槲寄生通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡

目的:探讨槲寄生诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡所涉及的信号转导途径。方法:采用MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blotting和DIG-EMSA研究细胞调亡途径。结果:槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带;槲寄生可通过抑制IκBα蛋白磷酸化进而抑制NF-κB;槲寄生可增强羟基喜树碱对HCT116细胞诱导的凋亡作用。结论:槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制和诱导调亡作用,并且通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡。

槲寄生凝集素抑制人大肠癌HCT116细胞环氧化酶-2表达的研究

目的:探讨槲寄生凝集素对人大肠癌HCT116细胞环氧化酶(COX-2)表达的影响。方法:采用RT-PCR、Western blotting和ELISA等方法检测不同浓度(0.1～1mg/L)槲寄生凝集素对细胞COX-2及其产物前列腺素E2(PGE2)表达的影响。结果:槲寄生凝集素可抑制HCT116细胞的COX-2mRNA、蛋白表达及PGE2的水平,其抑制COX-2蛋白的表达与PGE2的水平相一致,只在大剂量(1mg/L)时对COX-1mRNA有抑制作用。结论:槲寄生凝集素具有抑制HCT116细胞的COX-2基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在一定浓度(0.1～1mg/L)和时间范围(3～24h)内,表现出时效与量效关系。

高菜硫代葡萄糖苷提取物对人结肠癌细胞HCT116的抑制作用

为了探讨高菜(Brassica juncea var.integlifolia)中硫代葡萄糖苷(简称硫苷)的含量、种类及其对人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖和凋亡的影响,采用紫外分光光度法检测新鲜高菜中总硫苷含量,高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术鉴定硫苷化合物结构,流式细胞仪、蛋白质印迹法和实时定量聚合酶链式反应检测高菜硫苷提取物对人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖和凋亡的影响。结果表明:新鲜高菜中总硫苷含量为15.45 mg/g;从高菜硫苷提取物(总硫苷质量分数为73.7%)中鉴定出2-丙烯基硫苷、4-甲基硫代丁基硫苷、4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷3种主要的硫苷化合物;高菜硫苷提取物对正常人结肠成肌纤维细胞CCD-18Co没有抑制作用,但通过诱导细胞周期基因及相关信号蛋白(Cyclin B、CyclinD1、CyclinE)下调使HCT116细胞的细胞周期停滞,通过诱导细胞凋亡基因及相关信号蛋白(Caspase-3、Cleaved caspase-3)的上调使人结肠癌细胞株HCT116细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖。

异鼠李素诱导HCT116细胞自噬

目的研究中华补血草[Limonium sinense(Girard)Kuntz]中主要抗癌活性成分之一异鼠李素诱导人结直肠癌(HCT116)细胞自噬的机理。方法采用四唑盐比色法(MTT)检测异鼠李素对HCT116细胞的抑制作用,单丹尸磺酰胺(MDC)染色法检测自噬小泡的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3的表达情况。结果异鼠李素明显抑制HCT116细胞的增殖,且呈剂量依赖性效应。异鼠李素处理24 h后,自噬小泡形成增多,LC3蛋白表达增强。3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理能够明显降低异鼠李素对肿瘤细胞的抑制作用。结论实验结果显示中华补血草中的异鼠李素可以诱导HCT116细胞发生自噬,导致细胞死亡。

siRNA干扰沉默Slug基因表达抑制结肠癌细胞HCT116生长和侵袭的研究

目的:研究RNA干扰Slug表达对结肠癌细胞HCT 116生长和侵袭的影响,并探讨Slug对E-钙黏素(E-cadherin)的调控作用。方法:将表达Slug siRNA的3个载体pGenesi-l/Slug siRNA1-3和阴性对照pGenesi-INC分别转染HCT 116细胞,反转录PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测SlugmRNA和蛋白的表达。选取干扰效果最强的质粒转染细胞,采用噻唑蓝(MTT)染色检测细胞的增殖活性,细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。RT-PCR和Western blot检测抑制Slug表达后,E-cadherinmRNA和蛋白的表达水平变化。结果:3条Slug siRNA干扰序列均能有效抑制Slug表达,其中Slug siRNA3干扰效果最强:与阴性对照相比,mRNA和蛋白水平分别下降了85%和80%。Slug siRNA3组HCT 116细胞生长速度显著低于对照组(P<0.05),划痕愈合的速度以及侵袭至Matrigel胶上的平均细胞数量明显低于对照组(P<0.05)。干扰Slug的表达能够显著上调E-cadherin的表达。结论:RNA干扰Slug基因能够抑制结肠癌细胞生长及侵袭,其机制可能与上调E-cadherin有关。

皂角刺总黄酮诱导HCT116细胞凋亡的透射电镜观察

目的:研究皂角刺总黄酮对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用CCK-8试剂盒检测对细胞增殖的抑制作用,透射电镜观察对细胞凋亡的超微结构变化。结果:皂角刺总黄酮能够显著抑制HCT116细胞的增殖,且呈现出一定的剂量依赖性。皂角刺总黄酮作用48小时后,HCT116细胞透射电镜可见核固缩、碎裂和凋亡小体等凋亡形态学改变。结论:皂角刺总黄酮可抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,诱导其凋亡。

角蛋白18磷酸化与奥沙利铂作用下结肠癌HCT116细胞凋亡的关系

目的探讨在化疗药物作用下角蛋白18(K18)磷酸化与结肠癌HCT116细胞凋亡的关系。方法以不同浓度的奥沙利铂作用于HCT116细胞,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和钙黄绿素-AM/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)法检测细胞凋亡情况,免疫印迹(western blotting)方法检测K18磷酸化表达水平;HCT116细胞分别转染绿色荧光蛋白(GFP)、野生型K18和33、52丝氨酸(Ser33A、Ser52A)磷酸化位点突变的K18质粒后,用奥沙利铂处理,An-nexin V-FITC/PI和Calcein-AM/PI法分析K18及其突变对细胞凋亡的影响。结果奥沙利铂可以使HCT116细胞发生明显的凋亡,而且凋亡比例随着药物浓度的增加而升高,经20、60、100μmol/L奥沙利铂处理后,细胞较对照组均出现凋亡增加,依次为(15.6±3.1)%、(30.1±4.9)%和(62.6±6.8)%,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);K18的Ser33、Ser52磷酸化水平也随着药物浓度的增加而增加;单纯质粒转染的各细胞组之间的凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05),但经过奥沙利铂处理后,Ser33A和Ser52A质粒转染的HCT116细胞的凋亡率[(27.3±6.7)%和(31.2±8.1)%]明显低于GFP和K18质粒转染的细胞凋亡率[(40.5±4.8)%和(50.9±6.3)%,P<0.05],转染K18质粒组的HCT116细胞的凋亡率高于GFP转染对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ser33A和Ser52A质粒转染组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 K18 Ser33和Ser52磷酸化水平随着细胞凋亡水平的增加而增加;K18过表达提高了HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性,而抑制K18 Ser33和Ser52的磷酸化可以减少化疗药物作用下结肠癌细胞的凋亡。

基于Wnt/β-catenin通路的竹节香附素A对结肠癌HCT116细胞株上皮间充质转化的调控作用研究

目的观察竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌HCT116细胞株上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其可能机制。方法收集结肠癌患者的结肠癌组织标本和正常结肠组织标本,免疫组化实验检测β-连环蛋白(β-catenin)和上皮型钙黏蛋白(E-cad)的表达情况,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RA(1、2、4、8、16μmol/L)对HCT116细胞株的增殖抑制情况。运用转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白诱导建立HCT116细胞株EMT模型。通过划痕实验及Transwell实验分别观察RA 1、2μmol/L对EMT模型(TGF-β1诱导组)细胞迁移、侵袭能力的影响。免疫蛋白印迹(Western Blot,WB)实验和实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验分别检测β-catenin、E-cad、波形蛋白(Vimentin)、Snail相关蛋白及基因的表达情况。结果免疫组化结果显示,β-catenin蛋白在结肠癌组织中的表达高于正常结肠组织(P<0.05),E-cad蛋白表达减少(P<0.05)。MTT实验结果显示,RA能显著抑制HCT116细胞株增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性(P<0.05)。划痕实验及Transwell实验分别证实,经TGF-β1诱导后的HCT116细胞株迁移和侵袭能力均显著增强(P<0.05,P<0.01),且WB和qRT-PCR实验结果显示,E-cad蛋白和基因表达减少(P<0.05,P<0.01),Vimentin、Snail、β-catenin蛋白和基因表达增加(P<0.05,P<0.01),说明造模成功。划痕实验显示,RA 1、2μmol/L作用于EMT模型细胞后,划痕愈合率较TGF-β1诱导组降低(P<0.05,P<0.01),且RA 2μmol/L组低于RA 1μmol/L组(P<0.05),提示细胞迁移能力减弱;Transwell实验显示,RA 1、2μmol/L可抑制穿膜细胞数,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且RA 2μmol/L组低于RA 1μmol/L组(P<0.05)。WB及qRT-PCR实验显示,RA 1、2μmol/L组Wnt/β-catenin通路相关因子β-catenin,以及EMT相关因子Vimentin、Snail蛋白和基因表达较TGF-β1诱导组显著下降(P<0.05,P<0.01),E-cad蛋白和基因表达较TGF-β1诱导组升高(P<0.05,P<0.01)。结论RA可通过Wnt/β-catenin通路抑制HCT116细胞株EMT作用,从而减少细胞的侵袭和转移。

6种鸢尾黄素曼尼希碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的:对鸢尾黄素进行结构修饰,寻求新的具有抗肿瘤活性的化合物。方法:以鸢尾黄素为先导化合物,分别加入乙醇胺、甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺、正丙胺等胺类试剂和甲醛溶液,经曼尼希(Mannich)反应得到鸢尾黄素曼尼希碱衍生物,根据红外光谱、紫外光谱、质谱、核磁共振等确定其结构。采用溶解度试验法考察鸢尾黄素及其衍生物的水溶性;采用MTT法考察鸢尾黄素及其衍生物对人结肠癌细胞株HCT116、人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50);以H22肝癌荷瘤小鼠为模型,考察鸢尾黄素及其衍生物(剂量均为100 mg/kg)的体内抑瘤率。结果:共合成6个鸢尾黄素曼尼希碱衍生物,分别为8-(N-羟乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-甲基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N,N-二乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N,N-二甲基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-正丙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮(依次记为化合物1~6)。与鸢尾黄素比较,6个衍生物的水溶性明显提高,溶解度是鸢尾黄素的5~20倍;其中化合物1、3、5对HCT116细胞的IC50分别为(34.82±3.27)、(16.21±4.13)、(33.12±3.25)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(45.23±5.74)μmol/L];对A549细胞的IC50分别为(37.05±5.74)、(26.88±4.52)、(30.13±6.23)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(53.24±6.34)μmol/L];对HepG2细胞的IC50分别为(23.74±1.45)、(18.96±2.34)、(30.95±2.87)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(48.98±2.58)μmol/L];对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤率分别55.51%、57.20%、49.15%,且均高于鸢尾黄素的抑瘤率(33.05%),其余3个化合物相比鸢尾黄素的抗肿瘤活性无明显优势。结论:在本研究合成的6个鸢尾黄素曼尼希碱衍生物中,化合物1、3、5均具有强于鸢尾黄素的抗肿瘤活性。

Stat3靶向RNA干扰重组体的构建及鉴定

目的设计针对Stat3的发夹样RNA干扰重组体,通过脂质体转染结肠癌细胞HCT116观察其干扰效果,为探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础。方法设计针对Stat3编码区的有短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,克隆到载体Pavu6+27中构建重组体Pavu6+27-Stat3,再对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析。脂质体法转染重组体至大肠癌HCT116细胞株中,以空质粒(Pavu6+27)转染为对照;RT-PCR法观察Stat3基因表达改变。结果酶切鉴定和测序分析均提示Stat3靶向RNA干扰重组体的构建成功,Pavu6+27-Stat3转染后HCT116细胞Stat3基因表达较空载体Pavu6+27转染的对照组显著下降。结论Stat3靶向RNA干扰重组体成功构建,并能有效抑制HCT116细胞中Stat3基因表达。本实验为下一步利用RNAi技术沉默肿瘤细胞中Stat3基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡或抑制其增生,为探索肿瘤基因治疗的新途径打下基础。

mTOR信号通路介导黄芩苷抑制人结肠癌细胞的增殖

目的探讨黄芩苷抑制人结肠癌细胞(HCT116)增殖的分子机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷(0.01～100μg/ml)对体外培养的HCT116细胞增殖的抑制作用;采用Western blot分析检测被黄芩苷干预的HCT 116细胞的增殖相关蛋白的表达。结果与对照组比较,浓度为1～100μg/ml的黄芩苷处理组明显抑制HCT 116细胞的增殖(P<0.05)。用100μg/ml黄芩苷处理后,增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、eIF4E表达明显下调(P<0.05),4E-BP1表达明显上调。p-mTOR(Ser2448)、p-S6(Ser235/236)、p-4E-BP1(Thr37/46)的磷酸化水平下降(P<0.05)。结论黄芩苷能通过抑制mTOR信号通路来抑制人结直肠癌HCT116细胞的增殖。

奥沙利铂诱导结肠癌HCT116细胞凋亡过程中p53凋亡刺激蛋白2的磷酸化对p53促凋亡功能的影响

目的探讨p53凋亡刺激蛋白2（ASPP2）的磷酸化状态对ASPP2／p53凋亡通路活性的影响。方法结肠癌HCT116细胞分别转染野生型ASPP2表达质粒（Aw）和非磷酸化突变型ASPP2质粒（Am），使细胞过表达野生型和非磷酸化突变型ASPP2蛋白。以奥沙利铂诱导HCT116细胞凋亡。annexinV／PI双染细胞后，以流式细胞术分析HCT116细胞的凋亡水平。Westernblot法检测HCT116细胞中ASPP2蛋白的表达量和磷酸化状态。免疫共沉淀法检测ASPP2蛋白与p53的结合情况。结果奥沙利铂能诱导HCTl16结肠癌细胞凋亡以及ASPP2set92和ser361两个位点发生磷酸化。Aw和Am质粒转染的p53^＋/＋ HCT116细胞的凋亡率分别为（3．8±1．0）％和（3．9±1．2）％，与绿色荧光蛋白（GFP）质粒转染的p53^＋/＋ HCT116细胞的凋亡率[（4．0±0．8）％]差异无统计学意义（P〉0．05）。但经过奥沙利铂处理后，Aw质粒转染的p53^＋/＋HCT116细胞的凋亡率为（46．7±3．9）％，明显高于Am和GFP质粒转染的p53^＋/＋HCT116细胞[分别为（40．1±10．2）％和（37．1±6．9）％，P〈0．05]，而Am和GFP质粒转染组p53^＋/＋HCT116细胞的凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。磷酸化的ASPP2通过p53依赖途径促进奥沙利铂诱导的HCT116细胞凋亡，而ASPP2的磷酸化状态影响其与p53的结合能力。结论在奥沙利铂诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡过程中，ASPP2的磷酸化状态调节p53的促凋亡功能。

裸鼠盲肠黏膜下注射HCT116细胞建立结肠癌原位种植及转移模型的研究

目的建立一种简便、可行、稳定的裸鼠盲肠黏膜原位种植癌及转移模型。方法将人结肠癌细胞株HCT116细胞注射接种于裸鼠盲肠黏膜下,HE染色及人癌胚抗原(CEA)免疫组化检测接种后不同时期的盲肠原位瘤,腹腔淋巴结、肝、肺组织转移情况。结果盲肠接种HCT116细胞后2周,90%裸鼠均长出直径2~5 mm的盲肠原位瘤;接种后4周开始有腹腔淋巴结转移,12周时淋巴结转移率100%;接种10周时见肝、肺有转移,12周时肝、肺转移率分别为60%、39%。结论利用盲肠黏膜下原位接种HCT116细胞法建立裸鼠结肠癌模型,可模拟结肠癌临床原位发生、发展演变过程,方法简便且成瘤率高,为深入研究结肠癌转移机制的基础研究提供理想、稳定的动物模型。

下调REV7基因对于人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及机制研究

目的研究下调REV7基因表达对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及其机制。方法对HCT116细胞进行培养并运用RNA干扰技术实现REV7基因下调,将细胞分为空白组、转染阴性RNA oligo片段阴性对照组、转染REV7 RNA oligo的REV7基因下调组。克隆形成实验反映细胞增殖水平,蛋白印迹法检测相关基因表达水平、细胞凋亡发生水平和非同源末端连接途径发生水平。结果6Gy照后REV7 siRNA组细胞克隆形成率降低(P<0.05)。REV7 siRNA组REV7基因下调效率>60%。REV7 siRNA组γH2AX、Caspase9表达升高(P<0.05),Ku80、XRCC4表达降低(P<0.05)。结论下调REV7基因能提高HCT116细胞放射敏感性,其机制可能与下调REV7后非同源末端连接的发生被削弱有关。

LncRNA ANRIL靶向miR-195对HCT116细胞及裸鼠移植瘤放射增敏实验研究

目的探究LncRNA ANRIL对结直肠癌HCT116细胞体外体内放射增敏作用及机制。方法qPCR检测ANRIL表达。将阴性对照siRNA、ANRIL siRNA、miR-NC mimic、miR-195 mimic、miR-NC inhibitor、miR-195 inhibitor转染至HCT116细胞中分别记为阴性对照、沉默ANRIL、过表达miR-NC、过表达miR-195、抑制miR-NC、抑制miR-195组,以不做任何处理的HCT116细胞为空白对照组。克隆形成实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡,StarBase预测ANRIL下游miRNAs,双荧光素酶报告基因实验进一步验证。裸鼠皮下移植瘤实验检测ANRIL对照射后移植瘤生长影响。结果沉默ANRIL组细胞存活分数较阴性对照组降低(P<0.05),其放射增敏比为1.52。沉默ANRIL+4 Gy组细胞凋亡率较阴性对照+4 Gy组增加[(27.86±2.78)%︰(12.06±1.46)%,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示在13、16、19、22、25天时阴性对照组肿瘤体积比沉默ANRIL组降低[(234±66)、(273±63)、(296±72)、(321±85)、(403±94)mm^3与(357±79)、(485±124)、(617±143)、(764±174)、(985±221)mm^3,P<0.05]。miR-195是ANRIL靶基因,抑制miR-195可逆转沉默ANRIL对HCT116细胞放射增敏和凋亡促进作用及移植瘤生长抑制作用。结论LncRNA ANRIL通过调控miR-195表达来调节HCT116细胞放射敏感性,可能为临床结直肠癌放疗提供一个新的增敏靶点。

下调Annexin A3基因对结肠癌HCT116/L-OHP细胞生物学特性影响

目的肿瘤患者体内人膜联蛋白A3(annexinA3,ANXA3)水平升高可能为结直肠癌(colorectal cancer,CRC)潜在筛查的标志物。本研究探讨ANXA3在CRC耐药细胞株HCT116/LOHP中表达,及其对细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法设计合成慢病毒载体GV493,感染HCT116/L-OHP耐药细胞株,实验分为对照组、空载体组、LV-ANXA3-RNAi-1实验组和LV-ANXA3-RNAi-2实验组4组。利用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测ANXA3mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法测定细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell双室法检测细胞侵袭能力。结果成功构建下调ANAX3稳定感染细胞株,与对照组(4.889±0.652 7)和空载体组(1.000±0.062 3)相比,实验组LV-ANXA3-RNAi-1(0.532 7±0.039 8)与LV-ANXA3-RNAi-2(0.466 9±0.014 8)的ANXA3mRNA表达量下降,F=125.5,P<0.001;实验组LV-ANXA3-RNAi-1、LV-ANXA3-RNAi-2的ANXA3蛋白表达为0.147 5±0.015 5、0.149 1±0.010 7与对照组(0.937 4±0.025 8)和空载体组(0.678 5±0.063 7)相比,ANXA3蛋白表达量下降,F=123.2,P<0.001;实验组细胞增殖速度减慢,P<0.001;LV-ANXA3-RNAi-1和LV-ANXA3-RNAi-2实验组细胞凋亡率分别为(26.2±0.519 6)%、(36.47±0.545 7)%,高于对照组(7.2±0.404 1)%和空载体组(3.3±0.230 9)%,F=1 259,P<0.001;LV-ANXA3-RNAi-1和LV-ANXA3-RNAi-2实验组穿透滤膜的细胞数量分别为63.67±6.119、50.00±5.132,少于对照组(112.3±1.453)和空载体组(100.0±4.359)穿透滤膜的细胞数量,细胞侵袭能力下降,F=40.89,P<0.001。结论下调ANXA3基因可抑制人结肠癌细胞HCT116/L-OHP的增殖,促进细胞凋亡,降低细胞的侵袭能力。

吲哚美辛对结肠癌细胞CDK_2、CDK_4、p21^(WAF1/CIP1)、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的 非甾体类抗炎药通过环氧合酶途径是抑制肿瘤的机制之一。是否还有其他途径抑制细胞增殖及诱导凋亡。探讨吲哚美辛抗肿瘤的作用机制 ,为其临床应用提供实验依据。方法 不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞 2 4h ,通过Western蛋白印迹技术检测CDK2 、CDK4 、p2 1WAF1/CIP1、Bcl 2及Bax蛋白表达。结果 吲哚美辛降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2 、CDK4 及抗凋亡蛋白Bcl 2的表达 ,上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制剂p2 1WAF1/CIP1蛋白 ,而对促凋亡蛋白Bax的表达无影响。结论 吲哚美辛通过降低CDK2 、CDK4 、Bcl 2蛋白 ,上调 p2

去甲斑蝥素通过下调VE-Cadherin和MMP-2/9活性抑制结肠癌血管拟态形成的体外研究

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对结肠癌中血管生成拟态(VM)形成的作用及其可能的机制。方法:采用MTT法检测结肠癌细胞HCT116对NCTD的敏感性,筛选无毒剂量;在三维培养基础上观察NCTD作用后VM的形成情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测在NCTD干预后细胞内血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin,VE-Cd)的mRNA表达水平;Western Blot检测NCTD作用后VE-Cd蛋白表达水平;采用明胶酶谱法检测NCTD对三维培养的HCT116细胞MMP-2和MMP-9活性的影响。结果:三维培养下无毒剂量的NCTD能有效地抑制VM形成;VE-Cd mRNA表达在药物作用后出现明显下调;而HCT116细胞的胞浆和胞膜中VE-Cd蛋白均呈下调趋势,胞膜中VE-Cd蛋白下调更明显;三维培养的HCT116细胞MMP-2和MMP-9活性随着NCTD药物浓度的增加而逐渐降低。结论:体外实验研究中,NCTD可以有效抑制结肠癌VM的形成,其机制可能与下调VE-Cd表达和降低MMP-2、MMP-9的活性有关。

延龄草皂苷通过降低成纤维细胞活化蛋白表达水平抑制人类结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的研究延龄草皂苷是否能通过影响纤维细胞活化蛋白(FAP)表达来抑制结肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法将对数生长期结肠癌细胞HCT116分为5组:对照组、siRNA组、低剂量实验组、中剂量实验组和高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用含浓度为30, 60, 90 mg·L^(-1)延龄草皂苷的DMEM培养基100μL进行培养,对照组用等剂量的1%甲醇溶剂DMEM培养基进行培养,siRNA组用等剂量siRNA试剂且不含药物的DMEM培养基进行培养。用四唑盐(MTT)比色法增殖细胞实验筛选半数抑制浓度(IC_(50))及药物干预浓度;用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应分析检测FAP基因表达水平;用MTT比色法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果对照组、siRNA组、低剂量实验组、中剂量实验组和高剂量实验组的细胞增殖抑制率分别为(0.00±0.01)%,(55.03±6.32)%,(12.63±1.82)%,(28.92±2.48)%和(46.22±5.01)%;这5组的FAP基因表达分别为1.00±0.01,0.01±0.01,0.42±0.13,0.12±0.06和0.03±0.05;这5组的细胞凋亡率分别为(5.02±0.92)%,(68.92±7.01)%,(18.02±2.11)%,(35.22±4.67)和(60.18±6.33)%;这5组的细胞迁移水平分别为150.67±16.24,21.97±1.63,90.27±9.33,65.20±5.31和41.37±3.46;这5组的细胞侵袭水平分别为139.00±13.52,12.40±1.00,87.17±8.00,52.43±4.20和35.63±2.18。上述指标,实验组与对照组比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论延龄草皂苷通过降低FAP表达水平抑制人类结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。