岩生树花地衣型真菌NRPS基因的生物信息学分析

为了挖掘岩生树花地衣型真菌转录组数据中的NRPS基因,找出其潜在化合物或蛋白,以岩生树花地衣型真菌的转录组数据为基础,分析获得一个新的NRPS基因(Ri NRPS)。利用BLAST比对、分子系统进化及anti SMASH、NRPS predictor、Na PDo S、Norine等生物信息学分析手段对岩生树花地衣型真菌Ri NRPS基因进行分析,结果显示,Ri NRPS基因相对分子质量为702 699.9,等电点5.83,为不稳定蛋白;其开放阅读框总长19 098bp,编码6 362个氨基酸;该蛋白不存在信号肽,为非分泌蛋白,定位于细胞质基质中;可能合成HC-toxin合成酶,可能的催化反应是以Orn(鸟氨酸)、Gln(谷氨酰胺)、Gln(谷氨酰胺)、Cys(半胱氨酸)4个氨基酸作为底物合成环状四肽,此环状四肽可能是一种具毒素活性的多肽、其结构式为C21H32N4O6。研究结果为以后岩生树花NRPS基因的挖掘及非核糖体多肽类物质的生物合成提供参考。

玉米圆斑病菌毒素与玉米对应抗病基因研究进展

近年来玉米圆斑病在我国有加重趋势。为有效控制该病害,本文综述玉米圆斑病菌分泌的3种毒素或蛋白及玉米中的抗病基因。HC毒素是1号生理小种分泌的寄主专化性毒素,其合成受TOX2位点上多个基因控制。HC毒素抑制组蛋白脱乙酰酶活性,引起高度乙酰化来修饰植物防卫反应相关基因表达。Hm1和Hm2是玉米抵抗HC毒素的抗病基因,分别编码HC毒素还原酶和HC毒素还原酶类蛋白,Hm1在抗病玉米全生育期内均起作用,Hm2仅在成熟期才有抗性。BZR-cotoxin是玉米圆斑病菌3号生理小种分泌的水稻专化性毒素,其可诱导非病原菌在水稻和玉米叶片上感病。Bz-cmp是玉米圆斑病菌分泌的另一蛋白,修饰玉米种子内的ChiA蛋白,并将该蛋白转化为失活的ChiA-m,从而使种子感病。

人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%。复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强。27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合。结论成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础。

球毛壳菌循环肽HC-毒素基因的序列分析

为了验证Phrap软件是否适合在EST分析中应用 ,对球毛壳菌循环肽HC -毒素基因进行了序列分析。根据EST分析的结果 ,从cDNA文库中挑取循环肽HC -毒素基因的克隆进行了测序并序列分析。结果表明cDNA文库中循环肽HC -毒素基因的克隆插入片断大小为 12 17bp ;用Phrap软件拼接出来的循环肽HC -毒素的表达序列标签拼接序列与实际序列不完全一致 ,因此Phrap软件不适合在EST分析中应用。

表观遗传学药物对肝内胆管癌的作用

目的筛选肝内胆管癌敏感的表观遗传学药物并研究其作用机制。方法采用细胞活力实验筛选对RBE细胞敏感的药物；在多种细胞株上比较其作用；选择最敏感的药物探讨其机制：通过Giemsa染色观察肝内胆管癌细胞经药物处理后的形态学变化，用流式细胞技术检测细胞周期分布，联合流式细胞技术、Westernblot检测细胞的凋亡。结果RBE细胞分别经96种表观遗传学药物处理48h，27μmol／L浓度下22种药物对RBE细胞有抑制作用（细胞活力〈60％），组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂有12种，3trmol／L浓度下仅5种药物对RBE细胞有抑制作用，HDAC抑制剂4种；其中，玉米原斑病菌毒素（HCtoxin）对多种肝内胆管癌细胞株的抑制作用最为突出；与对照组比较，HCtoxin处理CCLP-1细胞48h后，能引起包括小体凋亡等多种细胞形态变化，能将细胞周期阻滞在G。期（82．93％比48．51％），能通过非半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶．3（Caspase-3）依赖的凋亡途径诱导细胞凋亡。结论HDAC抑制剂，尤其是HCtoxin，通过多种方式对肝内胆管癌细胞产生显著的抑制作用。