HDAC9基因SNPs与大动脉粥样硬化缺血性卒中的相关性研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)在动脉粥样硬化缺血性卒中易感区域单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与基因型和生物学表型的相关性。方法利用Haploview软件和千人基因组计划提供的遗传学数据,对HDAC9基因SNPs位点的最小等位基因频率(minor allele frequency,MAF)、单体域和单体型以及标签SNPs(haplotype tagging SNPs,ht SNPs)进行分析。结果在HDAC9基因Chr7:18930kb-19020kb区域共测定75个SNPs,其中Hardy-Weinberg平衡P>0.05,且MAF P>0.05的SNPs共51个。基于confidence intervals,four Gamete rule和solid spine of LD算法分别构建了11、14和8个单体域,其中rs2717356位点连锁不平衡程度低,且不在单体域内,属于HDAC9基因的重组热点区域。取r2≥0.8,且LOD值≥3.0确定30个SNPs为ht SNPs,且MAF均大于0.10;在ht SNPs中发现rs2526630位点[C/T]位于HDAC9的3'UTR区域,与hsa-mi R-545,hsa-mi R-616等micro RNAs结合。结论 30个标签ht SNPs作为人群HDAC9基因易感SNPs位点筛查和重复验证的依据。HDAC9基因rs2526630位点影响与mi RNA的结合在动脉粥样硬化缺血性卒中的发病中可能相关。

芦花鸡HDAC9基因CDS区克隆、生物信息学分析及组织表达分析

为探索组蛋白去乙酰化酶9(Histone Deacetylase 9,HDAC9)基因的功能,明确其在芦花鸡不同组织中的表达差异,实验采集芦花鸡各组织,克隆获得HDAC9基因完整CDS区,进行生物信息学分析及组织表达分析。结果显示,芦花鸡HDAC9基因CDS区长度为3 210 bp,编码1 069个氨基酸;芦花鸡HDAC9基因氨基酸序列与號鹦鹉、绿头鸭及雉鸡位于一个分支,同源性较高,亲缘关系较近。HDAC9蛋白分子质量约为118.0 ku,分子式为C_(5145)H_(8261)N_(1499)O_(1613)S_(33),理论等电点为6.33,半衰期为30 h,HDAC9蛋白为水溶性蛋白;HDAC9蛋白存在信号肽,为分泌蛋白;共存在67个潜在的磷酸化位点;存在3个N-糖基化潜在位点。HDAC9蛋白二级结构由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成,三级结构预测结果与其一致。实时荧光定量PCR结果显示,HDAC9基因在芦花鸡不同组织中表达水平存在显著差异,其中在胸肌中表达量最高,其次为睾丸。本实验结果为进一步探索HDAC9基因生物学功能奠定基础。

HDAC9与大动脉粥样硬化型脑梗死关系的研究进展

基于双胞胎、家族及分子流行病学的研究发现，脑梗死的平均遗传度约为37．9％，其中大动脉粥样硬化型脑梗死（large artery atherosclerosis stroke，LAA-S）的遗传度约为40．0％，心源性栓塞型遗传度约为32．6％，小动脉闭塞型遗传度约为16．1％，提示脑梗死存在遗传异质性，且遗传因素对LAA—S的影响更大。

miR-495-3p通过调控HDAC9表达对缺氧/复氧诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响

目的探讨微小RNA-495-3p(miR-495-3p)对缺氧/复氧(H/R)诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响及机制。方法体外培养神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,建立H/R损伤细胞模型。实验分组:Con组、H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-495-3p组、H/R+si-NC组、H/R+si-HDAC9组、H/R+miR-495-3p+pc DNA组、H/R+miR-495-3p+pc DNA-HDAC9组。采用q RT-PCR与Western blot分别检测细胞中miR-495-3p、组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)的表达;采用膜联蛋白V(AnnexinV)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;双荧光素酶报告基因检测miR-495-3p与HDAC9的靶向关系;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果与Con组比较,H/R组神经细胞中miR-495-3p的表达水平显著降低(P<0.05),HDAC9的表达水平显著升高(P<0.05);H/R处理后细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);miR-495-3p过表达或抑制HDAC9表达后细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);miR-495-3p可靶向结合到HDAC9的3′UTR区,并下调HDAC9的表达;HDAC9过表达可逆转miR-495-3p过表达对H/R诱导的神经细胞凋亡及炎症因子表达水平的抑制作用。结论miR-495-3p可通过靶向下调HDAC9的表达抑制H/R诱导的神经细胞凋亡及抑制炎性因子的产生进而对神经细胞发挥保护作用。

HDAC9沉默抑制新生大鼠海马神经元氧糖剥夺/再灌注损伤

目的:研究组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的新生大鼠海马神经元损伤的影响及其机制,为研究新生儿缺氧缺血性脑损伤奠定基础。方法:体外培养新生SD大鼠海马神经元,建立OGD/R损伤模型。用real-time PCR和Western Blot分别检测HDAC9 m RNA和蛋白表达;转染HDAC9 si RNA沉默其表达,并将细胞分为空白对照组、OGD/R组、OGD/R+scramble si RNA组和OGD/R+HDAC9 si RNA组;MTT法测定神经细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒检测LDH漏出率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测细胞Bax、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达。此外,用JAK2抑制剂AG490预处理细胞,评价JAK2/STAT3通路在HDAC9沉默对海马神经元OGD/R损伤中的作用。结果:HDAC9在OGD/R损伤的在新生大鼠海马神经元细胞中高表达(P<0.05);转染HDAC9 si RNA后,细胞HDAC9表达降低(P<0.05);在OGD/R诱导的海马神经元细胞中,下调HDAC9的表达能够显著提高细胞活性,降低LDH渗出率,减少神经细胞凋亡,下调Bax表达,上调Bcl-2表达,上调p-STAT3的表达(P<0.05),此外,AG490部分逆转HDAC9沉默对新生大鼠海马神经元细胞OGD/R损伤的抑制作用(P<0.05)。结论:HDAC9沉默通过JAK2/STAT3通路抑制新生大鼠海马神经元OGD/R损伤。

miR-30a-5p调控HDAC9对心肌细胞氧化应激损伤保护作用的机制研究

目的探讨miR-30a-5p通过调控组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激的影响及作用机制。方法本研究通过体外培养心肌细胞H9c2,建立缺氧复氧损伤细胞模型,细胞分组为:Control组、H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-30a-5p组、H/R+si-NC组、H/R+si-HDAC9组、H/R+miR-30a-5p+pcDNA组、H/R+miR-30a-5p+HDAC9组。qRT-PCR检测miR-30a-5p和HDAC9 mRNA表达;Western blot检测HDAC9、Bax和Bcl-2蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)含量;双荧光素酶报告基因检测miR-30a-5p和HDAC9靶向关系。结果与Control组比较,H/R组的心肌细胞中miR-30a-5p表达、Bcl-2蛋白表达和SOD活性均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量、LDH含量HDAC9 mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与H/R+miR-NC组比较,H/R+miR-30a-5p组的心肌细胞中miR-30a-5p表达、Bcl-2蛋白表达和SOD活性均显著增加(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-30a-5p组中HDAC93’UTR-wt荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而HDAC93’UTR-mut荧光素酶活性没有任何变化。与anti-miR-N组比较,anti-miR-30a-5p组中miR-30a-5p表达显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-30a-5p组中HDAC9蛋白表达显著降低(P<0.05);与anti-miR-N组比较,anti-miR-30a-5p组中HDAC9蛋白表达显著增加(P<0.05)。与Control组比较,H/R组的心肌细胞中HDAC9蛋白表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量和LDH含量均显著增加(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达和SOD活性均显著降低(P<0.05);与H/R+si-NC组比较,H/R+si-HDAC9组的心肌细胞中HDAC9蛋白表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量和LDH含量均显著降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达和SOD活性均显著增加(P<0.05)。与H/R+miR-NC组比较,H/R+miR-30a-5p组的心肌细胞中HDAC9蛋白表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量和LDH含量均显著降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达和SOD活性均显著增加(P<0.05);与H/R+miR-30a-5p+pcDNA组比较,H/R+miR-30a-5p+HDAC9组的心肌细胞中HDAC9蛋白表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量和LDH含量均显著增加(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达和SOD活性均显著降低(P<0.05)。结论miR-30a-5p通过下调HDAC9减缓缺氧复氧诱导的心肌细胞H9c2凋亡和氧化应激损,起到保护心肌细胞的作用。

HDAC9通过下调PDE4b表达参与调控小鼠心肌肥厚

目的探讨心肌肥厚性重构可能分子机制。方法选取8周龄清洁级雄性C57小鼠18只,随机分为升主动脉缩窄术(TAC)组和对照组(SHAM组),每组9只。TAC组给予升主动脉缩窄术(TAC术)构建心肌肥厚模型。SHAM组给予假手术。术后4周,利用二氧化碳窒息处死实验小鼠,剖开胸腔后分离心脏组织,用于后续实验。H&E染色观察心脏组织结构;心室/体质量指数评估心室重构情况;荧光测定法测定心脏组织中组蛋白去乙酰化酶(HDACs)活性;qPCR检测MYH7、PDE4b、HDAC4、HDAC5及HDAC9的表达水平,Western blot检测PDE4b及HDAC9蛋白表达水平,ChIP-qPCR检测HDAC9与PDE4b启动子结合水平。结果与SHAM组相比,TAC组小鼠室间隔及左室壁明显增厚,心室/体质量指数明显升高(4.48±0.18 vs 5.50±0.23)(P<0.05),心肌肥厚标志物MYH7表达明显升高(0.91±0.04 vs 1.44±0.07)(P<0.05);PDE4b表达明显降低(mRNA水平0.75±0.09 vs 0.27±0.06;蛋白水平0.67±0.11 vs 0.34±0.05)(P<0.05);肥厚心肌组织中组蛋白去乙酰化酶活性显著增加(3.24±0.32 vs 5.03±0.58)(P<0.05),HDAC9表达显著升高(mRNA水平0.85±0.08 vs 1.35±0.07;蛋白水平0.77±0.10 vs 1.25±0.05)(P<0.05),而HDAC4、HDAC5表达与SHAM组无明显差异(P>0.05);HDAC9与PDE4b启动子结合水平明显升高(1.67±0.10 vs 2.47±0.20)(P<0.05)。结论心肌肥厚中HDAC9可能参与下调PDE4b表达,进而参与心室肌肥厚性重构。

HDAC9在人结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨HDAC9蛋白在结肠癌中的表达,并分析其表达状态与临床病理资料之间的关系。方法通过免疫组织化学分析的方法检测结肠癌组织芯片(结肠癌组织99例和癌旁组织80例)中HDAC9蛋白的表达,利用蛋白印迹方法检测15例结肠癌组织和配对癌旁组织中HDAC9蛋白的表达,并通过SPSS 17.0软件统计分析HDAC9在结肠癌中的临床意义。结果免疫组织化学分析表明,HDAC9阳性产物表达于细胞核,结肠癌组织中HDAC9表达水平明显高于癌旁组织(P=0.001)。HDAC9的表达与结肠癌的淋巴结转移和TNM分期相关。生存分析表明HDAC9高表达可缩短结肠癌患者的生存时间(P=0.003)。Cox回归分析证实HDAC9是一个独立的预后标志物(P=0.022)。蛋白印迹结果发现结肠癌组织中HDAC9的表达明显高于癌旁组织(P=0.04)。结论 HDAC9在结肠癌中可能是一个不良的生存预后因子。

microRNA-384靶向HDAC9调控肝癌细胞增殖迁移侵袭和凋亡的机制研究

[目的]:研究microRNA-384(miR-384)、人组蛋白去乙酰化酶(HDAC9)对肝癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其作用机制。[方法]运用qRT-PCR检测正常肝上皮细胞THLE3和肝癌细胞HEP3B、BEL-7402、HUH7中HDAC9、miR-384的mRNA的表达;将PC DNA组(转染PC DNA)、PC DNA-HDAC9组(转染PC DNA-HDAC9)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-384组(转染anti-miR-384)、si-NC组(转染si-NC)、si-HDAC9组(转染si-HDAC9)、PC DNA-HDAC9+miR-NC组(共转染PC DNA-HDAC9和miR-NC)、PC DNA-HDAC9+miR-384组(共转染PC DNA-HDAC9和miR-384),用脂质体法转染至HUH7;Western blot检测细胞中HDAC9的蛋白表达;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性。[结果]与THLE3细胞比较,肝癌细胞HEP3B、BEL-7402、HUH7中HDAC9的mRNA和蛋白均显著上调,miR-384的mRNA显著下调(P<0.05);过表达HDAC9可明显促进HUH7的增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,敲减HDAC9具有相反的结果;HDAC9是miR-384的靶标,且受miR-384的负向调控。过表达miR-384可逆转HDAC9对肝癌细胞的作用。[结论]miR-384抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,其机制与靶向负调控HDAC9相关,将可为肝癌的治疗提供新的治疗靶点。

中国老年人HDAC9和PPP3CA基因多态性与衰弱的关联

目的探讨组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)rs2074633及钙调神经磷酸酶催化亚基A(calcineurin catalytic subunit A,PPP3CA)rs17030795的多态性与中国老年人衰弱发生的关联。方法本研究纳入衰弱组665例,对照组3388例。基于基因型频率及五种遗传模型(共显性、加性、显性、隐性和超显性),评估rs2074633及rs17030795多态性与衰弱之间的关联。结果在共显性模型中,与携带rs2074633 TT基因型相比,携带TC型(OR=1.99,95%CI:1.36~2.90)、CC型(OR=2.15,95%CI:1.48~3.13)的个体发生衰弱的风险增加;在加性(OR=1.28,95%CI:1.11~1.47)、显性(OR=2.07,95%CI:1.44~2.98)及隐形模型(OR=1.21,95%CI:1.01~1.45)中rs2074633多态性均增加衰弱的发生风险;在共显性模型中,与携带rs17030795 AA基因型相比,携带AG(OR=1.72,95%CI:1.19~2.51)、GG(OR=1.98,95%CI:1.37~2.87)型的个体发生衰弱的风险增加;在加性(OR=1.28,95%CI:1.11~1.48)、显性(OR=1.85,95%CI:1.29~2.66)及隐性(OR=1.25,95%CI:1.04~1.50)中rs17030795多态性均增加衰弱的发生风险。结论HDAC9 rs2074633及PPP3CA rs17030795多态性与中国老年人衰弱发生风险有关。

组蛋白去乙酰化酶9基因单核苷酸多态性与缺血性卒中的相关性

目的探讨组蛋白去乙酰化酶9（HDAC9）基因单核苷酸多态性与缺血性卒中（IS）亚型的相关性。方法回顾性纳入IS患者202例,按照低分子肝素Org10172治疗急性卒中试验（TOAST）分型,将IS患者分为大动脉粥样硬化型卒中（LAA）149例和小动脉闭塞型卒中（SAO）53例。纳入同期年龄、性别相匹配的健康体检者201名。采用聚合酶链式反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）,对所有受试者HDAC9基因rs11984041、rs2107595位点进行基因分型,并对基因型与IS的相关性行多因素Logistic回归分析。结果 （1）所有受检对象中,rs11984041位点检出的基因型均为CC型,rs2107595位点共检测出CC、CT、TT 3种基因型。（2）LAA组、SAO组、对照组3组间显性模型（CT＋TT、CC）基因型频率和等位基因频率差异有统计学意义（χ2=8.635,P=0.013;χ2=10.309,P=0.006）;而3组间CC、CT、TT基因型频率和隐性模型（CC＋CT、TT）基因型频率差异均无统计学意义（校正后均P〉0.017）;与对照组比较,LAA组等位基因频率差异有统计学意义（χ2=7.446,P=0.006）;显性模型中,LAA组CT＋TT（65.1%,97/149）与对照组（52.2%,105/201）基因型频率差异有统计学意义（χ2=5.800,P=0.016）。（3）多因素Logistic回归分析显示,性别、高血压、吸烟、高水平低密度脂蛋白胆固醇及rs2107595位点显性模型CT＋TT基因型与LAA型IS相关（显性模型CT＋TT的OR=1.909,95%CI：1.055~3.454,P=0.033）。结论除脑血管病危险因素如性别、高血压、吸烟、高水平低密度脂蛋白胆固醇外,HDAC9基因多态性也可能与LAA型IS相关,rs2107595位点CT＋TT基因型可能是LAA型IS的独立危险因素。

组蛋白去乙酰化酶9在肿瘤中的作用

组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)属于组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)Ⅱa亚型,在体内通过催化组蛋白3(H3)、组蛋白4(H4)和非组蛋白的去乙酰化,改变染色体的结构,调节基因的转录。研究表明HDAC9表达异常与肿瘤关系密切,但不同肿瘤中HDAC9的表达和功能不同,最终造成促癌或抑癌的相反结果,具体机制尚不明确。当前利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylases inhibitors,HDACIs)的表观遗传治疗已成为热点,研制特异性HDACIs并与化疗、放疗以及免疫治疗相结合已成为未来的方向,但靶向针对HDAC9的治疗研究非常有限。本文就HDAC9在肿瘤中的作用进行综述。

eIF4E和cyclin D1在肿瘤中的调控机制及临床治疗进展

真核翻译起始因子4E(eIF4E)是在大约30%的人类癌症中表达升高的有效致癌基因,包括结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、头颈部癌以及白血病和淋巴瘤[1-2]。细胞周期蛋白D1(cyclin D1)同样在乳腺癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌和肺癌等中存在异常表达,且在胰腺癌、皮肤黑色素瘤、子宫内膜癌等肿瘤中,cyclin D1影响局部浸润、转移和患者预后[3]。两者在肿瘤的发生发展中都发挥着重要的作用,因此探讨两者之间的调控机制,并针对其调控通路开发靶向治疗药物显得意义重大。

组蛋白去乙酰化酶9表达与恶性肿瘤预后相关性的Meta分析

目的分析组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)表达水平与恶性肿瘤预后的相关性。方法计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、中国期刊全文数据库和万方数据库,搜集HDAC9表达对恶性肿瘤预后相关性的病例对照研究,检索时限均为建库至2019年3月。筛选文献并提取数据,使用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入8篇病例对照研究,Meta分析结果显示,HDAC9高表达与性别(OR=0.87,95%CI=0.22~3.40,P=0.84)、TNM分期(OR=0.55,95%CI=0.20~1.52,P=0.25)、无进展生存期(HR=1.10,95%CI=0.97~1.26,P=0.14)无关,但与淋巴结转移(OR=2.25,95%CI=1.18~4.29,P=0.01),总生存期(HR=2.51,95%CI=1.11~5.66,P=0.03)和无事件生存期(HR=10.61,95%CI=1.26~86.90,P=0.03)显著相关。结论HDAC9的高表达是恶性肿瘤病人不良预后的危险因素。

GWAS支持的遗传变异rs2107595多态性影响缺血性中风风痰瘀阻证的血脂代谢

本研究旨在探索rs2107595多态性与中国南方汉族人缺血性中风风痰瘀阻证的发生及血脂水平的关联。方法:纳入缺血性中风风痰瘀阻证患者311例、健康对照组605例,采用Sequenom技术进行基因分型,运用PLINK统计软件进行遗传关联分析。结果:HDAC9基因rs2107595多态性与缺血性中风风痰瘀阻证的关联无统计学意义(均P>0.05),但是,rs2107595多态性与缺血性中风风痰瘀阻证患者的血清总胆固醇(TC)水平显著关联(加性模型:Padj=0.006;显性模型:Padj=0.003)。结论:GWAS支持的遗传变异rs2107595多态性可能影响缺血性中风风痰瘀阻证的血脂代谢。