HCC患者多肽生长因子及肿瘤标志物测定的临床意义

目的:分析血清多肽生长因子水平与肝硬化、肝癌的关系,初步探讨其发病机制。方法:采用放射免疫分析(RIA)测定32例肝癌(HCC)、34例肝硬化(LC)患者及30名正常对照组人员的血清TGF-α、TGF-β1、AFP及AFU水平四项指标。结果:HCC患者组血清TGF-α、TGF-β1、AFP及AFU水平均显著高于LC组及正常对照组(P均<0.05),LC组则AFP及AFU水平均显著高于正常对照组(P<0.05),但TGF-α、TGF-β1水平与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:HCC患者血清多肽生长因子TGF-α、TGF-β1、AFP及α-L、岩藻糖苷酶(AFU)水平发生了明显的变化,提示四项指标水平的升高及过度表达与肝癌的恶性增殖生长、病情的进展关系密切。

Midkine(MDK)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义

目的探讨Midkine(MDK)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达以及检测血清MDK对于肝癌诊断的初步临床意义。方法通过免疫组织化学染色和Western blot法检测50例临床样本(包含肝癌,肝硬化及正常肝组织)及7种不同肝癌细胞系中MDK表达情况;进一步通过酶联免疫吸附反应定量检测120例不同受试人群的血清样本,分析血清MDK在诊断肝癌中的初步临床意义。结果肝癌组织中MDK表达阳性率显著高于肝硬化(77%vs.30%,P<0.01)及正常肝组织(77%vs.0%,P<0.001);Western blot检测结果显示,MDK在多株肝癌细胞系中表达上调;此外,HCC患者血清MDK的中位数水平(1.195 ng/mL,0.84～1.71)较正常人(0.102 ng/mL,0.02～0.53;P<0.01)、HBV相关肝硬化(0.57 ng/mL,0.26～0.67;P<0.05)和HCV相关肝硬化(0.34 ng/mL,0.09～0.56;P<0.01)患者显著升高。结论 MDK在HCC患者中的表达显著上调,血清检测MDK可作为临床诊断肝癌的重要方法。

GP73的血清学分析以及联合AFP在HCC中的诊断价值

目的探讨不同人群血清中GP73水平及分析GP73和AFP联合检测对原发性肝细胞癌诊断的临床价值。方法收集119例原发性肝癌患者、50例肝硬化患者、114例慢性乙肝患者、6例慢性乙肝携带者及139例健康人血清,采用ELISA的方法对每个样本中GP73含量进行检测,结合各项临床指标进行统计学分析。结果血清GP73水平在健康人群中呈正态分布,而且在男性与女性之间无统计学差异(P>0.05)。分析HCC组血清中GP73水平发现,男性患者高于女性患者(P=0.013),伴有肝硬化的患者高于无肝硬化的患者(P=0.002),肿瘤直径>3cm的患者高于肿瘤直径≤3cm的患者(P=0.041),而GP73水平与HCC患者的年龄、AFP、ALT、AST、巴塞罗那(BCLC)分级、是否HBV感染、肿瘤数目无显著相关性。血清中GP73检测的阳性临界值为61.93ng/mL。根据这一临界值得出,GP73诊断HCC患者的灵敏度和特异度分别为58.82%和98.56%。GP73阳性率较高的是肝硬化患者组(86%)和慢性乙肝患者组(76.32%),HCC组的阳性率为58.82%,健康人群的GP73阳性率为1.44%,慢性乙肝携带者中未检出阳性样本。结合临床数据,GP73联合AFP检测的阳性率为82.35%。结论GP73在HCC患者血清中表达较高,将其作为一种肝癌血清标志物具有很好的研究价值;血清中GP73联合AFP检测的方法可有效提高对HCC的诊断率,从而避免漏诊现象的发生,对HCC的诊断具有重要的参考价值。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

MicroRNA与肝癌诊治:新的机遇和挑战

MicroRNA(miRNA)广泛参与机体各项生理和病理过程,近年来受到广泛关注且研究进展迅速。肝癌尤其是乙型肝炎相关肝癌是我国的重大疾病,miRNA在肝癌发生、发展过程中发挥着重要作用,在肝癌发生、肿瘤进展、预后判断和生物治疗等方面,miRNA均能通过调控其靶基因的表达参与其中。由于大规模平行测序等miRNA组学研究的新技术进展迅速,肝脏与肝癌miRNA组的研究进一步加深了科研工作者对肝癌相关miRNA的理解。在肝脏中富集表达的miRNA在肝癌组织中均出现表达失调,这些表达失调的重要miRNA已被证明是肝癌基因治疗的潜在靶点。此外,肝癌患者血清中存在的游离miRNA被证实是肝癌诊断和个体化治疗的潜在生物标志物。笔者简要阐述肝癌相关miRNA的表达和作用机制及其在临床肝癌诊断和干预中的潜在意义与价值,并对miRNA给肝癌诊治带来新的机遇和挑战作一展望。

人高尔基体蛋白GP73基因的克隆、表达、单克隆抗体的制备及鉴定

目的:高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是新近发现的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要血清学标志物。通过克隆、表达人GP73,制备抗GP73单克隆抗体并鉴定其特性。方法:克隆GP73基因,构建GP73原核表达载体pComb3XSS-GP73,诱导表达,以HisFF Trap亲和层析柱纯化GP73-6×His重组融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗GP73单克隆抗体。以间接法ELISA检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测肝癌患者血清中GP73表达水平。结果:成功表达并纯化了GP73-6×His重组蛋白;获得5株稳定分泌抗人GP73单克隆抗体杂交瘤细胞株;免疫共沉淀证实抗GP73单克隆抗体能与肝癌患者血清中GP73蛋白特异性结合,GP73水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GP73单克隆抗体,为后期建立检测人GP73的双抗体夹心ELISA方法打下基础。

结缔组织生长因子ELISA定量检测方法的建立及初步应用

目的:建立定量检测人结缔组织生长因子(CTGF)双抗体夹心ELISA方法,并应用此方法检测人血清中CTGF含量。方法:利用简易过碘酸钠法对纯化的抗CTGF单克隆抗体(mAbs)进行HRP标记后,行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法。用该方法初步对正常人、HBsAg阳性非肝癌患者及HBsAg阳性肝癌患者血清中的CTGF水平进行检测。结果:最佳配对组合为抗CTGFmAb3H5和HRP标记的抗CTGFmAb4C5,最适工作浓度分别为40μg/ml和1/4000,该方法的平均批内、批间变异系数分别为4.59%和5.70%,灵敏度达1.46 ng/ml,平均回收率为(98.73±4.84)%。用本方法测定35例HBsAg阳性肝癌患者、76例HBsAg阳性非肝癌患者和40例正常人血清CTGF水平,与正常对照组[2.65(2.16～3.18)ng/ml]比较,HBsAg阳性非肝癌组[5.53(2.74～8.23)ng/ml]和HBsAg阳性肝癌组[8.27(4.81±13.65)ng/ml]血清CTGF水平均显著升高(P<0.001);且HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阳性非肝癌组比较也明显升高(P=0.014)。结论:建立了一种可用于检测人CTGF的双抗体夹心ELISA方法。初步应用结果表明CTGF水平在HBsAg阳性肝癌患者血清中较HBsAg阳性非肝癌患者、正常人异常升高,提示CTGF分子有望成为HBsAg阳性肝癌早期预警标志物。

肝癌与HBV感染的关系

目的 探讨肝癌与HBV感染的关系。 方法 对 771例原发性肝癌病人及同期 794例其他消化道恶性肿瘤病人的血清HBV标记进行回顾性对比分析。 结果 发现肝癌组HBV -M阳性 72 6例 ( 94.16% ) ,非肝癌组HBV -M阳性 13 8例 ( 17.3 8% ) ,有显著差异 (P <0 .0 1)。HBV模式中 ,肝癌组HBV -M以“小三阳”( 1-4 -5 )为主 ,占全部肝癌病人的 67% ( 5 17/771) ,明显高于非肝癌组“小三阳”的 13 .5 1% ( 10 7/794)。 结论 原发性肝癌的发生与HBV有着非常密切的关系 ,而HBV与肝细胞的整合及不同的HBV基因型可能是其发生癌变的重要病理生理学基础。

海南地区原发性肝癌与HBV感染关系的探讨

对 771例原发性肝癌患者及同期 794例其他消化道恶性肿瘤患者的血清HBV标记进行回顾性对比分析。结果发现肝癌组HBVM阳性 72 6例 (94 16 % ) ,非肝癌组HBVM阳性 138例 (17 38% ) ,有显著差异 (P <0 0 1)。在感染HBV模式中 ,肝癌组HBVM以“小三阳”为主 ,占全部肝癌患者的 6 7 0 6 % (5 17/ 771) ,明显高于非肝癌组的 13 4 8% (10 7/ 794 ) ,“小三阳”中HBVDNA阳性明显高于其他HBVM阳性模式组。说明原发性肝癌的发生与HBV有着非常密切的关系 。

乙肝病毒血清标志物、PreS1抗原检测与肝癌诊断的关系

目的探索研究前S1抗原(PreS1-Ag)与原发性肝癌(PHC)发生的关系。方法对200例已确诊的肝癌患者及200例已确诊的非肝癌就诊者用ELISA法进行乙肝五项血清学标志物及PreS1-Ag检测。结果肝癌患者血清中HBsAg/AntiHBe(+/+)的百分率远大于HBsAg/HBeAg(+/+)的百分率,亦远大于PreS1-Ag(+)百分率;而非肝癌就诊者血清HBsAg/AntiHBe(+/+)的百分率也远小于肝癌患者。结论HBsAg/AntiHBe(+/+)能反映肝脏发生癌变的危险性增加。而血清PreS1-Ag在一定程度上反映病毒的活动性复制,可弥补HBV血清标志物在肝癌检测中的不足。

GPC3联合AFP、CEA、CA199检测对肝细胞癌的临床诊断价值

目的探讨GPC3联合AFP、CEA、CA199对肝细胞癌诊断的临床应用价值。方法采集实验者外周血,离心分离血清,免疫化学发光法检测血清中AFP、CEA及CA199的水平;ELISA法检测血清中GPC3的水平。统计分析各组实验者血清标志物和GPC3的差异,计算联合检测的诊断效率。结果肝细胞癌患者血清中GPC3、AFP、CEA及CA199的表达水平高于疾病对照组和健康对照组。血清GPC3、AFP、CEA及CA199联合检测的灵敏度、特异度及准确度均高于各项指标的单项检测。结论GPC3联合肝癌肿瘤标志物检测可以提高肝细胞癌的诊断效率,对于肝癌的诊断具有较大的临床应用价值。

Th22细胞和IL-22在肝癌外周血的表达及与肿瘤标记物的相关性研究

目的探讨Th22和IL-22在肝细胞癌外周血的表达情况,并分析其与肿瘤标记物的相关性。方法抽取45例肝细胞癌患者和15名正常人的外周血标本,采用流式细胞术检查Th22细胞水平,ELISA法检测IL-22水平,分析Th22、IL-22水平与肿瘤标记物AFP、CA125、CA193、CA199、CEA的相关性。结果肝细胞癌患者Th22和IL-22水平均显著高于健康人群水平(P<0.05)。男性和女性患者Th22、IL-22水平差异无统计学意义(P>0.05)。肝细胞癌患者外周血Th22细胞数量和血清IL-22水平存在正相关(r=0.322,P=0.033),而Th22数量和血清IL-22水平与肿瘤标记物AFP、CA125、CA193、CA199、CEA均无相关性(P>0.05)。结论尽管Th22和IL-22在肝癌外周血中高表达,但与血清肿瘤标记物无相关性,其在肝癌发病中的临床意义仍需临床大样本研究证实。

血清4项肿瘤标志物联合检测在原发性肝癌诊断中的应用价值

目的探讨甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)、高尔基体蛋白73(GP73)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)及甲胎蛋白(AFP)联合检测在原发性肝癌诊断中的应用价值。方法采用酶联免疫吸附试验(EL1SA)检测100例原发性肝癌(HCC)、100例肝炎肝硬化患者血清AFP-L3、GP73、GPC-3,同时用电化学发光法检测血清甲胎蛋白(AFP),同期选择100例门诊正常体检者作为对照组。对各指标表达情况进行比较和分析。结果原发性肝癌血清AFP、AFP-L3、GP73、GPC-3含量均显著高于肝炎肝硬化组及健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);AFP、AFP-L3、GP73、GPC-3联合检测的阳性率达86.0%,明显高于单项检测AFP(54.0%)、AFP-L3(55.0%)、GP73(48.0%)和GPC-3(43.0%)(P<0.05);且AFP、AFP-L3、GP73、GPC-3联合检测的敏感性均高于单一检测指标,差异有统计学意义(P<0.05),但其特异性显著低于AFP-L3、GP73单项检测(P<0.05)。结论联合检测血清AFP、AFP-L3、GP73、GPC-3含量可以提高对原发性肝癌的阳性诊断率,对早期诊断具有重要的临床意义。

CA19-9等肿瘤标志物对原发性肝癌的诊断价值分析

目的探讨多项肿瘤标志物对原发性肝癌的诊断价值。方法对70例原发性肝癌患者肿瘤标志物检测结果进行回顾性分析。结果 70例患者TSGF、CA15-3、CA19-9及AFP 4项肿瘤标志物的阳性率分别为4.7%、5.7%、54%和71%,CEA全部阴性。结论 CA19-9检测对AFP阴性及低水平AFP患者具有重要意义;CA19-9与AFP联合检测可提高阳性率并具有相互补充作用;CEA、TSGF、CA15-3对原发性肝癌的诊断价值不大。

血清标本高尔基体蛋白73定量检测及其临床意义

目的探讨定量测定血清高尔基体蛋白73(GP73)的临床意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝癌治疗前、肝癌介入术后、肝癌切除术后、肝移植术后、肝癌复发、乙肝肝硬化、慢性乙型肝炎、乙肝携带者、慢性丙型肝炎、脂肪肝以及健康体检血清标本中的GP73浓度。结果肝癌治疗前病例组中GP73的ROC曲线下面积为0.983,敏感性和特异性分别为96.8%和93.9%;对比肝癌治疗前,介入术后GP73浓度下降(P<0.001),肝癌切除和肝移植术后GP73浓度下降(P<0.001),肝癌复发伴随GP73浓度升高。与健康体检组比较,GP73浓度在肝硬化病例组中显著升高(P<0.001),但是低于肝癌治疗前病例组中GP73浓度(P<0.001)。在慢性乙型肝炎、乙肝携带者、脂肪肝病例组中均可检测到GP73,但显著低于肝癌治疗前病例组(P<0.001)。GP73浓度与肝癌分期的相关性不明显。6种非肝脏恶性肿瘤标本中GP73浓度显著低于未治疗的肝癌标本(P<0.001)。GP73在丙肝相关肝病的浓度均显著高于乙肝相关肝病(P<0.001)。结论 GP73可作为辅助临床早期诊断肝癌的一种标志物,对肝癌术后的复发及肝硬化的进展也有监测作用。

增强CT联合肿瘤标志物检测在肝癌诊断及预后中的应用价值

目的:探讨CT联合肿瘤标志物(tumor markers,TM)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断和预后中的应用价值。方法:选择62例HCC患者作为研究对象,所有患者均行肝部分切除术。另外,选取65例健康受试者作为对照组。收集血液样本,通过放射免疫法测定血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、糖类抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9,CA19-9)和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)。通过病理学检查研究血清TM水平与临床病理学特征之间的相关性。所有HCC患者还进行腹部增强CT扫描,探讨其影像学特征。利用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析单个TM检测、TM组合检测、TM组合检测联合CT检查的诊断效能。结果:HCC患者血清AFP、CA19-9和CEA水平明显高于对照组(P<0.05)。与高分化和无远处转移的患者相比,低分化和有远处转移的患者具有更高水平的AFP、CA19-9和CEA(P<0.05)。在不同年龄、性别和临床分期的HCC患者中,TM水平差异没有统计学意义(P>0.05)。ROC分析显示,与3种TM的组合检测相比,单个检测血清AFP、CEA或CA19-9具有较低的特异度和灵敏度(P<0.05)。TM组合检测联合CT检查可达到95.71%的特异度和87.47%的灵敏度,优于3种TM组合检测(P<0.05)。8例HCC患者术后6个月内复发。与术前相比,复发患者血清AFP、CA19-9和CEA水平显著升高,且高于未复发的患者(P<0.05)。结论:血清AFP、CA19-9和CEA组合检测联合CT检查可以克服单个TM检测的不足,避免误诊和漏诊,显著提高HCC的阳性检出率。

血清标记物GPC3与肝细胞癌的研究进展

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC3)是一种硫酸乙酰肝素糖蛋白,研究证明,GPC3表达与肝细胞癌(HCC)关系密切,尤其是小肝癌、AFP(甲胎蛋白)阴性肝癌、早期肝癌新的血清标志物。联合检测多种肿瘤标志物能大大提高诊断效能,为提高HCC诊断敏感性和特异性,现对血清GPC3与肝细胞癌关系进行综述。

SLC4A10表达水平对肝癌患者预后的影响

目的通过生物信息学(生信学)分析在肝细胞癌(HCC)中SLC4A10的表达对HCC患者预后的影响,初步验证并探讨其意义。方法通过TCGA数据库,分析SLC4A10在HCC组织与正常组织间的差异表达,并利用实时定量PCR进行验证。运用Kaplan-Meier(K-M)曲线分析SLC4A10的表达量对HCC患者预后的影响;通过单因素与多因素回归分析SLC4A10与HCC患者总生存期(CS)和无病生存期(DFS)的相关性;通过PPI数据库构建蛋白互作网络并进行功能富集分析,探索SLC4A10在HCC中的调控机制。结果通过生信学分析发现,SLC4A10在HCC组织中的表达显著低于正常组织;SLC4A10 mRNA表达降低与晚期临床病理参数显著相关,并降低HCC患者的CS和DFS;功能富集分析显示SLC4A10参与的重要的生物过程包括跨上皮转运、细胞体积稳态和钠离子跨膜导入。结论通过生信学分析提示SLC4A10在HCC中表达降低,其高表达利于HCC患者的预后,可能是HCC的潜在预后标志物或治疗靶点。

免疫检查点抑制剂治疗肝细胞癌的研究进展

肝癌的发病率及死亡率在全球恶性肿瘤中均位居前列。初诊的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者大多已处于晚期,失去手术根治的机会,全身治疗成为主要的治疗手段。随着免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)的出现,多种ICIs被批准用于晚期HCC患者,ICIs联合抗血管生成药物为主的靶向药物的治疗方案也被证实比ICIs单药效果更佳。但是,无论是单药ICIs还是联合治疗方案,多数患者仍不能从中获益。根据患者治疗的不同目标,通过肿瘤标记物选择不同的治疗方案是目前临床面临的挑战。本文对目前ICIs以及联合不同药物和局部治疗在HCC的临床研究进展、预测疗效和预后的生物标记物以及耐药性相关问题进行综述。