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题名HCA518的蛋白表达、纯化和单克隆抗体的制备
被引量:1
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作者
杨小昂
钱晓萍
孙秀媛
邵启祥
陈慰峰
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机构
北京大学医学部免疫学系
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出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期29-32,共4页
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基金
国家973重点基础研究发展规划基金(2003CB514100)国家自然科学基金(30340011)资助
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文摘
目的:对HCA518蛋白进行表达和纯化,并制备HCA518蛋白的单克隆抗体。方法:采用基因重组技术在原核系统表达HCA518蛋白,金属镍螯合的Ni-NAT亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA方法进行单克隆抗体细胞株的筛选;Westem blot方法鉴定单克隆抗体的特异性;免疫荧光法对HCA518蛋白进行定位。结果:成功表达和纯化了HCA518重组蛋白,其纯度达98%。共筛选出2株分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了HCA518的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体的效价分别为1×10-4、5×10-4,属于IgG2b亚型和IgM,该抗体能与重组蛋白和肿瘤细胞核蛋白(P100)发生特异性反应,免疫荧光显示HCA518蛋白主要定位于细胞核中。结论:建立了稳定分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体特异性好,对进一步应用于检测肿瘤组织中HCA518蛋白和判断肿瘤细胞的恶性增生程度预测肿瘤预后具有重要的实用价值。
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关键词
蛋白表达和纯化
肿瘤相关抗原
HCA518
单克隆抗体
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Keywords
Protein expression and purification
Tumor associated antigen
hcas18
Monoclonal antibody
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分类号
R392.11
[医药卫生—免疫学]
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