HBV-YMDD变异与HBV-DNA定量关系探讨

目的:探讨拉米夫定治疗慢性乙肝产生的HBV-YMDD变异与HBV-DNA定量的关系。方法:随机选择我院100例服用拉米夫定后产生YMDD变异的慢性乙肝患者,回顾性地比较其DNA定量的变化,以探寻两者有无必然联系。结果:慢性乙肝抗病毒治疗中产生的YMDD变异,与治疗前后DNA定量的变化无相关性。结论:拉米夫定治疗慢性乙肝产生的HBV-YMDD变异,尚难用治疗前后的HBV-DNA定量变化来预测。

HBV-YMDD变异患者与中医虚实辨证关系初探

目的 :初步探讨服用拉米夫定后HBV -YMDD变异患者中医辨证虚证、实证之间的关系。方法 :对服用拉米夫定半年以上的乙型慢性病毒性肝炎患者采用联合基因集团上海博华基因技术有限公司出品的迈科锐乙型肝炎病毒突变检测基因芯片 ,进行HBV -YMDD变异检测。出现HBV -YMDD者 ,根据中医基础理论 ,将其分为实证、虚证 ,来探讨HBV -YMDD变异患者中医虚、实辨证的关系。结果 :HBV -YMDD变异患者中实证变异率(38/ 4 8)明显高于虚证 (10 / 4 8) ,具有统计学意义。结论 :HBV -YMDD变异与虚、实辨证之间具有相关性。

通用模板PCR技术快速检测乙肝病毒YMDD变异株

目的 探讨快速、安全地检测血清中对拉米夫定耐药的乙型肝炎病毒YMDD变异株。方法 用UT- PCR法结合Taqman荧光探针技术 ,针对HBVcodon 5 5 0位设计两条高度特异性引物Pi和Pv ,并设置保守区对照引物Pc ,在HBV耐药检测中使用了 3管阵列 ,经在PE70 0 0上进行PCR后 ,根据△Cti和△Ctv值 ,来判断是否发生了YVDD和YIDD突变。结果 检测 163例经拉米夫定治疗的病人血清 ,5 1例YMDD变异株阳性 ,其中随机选 15例样本进行DNA测序 ,结果完全相符。结论 本方法具有快速、准确、安全等特点 ,值得推广。

PCR-ELISA技术检测HBV YMDD变异

笔者采用PCR-ELISA技术对服用拉米夫定的患者进行HBV YMDD突变的检测,现报告如下.

慢性乙型肝炎YMDD变异与中医证型的临床研究

[目的]探讨拉米夫定治疗后慢性乙型肝炎HBV-YMDD变异与中医证型的相关性。[方法]可统计的100例服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者,根据中医辨证分为肝郁脾虚组40例,涅热中阻组20例,肝肾阴虚组20例,瘀血阻络组20例。分别检测肝功能、乙肝三系定量、HBV-DNA定量、YMDD变异。比较6、12、18个月时各组的ALT、AST、TBlL,HBeAg转阴率,HBeAg/HBeAb转换率,YMDD变异率。[结果]各组HBV-YMDD变异发生率6个月时无差异或差异无统计学意义。12、18个月时,瘀血阻络组最高,肝肾阴虚组次之,肝郁脾虚组和湿热中阻组最低,差异有统计学意义。[结论]拉米夫定治疗后慢性乙型肝炎HBV-YMDD变异发生率与中医证型之间有一定的相关性。

疏肝解瘀汤联合拉米夫定治疗慢性乙型病毒性肝炎临床研究

目的：探究疏肝解瘀汤联合核苷类药物拉米夫定对慢性乙肝病毒性肝炎患者肝功能、乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV．DNA）及耐药变异株HBV—YMDD的影响。方法：选取120例慢性乙型病毒性肝炎患者，随机分为观察组和对照组，每组60例，均给予基础支持治疗，对照组用拉米夫定治疗，观察组在此基础上加用疏肝解瘀汤治疗，观察比较两组治疗后6个月、12个月肝功能、HBV—DNA转阴率、HBV-YMDD变异率及其临床治疗效果。结果：观察组与对照组治疗6个月、12个月后相比肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）和HBV-yMDD变异率差异均有统计学意义（P〈0．05）；HBV-DNA转阴率在治疗12月后差异有统计学意义（P〈0．05）；观察组总有效率83．33％，明显高于对照组的65．00％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：疏肝解瘀汤联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎能够有效地改善患者肝功能指标。提高HBV—DNA转阴率，降低HBV-YMDD耐药率。

乙型肝炎病毒耐药变异与基因型检测在临床上的应用

目的建立直接测序法检测HBV P区耐药变异情况并分析基因型。探讨HBV基因型与临床病情的关系。方法检测46例乙肝患者血清样本,采用特异的引物对待检标本HBV P区进行PCR扩增后作基因序列检测,利用Chromas2.23软件对测序结果进行分析有无突变产生,测序结果用软件clustalx1.81进行基因分型分析。结果可通过一次测序反应完成对HBV.DNA P区的基因检测及基因型分析。检出YMDD变异株8例,其中YIDD 5例,YVDD 3例。在检测的46例标本中23例为B基因型,阳性率为50.0%;有21例为C基因型,其阳性率45.6;D基因型2例,阳性率4.4%。B基因型HBV感染者中HCC2例,占8.7%;C基因型HBV感染者中HCC 8例,占38.1%。结论直接测序法分析HBV常见耐药突变位点及基因型准确可行,B基因型乙肝患者预后优于C基因型患者。

HBV YMDD模序突变及其与肝癌发生的关系

目的探讨肝癌病人HBV YMDD模序突变及其与肝癌发生的关系。方法用流过式反向斑点杂交结合血清生化指标分析慢乙肝组(CHB)、肝硬化组(LC)和肝癌组(HCC)中HBV YMDD模序突变情况。结果HCC组、LC组、CHB组HBV YMDD模序突变率分别为1.67%(1/60)、4.44%(2/45)和63.82%(30/47)。HCC组、LC组及CHB组中ALT(谷丙转氨酶)活性分别为(66±25)、(66.98±113)、(105±170)U/L,而AST(谷草转氨酶)活性分别为(152±108)、(74.13±58)和(57.2±56.6)U/L。HBV YMDD模序突变的产生与用药时间长短显著相关,HBV YMDD模序突变与ALT升高相关性不显著,但与AST升高显著相关。60例肝癌中有HBVYMDD模序突变的只有1例,突变率为1.67%。结论HBV YMDD模序突变的发生与肝癌发生不存在明显相关性,仅与拉米夫定用药时间长短显著相关。同ALT相比,AST更好地反映了HBV引起的肝病肝脏损坏的严重程度。ALT是拉米夫定用药过程中与HBV YMDD突变有关的较为敏感的肝功能生化诊断和病情监测指标。

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

目的 建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法。方法 设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特别处理芯片载体 ,用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。选择 30例服用拉米夫定后 ,HBVDNA转阴 ( <5 0 0copies/ml) ,6 8周后又反跳≥ 5 0 0copies/ml的病人进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异11例 ,YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为缬氨酸 (氨基酸基序由YMDD变为YVDD) ,6例核苷酸A669变为C ,氨基酸由亮氨酸5 2 8变为蛋氨酸 ;核苷酸G743 变为T ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为异亮氨酸。 (氨基酸基序由YMDD变为YIDD)。其中有 3例伴有核苷酸T781变为C ,使氨基酸由亮氨酸 5 6 5变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,与PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 %。

荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法在临床的应用评价

目的:对国产荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH—PCR—MC)检测乙型肝炎病毒聚合酶酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸基序(HBVYMDD)变异的试剂进行临床应用评价.方法:慢性乙型肝炎患者外周血浆标本217份,分别采用荧光标记Taqman探针定量PCR法(FT—PCR)和荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH—PCR—MC)检测HBVDNA含量和YMDD及其变异;其中78份HBVDNA阳性标本采用基因型特异性多引物对巢式PCR法进行基因分型(A—F),30份标本用PCR产物克隆测序法检测HBVYMDD及其变异.结果:血浆标本HBVDNA阳性率(≥1.0×106copies/L)为75.6%(164/217).YMDD及其变异检出率为67.7%(147/217).其中YMDD44.9%(66/147),YIDD22.5%(33/147).YVDD17.7%(26/147),YIDD/YVDD混合株10.9%(16/147),其他混合株4.0%(6/147);结合HBVDNA含量,HBVYMDD及其变异的检出下限为HBVDNA=5.0×106copies/L,但在106copies/L时检出率较低,仅为36.4%,随着HBVDNA含量增高,检出率显著增高(>80%),且在107copies/L时即有显著增高(χ2=7.177,P<0.01).在基因分型的78份标本中,C基因型占89.8%,B和D基因型分别占8.9%和1.3%,YMDD及其变异总检出率为100%,变异总检出率为59.0%;1份D基因型YMDD及其变异检测为YIDD/YVDD混合变异;B,C两种基因型变异检出率分别为71.4%和55.7%,但二者无统计学差异.以测序法的检测结果为相对标准,则FH—PCR—MC法检测HBVYMDD及其变异的相对敏感性、特异性和符合率分别为96.3%(26/27),100%(3/3)和96.7%(29/30);对于HBVYMDD及其变异的类型,两种方法检测结果一致.结论:FH—PCR—MC法是一种快速、特异的HBVYMDD及其变异检测方法,具有较高的检出率,且能区分YMDD及其变异的类型.

基因芯片检测拉米夫定引起的乙型肝炎病毒基因YMDD变异的研究

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)变异基因诊断芯片,对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断。方法:设计特异性寡核苷酸探针。用点样法制备HBV变异基因诊断芯片。选择住院患者30例服用拉米夫定后,HBVDNA转阴[<500拷贝(opies/ml)]68周后又反跳≥5000copies/ml的患者进行基因芯片杂交检测。同时用PCR直接测序法对30例患者血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果:30例服药后HBVDNA反跳患者中基因芯片测得HBVYMDD变异21例,其中YVDD变异11例,YIDD变异10例。直接序列测定发现有核苷酸A741变为G,使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)11例,有6例核苷酸A669变为C,使氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸;核苷酸G743变为T,使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YIDD)10例。其中有3例伴有核苷酸T781变为C,使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。其结果与基因芯片完全一致。结论:HBV变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异,同PCR直接测序法比较,准确率达100%,无假阳性。

乙型肝炎病毒YMDD自然变异与抗病毒治疗后变异特点

目的了解未经拉米夫定抗病毒治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者和经拉米夫定治疗后的CHB患者乙型肝炎病毒基因组P区多聚酶YMDD变异情况,观察其特点。方法选择未接受过抗病毒治疗的CHB患者119例和经拉米夫定治疗后无明显效果的CHB患者30例,采用荧光标记杂交双探针聚合酶链反应熔解曲线法(FH-PCR-MC)对其血浆标本进行YMDD基因序列突变检测。结果119例未接受过抗病毒治疗的患者,变异检出率为19.3%(23/119),23例出现自然变异毒株的患者,其体内病毒均为变异株与野生株共生,且变异株为非优势株,变异株在总病毒量中所占的比例均在50%以下,变异类型以YVDD为主(20例)。30例经拉米夫定治疗的患者变异检出率为56.7%(17/30),17例阳性患者有11例患者体内病毒完全为变异毒株,仅6例患者为变异株与野生株共生,且变异株为优势株者占83.3%(5/6);在变异类型上YVDD占8例,居多;YVDD与YIDD同时阳性占3例。结论未经抗病毒治疗的CHB患者存在YMDD自然变异毒株,且变异株皆与野生株共生,变异株为非优势株。经拉米夫定治疗后的变异多数为完全变异,少数为变异株与野生株共生,且变异株大多为优势株。

未经拉米夫定治疗HBVYMDD变异的临床分析

目的分析未经拉米夫定治疗的HBV病毒YMDD变异出现的情况,探讨HBV病毒YMDD变异出现可能的机理,了解以YMDD自然变异的慢性HBV感染患者的肝损害情况。方法对140例HBVDNA阳性,未经拉米夫定治疗的慢性HBV感染者进行YMDD检测,同时检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、发病年龄、HBeAg与抗HBe等临床相关指标。结果140例未经拉米夫定治疗的慢性乙肝病毒感染者中20例自然发生YMDD变异,YMDD变异组与未变异组引起的肝损害无显著性差异(P>0.05)。YMDD变异与HBeAg与抗HBe的阳性表达无明显差异(P>0.05)。结论HBV病毒YMDD变异株作为一个准种与野毒株同时存在感染个体,YMDD变异对肝损害严重性无关,YMDD变异与HBeAg阳性率与抗HBe阳性率无明显差异。

拉米夫定治疗53例HBV基因型对乙型肝炎患者P基因突变的影响

目的探讨HBV基因型与拉米夫定耐药者P基因突变的关系。方法 53例慢性乙型肝炎(CHB)患者经拉米夫定治疗每天100 mg,并于治疗前及治疗后3、6、12、15、18、24个月监测肝功能、HBV M、HBV DNA、HBV基因型及YMDD变异。结果 (1)B基因型占56.60%(30/53),C基因型占41.51%(22/53);(2)在CHB重度及肝硬化病例中C基因型的检出率高于B基因型(P<0.05);(3)拉米夫定治疗后C基因型较B基因型更易发生YMDD变异(P>0.05);(4)B基因型主要发生rtM204I位点突变(62.5%,5/8),而C基因型则主要发生rtL180M/M204V突变(77.78%,7/9)。结论 (1)遵义地区的HBV基因型主要由B、C基因型构成;(2)拉米夫定治疗后C基因型更易发生YMDD变异。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV YMDD变异及基因芯片检测

建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测方法。设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特殊处理芯片载体。用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。在本院住院治疗病人中选择 3 0例服用拉米夫定后 ,可能出现YMDD变异的病人进行基因芯片杂交检测分析 ;同时用PCR直接测序法对上述 3 0例病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。 3 0例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异 11例。YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果与基因芯片检测结果完全一致。乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,同PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 % 。

HBV基因分型与病毒载量及血清标志物关系的探讨

目的探讨HBV基因型与HBV-DNA水平及血清标志物的相关性。方法选择125例乙肝患者血清HBV-DNA复制阳性的标本分别检测HBV病毒基因分型、HBV-DNA、乙肝血清标志物、谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TBL)。结果 125例HBV-DNA复制阳性标本中HBV基因分型以B型为主占71.2%(89/125),C型占24.0%(30/125),BC混合型占2.4%(3/125),非B非C型占2.4%(3/125);B基因型患者血清ALT(297.3±193.6)U/L和TBL(105.1±59.7)mol/L水平高于C基因型患者ALT(158.1±107.5)U/L和TBL(53.1±22.7)mol/L,P<0.01;B基因型患者血清抗-HBe阳性率91.0%(81/89)显著高于C基因型的23.3%(7/30),P<0.01;B型HBV-DNA水平(5.87±1.72)log10copies/mL与C型(6.01±1.91)log10copies/mL无差异(P>0.05)。结论本地区HBV病毒基因型以B型为主,C型次之,B基因型对肝脏损害较C基因型重,并与HBV载量及HBeAg系统具有相关性,B基因型易发生YMDD突变。

使用/未用拉米夫定HBV慢性感染者中YMDD基序变异的检测

目的 探讨接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染者YMDD基序变异的分子生物学机理。方法 以RFLP法筛选HBVYMDD基序变异 ,阳性者作直接测序的方法 ,分别检测 1 9例正在应用拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者以及 86例未用拉米夫定的HBV感染者的血清标本。结果 1 9例正在应用拉米夫定治疗的患者中检测出 2例YMDD基序变异 ,测序结果分别为YIDD和YVDD变异。在 86例未用拉米夫定或其他抗病毒药物治疗的HBV感染者中检测出 3例YMDD基序变异 ,测序结果分别为YIDD 1例和YVDD 2例。结论 在未用拉米夫定的HBV感染者中同样存在着YMDD基序变异 。

拉米夫定耐药者体内乙型肝炎病毒水平与YMDD变异关系的研究

目的 :探讨拉米夫定耐药者 YMDD变异类型、变异率及与体内病毒水平的关系。方法 :荧光定量 PCR检测拉米夫定耐药者血清 HBV-DNA浓度 ,PCR产物直接测序检测 YMDD变异情况。结果 :5 2例拉米夫定耐药者 YMDD变异检测结果 ,其中有 2 4例发生 YMDD变异 ,占 46.1 5 % ,并且 YMDD(酪氨酸、蛋氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸 )基序发生三种变异 ,第一种类型为 YVDD变异 ,共有 1 1例 (变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 A741→ G变异 ;第二种类型为 YIDD变异 ,共有 1 1例(变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 G743→ T变异 ,其中有 1例核苷酸 G743→ C变异也引起 YIDD变异 ;第三种类型为 YLDD变异 ,共有 2例 (变异率 3 .85 % ) ,即核苷酸 A741→ T变异。 YMDD野生型血清病毒浓度为 7.0× 1 0 6± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml,YVDD、YIDD、YLDD变异型病毒浓度分别为 7.5×1 0 6 ± 1 .5× 1 0 6 copies/ ml、7.6× 1 0 6 ± 1 .7× 1 0 6 copies/ ml、6.9× 1 0 6 ± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml;经 t检验 ,YMDD变异型与 YMDD野生型血清病毒浓度之间的差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结论 :除已报道的拉米夫定耐药者 YMDD基序发生 YVDD和 YIDD变异外 ,还存在 YLDD变异 ;拉米夫定耐药者体内乙肝病毒水平与发生

乙肝病毒YMDD变异与血清标志物的相关性

目的研究HBV-DNAP基因变异在乙肝患者中的临床意义,为临床诊断和治疗提供依据。方法对263例乙肝患者采用PCR法检测HBV-DNAP基因的变异。结果大三阳组与小三阳组之间差异显著(χ2=10.52,P<0·01)。前者YIDD、YVDD和其他变异分别为21.13%、4.93%、8.45%。后者为9.62%、1.9%、3.85%。结论PCR是检测基因突变的高效方法之一,具有极高的灵敏性和可靠性。HBV-DNA位点变异对判断疾病的稳定与进展及病情转归有重要作用。