HDAC2抑制剂CAY10683通过自噬对急性肝衰竭小鼠的保护作用

目的:探究HDAC2抑制剂CAY10683在急性肝衰竭小鼠模型中的保护机制。方法:将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、CAY10683组、自噬抑制剂MRT68921组和CAY10683/MRT68921联合组。D-氨基半乳糖和脂多糖诱导建立急性肝衰竭小鼠模型,获取小鼠血清及肝脏标本。检测血清中丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶含量;一部分肝组织用于HE染色和电镜下观察,另一部分肝组织用于生化检测,蛋白质印迹法检测自噬蛋白UNC-51样激酶1和苹果酸脱氢酶1(MDH1)的相对含量,生化试剂盒检测组织中葡萄糖、丙酮酸、乳酸和乳酸脱氢酶含量。结果:CAY10683可增加急性肝衰竭小鼠模型中肝脏内的自噬水平,对小鼠肝脏具有一定的保护作用,CAY10683可降低急性肝衰竭小鼠模型中肝组织内的葡萄糖、丙酮酸、乳酸和LDH含量,增加肝组织内MDH1含量;MRT68921则相反;CAY10683一定程度上可拮抗MRT68921的作用。结论:HDAC2抑制剂CAY10683在小鼠肝衰竭进程中可能通过提高自噬水平改善肝脏内代谢,对肝脏起到一定的保护作用。

缺氧环境下miR-210调控HDAC2对肝癌VEC细胞血管通透性、血管形成及放疗耐药性的影响

目的探究缺氧环境下miR-210调控组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)对肝癌VEC细胞血管通透性、血管形成及放疗耐药性的影响。方法分别在缺氧环境和正常环境下培养VEC细胞,以RT-qPCR和Western blotting检测两种培养环境下VEC细胞miR-210和HDAC2表达。其中在缺氧环境下培养VEC细胞并随机分为对照组、阴性对照组、miR-210 inhibitor组、HDAC2敲低组、miR-210 inhibitor+HDAC2过表达组,采用MTT法和Edu染色检测缺氧环境下各组VEC细胞增殖;Transwell小室法、小管形成实验分别检测各组VEC细胞血管通透性和血管形成;Western blotting和ELISA检测各组VEC细胞血管VEGF表达释放;MTT法测定各组细胞活力并检测其放疗耐药指数。结果与正常环境下培养的VEC细胞相比,缺氧环境下VEC细胞miR-210表达、HDAC2 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。与对照组相比,miR-210 inhibitor组、HDAC2敲低组细胞HDAC2 mRNA及蛋白表达、细胞活力、增殖率、通透性强度、成管长度、VEGF蛋白表达、细胞培养基中VEGF水平、放疗耐药指数降低(P<0.05),阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05);与miR-210 inhibitor组相比,miR-210 inhibitor+HDAC2过表达组细胞HDAC2 mRNA及蛋白表达、细胞活力、增殖率、通透性强度、成管长度、VEGF蛋白表达、细胞培养基中VEGF水平、放疗耐药指数升高(P<0.05)。结论缺氧环境下下调miR-210可通过降低HDAC2表达而抑制肝癌VEC细胞增殖、血管通透性、血管形成及放疗耐药性。

HDAC2对急性缺血性卒中患者中性粒细胞TBC蛋白家族成员的表观调控

目的研究急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)后介导中性粒细胞脱颗粒和吞噬功能的分子以及组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)的表观调控机制。方法从首都医科大学宣武医院急诊选取3例前循环缺血发病6 h内未接受溶栓和血管内治疗的60~80岁男性患者,另选3例性别、年龄匹配的健康对照者,采用密度梯度离心的方法分离外周血中性粒细胞,进行RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq),分析AIS患者与健康对照组的转录组差异;另外,通过染色质免疫共沉淀测序(chromatin immunoprecipitation high-throughput sequencing,ChIP-seq)分析中性粒细胞中与HDAC2结合的基因。结果(1)RNA-seq显示,与健康对照组相比,AIS后13个TBC1D家族分子转录水平变化显著,其中TBC蛋白家族成员-TBC1D10A、TBC1D31、TBC1D5共3个分子的转录水平显著下调,TBC1D10B、TBC1D10C、TBC1D17、TBC1D2、TBC1D22A、TBC1D26、TBC1D29、TBC1D3H、TBC1D8、TBC1D9B共10个分子转录水平显著上调。(2)ChIP-seq分析显示,AIS患者的HDAC2结合的TBC1D家族基因差异性表达,对HDAC2结合的差异基因启动子进行甲基化分析,发现这些TBC1D家族分子存在高度甲基化和中度甲基化修饰,受表观遗传学乙酰化和甲基化双重调节。结论TBC1D家族分子可能是调节急性缺血性卒中后中性粒细胞脱颗粒和吞噬的潜在靶点,HDAC2与该家族的基因组可能有广泛的结合。

大鼠场景性恐惧记忆再激活过程中海马HDAC2的表达变化

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)在场景性恐惧记忆再激活过程中的表达变化。方法:对大鼠进行不可逃避的电击刺激与中性刺激(训练环境)联结匹配训练,建立大鼠场景性恐惧条件化模型,之后采用免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR方法检测实验组(恐惧记忆唤起后30 min、2 h、6 h、24 h组和不进行恐惧记忆唤起的no-recall组)和对照组(与实验组相同的处理方式但没有足底电击的刺激)大鼠海马中HDAC2的表达变化。结果:免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR方法检测结果均显示场景性恐惧记忆唤起后30 min与24 h,HDAC2在大鼠海马中的表达水平明显高于对照组,差异具有统计学意义。其它时间点及no-recall组HDAC2的表达与对照组相比,没有统计学意义。结论:场景性恐惧记忆唤起后30 min与24 h,HDAC2在大鼠海马中表达水平显著升高,此变化可能与恐惧记忆产生的相关行为(恐惧记忆的消退行为、焦虑行为等)有一定的联系。

散发性乳腺癌HDAC1和HDAC2蛋白表达与临床病理参数相关性研究

目的:探求HDAC1、HDAC2蛋白表达与乳腺癌临床、病理参数的相关性及其临床意义。方法:收集散发性乳腺癌标本119例,乳腺纤维腺瘤组织18例,应用SP免疫组化法检测HDAC1、HDAC2蛋白的表达情况,并与乳腺癌临床病理特点之间的关系进行分析。结果:HDAC1、HDAC2在乳腺癌和纤维腺瘤组织中表达均无显著差异。在ERβ表达阳性的组织中,HDAC1表达显著增高;HDAC2与HER2的表达呈显著的正相关性;HDAC1和HDAC2在c-Myc阳性表达的组织中阳性率显著增高;MRP阳性表达的组织中,HDAC1表达显著增高,BCRP阳性表达的组织中,HDAC2表达显著增高。结论:HDAC1、HDAC2高表达与女性散发性乳腺癌的发生发展以及产生耐药之间有一定的联系。

miR-455-3p通过靶基因HDAC2抑制心肌梗死后心肌肥厚

目的:探讨miR-455-3p在心肌梗死后心肌肥厚中的作用。方法:比较miR-455-3p在心肌梗死组和空白对照组的表达。心肌细胞过表达miR-455-3p情况下分析细胞表面积和心肌肥厚基因表达。荧光素酶活性检测和Western blot法确定受miR-455-3p调控的靶基因。通过心肌梗死模型组大鼠体内miR-455-3p的过表达确定miR-455-3p对心肌肥厚的影响。结果:在体外和体内试验中发现在心肌肥厚中miR-455-3p均被下调。体外实验,过度表达miR-455-3p可以抑制心肌肥厚。与miR-455-3p相比,心肌肥厚中HDAC2被上调。HDAC2是一种新型的miR-455-3p靶基因。心肌梗死大鼠过表达miR-455-3p通过降低HDAC2的表达能抑制心肌梗死后心肌肥厚。结论:miR-455-3p是心肌肥厚的重要调节因子,为心肌梗死后心肌肥厚的治疗提供新的理论基础。

miR-455-3p靶向HDAC2对卵巢上皮性癌细胞生长和运动的影响

目的研究miR-455-3p通过靶向HDAC2对卵巢上皮性癌细胞生长和运动的影响。方法荧光素酶报告实验验证miR-455-3p与HDAC2靶向关系;构建HDAC2pcDNA载体过表达HDAC2,细胞转染mimic,将细胞随机分为4组:Control组、mimic组、HDAC2组、mimic+HDAC2组进行后续实验。BRDU染色检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测Ki67、PCNA、c-MycmRNA水平;Transwell检测细胞侵袭;划痕试验检测细胞迁移;Westernblot检测血管内皮生长因子(VEGF)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)蛋白表达水平。结果miR-455-3p和HDAC2存在直接靶向作用关系。与HDAC2组相比较,mim-ic+HDAC2组BRDU阳性细胞数降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Ki67、PCNA、c-MycmRNA水平降低(P<0.05),侵袭细胞数降低(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05),VEGF、Vimentin、Fibronectin蛋白水平降低(P<0.05)。结论miR-455-3p通过靶向HDAC2诱导卵巢癌细胞HO-8910凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,降低运动能力。

HDAC2:阿尔茨海默病治疗靶点

表观调节机制在阿尔茨海默病的发生、发展过程中起着重要作用。乙酰化组蛋白和乙酰化非组蛋白在基因表达与信号转导过程中具有重要的调控作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以改善AD患者突触可塑性与学习记忆能力。HDAC2在控制神经元形成中起关键作用。HDAC2参与海马区域记忆形成相关蛋白表达,对学习和记忆的形成具有负调节作用,影响神经突触可塑性和数量。目前应用的HDAC抑制剂为广谱药物缺乏特异性,分析HDAC2作用机制有利于研究出针对疾病的靶点药物。

HDAC2,P53,P21,Ki-67在卵巢癌中的表达及临床意义

为研究HDAC2,P53,P21和Ki-67在卵巢癌中的表达变化,并探讨其临床价值。方法为采用免疫组化组织芯片(TMA)检测95例卵巢肿瘤患者(49例卵巢癌、13例交界性肿瘤、33例良性肿瘤),分别检测卵巢肿瘤中的HDAC2,P53,P21,Ki-67的表达,并观察与患者5年生存率的关系。结果:与良性肿瘤组织相比,卵巢癌组织中HDAC2,P53,P21和Ki-67的表达明显增加(p<0.05)。临床分期高的卵巢癌患者Ki-67表达呈上升趋势,5年生存率与淋巴结转移及复发呈正相关(p<0.05)。结论:HDAC2,P53,P21和Ki-67在卵巢癌的发生、发展中起重要作用,其中Ki-67还可作为判断患者预后的指标之一。

孕期应激下调成年雄性子代大鼠海马HDAC2表达

目的明确母代大鼠孕期应激对雄性子代海马中组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2, HDAC2)表达变化的影响。方法将16只SD孕鼠随机分为应激组和对照组,每组8只,应激组在孕16-21天进行限制性应激,对照组不做任何处理。ELISA检测成年子代外周血血浆糖皮质激素,用旷场、高架十字迷宫、新物体识别及巴恩斯迷宫四种行为学评估成年子代认知功能,免疫组织化学、Western blot、RT-PCR 检测成年雄性子代海马HDAC2表达变化。结果母代孕期应激成年子代糖皮质激素升高,旷场与高架十字迷宫中表现出焦虑样行为,新物体识别与Barnes迷宫表现出学习记忆与空间记忆能力下降,海马HDAC2 mRNA和蛋白水平均下调。结论孕期应激对子代成年的认知功能损害可能与子代海马HDAC2的表达下调有关。

HDAC2 cDNA的克隆及在酵母细胞中的表达

目的 :本研究的目的为获得HDAC2的cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因。方法 :利用RT -PCR方法 ,从人HeLa细胞中扩增出一约 1 5Kb的DNA片段 ,全自动测序后 ,重组入pLexA载体 ,构建成 pLexA -HDAC2 ,用醋酸锂法转化酵母菌EGY48(p8op -lacZ)。 结果 :结果显示 ,获得的 1 .5Kb的DNA片段碱基序列与文献报道的HDAC2的cDNA一致。pLex A -HDAC2转化EGY48(p8op -LacZ) 3天后 ,长出 1mm大小的白色菌落。 结论 :上述结果表明 pLexA -HDAC2可在EGY48(p8op -LacZ)稳定表达 ,无毒性 ,也没有自身激活LacZ的功能 ,可作为酵母双杂交系统中的靶基因。

益肺健脾润肠法治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期(肺脾气虚证)的疗效及对HDAC2、IL-17A的调控作用

目的:探讨益肺健脾润肠法治疗COPD稳定期(肺脾气虚证)的疗效及对HDAC2、IL-17A的调控作用。方法:选取2019年3月—2019年12月收治的70例COPD稳定期(肺脾气虚证)患者作为研究对象,随机分为治疗组和对照组,各35例。对照组单用噻托溴铵吸入剂,治疗组在吸入噻托溴铵基础上联合口服益肺健脾润肠方治疗,对两组疗效及肺功能、HDAC2、IL-17A进行观察。结果:治疗前两组症状积分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后治疗组症状积分较对照组低(P<0.05);治疗前两组FEV_(1)(L)、FEV_(1)/FVC(%)差异无统计学意义(P>0.05),治疗后治疗组上述指标明显优于对照组(P<0.05);治疗前两组HDAC2、IL-17A表达差异无统计学意义(P>0.05),治疗后治疗组HDAC2表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:益肺健脾润肠法治疗COPD稳定期(肺脾气虚证)效果显著,可改善肺功能,对HDAC2、IL-17A具有调控作用。

牦牛HDAC2基因克隆及其在睾丸中的表达

旨在克隆牦牛HDAC2(Histone deacetylase 2)基因,预测分析HDAC2蛋白的结构和特性,并检测HDAC2的mRNA在牦牛不同组织以及不同发育阶段睾丸中的表达。将牦牛按年龄划分为幼年组(0.5~1岁)、成年组(4~5岁)及老年组(7~9岁),采集成年组牦牛肝脏、肾脏、肺、胃、脾脏、脑、心脏和卵巢组织以及3个时期的牦牛睾丸组织,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得牦牛HDAC2的基因序列,使用生物信息学的方法预测该基因的序列同源性以及其编码蛋白质的氨基酸序列和结构;通过实时荧光定量PCR检测HDAC2的mRNA在牦牛不同组织中的表达,通过RT-PCR检测HDAC2的mRNA在牦牛不同发育阶段睾丸中的表达,利用色素原位杂交技术检测HDAC2 mRNA在成年牦牛睾丸中的定位。结果表明,HDAC2基因的开放阅读框包含1467个碱基,编码488个氨基酸,其基因序列在哺乳动物中高度保守。结构预测表明,HDAC2是一个脂溶性疏水蛋白,具有一个组蛋白去乙酰化酶结构域。该基因的mRNA在卵巢和睾丸中的表达较高。HDAC2的mRNA在幼年期牦牛睾丸中的表达显著高于其他时期,在牦牛睾丸中HDAC2的mRNA定位在除精细胞之外的各类细胞中。克隆得到牦牛HDAC2基因序列并明确了该基因在睾丸中的时序表达模式,对于深入探讨HDAC2在牦牛睾丸发育及精子发生中发挥的作用提供了一定的试验数据。

HDAC2在恶性肿瘤中的研究进展

组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)是Ⅰ类组蛋白去乙酰化酶,对染色体的结构修饰和基因表达的调控起着重要作用。大量研究表明HDAC2参与恶性肿瘤的发生,并通过多种信号通路调控恶性肿瘤的发生、增殖、侵袭与迁移等生物学作用。本文综述了HDAC2在恶性肿瘤中的作用机制,旨在为临床预防、诊断、治疗及预后提供可靠的作用靶点。

中医针刺治疗对COPD模型大鼠外周血HDAC2活性的影响

目的:观察针刺对COPD模型大鼠的治疗效果及对外周血中HDAC2活性的影响。方法:连续3周对熏烟法建立COPD模型大鼠进行针刺治疗,仪器检测大鼠肺的通气能力。3周后抽取大鼠外周静脉血,用活性荧光分析技术测定其中HDAC2酶活性;用ELISA法检测外周血中IL-10、IL-8和TNF-α的表达含量。结果:针刺治疗的大鼠,与模型组的大鼠相比,肺通气水平明显上升(P<0.05),外周血的HDAC2活性亦明显上升(P<0.05),但是炎症因子IL-10、IL-8和TNF-α的表达含量明显降低(P<0.05)。结论:针刺治疗对于COPD模型大鼠具有疗效,结果也提示针刺疗效可能是通过调节HDAC2活性,从而消除炎症而起作用。

中国北方汉族男性HDAC2基因多态性对酒精使用相关认知功能的影响

目的探讨中国北方汉族男性组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)基因多态性与酒精使用情况对认知功能的影响。方法纳入中国北方地区的汉族男性504名,采用酒精使用障碍筛查量表(alcohol use disorders identification test,AUDIT)进行筛查并分组为高风险饮酒组(n=194)、低风险饮酒组(n=186)和对照组(n=124)。采用简易视觉图形记忆测验(brief visuospatial memory test-revised,BVMT-R)、数字符号替换测验(digit symbol substitution test,DSST)、数字广度测试(digit span test,DST)评估3组人群认知功能情况。提取受试者外周血中DNA,采用Agena MassARRAY SNP基因分型法检测HDAC2的rs9481408、rs6568819、rs9488289基因多态性。结果与高风险饮酒组及对照组比较,低风险饮酒组的DSST得分较高(P<0.05)。根据各位点基因型分层分析,结果显示对于rs9481408、rs6568819、rs9488289位点,均为携带CC基因型者中低风险饮酒组DSST得分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论中国北方汉族男性人群HDAC2基因rs9481408、rs6568819、rs9488289位点的CC基因型与低风险饮酒者部分认知功能较好可能存在相关性。

HDAC2磷酸化区域突变体的构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响

目的应用片段缺失突变技术鉴定HDAC2自身磷酸化对其Sumo-E3连接酶活性及蛋白质翻译的影响。方法以前期获得的鼠源性HDAC2Sumo-E3连接酶结构域基因片段为模板,设计片段缺失突变引物,经长片段重叠延伸PCR技术扩增获得片段缺失突变基因片段,后于Top10大肠杆菌中自然连接扩增获得pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3连接酶磷酸化结构域缺失突变的真核表达载体。然后将载体转染于L929成纤维细胞瞬时过表达突变基因,再经翻译反应性荧光素酶报告基因实验和Western-blot鉴定HDAC2自身磷酸化修饰对Sumo-E3连接酶介导的报告基因和靶蛋白质表达的影响。最后通过MTT实验检测HDAC2自身磷酸化修饰对其Sumo-E3连接酶介导的L929细胞增殖的影响。结果成功构建获得磷酸化修饰完全缺失的HDAC2片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3(DEL 394-424AA)。LUC报告基因检测结果显示,DEL 394-424AA片段缺失突变体促进LUC翻译是对照组的4.24倍,且能显著促进靶蛋白ODC和c-Myc的表达,以及L929小鼠成纤维细胞的增殖效应。结论 HDAC2自身磷酸化修饰对HDAC2Sumo-E3连接酶活性及其调节的蛋白质翻译和细胞增殖作用起负性调节作用。

基于HDAC2运用中医定向透药治疗慢性阻塞性肺疾病急性期的临床观察

目的基于蛋白去乙酰化基酶2(HDAC2)观察玉屏风散合六君子汤中医定向透药治疗肺脾气虚型慢性阻塞性肺疾病急性期(AECOPD)的疗效及对肺功能、炎症因子的影响。方法选择120例AECOPD患者作为研究对象,采用随机分组法将其分为对照组、常规组及观察组,每组各40例,对照组予以常规西医治疗,常规组及观察组在对照组基础上分别加用普通扶正咳喘方及玉屏风散合六君子汤中医定向透药治疗,3组疗程均为6周,比较3组患者的临床疗效、血清炎症指标和肺功能指标水平。结果观察组的临床治疗总有效率优于对照组及常规组(P<0.05);与本组治疗前比较,3组治疗后第1秒用力呼气量(FEV1)、第1秒用力呼气量占预计值的百分比(FEV1%)、第1秒用力呼气量占所有呼气量的比例(FEV1/FVC)显著升高(P<0.05)。3组治疗后比较,观察组上述肺功能指标较对照组及常规组明显改善(P<0.05);与本组治疗前比较,3组治疗后血清TNF-a、IL-6及IL-8水平明显降低(P<0.05)。3组治疗后比较,观察组上述炎症因子指标较对照组、常规组明显改善(P<0.05);而HDAC2的表达与此相反,治疗后对照组表达为(2.32+0.41)pg/mL,常规组及观察组共培养组指标分别为(3.69+0.72)pg/mL,(7.15+0.49)pg/mL,表达逐渐升高,观察组表达最高,较常规组高(P<0.05)。结论玉屏风散合六君子汤中医定向透药治疗可以促使炎症细胞组蛋白脱乙酰化酶HDAC2的表达激活,降低炎症反应水平,提高免疫功能,从而达到“补肺健脾、化痰通络”缓解AECOPD病情目的。

HDAC2对豚鼠急性听力损失治疗中糖皮质激素抵抗的影响

目的观察地塞米松(dexamethasone,DEX)加氨茶碱(amionophylline,AMI)治疗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的豚鼠急性听力损失的疗效及耳蜗组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)的表达,探讨治疗中HDAC2对糖皮质激素(glucocorticoid,GC)抵抗的影响。方法选取50只健康白色豚鼠,其中10只为对照组,仅双耳鼓阶注入5μl人工外淋巴液(artificial perilymph,AP)(AP组);其余40只鼓阶注入5μl(5mg/ml)的LPS后再随机分为4组,每组10只:模型组(LPS组),无其他处理;LPS+DEX组:术前30min及术后24小时腹腔注射DEX 1mg/kg;LPS+AMI组:术前30min及术后24小时腹腔注射AMI 20mg/kg;LPS+DEX+AMI组:术前30min及术后24小时腹腔注射AMI 20mg/kg及DEX 1mg/kg。所有动物给药前及鼓阶注射术后48小时行ABR检测后取耳蜗,采用免疫荧光法,观察耳蜗基底膜铺片及耳蜗组织冰冻切片中HDAC2的分布及空间定位,用ELISA法测定耳蜗组织中HDAC2的含量。结果 LPS组鼓阶注射LPS后48小时全频听力损失,由低频向高频逐渐加重;LPS+DEX组及LPS+AMI组16、32kHz ABR阈移较LPS组改善明显(<0.05),LPS+DEX+AMI组各频率ABR阈移均低于LPS+DEX组(P<0.05),以16kHz处最显著(P<0.01)。耳蜗基底膜铺片及耳蜗冰冻切片免疫染色结果表明HDAC2广泛分布于耳蜗中,且主要存在于胞核内。8、16、32kHz ABR阈移与耳蜗内HDAC2的含量呈负相关(P<0.05)。结论 AMI可提高豚鼠耳蜗HDAC2的表达,HDAC2可改善治疗中GC抵抗,对提高GC治疗LPS导致的急性听力损失的敏感性有一定的作用。