外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的关系

目的探讨外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、人巨细胞病毒(hCMV)-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死(As-ACI)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法选取89例As-ACI患者(脑梗死组),另选取健康体检者43例(对照组)。根据颈内动脉超声结果将As-ACI患者分为内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组。比较各组外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平、单个核细胞TLR4表达水平、hCMV-IgM抗体阳性率和内膜中膜厚度(IMT)。分析As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素,分析CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4与IMT的相关性及其对颈动脉狭窄的预测价值。结果脑梗死组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、HDLC水平低于对照组,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、TC、TG、LDLC、hs-CRP水平、IMT高于对照组(P<0.05)。内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平依次降低,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、IMT依次增高(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平与IMT呈负相关,TLR4表达与IMT呈正相关(P<0.05)。高血压、CD4^(+)CD25^(+)Treg表达、TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性是As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4表达水平联合检测的预测价值高于单独检测(P<0.05)。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM抗体阳性率与As-ACI患者颈动脉粥样硬化进展有关,外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4联合可以较好预测病变过程。

晚期孕妇血清sIL-2R水平与先天性HCMV感染的相关性

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的孕妇血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平与先天性HCMV感染的相关性。方法联合应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录PCR(RT-PCR)法筛检外周血HCMV-IgM和HC-MV晚期mRNA均阳性的妊娠晚期孕妇,再用套式PCR法(Nest-PCR)检测其新生儿脐血HCMV-DNA,然后随机选择新生儿HCMV-DNA阳性34例和阴性41例作为研究对象,应用ELISA法定量检测其相应孕母外周血血清sIL-2R水平。结果其新生儿脐血CMV-DNA阳性和阴性的孕妇血清sIL-2R平均水平分别为301.01±35.14U/ml和197.75±17.51U/ml(t=2.83,P<0.01)。结论活动性HCMV感染的妊娠晚期孕妇血清sIL-2R水平可能与先天性HCMV感染的发病机制相关。

冠心病患者HCMV抗体和HCMV-DNA的测定及其临床意义

目的 探讨人巨细胞病毒 (HCMV)感染与冠心病的关系及 HCMV感染可否作为冠心病的独立危险因子。方法 间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定 HCMV- Ig G、HCMV- Ig M和 HCMV- Ig A抗体 ,聚合酶链反应 (PCR)测定 HCMV- DNA。结果 冠心病组的 HCMV- Ig G、Ig M、Ig A抗体阳性率、S/N值 (标本 450 nm吸光度值 /阴性对照 450 nm吸光度值 )和 HCMV- DNA阳性率均明显高于对照组 ,且这些指标不受血清胆固醇、甘油三酯水平及是否伴有高血压和 /或糖尿病的影响 (除 HCMV- Ig M抗体阳性率在是否伴有高血压和 /或糖尿病两组间比较 P<0 .0 5外 ,余均为 P>0 .0 5)。结论 HCMV感染可能与冠心病有关 ,HCMV感染有可能作为冠心病的独立危险因子。

HCMV(PP65)抗原血症检测在HCMV感染疾病中的应用价值

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染相当普遍,在我国人群中感染率高达80%～100%.一旦发生HCMV感染常终身带毒,免疫功能正常时,感染常无症状,病毒潜伏持续存在,当机体抵抗力下降时,可引起病毒激活感染,导致严重损伤和疾病.HCMV感染对宿主有两方面的负反应,除病毒本身导致的细胞损伤和病毒诱导的免疫病理损伤外,还极易激发宿主受细菌、真菌、原虫以及其它病毒的感染,从而导致双重感染,对人类健康造成极大威胁.在感染早期给予特异性的抗病毒药物治疗可显著降低HCMV疾病出现的频率和严重性,因此早期、快速、精确地诊断HCMV激活感染十分重要.HCMVPP65抗原血症检测技术的建立和发展不仅使上述要求得以实现,而且对于监测HCMV病的发生发展及制定正确的治疗方案具有重要价值.

对血浆HCMV-IgM、尿HCMV-DNA阳性患儿用更昔洛韦干预意义

目的:调查对巨细胞病毒感染婴儿用更昔洛韦治疗的必要性。方法:本研究对2007年10月～2008年10月在深圳市宝安区妇幼保健院住院的0～6个月龄婴儿2840例,以ELISA法及PCR技术对患儿血浆HCMV-IgM、患儿尿及其母乳汁HCMV-DNA进行了检测,并对结果阳性及有临床症状的患儿分治疗组及对照组,治疗组采用更昔洛韦为主的综合治疗,对照组主要采取对症治疗,并判断疗效。结果:2840例患婴中血浆HCMV-IgM阳性者184例,占6.478%,尿HCMV-DNA升高者180例,占血浆HCMV-IgM阳性者97.8%,其母乳汁HCMV-DNA升高者170例,占血浆HCMV-IgM阳性者92.4%,对血清HCMV-IgM阳性、尿及其母乳汁HCMV-DNA升高的患儿分治疗组45例及对照组125例,发现治疗组临床症状改善42例(占93.3%),尿HCMV-DNA滴度降低30例(占66.7%),血浆HCMV-IgM转阴22例(占48.9%)。对照组临床症状改善80例(占64%),尿HCMV-DNA滴度降低10例(占8%),血浆HCMV-IgM转阴2例(占1.6%)。结论:采用更昔洛韦为主的综合治疗与采取单纯对症治疗相比,差异具有统计学意义,P<0.01。

尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断价值分析

目的:分析尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断效能。方法:选取本院2019年7月-2022年8月收治HCMV感染患儿112例。据主诉、体格检查及第一临床诊断将HCMV感染患儿分为肺炎组(n=68)、肝炎组(n=26)及其他组(n=18,主诉主要为发热、腹泻等)。对比分析不同性别、疾病组、年龄尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果。结果:尿液HCMV-DNA阳性率为30.35%、血清HCMV-IgM阳性率为33.03%,两者联合检测阳性率为87.50%。观察组不同性别之间HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检测结果均无统计学差异(P>0.05)。肝炎组尿液HCMVDNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于肺炎组和其他组;且其他组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率低于肺炎组(P<0.05)。>180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于<90 d和90 d^(-1)80 d;且90 d^(-1)80 d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于<90 d(P<0.05)。结论:尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断效能高,结合临床表现可全面判断患儿HCMV感染状态。

HCMV疫苗及其预防先天性HCMV感染的研究现状

人巨细胞病毒(HCMV)是宫内感染中最常见、危害最大的一种病毒,至今尚无有效治疗方法,保护性疫苗的早期预防成为近几年研究热点。综述HCMV疫苗研究进展及在预防先天性HCMV感染中的应用现状。

HCMV pp65截短蛋白原核表达条件优化

为了提高HCMVpp65蛋白片段在大肠杆菌中表达量,研究了不同发酵条件对其表达的影响,包括培养基、接种量、温度、摇床转速、pH、诱导时间以及诱导剂IPTG使用浓度等。结果表明,以LB培养基为发酵液,按5%接种量,37℃培养3h后IPTG诱导5h,重组菌菌体生物量为0.6g/L,目的蛋白表达量达18mg/L。用3.7L发酵罐进行放大培养,菌体生物量达0.85g/L,最高目的蛋白表达量达到25mg/L。

孕妇围生期HCMV感染与婴儿先天性疾病关系

目的探讨孕妇人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染对婴儿的近期影响。方法采用ELISA和PCR相结合的方法,采集74例HCMV活动性感染孕妇及50例无HCMV活动性感染孕妇的婴儿血进行HCMV-IgM及HCMV-DNA检测,并对感染婴儿定期随访至生后6个月,追踪其近期预后。结果孕期HCMV活动性感染组的婴儿先天性感染率为36.49%,围产期感染率为45.95%,显著高于孕期无HCMV活动性感染组(P<0.005);HCMV活动性感染孕妇的婴儿中,先天性感染组症状性感染发病率高于围生期感染组(P<0.025);神经系统异常、先天畸形及全身性感染发病例数多于围生期感染组(P<0.05);先天性感染组中,症状性感染婴儿治疗后肝功能恢复、HCMVHCMV-IgM和/或HCMV-DNA转阴率及近期预后比围生期感染组差(P<0.05)。结论孕期HCMV活动性感染与婴儿先天性感染及围生期感染显著相关。孕期HCMV活动性感染引起的先天性感染较围生期感染严重,预后差,故应重视孕期HCMV感染的检测,预防和阻断HCMV先天性感染的发生。

HCMV活动性感染与尿路上皮癌的相关性研究

目的分离和鉴定尿路上皮癌患者的肿瘤组织和抗凝血标本中人巨细胞病毒(HCMV),结合临床资料分析比较HCMV活动性感染与尿路上皮癌发生发展及其复发的相关性。方法采集33例经病理检测确诊为尿路上皮癌患者的组织和血标本,进行如下处理:分别采用细胞培养病毒分离法进行病毒分离;PCR法检测患者的抗凝血及组织DNA标本中HCMV UL55和UL83基因;IFA法检测抗凝血标本中HCMV pp65抗原;ELISA法检测HCMV IgG及IgM抗体;记录分析结果,确定尿路上皮癌患者HCMV活动性感染率。结果在33份抗凝血标本中,分离到1株临床分离株,该标本经盲传3代出现典型HCMV特征性细胞病变效应(CPE),经鉴定为HCMV。HCMV UL55和UL83基因、HCMV pp65抗原血症及HCMV IgM抗体检测均为阳性的有6份,因此可以判定在33例尿路上皮癌患者中,HCMV活动性感染者有6例,活动性感染率为18.2%(6/33)。结合患者的临床资料进一步分析发现,尿路上皮癌患者复发及病理分级均与HC-MV活动性感染相关,且HCMV活动性感染者其病理分级程度升高。结论结合临床资料分析发现,尿路上皮癌复发及病理分级程度升高均与HCMV活动性感染有关。

大蒜新素对HCMV主要即刻早期抗原IE72和IE86在人胚肺成纤维细胞中表达的影响

目的 :研究大蒜新素对人巨细胞病毒 (HCMV)即刻早期抗原 (IEAs)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响。方法 :建立HCMVAD16 9毒株 (MOI为 2.5和 0.2 5 )感染细胞模型和大蒜新素 (IC50 和MTC浓度 )干预模型。用WesternBlot检测药物处理后感染细胞中HCMV主要IEAs(IE72和IE86 )表达强度变化 ,并与相应浓度更昔洛韦(GCV)的作用效应相比较。结果 :在高MOI和低MOI感染时 ,不同浓度大蒜新素均能使HCMVIE72和IE86表达强度明显下降 ,对IE86表达的抑制率为IE72的 2倍左右。与GCV相比 ,大蒜新素对IE72的抑制率低于GCV ,而对IE86的抑制效应高于GCV。结论 :大蒜新素明显抑制HCMVIE72和IE86表达 ,对IE86的抑制尤为显著 。

生殖道HPV感染合并HCMV、HSV、UU、CT感染情况分析

目的:对比HPV感染组与HPV未感染组之间合并HCMV、HSV、UU、CT四种病原体的感染情况,探讨生殖道HPV感染合并其它病原体感染对宫颈癌的发生、发展的影响。方法:收集经检测已知为HPV分型一种亚型或合并多种亚型呈阳性的宫颈分泌物DNA提取液87例,及HPV分型亚型呈阴性的宫颈分泌物DNA提取液43例,应用PCR结合反向寡核苷酸探针杂交技术检测(RDB);应用实时荧光定量PCR扩增检测技术(FQ-PCR)对上述标本进行了测定。结果:①HPV阳性组(87例)和HPV阴性组(43例)合并HCMV、HSV、UU、CT病原体感染的综合检出率分别为74.71%和49.42%;②HPV阳性组(87例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为22.99%(20例)、1.15%(1例)、57.47%(50例)、24.13%(21例),HPV阴性组(43例)合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为9.3%(4例)、0%(0例)、41.86%(18例)、6.98%(3例);③HPV阳性组按亚型不同可分为高危型组和低危型组。其中高危型组(78例)中合并HC-MV、HSV、UU、CT感染分的单项检出率分别为19.23%(15例)、1.28%(1例)、52.56%(41例)、17.94%(14例),低危型组(9例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为55.56%(5例)、0%(0例)、100.00%(9例)、77.78%(7例);④HPV阳性组中以分型为16亚型的合并感染率最高;HCMV、UU、CT分别为40.00%(8/20)、28.00%(14例)、19.05%(4例);⑤在87例HPV阳性组的病例中,查到30例有宫颈上皮内瘤样变(CIN)病例资料。这30例中有23例合并HCMV、UU、CT感染,其单项检出率分别为21.08%(6例)、69.57%(16例)、30.43%(7例);有7例HPV阳性CIN病例不合并HCMV、HSV、UU、CT感染。结论:宫颈上皮细胞HPV感染与宫颈癌的发生、发展有密切关系,HPV感染者也可同时合并其他泌尿生殖道常见病原体感染。多种病原体同时感染宫颈与宫颈癌的发生、发展及预后的关系有待进一步研究。

抗HCMV不同多肽McAb的鉴定

目的为了将单克隆抗体 (Mc Ab)用于诊断技术 ,我们首先建立了 13株抗人巨细胞病毒 (HCMV)的 Mc Ab,选取 6株 Mc Ab作进一步鉴定。方法这 6株 Mc Ab的鉴定主要采用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验等方法。结果间接免疫荧光试验表明 :Mc Ab8B8相应的多肽为早期抗原 ;而 Mc Ab7B4、7D7、7E7、7E11、8D6的相应病毒多肽为晚期抗原。免疫印迹试验的结果表明 :Mc Ab7B4、7D7、7E7、7E11、8B8、8D6相应的病毒多肽分子量分别为 46、15 0、38、5 1、72、6 5 kd。结论 Mc Ab8B8可不用于 HCMV的快速诊断。

重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达

目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和甲醇利用缓慢型(Muts)菌株的不同生长特点,筛选出Mut+和Muts型转化子,用PCR法进一步鉴定阳性克隆.分别用甲醇诱导Mut+和Muts型转化子表达目的蛋白4d,取培养产物冻干浓缩,进行SDS-PAGE和Westernblotting,筛选出能特异表达目的蛋白的菌株,分析蛋白的含量及纯度.结果:重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达,其表达量约占培养上清分泌蛋白的76 5%.结论:重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达.

感染HCMV的腮腺导管上皮细胞CK和EMA丢失

目的 研究人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对腮腺导管上皮细胞表型产生的影响。方法 用免疫组化方法检测腮腺巨细胞包涵体病石蜡包埋组织中巨细胞病毒以及早期抗原、CK、EMA等的表达。结果 腮腺导管上皮细胞感染人巨细胞病毒后 ,作为上皮性标志物的CK和EMA表达呈阴性。结论 人巨细胞病毒感染腮腺导管上皮细胞使其CK和EMA丢失。

尿液HCMV DNA检测在儿童HCMV感染中的临床应用

目的：对患儿尿液进行 HCMV DNA荧光定量检测并对检测结果进行统计学分析，以了解 HCMV在患儿各年龄段及各种疾病中的感染情况。方法采用荧光定量PCR技术对2014年1月～2015年12月收集的1492份尿液标本进行 HCMV DNA荧光定量分析。结果新生儿组、婴幼儿组、学龄前组和学龄期组之间的 HCMV DNA检测结果比较差异有统计学意义（χ2＝9.253～23.452，P 均＜0.01）；学龄期组与新生儿组比较差异有非常显著性统计学意义（χ2＝23.452，P＜0.001）。患儿常见几种疾病组中，肝功能异常组、支气管肺炎组和发热组之间差异无统计学意义（χ2＝0.356～0.865，P均＞0.05）。肝功能异常组、支气管肺炎组和发热组三组与早产儿组和高胆红素血症组比较差异有统计学意义（χ2＝13.231，P均＜0.01）。结论新生儿和婴幼儿是人巨细胞病毒感染的高发人群，其中的早产儿和高胆红素血症患儿的 HCMV DNA检出率较高应引起重视；尿液 HCMV DNA检测简便快速，标本留取方便，在婴幼儿 CMV感染的诊断和治疗中具有重要意义。

金叶败毒颗粒对HCMV感染及母婴垂直传播的临床疗效研究

采用 EL ISA法筛查育龄妇女 2 32 0例及孕妇 34 88例血清中人巨细胞病毒 (HCMV) Ig M、Ig G,并以 Ig M阳性者作为研究对象 ;采用 RT- PCR技术检测孕中期脐血、羊水、孕晚期脐血中晚期 HCMV- m RNA,检测胎儿先天性感染。采用金叶败毒颗粒、更昔洛苇治疗 HCMV感染并与对照组 (Ig M自然转阴组 )比较 Ig M转阴率及垂直传播率。结果表明 :对育龄妇女金叶败毒颗粒治疗组、更昔洛苇治疗组其 HCMV- Ig M转阴率分别为 81.32 %、 10 0 % ,明显高于对照组 (4 8.0 8% ) ,差异具有极显著意义 (P<0 .0 0 1) ;两治疗组之间差异无显著意义。对孕妇金叶败毒颗粒治疗组其HCMV- Ig M转阴率为 80 .91% ,明显高于对照组 (39.81% ) ,差异具有极显著意义 (P<0 .0 0 1) ;金叶败毒治疗组母婴传播率为 19.6 4% ,明显低于对照组 (4 7.37% ) ,差异具有显著意义 (P<0 .0 5 )。提示 :金叶败毒颗粒是治疗 HCMV感染安全、有效的药物 ,能降低胎儿先天性 HCMV感染率 ,对孕妇

HCMV在基因转染细胞中复制的研究

用人喉上皮细胞癌细胞系(HEP_2)的DNA转染人胚肺细胞(HEL),得到了5株基因转染细胞(GTC),命名为A5、B3、G8、D3和H3.这些GTC的染色体数在HEL的染色体数与两个亲代细胞(HEP-2和HEL)染色体的和数之间,感染人巨细胞病毒ADI69株后4d,D3比A5、B3、G8和H3有更多的荧光阳性细胞和更高的病毒滴度.在D3中HCMV复制随感染剂量的增大而增速.不同代数的D3对HCMV具有相似的敏感性,HCMV感染传至100代的D3,电镜证实仍可象原代D3复制大量的HCMV.永生性的D3可以用作分析调控HCMV复制的宿主细胞因子、分离培养HCMV等的工具.

HCMV pp65 DNA疫苗诱导小鼠的细胞免疫应答

目的 构建含HCMV pp65336～ 50 7位氨基酸的重组真核表达质粒 pcDNA3 1 pp65作为HCMVpp65基因疫苗 ,观察其诱导小鼠的细胞免疫应答情况。方法 以 6～ 8周龄♀Balb/c小鼠为动物模型 ,试验组和对照组各 6只。试验组于股四头肌注射pp65DNA疫苗 ,对照组注射空载体pcDNA3 1。 2组小鼠分别在 0d、5d、3周注射该DNA疫苗 2 0 0μg。在末次免疫后 3d ,无菌取小鼠脾细胞 ,并用ConA和重组HCMV pp65336～ 50 7作为抗原刺激 ,吉氏液染色观察T淋巴细胞的形态学变化 ,并计算转化率。MTT法对脾脏的特异性杀伤细胞率和淋巴细胞的增殖指数进行测定 ,间接ELISA定量检测脾细胞上清中IFN γ的含量。结果 pp65336～ 50 7抗原刺激的DNA疫苗免疫鼠脾细胞体积变大 ,胞浆增多 ,核仁增多 ;淋巴细胞增殖试验示pp65336～ 50 7抗原能特异性刺激免疫鼠脾细胞增殖 ;试验组IFN γ较对照组增高 ,其含量为 80 0ng/L。与对照组比较 ,差异均具显著性 (P<0 0 5)。试验组及对照组脾细胞杀伤率分别为 :56 0 5 %±1 3 64 %、9 85 %± 2 0 6 % ,试验组脾细胞CTL活性比对照组增高 (P <0 0 5)。