大豆皂苷调控miR-584-5p/HDAC1通路对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究大豆皂苷调控微小RNA-584-5p(microRNA-584-5p,miR-584-5p)/组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylasel,HDAC1)通路对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞增殖及凋亡的影响。方法以终浓度Oltg/rml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的大豆皂苷处理体外培养的人EC细胞系HEC-1-A,以细胞计数试剂盒8(cell counting Kit-8,CCK-8)法测定各浓度处理后的细胞活力,计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。将对数生长期的HEC-1-A细胞随机分为对照组、大豆皂苷组、miR-584-5p抑制剂组、大豆皂苷+miR-584-5p抑制剂组、大豆皂苷+miR-584-5p抑制剂阴性对照组,分组转染及用药处理后,以CCK-8法测定各组细胞活力;以流式细胞实验检测各组细胞凋亡率;以免疫印迹实验检测各组细胞HDAC1蛋白、增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及凋亡相关蛋白[天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9(cysteine-containing aspartate-specific proteases 9,caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2-associated X protein,Bax)]表达;以实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)实验检测各组细胞miR-584-5p与HDAC1 mRNA表达。结果不同浓度大豆皂苷可抑制HEC-1-A细胞生长,IC_(50)为98.56μg/ml。与对照组相比,大豆皂苷组与大豆皂苷+miR-584-5p抑制剂阴性对照组的细胞活力、PCNA蛋白表达、HDACl mRNA及蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、caspase-9及Bax蛋白表达、miR-584-5p表达增高(P<0.05);miR-584-5p抑制剂组的细胞各指标与大豆皂苷组相反。miR-584-5p抑制剂可减弱大豆皂苷对细胞各指标的作用。结论大豆皂苷可上调miR-584-5p表达,下调HDAC1表达,促使EC细胞凋亡,抑制其增殖。

His/GST-HDAC1在大肠杆菌中表达的研究

目的:对His/GST-HDAC1在大肠杆菌BL-21中的表达进行研究。方法:HDAC1的完整基因片断被克隆到pColdⅠ载体和pGEX载体上,并在其N末端分别联有His和GST;采用大肠杆菌BL21对HDAC1进行表达;采用亲和色谱对HDAC1进行纯化;用SDS-PAGE和蛋白质印迹来验证表达和纯化效果;对HDAC1活性进行测定。结果:多数HDAC1存在于大肠杆菌BL-21细胞裂解液的沉淀组分和纯化过程中的未结合组分中,小部分HDAC1可从细胞裂解液的上清液中得以纯化,但未显现出酶活性。用FPLC对HDAC1进行进一步分离,结果表明,HDAC1发生了分子聚集,使得它们的分子量大于正常分子量。结论:活性His/GST-HDAC1不能用大肠杆菌BL21成功表达。

黄芩素介导自噬经由miR-449a/HDAC1轴抑制喉癌细胞增殖及迁移的机制研究

目的 探究黄芩素抑制喉癌细胞增殖及迁移的机制。方法 采用Hep-2细胞为研究对象。MTT法检测各组细胞增殖活力;划痕实验检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3II/I、p62及HDAC1的表达水平;RT-PCR检测细胞miR-449a的表达水平;生物信息学软件分析miR-449a与HDAC1的靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验鉴定;透射电子显微镜观察自噬小体数量。结果 黄芩素显著抑制了喉癌细胞的增殖和迁移,并诱导细胞凋亡;黄芩素增加了细胞内Beclin-1及LC3II的蛋白表达水平,减少了p62及LC3I的蛋白表达水平;黄芩素显著增加喉癌细胞miR-449a的表达水平,降低HDAC1的蛋白表达量;HDAC1与miR-449a存在结合作用;黄芩素联合miR-449a mimic处理喉癌细胞,可以更显著的抑制细胞增殖及HDAC1的蛋白表达水平,以及更为有效地上调miR-449a的相对表达量和诱导自噬。结论 黄芩素可以介导自噬经由miR-449a/HDAC1轴抑制喉癌细胞增殖及迁移。

阿司匹林乙酰化修饰HDAC1抑制人结肠癌细胞HCT116增殖

大量研究表明阿司匹林具有重要的抗肿瘤作用。阿司匹林的乙酰基可以乙酰化大量蛋白质,从而影响体内的乙酰化水平,但其乙酰化作用在抗肿瘤上的具体机制还不清楚。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)已用于肿瘤治疗或处于临床研究,通过抑制组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases, HDACs)的去乙酰化酶活发挥抗癌作用。组蛋白去乙酰化酶1(Histone Deacetylase1, HDAC1)是Zn^(2+)依赖的Ⅰ类HDAC家族成员,在多种癌症中表达上调,是组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone Deacetylase Inhibitors, HDACi)发挥抗癌作用最关键的靶点之一。在抗肿瘤的过程中,阿司匹林是否乙酰化调控HDAC1尚未见报道。在本文中,我们发现阿司匹林可以乙酰化HDAC1并抑制其去乙酰化酶活,赖氨酸(K)200位点是阿司匹林乙酰化HDAC1的关键位点。有趣的是,HDAC1可以对自身去乙酰化,但不能发生在K200上。沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1),而不是HDAC1,可以对HDAC1的K200位点去乙酰化。进一步细胞学实验发现,在敲除HDAC1的人结肠癌HCT116细胞中,阿司匹林不再抑制HCT116细胞增殖,回补HDCA1的K200Q突变体也无法恢复HCT116细胞增殖,提示阿司匹林可能通过靶向HDAC1发挥抗HCT116细胞增殖作用。

RNA干扰沉默HDAC1基因对胃癌细胞增殖、凋亡、组蛋白乙酰化和甲基化的影响

目的探讨RNA干扰沉默HDAC1基因对人类胃癌MGC803细胞增殖、凋亡及组蛋白乙酰化水平的影响。方法设计针对HDAC1基因小干扰RNA片段,经脂质体转染入MGC803细胞,RT-PCR及Western blot鉴定其干扰效果;MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL分析细胞调亡,Western blot检测组蛋白H3、H4乙酰化、组蛋白H3K9甲基化的影响及凋亡相关蛋白BCL-2、procaspase-9、pro-caspase-3、C-myc蛋白表达。结果 HDAC1 siRNA转染MGC803细胞后,HDAC1基因的mRNA、蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P<0.05);60、120、240 nmol/L HDAC1 siRNA处理24 h后,细胞凋亡率分别为(18.5±3.5)%、(41.4±4.3)%、(59.2±5.5)%,而对照组仅为(4.8±2.7)%,有统计学意义(P<0.05);同时下调Bcl-2、proCaspase-9、proCaspase-3、c-Myc的表达;上调细胞周期蛋白P21的表达;干扰HDAC1基因可上调组蛋白H3,H4乙酰化水平,下调H3K9甲基化水平。结论干扰HDAC1基因表达后可能通过上调与基因转录激活有关的组蛋白H3、H4乙酰化水平,下调与基因转录抑制有关H3K9甲基化水平,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。

HDAC1在肺腺癌细胞株A549中的表达及TSA对细胞增殖、凋亡的影响

背景与目的:研究表明组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)在多种肿瘤细胞中高表达,组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)抑制剂制滴菌素A(trichostatinA,TSA)能抑制肿瘤细胞的生长。而缺氧是恶性肿瘤的重要特征,本实验拟研究HDAC1在低氧肺腺癌细胞株A549中的表达及TSA对细胞增殖、凋亡的影响。方法:实验设常氧组(对照组)及低氧组(实验组),实验组设A～F组,即低氧6h组(A组),低氧6h加TSA组(B组),低氧12h组(C组),低氧24h组(D组),低氧24h加TSA组(E组),低氧48h组(F组)。用蛋白印迹法(Westernblot)检测A549细胞在不同时间低氧条件下HDAC1的表达,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、免疫组化和流式细胞仪、原位凋亡(Tunel)法检测A549细胞在不同时间低氧条件下的增殖和凋亡率以及TSA对其的影响,用RT-PCR检测A549细胞在不同时间低氧条件下HDAC1mRNA的表达及TSA对其的作用。结果:对照组HDAC1蛋白质表达的A值为138±11,实验A、C、D、F组A值分别为78±4.0、86±5.0、124±3.0、120±9.0。对照组HDAC1mRNA的A值与β-actinmRNAA值的比值0.68±0.03,A、B、D、E组HDAC1mRNA的A值与β-actinmRNAA值的比值分别为0.46±0.03、0.45±0.02、0.70±0.03、0.33±0.02。对照组PCNA的A值0.13±0.03、A、B、D、E组PCNA的A值分别为0.10±0.02。

肠型胃癌中LDH-A与HDAC1表达的相关性研究

目的探讨乳酸脱氢酶A(LDH-A)与组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在肠型胃癌中表达的相关性及其与预后的关系。方法应用Western blotting法检测HDAC1蛋白在慢病毒介导的LDH-A siRNA转染肠型胃癌细胞株SGC7901中表达的变化;应用免疫组织化学方法检测661例肠型胃癌组织及癌旁正常组织中LDH-A与HDAC1蛋白的表达情况并分析其表达与预后的关系。结果 Western blotting检测结果显示,LDH-A蛋白在SGC7901细胞株中的表达明显上调,且LDH-A的沉默可显著下调HDAC1的表达。肠型胃癌组织中LDH-A蛋白的高表达率为54.8%(362/661),明显高于癌旁正常组织的12.9%(85/661),两者差异有统计学意义(P<0.01);肠型胃癌组织中HDAC1的高表达率为51.3%(339/661),明显高于癌旁正常组织的15.4%(102/661),两者差异有统计学意义(P<0.01)。LDH-A与HDAC1蛋白在肠型胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.324,P<0.001)。单因素生存分析结果显示,LDH-A与HDAC1均低表达患者的生存曲线明显优于其他组合(P<0.001);多因素生存分析结果显示LDH-A与HDAC1表达均为肠型胃癌独立的预后因素。结论在肠型胃癌中,LDH-A与HDAC1的表达呈正相关,采用LDH-A和HDAC1双靶点抑制治疗可能具有潜在的生存获益。

RNA干扰沉默HDAC1基因对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究下调HDAC1的表达对大肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:设计合成HDAC1的特异性shRNA,将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染SW480细胞株.用RT-PCR和Westernblot检测shRNA对细胞内HDAC1基因表达的影响,同时采用Westernblot对细胞周期相关基因进行检测.采用MTT法检测生长抑制作用.运用流式细胞术检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布.结果:成功构建和筛选出HDAC1特异性的shRNA质粒载体,与空白对照组相比,转染HDAC1-shRNA的大肠癌细胞HDAC1mRNA蛋白质表达水平明显下降(30.4%±4.5%vs64.6%±4.4%,P<0.01;27.4%±4.5%vs58.1%±3.3%,P<0.01),p21/WAF-1/CIP-1表达增加(97.4%±2.6%vs62.6%±3.4%,P<0.01),CdK2和CyclinE蛋白下降(CdK2:27.7%±6.0%vs42.6%±4.1%,P<0.01;CyclinE:42.0%±8.5%vs82.8%±3.7%,P<0.01),细胞生长抑制率增加(24h:35.9%±4.9%vs1.2%±0.6%,P<0.01;48h:47.5%±7.0%vs1.3%±0.6%,P<0.01;72h:45.7%±6.2%vs1.0%±0.5%,P<0.01;96h:48.2%±4.7%vs1.2%±0.7%,P<0.01),凋亡率明显增加(31.3%±2.8%vs3.9%±0.7%,P<0.01),G0/G1期和G2/M期细胞比例增加(G0/G1:64.5%±0.9%vs57.8%±1.8%,P<0.01;G2/M:17.4%±1.3%vs14.5%±0.6%,P<0.05),S期细胞比例相应下降(17.5%±1.0%vs27.7%±1.5%,P<0.01).结论:HDAC1特异的shRNA能够有效下调HDAC1基因,诱导大肠癌细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖.

miR-34a靶向调控HDAC1基因对急性髓系白血病细胞凋亡的影响

目的:探讨急性髓系白血病细胞中miR-34a对HDAC1的调控作用以及对细胞凋亡的影响。方法:将miR-34a mimics、miR-34a inhibitor、miR-34a scramble转染到HL-60细胞中,采用CCK8试验和流式细胞术分别检测miR-34a不同表达水平对HL-60细胞增殖和凋亡的影响。应用Western blot检测miR-34a表达改变后HDAC1蛋白表达水平。构建含HDAC1 3′UTR的双荧光素酶报告载体,应用双荧光素酶报告实验验证miR-34a与HDAC1的作用位点。构建不含HDAC1 3′UTR的表达载体,应用回复实验验证miR-34a与HDAC1的相互作用。结果:miR-34a过表达可导致HL-60细胞的增殖抑制、凋亡率增加。生物信息学分析表明,HDAC1是miR-34a的靶基因;Western blot结果显示,miR-34a高表达可下调HDAC1蛋白表达,双荧光素酶实验和回复实验显示,miR-34a可作用于HDAC1 3′UTR区,调理其表达。结论:miR-34a促进HL-60细胞凋亡,其作用可能与其对HDAC1表达调控有关。

姜黄素调节B淋巴瘤细胞p300和HDAC1的研究

p300是一种具有组蛋白乙酰化酶活性的转录辅助因子,HDAC1是一种组蛋白去乙酰化酶。本研究查明姜黄素对B-NHL细胞株Raji细胞增殖的影响,并探讨这种影响与p300以及HDAC1转录调节表达的关系。以不同浓度(6.25-50μmol/L)的姜黄素作用于体外培养的Raji细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率,Annexin-V-FITC/PI双标流式细胞术检测细胞的凋亡率和应用RT-PCR和Westernblot法检测Raji细胞中HDAC1和p300的mRNA表达和蛋白含量的变化。结果表明:姜黄素对Raji细胞抑制作用呈明显的时效和量效关系。24小时的IC50为25μmo/L;姜黄素能够诱导Raji细胞凋亡,凋亡率为14.38%-61.18%,并呈浓度依赖性。姜黄素明显抑制HDAC1和p300的活性和表达。在IC50浓度时,随着时间的延长,其p300和HDAC1mRNA表达和蛋白含量逐渐降低,呈时间依赖性,与对照组相比有显著性(P<0.05)。结论:姜黄素对B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞具有抗肿瘤细胞的增殖作用,并促进其凋亡。姜黄素能够抑制转录共激活因子p300及组蛋白去乙酰化酶HDAC1活性和表达,可能是其作用机制之一。

HDAC1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:观察HDAC1蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,确定HDAC1蛋白表达与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学染色方法检测169例肺癌组织中HDAC1蛋白表达情况,用Spearman等级相关分析检验HDAC1蛋白染色强度与临床病理特征的相关性。用Kaplan-Meier计算生存曲线,用log-rank检验分析生存曲线。结果:在169例NSCLC组织中,HDAC1阳性表达率为97.0%,HDAC1蛋白高表达与临床分期(P=0.027,r=-0.170)、远处转移(P=0.023,r=-0.175)均呈负相关。HDAC1蛋白不同表达水平肺癌患者无进展中位生存期差异无显著性。结论:HDAC1蛋白高表达与NSCLC患者更好的临床病理学特征相关。用免疫组化方法检测HDAC1在NSCLC中的表达,有可能成为预测NSCLC患者对HDAC抑制剂治疗反应的新手段。

Cdyl、G9a、及HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达

目的观察Cdyl、G9a、HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达,探讨Cdyl及相关因子引起雄性大鼠肾阳虚的机制。方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为空白组与模型组,模型组采用环磷酰胺50mg/kg·d腹腔注射,空白组给予等量生理盐水注射。大鼠造模后第6天,将大鼠取血处死,分离睾丸、附睾进行相关指标检测。结果与空白组比较,模型组大鼠精子浓度、活力及活率明显降低;模型组大鼠睾丸组织Cdyl、G9a表达明显降低(P<0.01),HDAC1表达明显升高(P<0.01)。结论 Cdyl、G9a表达降低,HDAC1表达升高与雄性大鼠肾阳虚相关。

散发性乳腺癌HDAC1和HDAC2蛋白表达与临床病理参数相关性研究

目的:探求HDAC1、HDAC2蛋白表达与乳腺癌临床、病理参数的相关性及其临床意义。方法:收集散发性乳腺癌标本119例,乳腺纤维腺瘤组织18例,应用SP免疫组化法检测HDAC1、HDAC2蛋白的表达情况,并与乳腺癌临床病理特点之间的关系进行分析。结果:HDAC1、HDAC2在乳腺癌和纤维腺瘤组织中表达均无显著差异。在ERβ表达阳性的组织中,HDAC1表达显著增高;HDAC2与HER2的表达呈显著的正相关性;HDAC1和HDAC2在c-Myc阳性表达的组织中阳性率显著增高;MRP阳性表达的组织中,HDAC1表达显著增高,BCRP阳性表达的组织中,HDAC2表达显著增高。结论:HDAC1、HDAC2高表达与女性散发性乳腺癌的发生发展以及产生耐药之间有一定的联系。

HDAC1对喉癌细胞侵袭、迁移及血管内皮生长因子水平影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对喉癌细胞侵袭、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)水平影响。方法喉癌细胞Hep2中转染HDAC1 siRNA和siRNA对照记为HDAC1 siRNA组和siRNA-NC组,同时以不做转染的细胞为对照组。qRT-PCR测定细胞中HDAC1 mRNA水平,Western blot检测细胞中HDAC1蛋白水平,Transwell小室检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测细胞迁移,ELISA检测培养液上清中VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)水平,Western blot检测细胞中信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平。结果 HDAC1 siRNA组细胞中HDAC1 mRNA和蛋白水平均明显低于对照组(P<0.05)。siRNA-NC组细胞中HDAC1 mRNA和蛋白水平与对照组相比无显著差异(P>0.05)。siRNA-NC组细胞迁移率、侵袭数目及培养液上清中VEGF、b FGF含量均明显降低,细胞中MMP-2、p-STAT3/STAT3水平也下降,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。siRNA-NC组细胞迁移率、侵袭数目、MMP-2水平、p-STAT3/STAT3水平及培养液上清中VEGF、b FGF含量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论下调HDAC1表达可降低喉癌细胞侵袭和迁移能力,降低细胞分泌VEGF、b FGF水平,作用机制可能与抑制STAT3信号通路有关。

Caveolin-1和HDAC1蛋白在肾细胞癌中的表达及意义

目的探讨Caveolin-1和HDAC1蛋白在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)及正常肾组织中的表达及临床意义,并探讨其与肿瘤生物学行为之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测51例RCC、15例正常肾组织及26例癌旁组织中Caveolin-1和HDAC1蛋白的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。51例RCC中组织学分级:高分化13例,中分化24例,低分化14例;临床分期:Ⅰ期16例,Ⅱ期20例,Ⅲ期10例,Ⅳ期5例。结果 Caveolin-1在正常肾组织、癌旁组织和RCC中的阳性表达率分别为33%(5/15)、42%(11/26)、65%(33/51),逐渐升高(P<0.05)。在51例RCC中,Caveolin-1的阳性表达率临床分期Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期,低分化高于中、高分化,有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。Caveolin-1表达与病理学分期、分级和淋巴结转移均相关(P值分别为0.001、0.038和0.006,P均<0.05),随着肿瘤分期、分级的升高,Caveolin-1表达增强。RCC中Caveolin-1表达与年龄、性别、肿瘤所在部位均无关(P>0.05)。HDAC1在正常肾组织、癌旁组织和RCC中的阳性表达率分别为13%(2/15)、19%(5/26)、75%(38/51),呈现显著升高的趋势(P<0.05)。在51例RCC中,HDAC1的阳性表达率临床分期Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期,低分化高于中、高分化,有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,肾癌组织中HDAC1表达率随肾癌TNM分期的增高和病理分级的增加而升高。RCC中HDAC1表达与年龄、性别、肿瘤所在部位均无关(P>0.05)。RCC中Caveolin-1的表达与HDAC1表达呈正相关。结论 Caveolin-1和HDAC1在RCC中高表达,可能是RCC发生、发展及浸润转移的重要因素之一,联合检测对判断RCC预后有指导意义。

慢病毒转染敲低HDAC1表达对胃癌干细胞干性增殖、迁移及侵袭的影响及其机制研究

目的通过慢病毒转染敲低胃癌干细胞观察HDAC1表达对人类胃癌干细胞干性增殖、迁移及侵袭的影响以及对胃癌干细胞干性相关基因表达的影响,进一步探讨HDAC1低表达对人类胃癌干细胞增殖分化的影响及机制。方法2017年7—10月于华北石油管理局总医院细胞实验室进行。通过慢病毒转染将细胞株分为实验组对照组。以Nanog为胃癌细胞干性标志物,流式细胞术筛选出胃癌干细胞。通过慢病毒转染技术干扰胃癌干细胞中HDAC1表达,实时定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot方法检测干扰效率。采用MTT比色法和划痕试验分别观察2组细胞增殖和迁移能力的差异;通过Transwell实验观察2组细胞侵袭能力的差异;采用qRT-PCR和Western Blot方法检测2组细胞干性相关基因表达。结果(1)实验组胃癌干细胞的增殖能力在96 h、120 h,均显著低于对照组(t=5.471、7.251,P均<0.001)。(2)通过细胞划痕实验观察到实验组胃癌干细胞的24 h划痕愈合速度较对照组慢,HDAC1的低表达降低胃癌干细胞的迁移能力,2组比较差异具有统计学意义[(20.23±5.46)个vs.(39.96±3.48)个,t=6.813,P=0.001]。(3)Transwell实验显示,实验组胃癌干细胞的侵袭能力显著低于对照组,HDAC1低表达降低胃癌干细胞的迁移能力,2组穿膜细胞数差异具有统计学意义[(21.51±4.32)个vs.(62.63±4.21)个,t=15.242,P=0.000]。实验组细胞干性相关基因Nanog、BMil、c-Myc表达均显著低于对照组(0.23±0.06 vs.1.00±0.01,t=28.306,P=0.000;0.64±0.11 vs.1.00±0.01,t=7.288,0.001;0.48±0.09 vs.1.00±0.01=12.841,0.000)。结论HDAC1低表达可降低胃癌干细胞的增殖、迁移及侵袭能力;HDAC1低表达下调BMi1基因表达可能是其降低胃癌干细胞的增殖、迁移及侵袭的机制之一。

BRMS1、HDAC1、VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨BRMS1、HDAC1及VEGF-C蛋白在乳腺癌、乳房纤维瘤及正常乳腺组织的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法随机检测60例乳腺癌组织标本BRMS1、HDAC1、VEGF-C蛋白的表达,随机收集乳房纤维瘤组织及其旁正常乳腺组织各20例作为对照组,结合临床病理资料分析其临床意义。结果BRMS1在乳腺癌组织中表达率为60%,在乳房纤维瘤组织中表达率为85%,在正常乳腺组织中表达率为95%,乳腺癌组织中的BRMS1的表达明显低于乳房纤维瘤和正常乳腺组织(P<0.05)。HDAC1在乳腺癌组织中表达率为91.7%,在乳房纤维瘤组织中表达率为55%,在正常乳腺组织中表达45%,HDAC1在乳腺癌组织中的表达明显高于乳房纤维瘤和正常乳腺组织(P<0.01),乳腺癌中VEGF-C的表达58.3%高于乳房纤维瘤25%和正常组织20%(P<0.05)。结论BRMS1、HDAC1和VEGF-C共同参与了乳腺癌的转移,联合检测BRMS1、HDAC1及VEGF-C的表达有助于判断其预后。

牦牛HDAC1基因克隆及其在组织和卵母细胞减数分裂过程中的表达研究

旨在克隆牦牛组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC 1)基因,并检测其在牦牛不同组织及卵母细胞减数分裂过程中的表达水平,从而为研究HDAC1在牦牛生殖发育中的作用机制提供理论依据。本试验采用牦牛为研究对象,通过RT-PCR技术获得牦牛HDAC1基因CDS序列,使用相关生物信息学软件分析其结构和功能,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测HDAC1基因在牦牛脑、心、肌肉、卵巢、肾、脾、小肠、肝、肺和子宫组织中的表达谱及在卵母细胞减数分裂过程中mRNA的表达水平。结果表明,HDAC 1基因开放阅读框为1 302 bp,编码433个氨基酸,与黄牛、山羊和绵羊的同源性较高;HDAC1基因在牦牛的各个组织中均有表达,其中在脾、肾和小肠中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。在牦牛减数第一次分裂中期(MⅠ)和减数第二次分裂中期(MⅡ)卵母细胞中,HDAC 1基因的表达水平极显著高于生发泡(germinal vesicle,GV)期(P<0.01)。提示,HDAC 1基因参与牦牛卵母细胞减数分裂过程。本试验为进一步研究HDAC 1基因在高寒、低氧环境下的牦牛生殖繁育中的作用提供了理论依据。

3个HDAC1的保守氨基酸定点突变的获得

:目的 :为了研究HDAC1保守氨基酸的定点突变对其功能的影响 ,需要建立HDAC1保守氨基酸定点突变的突变子。方法 :在克隆HDAC1cDNA的基础上 ,利用AlteredSiteⅡ体外突变系统对HDAC1保守氨基酸中的三个氨基酸位点进行突变 ,经DNA测序鉴定。结果与结论 :结果分别获得了HDAC1的C15 1A ,Y188F ,S197A的定点突变子 ,为进一步研究HDAC1保守氨基酸的定点突变对其功能的影响打下了基础。

重组干扰质粒对卵巢癌COC1细胞HDAC1表达的影响

目的构建重组HDAC1基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒干扰质粒并研究其对卵巢癌COC1细胞HDAC1表达的影响。方法针对HDAC1基因设计特异性siRNA靶点,构建慢病毒干扰质粒载体,筛选获得的有效shRNA慢病毒干扰序列,将其转染卵巢癌COC1细胞。采用Real-time PCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效果,Western blot方法检测靶基因在蛋白质水平的沉默效果。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确。shRNA慢病毒干扰质粒转染COC1细胞后HDAC1基因的mRNA表达量和蛋白质水平较阴性对照质粒转染组均显著下调(P<0.05)。结论成功构建HDAC1基因的shRNA慢病毒干扰质粒,该慢病毒干扰质粒能够在细胞水平有效沉默靶基因。