广州地区259例丙型肝炎病毒患者HCV基因分型研究

目的 了解广州地区丙型肝炎病毒患者的HCV基因型分布情况,为该地区丙型肝炎病毒的预防和诊疗提供依据。方法 选择自2019年9月至2023年4月共259例丙型肝炎病毒患者的HCV基因分型的结果,分析比较不同年龄、性别和年度各基因型感染率的差异。结果 共纳入259例患者,最常见的基因型为6a型和1b型,占42.47%和42.08%,与其他亚型差异有统计学意义(P<0.05)。其余依次为3a型占6.18%,2a型占4.63%,3b型占4.25%,2b型占0.39%,未发现亚型混合感染。1b型,青年人群(41.86%)、中年人群(31.447%)分别低于老年人群的71.93%;6a型,青年人群(44.186%)、中年人群(51.572%)分别高于老年人群的15.789%,差异有统计学意义(P<0.05)。女性1b型63.077%、2a型10.769%分别高于男性的35.052%和2.577%,女性6a型18.462%低于男性的50.516%,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年度各基因型感染率差异无统计学意义。结论 广州地区丙型肝炎病毒患者HCV基因分型以6a型、1b型为主。1b型多见于60岁以上的老年人群和女性,6a型多见于中青年人群及男性。

血液透析患者丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型

目的 建立一种丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型方法。方法 对 4 7份血液透析患者HCVRNA阳性的标本 ,用 5′非编码区 (5′ NCR) 1、2、3、1b型特异性引物 ,进行逆转录巢式PCR扩增分型。结果 4 7份HCVRNA样本 4 3例可以分型 ;优势株为 1b亚型 ,1b及 1b相关型占总样本数的 87.2 3% (4 1 / 4 7) ;7例为混合感染 ,占可分型数的 1 6 .2 7% (7/ 4 3)。结论 本组血液透析患者感染的HCV基因型的分布可能与地区流行及医源性传播有关 。

献血人群HCV携带者NS5b区基因多态性的初步探讨

目的 探讨献血人群中丙型肝炎病毒(HCV)携带者NS5b区基因多态性。方法 对广西、安徽、西安、江苏、上海五个地区184例抗-HCV阳性献血员的血清用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行了HCVRNA检测,并对HCVRNA阳性血清用限制性片段长度多态性方法(RFLP)分析。结果 共检出42例HCVRNA阳性血清,其中广西8例,安徽4例,西安2例,江苏9例,上海19例。对这42份血清进行RFLP分析。结果显示:HCV 1b型37例(37/42,88.1％),HCV2a型5例(5/42,11.9％)。其中1b型中广西7例,安徽4例,江苏9例,上海17例;2a型中广西1例,上海2例,西安2例。进一步的实验表明,42例PCR产物全部都具有Hae Ⅲ酶切点,且5例2a型表现出3种基因变异。结论 我国献血人群中HCV感染者大多数属1b型,且HCV携带者的HCV基因在亚型下存在多种有规律的变异。

RT套式PCR检测血浆HCV RNA及与抗HCV检测的比较

应用微量血清热变性法提取核酸 ,逆转录套式聚合酶链反应 (RT nestPCR)检测血浆HCVRNA ,并与抗HCVELISA检测结果比较 ,对HCVRNA阳性标本进行HGVRNA的筛查。结果在 32例抗HCV阳性和 2 0例抗HCV阴性血浆中 ,HCVRNA分别检出 18例和 2例 ,总符合率为 70 % ,2 0例HCVRNA阳性者中有 2例合并感染HBV ,1例合并感染HGV。

输血后肝炎的临床研究

利用血清学ＥＬＩＳＡ法和ＰＣＲ技术对１６９名输血后肝炎（ＰＴＨ）患者的病原学进行了研究。结果表明，ＰＴＨ主要致病原为ＨＣＶ（９８．２２％），其中部分患者（１４．０２％）同时合并有ＨＢＶ感染，３例ＰＴＨ病因尚不明确，有待进一步研究。ＨＣＶ所致ＰＴＨ患者抗ＨＣＶ检出时间为ＰＴＨ症状出现后７ｄ～１年，平均为５４．６２ｄ。ＨＣＶＲＮＡ在感染早期（６～２０ｄ，平均８．７２ｄ），即可检出。对８４名ＰＴＨ患者１．５～３年内抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ动态观察的结果表明，抗ＨＣＶ可较长时间持续存在，而ＨＣＶ病毒血症可有３种表现形式：一过性病毒血症、持续性病毒症和间歇性病毒血症。本研究证实，认真开展献血者抗ＨＣＶ筛查对于减少或防止ＰＴＨ发生十分重要；另外，医务人员应严格掌握输血指征，严禁无指征输血。

职业献血浆员HBV和HCV感染状况的研究

本文采用ELISA法检测247名职业健康献血浆员中抗-HCV和HBV感染标志(HB-VM),并用PCR技术检测其中85人血清HBV-DNA的存在状况.发现抗-HCV阳性率为4.0%,HBVM阳性率为29.1%,HBV-DNA阳性率为11.8%≥40岁人群抗-HCV阳性率明显高于30岁以下人群(7.7%比0,P=0.042).HBVM阳性者抗-HCV阳性率明显高于HBVM阴性者(8.3%比2.3%,P=0.038),HBV感染与HCV感染之间存在一定的伴随关系.HBVM阳性者血清HBV-DNA阳性率明显高于HBVM阴性者(18.2%比 0,P<0.05).结论认为目前常规筛选献血员的方法不安全,建议加以改进.

HCV RNA载量与肝脏组织损伤的关系

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)RNA复制水平与肝功能丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)之间的相互关系。方法收集1182例疑似丙肝病人血清标本,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HCV RNA,利用酶动力法测定ALT、AST,采用ELISA测定抗HCV抗体。数据采用SPSS16.0统计软件处理。结果病人血清样本中,HCV RNA阳性801例(64.8%),其中抗HCV阳性766例(95.6%);HCV RNA阴性381例(32.2%),其中抗HCV阳性100例(26.2%)。HCV RNA阳性样本中同时抗-HCV阳性者ALT,AST异常率分别为59.0%和60.8%;抗-HCV阴性者为31.4%和34.2%。HCV RNA阴性样本中同时抗-HCV阳性者ALT,AST异常率分别为24.0%和15.0%,抗-HCV阴性者为13.9%和12.1%。HCV RNA含量与ALT、AST水平明显成正相关,r=0.62,P<0.05。结论 HCV RNA含量与肝组织损伤程度成正相关。

几家HCV抗体诊断试剂盒检测系列血清的比较

应用Abbott、UBI及国内几家的HCV第二代抗体诊断试剂盒A、B、c及D检测25名HCV感染者的210份感染后不同时期的系列血清,首次采用ELISA及RIBA分片段检测抗体,并与敏感的PCR法检测血清中HCV RNA结果相比较。虽然各试剂盒的总体检测符合率无显著性差异,但个别国产试剂盒的早期检测能力尚有待提高。用任何一家抗体检测试剂盒均会漏检小部分标本,抗体检测阴性的血清在100000倍稀释后仍可检出HCV RNA,因此,有必要发展包括更多片段包被的第三代HCV抗体诊断试剂盒。

丙型肝炎病毒RNA含量与抗-HCV及ALT的关系探讨

目的了解丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)与抗丙肝病毒抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)的关系。方法83份确诊为丙肝的住院患者样本作观察组,95份健康体检人群样本作对照组,用荧光定量逆转录聚合酶反应(FQ-RT-PCR)检测这两组样本的HCV RNA含量,并同时采用ELISA法检测抗-HCV,用全自动生化检测仪测定ALT水平。结果观察组HCV RNA含量高于80 copy／ml者67份,抗-HCV阳性者64份,经进一步相关性分析,两者有很好的相关性(r=0．587,P=0．002);83份病例中有58份ALT异常,其异常率随HCV RNA含量的升高而增加。经统计学分析,ALT异常例数和正常例数差异有显著性(P<0．01);ALT水平和HCV RNA含量无相关性(r=0．175,P=0．095);而ALT异常率与HCV RNA含量呈正相关(r=0．903,P=0．036)。结论HCV RNA含量与抗-HCV同时检测可提高临床对丙型肝炎的诊断。HCV RNA是反映HCV复制的可靠指标,结合ALT的结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的炎症状态。FQ-RT-PCR法检测HCV RNA具有非常好的临床应用价值。

在安全输血中应用丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的初步探索

本研究探讨用丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫吸附技术(HCV-cAgELISA)筛查献血员感染HCV的可行性。对我医院2003年1月-2005年12月间的8677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检。将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清标本,分别再做HCV-cAgELISA和HCVRT-PCR检测。结果表明:经HCV-cAgELISA检测,29份仅初检(15份)和仅复检(14份)抗-HCV阳性血清标本中只有5份结果为阳性,阳性率为17.24%。经HCVRT-PCR检测,29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中同样也只有5份阳性结果,阳性率也为17.24%。结论:HCV-cAgELISA检测技术的敏感性与HCVRT-PCR技术类似,但成本明显降低,有可能作为HCV感染的辅助确证试验,或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血者血液的筛查。

应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA

循环逆转录 (circulatoryreversetranscription ,CRT)是线性增长逆转录cDNA产量的一种新技术。为了将该技术用于检测HCVRNA ,通过改变CRT的循环次数 ,结合竞争PCR ,作出标准曲线。采用 16次CRT加 34次循环PCR检测了 136例HCVELISA阳性、5 4例HCVELISA阴性和 10 8例临床可疑病人全血标本 ,并与逆转录PCR(RT -PCR)和巢式PCR (NT -PCR)的检测结果相比较 ,显示HCVRNA总检出率分别为 :5 7 9%、35 6 %、5 8 6 %。结果提示 ,CRT -PCR是一种简便有效的提高RNA检测灵敏度的方法 。

Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA

目的 采用一种新的铕螯合物BHHCT ,制备高灵敏度荧光标记物 ,建立检测丙型肝炎病毒 (HCV)RNA的方法。方法 采用柱层析纯化的方法抽提血清中HCVRNA。以 5′端带有生物素的引物进行RT PCRTth酶一步法扩增 ,通过固定于微孔板上的捕获探针与带有生物素的PCR扩增产物杂交后 ,利用标记有铕的链霉亲合素与生物素的特异性结合 ,将铕连接到待测核酸上 ,在特定波长的激发光激发下发出荧光 ,进行检测。结果 铕标记检测法与酶标法的变异系数、敏感性、特异性分别为10 .43%、10 0 %,10 0 %与 16 .2 5 %,94%,10 0 %。结论 Eu标记RT PCRTth酶一步法检测HCVRNA ,具有敏感、特异、快速、重复性好、不受环境因素影响和无溴乙锭污染等优点 ,可望取代酶标法及电泳法。

HCV RNA RT-PCR测定室间质量评价的研究

目的 建立国内HCVRNART PCR测定的室间质量评价系统。方法 室间质量评价研究工作采用的质控血清盘由 10支冻干质控血清组成 ,其中包括 2份强阳性、 2份弱阳性、 2份阴性和一个 5倍倍比稀释系列 (4份 )。将血清盘寄发给各参评实验室并要求各个实验室按照规定时间检测、回报结果 ,然后对结果进行统计分析。结果 多数参评实验室存在不同程度的假阳性和假阴性的问题。 2份强阳性标本检出率均为 87 5 % ,弱阳性标本 (含量分别为 6 76× 10 4 和 3 81× 10 4 拷贝数 /ml)检出率分别为 45 83%和 2 5 0 0 % ;阴性样本的假阳性率分别为 12 5 0 %和 16 6 7% ,2份阴性标本测定均正确 37家 ,占77 0 8% ;稀释系列测定正确的有 16家实验室 ,占 33 33 % ,仅 2家实验室稀释系列测定完全正确 ,5家实验室既存在假阴性又存在假阳性问题。结论 许多临床实验室虽然建立了PCR检测方法 ,但却存在特异性和灵敏度问题 ,有必要定期进行室间质量评价 ,保证该项目的检测质量。

应用RT-PCR技术快速检测鉴定猪瘟病毒

根据所有已报道的猪瘟病毒株(HCV)和牛病毒性腹泻病毒株(BVDV)的序列设计了3条引物Pa、Pb、Pc。应用RT-PCR技术,引物对Pa/Pb从猪瘟HCLV株、猪瘟Thiveral株、3株猪瘟野毒株都扩增出了预期185bp的片断,Pa/Pc从BVDVOregonC24V株中也扩增出了240bp的片断,而Pa/Pb与牛睾丸原代细胞、PK-15细胞、BVDVOregonC24V株均无反应,Pa/Pc也不与所试验的5株猪瘟毒株反应。采用多重PCR可以从同时含有HCV和BVDV核酸的样品中扩增出各自的特异性条带。针对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的特异性插入序列,设计了引物Pr、Pra、Prb,可以从HCLV细胞毒或用HCLV人工感染的兔脾组织毒中扩增出预期200bp的片断,而Pr、Pra、Prb与猪瘟Thiveral株和3株猪瘟野毒株均不反应。通过含毒量梯度试验,得出了RT-PCR可检测猪瘟病毒量的下限为200RID或200TCID50。

检测HCV RNA的PCR试剂质控试行参考品的建立

选慢性丙型肝炎病人中HCVRNA含量不等的阳性血清作为阳性标准，采用选自HCV基因5’端非编码区的不同引物来扩增病毒基因，扩增产物与分子量标准进行比较，部分产物用酶切初步分析进行确证。选国家HCV抗体诊断试剂盒临床验证参考品中的阴性样品作为阴性标准，经反复检测显示HCVRNA为阴性。选强阳性血清经5%小牛血清稀释作为灵敏度标准，检测范围为10－5～10－7。应用该参考品对北医肝病研究所的三批HCVRNA诊断试剂盒进行检测，阳性和阴性标准均符合要求，灵敏度为10-5～10-6。

亚甲蓝光化学灭活对血浆丙型肝炎病毒基因组核酸降解的研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组核酸在亚甲蓝光化学法(methelene blue photochemistry,MB-P)灭活病毒前后的变化,在全基因组水平分析MB-P对基因组各结构区段的降解作用。方法含HCV的血浆中加入终浓度为1.0μmol/L的MB,经约30000Lux强度的荧光照射后,在不同作用时间点取样;将HCV全基因组序列分为互相重叠的8个区段,分别进行RT-PCR,分析基因组核酸的完整性;同时运用实时定量PCR(real time-PCR,RT-PCR)技术观察核酸降解的动力学变化。结果基因组各区段RT-PCR结果发现,经过不同的光照时间,HCV基因组各区段的稳定性不同,第2、4、5、6区段对MB-P作用较敏感,基因组5’端区段和3’端区段经MB-P作用后的稳定性高于基因组其它区段;RT-PCR结果显示,随着光照时间延长,可被检测到的病毒核酸拷贝数逐渐下降。结论MB-P灭活过程中HCV基因组核酸被降解,而且基因组不同区段对光化学作用的反应性不同,提示RNA降解可能是病毒灭活的重要机制;检测病毒核酸稳定性以监测病毒灭活具有一定临床实用价值。

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量 ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的 ＨＣＶ－ＲＮＡ，评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及 ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清、血浆、淋巴细胞、尿液标本中 ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞、尿液标本中 ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量 ＰＣＲ检出率（４６．３８％、８５．５１％、８０．００％），分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ（定性）阳性率（２４．６４、２８．９９％、２０．００％），有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率，荧光定量ＰＣＲ法（３９．１３％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（８．７０％）（Ｐ＜０．００１）。ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ定性阳性率不随 ＲＮＡ定量水平均高而增高。结论与 ＲＴ－ＰＣＲ（定性）相比，荧光定量ＰＣＲ技术检测

河南省艾滋病流行区HIV共感染HBV和HCV状况分析

目的:了解河南省艾滋病流行区艾滋病病毒(HIV)共感染乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)状况。方法:首先用Combas Amplicor HIV-1病毒载量检测法对从我省HIV某高发县采集的由输血感染HIV-1的130份血样进行定量测定。挑选出HIV-1病毒载量4.28×102拷贝/mL以上的血浆样本81份,同时收集30份HIV-1阴性健康体检者血浆作为对照,再用巢式PCR法对以上样本进行HBV和HCV测定。结果:81份HIV-1阳性样本中HBV阳性32份(39.5%),HCV阳性72份(88.9%);同时感染HBV和HCV的样本为7份(8.6%)。30份HIV-1阴性对照组中,HBV阳性7份(23.3%),与HIV-1阳性组间比较差异无统计学意义(χ2=2.51,P>0.05);HCV阳性4份(13.3%),与HIV-1阳性组间比较差异有统计学意义(χ2=57.88,P<0.05);HIV-1阴性对照组中未检测出HBV和HCV共感染样本,与HIV-1阳性组相比差异无统计学意义(χ2=2.77,P>0.05)。结论:经输血感染HIV的患者具有共感染HCV的倾向;对以上途径感染HIV的患者,在进行HIV治疗时应同时进行HBV和HCV检测,阳性者应在治疗HIV-1的同时给予抗HBV和HCV治疗。

血清HCV RNA NS_5基因的检测及其意义

利用源自ＮＳ＿５和５＇－ＵＴＲ引物进行丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ基因片段的逆转录－套式多聚酶链反应（ＲＴ－ｎｅａｔｅｄＰＣＲ）检测。对３５例随机选择的抗ＨＣＶＡｂ（＋）血清的检测结果表明，两种引物检测结果的敏感性无显著性差别。利用ＮＳ＿５区引物扩增的片段可与５种不同型别的ＨＣＶＲＮＡ亚基因探针很好地结合和显色，说明ＮＳ＿５基因可以利用于ＨＣＶＲＮＡ的基因分型。对１３１例抗ＨＣＶＡｂ（＋）血清进行了ＮＳ＿５基因检测，检出率为５２．６８％（６９／１３１），其小，除ＨＣＣ和ＣＲＦ组检出率分别为１６．６７％和３４．６８％，其余各组均在５０～８０％之间。献血组、献浆组和免疫球蛋白中ＨＣＶＲＮＡ的检出率分别为６６．６１％，５４．４５％和５７．１４％，说明应用未经筛查的血液及血制品小有很高的感染危险性，２２例抗ＨＣＶＡｂ（－）ＮＡＮＢＨ患者中有８例第２次ＰＣＲ后确证为ＨＣＶＲＮＡ（＋），表明１／３与低水平的ＨＣＶ感染有关。

江苏地区无偿献血者HCV基因型的分布

目的探讨江苏地区献血者感染的HCV基因型及亚型。方法收集2013年来自江苏省血液中心ELISA双试剂检测抗-HCV阳性献血者血清标本,使用HCV核酸定量检测试剂盒检测HCV RNA载量;同时使用RNA提取试剂提取HCV RNA,反转录PCR法扩增HCV Core区基因片段,并对扩增产物进行测序,利用进化树分析基因型和亚型。结果 2013年抗-HCV阳性标本139例(0.20%),其中64例抗-HCV阳性血清标本经荧光定量检测,RNA阴性30份,阳性34份。经巢式PCR扩增能够分型的标本24份,包括1a(71.7%)、1b(7.5%)、2a(7.5%)和3b(1.9%)3种基因型和4种亚型。年龄偏大(>35岁)以及男性的HCV RNA阳性标本的病毒滴度与抗-HCV水平(S/CO值)都高于RNA阴性标本,并且存在性别差异,但年龄间无差异。结论江苏无偿献血者感染的HCV基因型以1型为主,其中1b为优势基因亚型。病毒血症献血者的HCV抗体水平显著升高,HCV RNA在自然感染进程中的变化有待通过进一步随访进行研究。