脱钙液的组分与处理时间对骨髓活检组织HE和免疫组化染色的影响

目的:探讨不同组分的脱钙液及脱钙时间对骨髓活检组织HE染色和免疫组化染色效果的影响。方法:收集36例骨髓活检穿刺组织,分为10%硝酸甲醛液(A液)、10%盐酸甲醛液(B液)和30%甲酸甲醛液(C液)3组,每组12例,分别观察各组的脱钙时间。另收集5例骨髓活检穿刺组织,将同一例标本分成两份,观察不同组分的脱钙液和脱钙处理时间对HE染色和免疫组化染色效果的影响。结果:A液、B液的脱钙时间比C液短;3种方法的HE染色效果均较好;而C液脱钙2 h的Ki67免疫组化染色效果好,但其他方法的Ki67免疫组化染色效果欠佳。结论:采用30%甲酸甲醛液处理2 h的脱钙法,实验操作简便,HE染色和免疫组化染色效果较为满意。

快速HE染色在周围型肺癌穿刺活检快速现场细胞学评价中的应用

背景与目的快速现场评价(rapid on-site evaluation,ROSE)是在活检术中同步实施的标本快速细胞学染色和评价技术。迪夫(Diff-Quik,DQ)染色是快速现场细胞学评价(cytological ROSE,C-ROSE)最常用的染色方法,但国内大部分病理医生不使用DQ染色进行现场细胞学判读,因此难以开展C-ROSE。本研究拟在周围型肺癌穿刺活检过程中分别使用快速苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和DQ染色进行C-ROSE,评估快速HE染色在C-ROSE中的应用价值。方法对300例术前拟诊周围型肺癌患者实施胸部计算机断层扫描(computed tomography,CT)引导肺活检,随机分成两组且分别使用快速HE染色和DQ染色,进行C-ROSE判读,并对两种染色方法进行比较和评价。结果C-ROSE与组织病理诊断符合率为96.7%。快速HE染色的中位时间为160 s,而DQ染色为120 s,两组存在统计学差异(P<0.001)。但两组的肺活检时间、组织病理符合率、细胞学标本脱片率和严重不良反应发生率均无统计学差异(P>0.05)。结论在周围型肺癌活检过程中,两种染色方法均能满足C-ROSE要求,快速HE染色可应用于C-ROSE,且更符合国内临床需求,具有潜在的推广价值。

大鼠阴道细胞涂片技术及其HE染色方法的研究

目的:探索制备大鼠阴道细胞涂片的最佳方法,为实验中判断雌性大鼠的动情周期提供参考。方法:60只SD雌性大鼠,随机分为6组,每组10只,分别用不同方法制备阴道细胞涂片,共10 d。空白组正常饲养;常规棉签组10cm无菌棉签用生理盐水浸湿插入大鼠阴道内(深度约1 cm),单向旋转3圈,蘸取脱落细胞,逆向均匀地涂在载玻片上;自制棉签组自制无菌棉签(较常规棉签头外径小),操作同常规棉签组;20μl移液枪组、40μl移液枪组、80μl移液枪组分别采用20μl、40μl和80μl 3种不同刻度的移液枪,吸取20μl、40μl和80μl生理盐水打入大鼠阴道内(深度约1 cm),反复吹打3次,吸出阴道液均匀地涂在载玻片上。涂片晾干后,经苏木精-伊红染色(HE染色),在显微镜下分别观察HE染色前后阴道涂片细胞分布情况,并记录每只大鼠的动情周期变化,比较不同制备方法对大鼠动情周期的影响。同时,每日尾静脉采血对大鼠血清性激素水平进行连续性检测,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中促卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平连续变化情况,共10 d。结果:棉签插入阴道滞涩,采集阴道细胞量少,细胞分布不均匀,呈“条带”样排列;染色后,细胞脱落明显,易脱片,细胞较少,可勉强判断动情周期;常规棉签与自制棉签比较,镜下观察结果相似,常规棉签采集阴道细胞较多。移液枪插入阴道顺畅,采集细胞量多,随着吸取生理盐水量的增加,细胞分布表现为由密集重叠到相对均匀;染色后,细胞较多,细胞形态清晰,动情周期易辨。尤以80μl移液枪为宜。棉签法长时间刺激会导致大鼠动情周期紊乱,主要表现为动情周期延长;移液枪冲洗法对大鼠动情周期影响较小,移液枪组与常规棉签组动情周期紊乱率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。棉签组血清中FSH、E2水平变化无周期性、规律性变化,第5天、第6天、第8天与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);80μl移液枪组大鼠血清中FSH、E2水平呈周期性变化,较有规律,与空白组水平变化趋势相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究阴道涂片的制备方法中80μl移液枪组最佳,对大鼠动情周期变化影响较小,性激素水平变化趋势与空白组大鼠相近,即用80μl移液枪冲洗涂片法观察大鼠动情周期清晰易辨,影响较小。

免疫荧光检测平台联合快速HE染色在阴道炎中的诊断价值

目的分析免疫荧光检测平台联合快速HE染色在阴道炎中的诊断价值。方法选取2021年1月至2022年12月在首都医科大学附属北京妇产医院怀柔妇幼保健院妇科就诊的250例疑似阴道炎患者为研究对象。以实验室检验作为金标准,分析不同检验方式检测阴道炎的诊断效能及阴道清洁度检出情况。结果免疫荧光联合快速HE染色法的诊断效能高于湿片镜检法,差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光联合快速HE染色与湿片镜检法的阴道清洁度检出情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论免疫荧光检测平台联合快速HE染色在阴道炎中的诊断价值较高,能够提高诊断效能。

气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。

紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响

目的探究紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆力及氧化应激损伤的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、紫斑牡丹花粉组(750、1500、3000 mg·kg^(-1)),采用颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1)),制备亚急性衰老模型。Morris水迷宫评估小鼠学习记忆力;HE、DAPI染色评估肝、脑组织细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清、肝脑组织内MDA、T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT及γ-H2AX、SA-β-Gal水平。结果水迷宫实验结果表明,紫斑牡丹花粉能明显提高衰老小鼠的学习记忆力。组织染色结果表明,紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠肝脑组织细胞损伤具有保护作用,且高剂量组作用最为明显。ELISA结果显示,与模型组比较,紫斑牡丹花粉各剂量组的MDA、γ-H2AX、SA-β-Gal水平降低,T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT水平升高。结论紫斑牡丹花粉能改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习记忆力,提高衰老小鼠体内抗氧化酶活性和清除自由基、脂质过氧化物的能力,保护肝脑脏器组织细胞免受氧化损伤,提示其具有潜在的延缓衰老的作用。

不同固定液对大鼠脾石蜡切片HE染色标本的影响

目的:比较经不同固定液处理的大鼠脾石蜡切片HE染色效果,优化制作大鼠脾石蜡切片HE染色标本的最佳方法。方法:用3种不同的固定液处理大鼠脾脏组织,经上行梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片、HE染色,显微镜下观察,比较其染色效果,选择最佳的大鼠脾石蜡切片标本的制作方法。结果:不同的固定液处理的大鼠脾石蜡切片HE染色效果各有不同,经Helly固定液处理后的标本的染色效果最佳。结论:Helly固定液是制作大鼠脾石蜡切片HE染色标本的理想固定液。

HE染色光镜观察法在脑组织形态学研究中的应用

HE染色光镜观察法是生物、医学基础研究中最基本的研究方法之一。通过复习整理针刺干预对相关神经系统疾病大鼠模型病理变化的影响,并与免疫组化染色法比较,了解HE染色方法在中医针灸作用机理研究中的地位和作用。表明HE染色方法可以在同一个视野下同时观察大鼠脑组织的多种指标变化情况,以整体判断大鼠脑的功能状态,和免疫组化染色法相比具有观察直观,操作简便易于掌握,而且经济节省时间的特点,明确HE染色光镜观察法作为一种最基础的方法在脑组织形态学的研究中有着其不可替代的优势。

Masson三色染色与HE染色在豚鼠牙齿组织石蜡切片中的比较研究及应用

针对牙齿组织形态学研究的难点,选择适宜固定液,用EDTA-2Na进行脱钙,完成了牙齿组织石蜡切片的制作。通过确定染色程序及各种染料的最佳作用时间,分别利用Masson三色染色法、传统的苏木精和伊红(HE)染色法对牙齿组织切片进行了染色观察。染色结果表明,与HE染色法相比,Masson三色染色更能使牙齿的各主要成分以不同颜色显现出来,色彩对比鲜明,亮丽润眼,为牙齿组织生理及病理组织形态学研究奠定了基础。针对机体中硬组织的相似特性,该试验方法可以在骨骼、软骨等硬组织的形态学研究中参考、改进并推广使用。

原发性脑干挫伤的HE染色观察

目的观察原发性脑干挫伤的形态学特点。方法从465例致死性颅脑损伤中,检出171例有脑干挫伤病变、均于伤后10min～7d死亡者。脑干标本经福尔马林固定后,以脑干各颅神经根水平面等处切取检材,每例共8块,HE染色,光镜观察。结果 171例中有24例颅底骨折致脑干挫伤者,脑干横切面见小灶出血,其余只有在镜下方可见有组织出血、挫碎或撕裂等脑挫伤改变,以及对损伤的应激反应现象。结论原发性脑干挫伤的形态学具有一定特点,故对鉴定脑干损伤有着重要的参考价值。

HE染色细胞核灰染的处理方法比较研究

目的探讨HE染色细胞核灰染的处理方法,提高HE染色质量。方法收集10例HE染色发灰的胃粘膜、肠息肉和子宫内膜等不同类型的组织,重新切片,通过调整苏木素染色条件以及染色前对组织进行修复处理,设对照组,比较各种处理方法的染色效果。结果通过延长时间、水浴加热和微波加热等调整苏木素染色条件的方法以及水煮修复处理法能够不同程度地促进核染色,但灰染现象未能彻底解决。PBS、EDTA、柠檬酸分别采用高压和微波修复处理均能较好地改善HE染色细胞核灰染现象,以PBS微波处理法效果最佳。结论 PBS微波处理法是HE染色细胞核灰染现象的一种有效处理方法。

细胞HE染色涂片与细胞蜡块检测晚期非小细胞肺癌胸腔积液标本中表皮生长因子受体基因突变

目的:伴发胸腔积液的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者已失去手术机会,表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)是EGFR敏感突变的晚期NSCLC患者的一线用药。但EGFR-TKIs治疗时或治疗后出现的疾病进展以及药物的更新迭代给临床诊治带来了挑战,需要对存档的胸腔积液细胞样本进行EGFR复检或比对研究。本研究采用细胞HE染色涂片与细胞蜡块两种制作方法对NSCLC胸腔积液样本的EGFR突变基因进行检测,分析两种保存方式、保存时间对胸腔积液细胞DNA质量的影响,以期探索出一条保存细胞学资料及充分利用细胞学档案资料的可靠途径。方法:选取2014年10月—2021年4月航天中心医院病理科接收的胸腔积液样本57例,所有样本同时制作细胞HE染色涂片与细胞蜡块。将57例配对的细胞HE染色涂片与细胞蜡块采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链反应(amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术进行EGFR基因突变检测。DNA检测浓度为2 ng/μL,细胞HE涂片与配对细胞蜡块DNA样本并排进行扩增。结果判读按试剂说明书要求,待测样本的8号孔外控循环阈值(cycle threshold,Ct值)在13~21之间为样本合格,EGFR基因突变Ct值<26时,判断为阳性;26≤Ct值<29为临界阳性,Ct值≥29为阴性。ΔCt值为突变Ct值与外控信号Ct值的差值。比较细胞HE染色涂片与细胞蜡块检测为阳性的ΔCt值。同时将57例患者按时间段分为4组:2014—2015年(n=10),2016—2017年(n=20),2018—2019年(n=17),2020—2021年(n=10)。比较不同时间段的检测结果。结果:57例晚期NSCLC患者中以胸腔积液为首发症状入院者42例,占73.7%;57例中37例发生EGFR突变,突变率64.9%;19del突变和L858R突变为主要的突变类型,分别占37.8%(14/37)和48.6%(18/37);37例突变患者中女性占56.7%(21/37);细胞涂片与配对的细胞蜡块突变一致率为100%;细胞HE染色涂片的ΔCt值小于配对细胞蜡块的ΔCt值(t=4.526,P<0.001)。37例配对细胞蜡块与细胞HE染色涂片的突变Ct值均<26。4个时间段中,2014—2015年、2016—2017年、2018—2019年的细胞蜡块突变基因Ct均值均高于2020—2021年(P<0.05);4个时间段的细胞HE染色涂片突变Ct均值差异无统计学意义(P>0.05)。57例配对细胞蜡块与细胞HE染色涂片的外控Ct值均在13~21之间。2014—2015年、2016—2017年的细胞蜡块与细胞HE染色涂片的外控Ct值均高于2018—2019年、2020—2021年(均P<0.05)。结论:细胞HE染色涂片与细胞蜡块检测NSCLC胸腔积液样本EGFR突变具有极好的一致性,且细胞HE染色涂片的DNA质量优于细胞蜡块,但细胞HE染色涂片的局限在于不可复制性,建议在胸腔积液标本制作中进行多张涂片,以满足多次检测的需求。

HE染色切片组织的STR检测及法医学应用

目的建立并优化HE染色切片组织STR分型方法,评估HE染色切片组织的STR分型有效性。方法用QIAgen法提取2例尸检人体的心、肝、肺、肠等8种组织的HE染色切片DNA,用TaqMan荧光探针法通过荧光域值循环数(Ct值)测定获得各提取液中的DNA质量浓度,以阳性内对照(internal posi-tive control,IPC)监测PCR过程中的抑制水平。再用Identifiler试剂盒扩增,在3100-Avant上进行STR片段分析。结果在本研究建立优化的STR分型技术条件下,8种人体组织的HE染色切片DNA提取液质量浓度均可达到1ng/μL以上,其IPC的Ct值提示无PCR抑制剂。HE染色切片组织的STR分型有效性与石蜡包埋组织相当,其DNA随时间延续而缓慢降解。结论在一定保存时限内,HE染色切片的DNA质和量可以满足STR分型检测需要,但受残余甲醛固定剂的影响,HE染色切片的分型成功率随保存时间延长而降低。

HE和Giemsa染色在结膜刮片检测嗜酸粒细胞的染色比较

目的:通过HE和Giemsa对嗜酸粒细胞的染色效果比较,寻找最佳染色方法。方法:对春季结膜炎20例病人进行结膜刮片,并分别作HE和Giemsa染色,最后用光学普通显微镜观察。结果:在显微镜下,Giemsa染色的嗜酸粒细胞比HE染色的嗜酸粒细胞清晰。结论:实验表明,检测嗜酸粒细胞,采用Giemsa染色,可获得满意的染色效果。

不同固定液冷冻切片HE染色质量的对比观察

目的观察4种固定液对冷冻切片染色质量的影响,从中筛选固定效果最佳的固定液。方法收集60例新鲜组织,其中良性18例,恶性42例,行冷冻切片,分别采用丙酮、95%乙醇、AAF液、改良AAF液固定苏木精-伊红染色法(HE)染色,观察染色效果。结果丙酮、95%乙醇固定的切片,组织结构不清晰,核、质着色不佳;AAF液固定的切片,组织结构较清晰,核着色较鲜艳,胞质着色淡;改良AAF液固定的切片,组织结构清晰,核、质着色鲜艳。结论复合固定液固定的冷冻切片HE染色效果优于单纯固定液,其中改良AAF液效果最佳。

石蜡组织切片制作原理引入口腔组织病理学实验课的探讨

目的探讨石蜡组织切片制作原理引入本科口腔组织病理学实验课程的应用效果。方法2020年9—12月以自愿参加学习的郑州大学2017级口腔专业59名本科生为研究对象,实验课开课前讲授石蜡组织切片制作原理和HE染色理论知识,通过调查问卷的形式评价课程效果。结果调查问卷结果显示,57名学生(96.61%)认为该课程有助于实验课中组织切片学习且增加对实验课的兴趣。在口腔组织病理实验课中,39名学生(66.1%)观察到非学习组织结构或异常结构(情况),其中36名学生(92.31%)观察到的异常结构在课程中有讲述。结论石蜡组织切片制作原理引入本科口腔组织病理学实验课程,增强了学生对实验课的兴趣,有助于实验课中读片学习,有效提升了实验课的教学质量。

HE染色切片行荧光原位杂交检测方法的探讨

目的建立HE染色切片上进行荧光原位杂交(FISH)检测的技术方法。方法 HE染色后的切片,轻轻揭掉其盖玻片,然后放在二甲苯中浸泡40 min,重复2次。接着按本实验室标准的FISH操作规程进行。结果用此方法进行FISH检测,组织无脱片,信号清楚,定位准确,背景干净。结论 HE染色切片行荧光原位杂交检测方法稳定,结果可靠,在病理诊断中有一定的应用价值。

肾穿组织免疫荧光及HE染色方法的改良

目的探讨肾脏穿刺活检组织行直接免疫荧光法及HE染色技术的改良,并用AB两组对比的方式显示改良前后的优缺点。方法肾脏穿刺活检组织免疫荧光及HE染色技术的改良。结果改良后的肾穿组织免疫荧光技术及HE染色技术大大缩短操作时间,HE染色上色均匀,核浆对比明显。结论肾活检病理是根据肾脏疾病的发病特点,在一般病理学方法的基础上,吸收了免疫病理(免疫荧光、免疫酶标)、超微病理等先进手段而完成的。肾穿刺组织的病理检查包括光镜观察及电镜检查两部分,免疫荧光及HE染色是光镜观察的重要组成部分。肾活检有利于明确诊断、指导治疗、判断预后、探讨临床分型与病理分型的关系,也是提高肾脏病临床与科研水平的重要手段之一。

HE切片中苏木素沉渣去除方法探讨

目的:探讨去除HE染色切片中苏木素沉渣的方法。方法:采用下列三种方法去除HE染色切片中的苏木素沉渣并比较其效果:(1)陈旧苏木素染色液加热至40℃;(2)滤纸过滤陈旧苏木素染色液;(3)石蜡切片经1.0%NaOH浸泡8min、1.0%NaHCO3浸泡2min、200U/ml糜蛋白酶浸泡8min后在陈旧苏木素染色液中染色。此外,在AB/PAS染色前和染色后用1.0%NaOH、1.0%NaHCO3、200U/ml糜蛋白酶浸泡切片,观察该化学处理对粘液染色效果的影响。结果:经过1.0%NaOH、1.0%NaHCO3或200U/ml糜蛋白酶浸泡的切片,HE染色后无苏木素沉渣附着;陈旧苏木素染色液加热后染色,切片中仍有大量苏木素沉渣附着,过滤后染色则切片中苏木素沉渣消失。在AB/PAS染色后、苏木素衬染前1.0%NaOH、1.0%NaHCO3或200U/ml糜蛋白酶处理切片,粘液区呈强阳性染色;AB/PAS染色前用上述方法处理切片,粘液染色强度略有减弱。结论:陈旧苏木素染色液过滤经1.0%NaOH、1.0%NaHCO3、200U/ml糜蛋白酶浸泡均可有效去除HE染色切片中的苏木素沉渣。

骨髓活检HE染色时细胞核灰染的处理方法比较

目的探讨骨髓穿刺活检组织在HE染色时细胞核灰染的处理方法,以提高染色质量。方法收集HE染色时骨髓穿刺活检组织中细胞核灰染的病例15例,每例重新切片,通过延长苏木素染色时间、高压修复、微波修复及氨水浸泡等4种不同的处理方法,设对照组,比较各种处理方法的染色效果。结果高压法、微波法和氨水法均能明显改善骨髓腔内各细胞核的灰染现象,但高压法易使骨小梁脱片,微波法处理时间较长,氨水法既能保持组织结构的完整性,又用时较短。延长时间法改善细胞核灰染的效果不及前三种方法。结论氨水法是处理骨髓穿刺活检组织在HE染色时细胞核灰染的一种有效的方法,且操作简单、快速。