姜黄素加重结肠癌细胞株HCT-116线粒体损伤和促进细胞凋亡的作用研究

目的:观察姜黄素对结肠癌细胞株HCT-116细胞增殖和凋亡的影响以及对细胞线粒体形态和功能的改变,并探讨其可能的机制。方法:体外培养结肠癌细胞株HCT-116,给与不同浓度的姜黄素(5、10、20、30μmol/L)处理,细胞计数试剂盒CCK-8观察细胞增殖的变化并筛选出最佳作用浓度。流式细胞术检测细胞凋亡的改变。线粒体膜电位检测试剂盒JC-1检测细胞内线粒体膜电位的变化。电镜和Mito Tracker Deep Red染色观察细胞内线粒体形态结构的变化。三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测细胞ATP和ROS的变化。分光光度计检测与凋亡密切相关的casppase-3和caspase-9活性变化。最后,Western blot检测结肠癌细胞内caspase-3和caspase-9蛋白水平的变化。结果:姜黄素处理细胞株HCT-116细胞后,细胞的增殖水平受到抑制,且呈浓度-时间依赖性,其半数最大抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为13μmol/L。姜黄素不仅增加早期凋亡的结肠癌细胞的比例,还使细胞内线粒体膜电位水平下降,且呈浓度依赖性。电镜结果显示姜黄素处理后,细胞内线粒体出现明显的线粒体肿胀,线粒体嵴肿胀、消失、膜破裂和空泡等。Mito Tracker Deep Red染色后显示线粒体数量减少且呈碎片状。细胞内的ATP生产明显下降。另外,姜黄素还增加细胞内caspase-3和caspase-9酶活性和蛋白水平的表达。结论:姜黄素抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,并促进细胞的凋亡,其机制与姜黄素加重线粒体形态和功能的损伤有关。

蟾蜍他灵对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨不同浓度蟾蜍他灵(BT)对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。方法采用CCK-8实验检测不同浓度(0、10、20、40、80、160、320 nmol/L)的BT处理24和48 h后的细胞活力,并计算半抑制浓度(IC 50);平板克隆实验验证0、12.5、25.0 nmol/L BT(设为A、B、C组)处理14 d后对HCT116细胞集落形成能力的影响;使用划痕和Transwell实验验证0、25、50 nmol/L BT(设为A、C、D组)处理24 h后对HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响;应用Western blot实验检测A、C、D组处理24 h后HCT116细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平。结果CCK-8实验结果显示,BT处理HCT116细胞24或48 h后,随着BT的浓度增加,其抑制HCT116细胞增殖的作用显著增强(F=2106.00、3725.00,P<0.05),处理24和48 h的IC 50分别为49.59、24.10 nmol/L;平板克隆实验结果显示,B、C组细胞的集落数量显著少于A组(F=159.30,t=12.40、17.32,P<0.05);划痕和Transwell实验结果显示,C、D组细胞迁移率和侵袭细胞数量显著低于A组(F=120.30、296.80,t=12.71~21.27,P<0.05);Western blot实验结果显示,BT显著上调HCT116细胞内E-cadherin蛋白表达(F=2736.00,P<0.05),其中C、D组显著高于A组(t=50.27、72.13,P<0.05);而BT显著下调N-cadherin蛋白表达(F=626.80,P<0.05),其中C、D组显著低于A组(t=26.54、33.57,P<0.05)。结论BT可明显抑制人结直肠癌细胞HCT116的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化过程,有望成为结直肠癌治疗的潜在候选药物。

SOX4靶向miR-17对结肠癌细胞HCT-116生物学行为的影响

目的探讨性别决定区Y框蛋白4(SOX4)及miR-17在结直肠癌中的表达及对HCT-116细胞生物学行为的作用。方法收集2020年3月至2022年1月在河北北方学院一附院和张家口市第一医院的27例结直肠癌患者组织标本并检测SOX4及miR-17的表达水平,并分析与临床病理特征的关系。利用慢病毒转染技术干预HCT-116细胞的SOX4及miR-17表达。检测各组细胞中SOX4和miR-17的表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力、细胞活性变化和相关蛋白表达。结果与正常组织比较,结直肠癌组织中SOX4表达水平升高。SOX4及miR-17在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.724,P<0.001),SOX4和miR-17的表达和病理分期、淋巴结转移、肝转移情况相关,差异有统计学意义(P<0.05),而与肿瘤的大小、分化程度无相关(P>0.05)。SOX4模拟组细胞增殖能力、迁移能力及细胞活性显著高于对照组及SOX4抑制剂组(P<0.05)。SOX4抑制剂组与对照组相比迁移及增殖相关蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论SOX4在结直肠癌组织中表达上调,SOX4的表达可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,miR-17可能是其下游调控靶点。

复方葛根汤诱导结肠癌HCT116细胞铁死亡分子机制研究

为探究复方葛根汤对结肠癌HCT116细胞增长作用及其分子机制,通过MTT法检测、克隆形成、形态学分析探讨复方葛根汤对HCT116细胞增长作用,以活性氧试剂盒检测、荧光显微成像及蛋白免疫印迹法探究其分子机制。研究结果显示,与溶媒对照组相比,复方葛根汤能显著抑制HCT116细胞增长能力,并呈浓度和时间依赖性,机制上能显著增加细胞内活性氧,显著上调铁死亡相关蛋白PTGS2、ACSL4蛋白的表达,及明显下调铁死亡相关蛋白GPX4表达,表明复方葛根汤可能通过诱导铁死亡机制抑制HCT116细胞增长。

基于CRISPR/Cas9技术的HCT-8细胞基因编辑系统构建

【目的】构建人回盲肠癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞系的CRISPR/Cas9基因编辑系统,实现对目的基因的高效编辑。【方法】采用慢病毒感染的方式,将慢病毒载体质粒LentiCas9-Blast与包装质粒pSPAX2和pMD2.G共转染至人胚胎肾(human embryonic kidney 293T,HEK293T)细胞系获得高滴度的重组慢病毒液,并感染HCT-8细胞系,以未感染组为阴性对照,用杀稻瘟菌素进行抗性筛选,直至阴性对照组全部死亡;采用有限稀释法对阳性细胞进行单克隆筛选,对筛选得到的单克隆细胞系进行扩大培养,并采用PCR及Western Blot试验验证Cas9基因及其蛋白表达情况,而后对阳性单克隆细胞系进行基因编辑效率及细胞系活性验证。【结果】得到能成功表达Cas9蛋白的6株HCT-8-Cas9单克隆细胞系。其中HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4细胞系蛋白量表达较高;对所筛选单克隆细胞系进行基因编辑效率检测,pXPR_011慢病毒表达报告基因载体系统检测结果表明,HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系Cas9基因编辑效率为48.82%,显著高于其他HCT-8-Cas9单克隆细胞系;单克隆细胞系活性检测结果表明,HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系细胞活性与HCT-8细胞系相比均无显著差异。【结论】HCT-8-Cas9_4细胞系能够稳定表达Cas9蛋白,具有良好的编辑效率,可用于后续靶标基因的高效编辑。

槐果碱对人肠癌细胞HCT-116生长抑制作用

目的探讨槐果碱对人肠癌细胞HCT-116生长的影响。方法选取人肠癌细胞HCT-116,用不同浓度梯度槐果碱作用48 h后,通过细胞毒性试验检测增殖能力,根据IC_(50)选择3个浓度进一步实验。通过平板克隆形成实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,线粒体膜电位检测线粒体膜电位水平,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白及生存素(survivin)的表达水平。结果细胞毒性试验显示,槐果碱可抑制HCT-116肿瘤细胞增殖,且随着槐果碱浓度的升高抑制作用增强。IC_(50)为2.134 mmol/L,并选择1、2和4 mmol/L进行进一步相关实验;在槐果碱作用后HCT-116细胞克隆能力、线粒体膜电位水平均明显下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);槐果碱作用后,HCT-116细胞内Bcl-xL、Bcl-2、survivin表达显著下调,而Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9显著上调。结论槐果碱可抑制肠癌细胞HCT-116增殖并通过线粒体途径促进凋亡。

左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能的保护及机制研究

目的 研究左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法 采用左金丸醇提物低、中、高剂量(5、10、20μg·mL^(-1))处理HCT116、IEC6细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况。通过体外构建IEC6、HCT116细胞共培养体系模拟结肠癌微环境,以左金丸(5、10、20μg·mL^(-1))进行干预;检测IEC6细胞跨膜电阻(TEER)值及细胞通透性;采用高效液相色谱(HPLC)法检测HCT116、IEC6细胞多胺含量;微量法检测HCT116细胞的葡萄糖消耗量、乳酸及ATP含量;Western Blot法检测IEC6细胞Zonula occluden 1(ZO-1)、Occludin蛋白和HCT116细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)、精眯/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)、鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)、SLC22A1、缺氧诱导因子1(HIF1α)、C-Myc、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、乳酸脱氢酶(LDHA)蛋白表达情况。结果 (1)与对照组比较,左金丸低、中、高剂量(5、10、20μg·mL^(-1))处理HCT116细胞24、48、72 h后,细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01);左金丸低、中、高剂量(5、10、20μg·mL^(-1))处理IEC6细胞24 h后,细胞增殖抑制率无明显变化(P>0.05)。(2)与IEC6细胞单培养组比较,共培养模型组细胞的TEER及FD4荧光强度显著降低(P<0.01);紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达量显著降低(P<0.01);IEC6细胞的多胺含量显著降低(P<0.01)。与HCT116细胞单培养组比较,共培养模型组HCT116细胞的多胺含量显著增加(P<0.01)。与共培养模型组比较,左金丸中、高剂量组细胞的TEER及FD4荧光强度显著升高(P<0.01);左金丸高剂量组IEC6细胞ZO-1、Occludin蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);左金丸低、中、高剂量组的IEC6细胞多胺含量显著增加(P<0.01),而左金丸中、高剂量组HCT116细胞的多胺含量显著降低(P<0.01)。(3)与对照组比较,左金丸能明显下调HCT116细胞多胺合成酶ODC、多胺转运体SLC22A1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),明显上调SSAT、OAZ1蛋白表达(P<0.05,P<0.01);能够明显抑制HCT116细胞的葡萄糖消耗量、乳酸生产量及ATP含量(P<0.05,P<0.01);明显下调糖酵解通路HIF1α、C-Myc、HK2、PKM2、PDK1、GLUT1、LDHA蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能具有保护作用,对结肠癌HCT116细胞具有增殖抑制作用,可能与其调节HCT116细胞多胺代谢、转运以及抑制肿瘤糖酵解水平有关。

对叶百部碱对HCT116及NCM460细胞活性的影响

目的:探讨对叶百部碱对人结肠癌HCT116细胞及人正常结肠NCM460细胞活性的影响。方法:选择人结肠癌HCT116细胞,利用对叶百部碱(0、25、50、75、100、125 mg·L^(-1))进行干预24、48、72 h,选择人正常结肠NCM460细胞,利用对叶百部碱(0、10、25、50、75、100、125 mg·L^(-1))进行干预24 h,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法检测对叶百部碱对HCT116及NCM460细胞的活性的影响;结果:与正常组比较,对叶百部碱组给药干预24、48、72 h人结肠癌HCT116细胞存活率显著降低,细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01);与正常组比较,对叶百部碱组给药干预24 h人正常结肠NCM460细胞存活率无显著差异(P>0.05)。结论:在一定实验条件下,对叶百部碱(10、25、50、75、100、125 mg·L^(-1))对人正常结肠NCM460细胞无明显细胞毒性作用;对叶百部碱(25、50、75、100、125 mg·L^(-1))可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖。

雷公藤红素对人结直肠癌细胞HCT-8增殖和侵袭迁移的影响及作用机制

目的探究雷公藤红素(celastrol,Cel)对结直肠癌细胞株HCT-8增殖和转移能力的影响及相关分子机制。方法分别以不同浓度的Cel(0,0.5,1.0,2.0μmol/L)处理HCT-8细胞24 h。采用MTT法检测细胞的存活率;细胞集落克隆形成法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞侵袭迁移能力;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS水平;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(cleaved PARP、Bcl-2、Bax)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及上皮间质转化(EMT)相关蛋白的相对表达量。结果MTT结果显示,细胞的存活率随Cel浓度增加而下降(P<0.01);Transwell结果显示,细胞侵袭和迁移能力随Cel浓度增加而下降(P<0.001);细胞内ROS含量随Cel浓度增加而增多,并且Western blot结果显示Bax、cleaved PARP、p-JNK、p-p38 MAPK、E-cadherin蛋白表达随Cel浓度增加而升高(P<0.01),Bcl-2、p-ERK1/2、Vimentin、Twist、Slug、Snail蛋白表达均显著降低并呈浓度依赖性(P<0.01)。结论雷公藤红素可以抑制结直肠癌HCT-8细胞的增殖、侵袭和转移,其作用机制可能与MAPK信号通路引起细胞凋亡及上皮间质转化进程(EMT)有关。

芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制

目的:探讨芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制。方法:体外培养人结肠癌HCT-8细胞,分为对照组、芝麻酚50μmol/L组、芝麻酚100μmol/L组和芝麻酚250μmol/L组共4组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组不同作用时间细胞增殖率,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路相关蛋白、增殖相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平。结果:经芝麻酚处理24、48、72 h后,HCT-8细胞的OD值从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,HCT-8细胞的抑制率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05);经芝麻酚处理后HCT-8细胞凋亡率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05);各组JAK2/GAPDH和STAT3/GAPDH蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);芝麻酚处理后HCT-8细胞中p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3蛋白表达水平从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P <0.05);芝麻酚处理后HCT-8细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05);芝麻酚处理后HCT-8细胞中Bax蛋白表达水平从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:不同剂量芝麻酚均对体外培养人结肠癌HCT-8细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

基于HCT-FEM和3D电磁模型的SAW滤波器性能仿真系统

该文基于分层级联有限元(HCT-FEM)和三维电磁模型构建了一套声表面波(SAW)滤波器性能仿真系统。采用Matlab协同COMSOL建立的HCT-FEM模型计算声学元件导纳,用ANSYS建立的三维电磁模型计算含芯片走线、引线/金属球、封装外壳及测试电路的外部电磁S参数,并在ADS软件中对SAW滤波器频率响应进行复原。将该系统应用于一款芯片级封装(CSP)的普通SAW滤波器和一款表贴封装(SMD)的单晶薄膜SAW滤波器电性能仿真,仿真与实测结果吻合较好。

HCT变换与联合稀疏模型相结合的遥感影像融合

提出了一种基于HCT变换和联合稀疏模型的遥感影像融合方法,可更有效地利用多光谱所需谱段的光谱信息,最终得到所需谱段的融合影像。该方法将所需谱段的多光谱影像进行HCT变换,获取其亮度分量和角度分量;然后利用亮度分量和全色影像小波变换的低频分量进行联合稀疏模型的构建、系数求解和融合,得到融合的全色低频分量;最后将该低频分量与前面步骤所得其他分量分别进行小波逆变换和HCT逆变换,得到高质量的融合影像。试验利用Pleiades-1和WorldView-2两种卫星数据进行验证,并通过视觉效果和量化的融合评价指标进行对比和分析,验证了本文算法的有效性。

茶树HCT基因的克隆及表达

Cs-EV12(GenBank登录号:GH618817)为一受假眼小绿叶蝉取食诱导的茶树香豆酰辅酶A:莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶的cDNA片段,应用RACE技术克隆了该基因的全长cDNA,命名为CsHCT(GenBank登录号:JQ619537)。CsHCT cDNA序列全长1 653 bp,包含一个编码447个氨基酸的完整开放阅读框。序列分析显示CsH-CT与毛果杨、烟草、拟南芥的HCT在氨基酸序列上一致性分别为54%、41%和40%,含有植物BAHD酰基转移酶家族活性中心的保守基序,以及与HCT正确折叠有关的DFGWG基序。HCT的表达受假眼小绿叶蝉取食、低温、紫外线和茉莉酮酸甲酯的诱导。

5周高原训练对优秀自行车运动员WBC、RBC、HGB和HCT影响的研究

通过对山东省8名优秀自行车运动员5周高原训练前、训练中与训练后与免疫能力和有氧运动能力相关指标变化规律的分析,研究高原训练对优秀自行车运动员免疫能力以及有氧运动能力的影响。8名研究对象在高原进行为期5周的训练,3天一周期,与平原训练内容一致。运动员WBC水平在上高原后第1周末开始减少,持续3周呈现出显著性差异(P<0.05)后上升,在下高原后的第1周达到一个峰值,并与进高原前呈现显著性差异(P<0.01),随后又下降趋于稳定;RBC、HGB和HCT三个指标变化趋势基本一致,都是在进入高原后升高,到第4、5周达到峰值后趋于稳定,呈现出和高原前比较显著性差异(P<0.05或P<0.01);高原训练结束后下降,直到低于高原训练前水平后回归,第5周左右达到高原训练前水平。经过5周的高原训练,可以观察到运动员的血液指标变化大致呈现3个时相的变化,即升高相、保持相、回归相,提示高原训练导致运动员免疫能力产生明显变化,与运动能力有关的指标显著升高,并持续到下高原后两周左右。高原训练要严格运动员机体监控,在下高原两周内参加比赛更有利于运动员成绩的发挥。

新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤的治疗

目的 :寻求有效的肿瘤基因治疗方法 ,研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型 ,瘤内注射脂质体包裹的真核重组子 pVHN和pVVP3。观测 pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的效果 ,免疫组化法检测肿瘤细胞Bcl 2和PCNA的表达。结果 :经HN基因和VP3基因联合治疗组的小鼠与荷瘤对照组小鼠相比 ,肿瘤体积明显缩小 ,抑瘤率可达 70 %。病理组织切片表明 ,治疗组裸鼠体内肿瘤细胞大量凋亡 ,局部地方可见细胞消失。免疫组化表明 ,Bcl 2和PCNA蛋白在荷HCT裸鼠对照组与各治疗组均有表达 ,其中Bcl 2表达在荷瘤对照组与pVHN治疗组差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,PCNA表达在荷瘤对照组与 pVHN +pVVP3治疗组差异极其显著 (P <0 .0 1)。结论 :NDVHN基因与凋亡素VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤细胞的增殖有一定抑制作用 ,可诱导其凋亡 ,其凋亡可能与下调Bcl 2表达有关。

木质素生物合成中C3H/HCT的研究进展

木质素是由三种不同的木质素单体聚合而成的,其含量和单体组成与植物体的综合利用密切相关。木质素单体的生物合成途径涉及到许多酶的参与,C3H/HCT是发现较晚的两个酶,在从对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)的羟基化过程中起作用,是控制木质素H-单体与G/S-单体相互转化的关键酶。该文主要对C3H/HCT的研究进展及在木质素生物合成中的作用进行了阐述。

小檗碱抑制HCT116细胞生长与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究小檗碱对结肠癌细胞的增殖抑制作用与Wnt/β-catenin信号的关系。方法结晶紫染色法检测小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用,采用流式分析及West-ern blot研究小檗碱诱导HCT116细胞凋亡;Western blot检测β-catenin蛋白表达、RT-PCR法检测β-catenin mRNA表达,确定小檗碱对其表达的影响;采用外源性过表达β-cate-nin研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与β-catenin的关系。结果小檗碱处理组细胞较对照组细胞增殖明显受到抑制,并诱导HCT116细胞凋亡。小檗碱处理组全细胞、胞质及核内β-catenin蛋白水平均明显较对照组低。外源性过表达β-catenin能减弱小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用。小檗碱处理组β-catenin mRNA表达明显受到抑制。结论小檗碱能抑制HCT116细胞增殖并抑制Wnt/β-catenin信号转导,其机制可能与下调β-catenin mRNA表达有关。

甲磺酸阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖的抑制作用及其机制

目的检测阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的抑制作用,探讨其可能的作用机制及其影响的信号通路。方法 MTT方法检测不同浓度(0、0.5、1、1.5、2μmol/L)的阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的毒性作用,并设置卡培他滨阳性对照组;Annexin VFITC/PI双染法检测上述不同浓度的阿帕替尼处理后结肠癌HCT-116细胞的凋亡情况,实时荧光定量PCR及Western Blotting技术检测其对凋亡相关基因及蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的影响,Western blotting技术检测其对Akt、p-Akt、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白表达的影响。结果 MTT细胞毒性检测结果表明,阿帕替尼在体外能有效抑制HCT-116细胞的增殖,IC50为1.335μmol/L。Annexin-V/PI双染法细胞凋亡检测结果表明,阿帕替尼能显著的诱导HCT-116细胞凋亡,并且呈浓度依赖性。实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明,阿帕替尼可以诱导促凋亡基因Bax和Caspase-3的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达。Western blotting检测信号通路蛋白的结果表明,在阿帕替尼处理后p-Akt和p-Erk1/2的表达显著降低,而Akt和Erk总蛋白水平没有变化。结论阿帕替尼可通过抑制MAPK/Erk、PI3K/Akt信号转导通路来实现诱导细胞凋亡,从而达到抑制HCT-116细胞增殖的目的。

洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察两种不同提法的洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用热水浸提法和乙醇抽提法从洋葱中提取黄酮类物质,MTT法测定其对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,免疫细胞化学染色检测Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法观察细胞凋亡,并通过基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带。结果:MTT法结果显示两种不同方法提取的黄酮类物质对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,而热水浸提法和乙醇抽提法相比,后者提取的物质抑制作用优于前者,发挥作用的起始浓度也较低;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示黄酮类物质作用于HCT116细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带;免疫细胞化学染色和TUNEL结果均表明在一定药物浓度作用后,细胞出现凋亡。结论:洋葱中的黄酮类物质对体外培养的人结肠癌HCT116细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导的作用,其中乙醇抽提法提取的黄酮类物质作用更强。