我国部分省份牛冠状病毒HE基因遗传变异分析

2020-2023年收集我国14个省份78个临床发病牛群的肛拭子、粪便、组织等样品1819份,用实时荧光RT-PCR方法进行牛冠状病毒(BCoV)检测,并选取部分核酸阳性样品进行HE基因全长的扩增、测序与遗传变异分析。78个发病牛群中,BCoV阳性场占56.41%,共获得35条HE基因全长序列,与参考序列相比,核苷酸同源性为97.0%~100.0%,氨基酸同源性为97.0%~99.8%。系统进化分析表明,BCoV毒株HE基因在进化上呈现典型的地域性特点,亚洲毒株和美国毒株进化上较为接近,而欧洲毒株位于另一个分支,所测毒株与中国参考毒株处于亚-美型毒株分支中,位置相对较为集中。所测35个HE序列中,有34个没有发生插入或缺失突变,来自宁夏的BCoV/NX13/CHN/2023毒株其HE基因存在12个核苷酸的插入突变,证实了BCoV HE基因插入变异株在我国的存在。基因重组分析显示,该毒株与BCoV/HeB120/CHN/2021的HE基因可能发生了重组,预测重组值分别为0.797和0.759。说明了我国部分省份临床发病牛群BCoV感染及BCoV HE基因的遗传变异,为明晰我国BCoV流行毒株分子特征提供参考。

基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株

目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。

猪轮状病毒HeBei-12株在MA-104细胞上最适繁殖时间的摸索

本试验将He Bei-12株猪轮状病毒在MA-104细胞上培养,通过对病毒的细胞培养物进行核酸提取及RT-PCR检测证明,该病毒可以很好的适应细胞。为获得最佳的病毒培养量,本试验分别从间接免疫荧光,增殖动力学曲线以及病毒感染细胞后的超薄切片电镜对病毒的繁殖周期做了初步研究。结果表明,He Bei-12株猪轮状病毒在感染MA-104细胞时,病毒粒子是随着时间的变化而变化的,当病毒接种20 h时即可在细胞质中观察到病毒粒子。当病毒感染细胞64 h时,滴度达到最大值4.8 log TCID50/m L,此后滴度逐渐下降。本试验对猪轮状病毒地方流行株He Bei-12株在MA-104细胞上的最佳繁殖时间进行摸索,为进一步研究其生物学特性和疫苗研制奠定了基础。

提高拮抗菌WB3对番茄灰霉病菌拮抗能力的He-Ne激光与氯化锂复合诱变技术

利用He-Ne激光(波长632.8 nm,功率12 mW)与氯化锂复合诱变一株番茄灰霉病菌拮抗菌WB3,获得14株拮抗效果突出的菌株,其最大抑菌带宽为15.7 mm.综合单一诱变组里菌株致死率以及拮抗能力的大小,其中辐照时间为30 min,氯化锂浓度为1.2%时为复合诱变最佳条件.经过复合诱变,L8拮抗菌最高抑菌带宽可提高14%以上,而单一He-Ne激光诱变后抑菌带宽提高8.8%,单一氯化锂诱变后抑菌带宽提高9%.L8菌株生长迅速,经传代培养证明其抑菌性能具有稳定遗传性.该实验研究He-Ne激光与氯化锂复合诱变枯草芽孢杆菌WB3的方法可应用于番茄灰霉病的生物防治领域.

SD大鼠皮肤光老化动物模型建立方法的探索

目的探讨光老化动物模型造模过程中的各个关健因素,确定实用的造模方法。方法模拟日光中UV(UVA+UVB)照射SD大鼠,3次/周,共12周,累计照射剂量:UVA为148.5J/cm2,UVB为21.38J/cm2;观察照射部位皮肤的临床表现、组织病理、超微结构及生化指标的改变情况。结果经UVA联合UVB照射12周后,SD大鼠具备皮肤光老化模型的临床表现、组织病理、超微结构及生化指标的改变,提示造模成功。结论本实验中的造模关健因素简便易行,经济可靠,可复制性强,为光老化动物模型的复制建立了一种实用的方法 。

胎儿弯曲菌蛟河株从结肠癌患者血液中的分离及鉴定

目的:研究从结肠癌术后患者血液中分离出的病原菌生物学性状并鉴定其种型.方法:按常规的鉴定方法进行细菌学实验(包括形态学、培养特性、生化特征等实验);用碱裂解法提取细菌DNA,使用TaKaRa16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit(Code No.D310),以Forward primer/Reverse primer2为引物,做16S rDNA PCR扩增及序列测定.结果:蛟河株的形态学、培养特性和生化特征等实验符合弯曲菌属胎儿弯曲菌(Campylobacter fetus)鉴定标准;经16S rDNA扩增及测序结果NCBI上比对结果为胎儿弯曲菌.结论:蛟河株为弯曲菌属胎儿弯曲菌;但比对胎儿亚种形态学和生化特征有一定差异,且可稳定遗传给子代,可以确定为胎儿亚种的新变种.

实用光老化动物模型建立方法的探讨

目的:探讨光老化动物模型造模过程中的各个关健因素,确定实用的造模方法。方法:用电推剪剃除大鼠背部预定部位的毛,将大鼠置于专用固定器中,每天10min,用SS-03AB型紫外线光疗仪(UVA:340～400nm;UVB:260～350nm)连续照射60天,第61天处死大鼠,照射部位皮肤组织切片进行HE染色,观察造模效果,并结合实践总结造模经验。结果:与空白组大鼠皮肤相比较,模型组呈现表皮层厚薄不一,真皮层血管扩张,大量炎性细胞浸润,胶原纤维明显变性等典型光老化特征,造模成功。结论:本实验中讨论并确定的造模关健因素简便易行,经济可靠,可复制性强,为光老化动物模型的复制建立了一种实用的方法。

一株耐盐性蛋白酶产生菌的诱变选育及酶学性质研究

通过富集、初筛和复筛从肉联厂附近的土壤中分离筛选耐盐蛋白酶产生菌DB-12,经形态学、生理生化及16SrRNA序列分析,菌株DB-12被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),产蛋白酶活力为56U/mL。为增强该菌株的耐盐和产蛋白酶能力,对其进行He-Ne激光诱变,获得遗传稳定性良好的突变株DB-12-16,其所产蛋白酶的酶活最高可达132U/mL,此外,还可耐受25%浓度的氯化钠。酶学性质研究结果表明:突变株所产蛋白酶具有较高的温度和pH适应性。作为一种耐盐且高产蛋白酶的菌,该突变株在食品生产及环境修复等方面有极为广阔的应用前景。

复合诱变选育高产富硒酵母

以酿酒酵母FX-12-135为初始菌株,以有机硒含量为筛选指标,筛选高产富硒酵母菌。首先采用紫外诱变方法处理菌株,然后利用氦氖激光辐照处理进行选育,得到一株高产突变株HN-14-109,其摇瓶富硒能力比初始菌株提高29.8%,且遗传特性稳定。表明紫外诱变复合氦氖激光辐照是提高酵母富硒能力的有效方法。

PCV2 WH株人工感染断奶仔猪复制多系统衰竭综合征

【目的】建立猪圆环病毒2型(PCV2)WH株人工感染断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的动物模型,为探讨PCV2的致病机理及疫苗免疫效果评价奠定基础。【方法】将PCV2WH株通过颈部肌注和滴鼻感染PCV2抗体阴性的7周龄仔猪,攻毒后第4、7 d用钥孔血蓝蛋白(KLH)进行刺激,第7、11 d再腹腔注射巯基乙酸,同时设阴性对照组(单独KLH刺激)。攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,观察其组织病变,并取肺脏、淋巴结组织提取病毒DNA,用PCR检测PCV2;取试验猪的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、心脏、膀胱等组织制作石蜡切片,进行HE染色和免疫组化分析。【结果】攻毒组仔猪的临床症状主要表现为发热、消瘦、被毛粗乱、皮肤苍白;攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,剖检发现阴性对照组未出现病理变化,而攻毒组仔猪有明显病理变化,从其病变的肺脏、淋巴结、肾脏、脾脏、肝脏、心脏组织中均能检测到PCV2。HE染色结果显示,组织病理学变化主要为间质性肺炎、淋巴细胞缺失、间质性肾炎、肝脏肝窦单核巨噬细胞增生。免疫组化分析结果显示,肺脏支气管上皮细胞呈明显阳性,部分肺泡巨噬细胞可见阳性信号,主要位于胞浆内;肠系膜淋巴结均出现较强阳性信号,主要位于淋巴细胞的胞浆内;肾间质细胞呈明显阳性。【结论】用PCV2 WH株攻毒联合KLH和巯基乙酸反复刺激断奶仔猪能成功复制出PMWS,为后续PCV2疫苗的免疫效果评价及PMWS发病机理研究提供了理想的动物模型。

高压临氢环境中材料氢脆测试方法讨论

材料的高压氢脆问题是氢气储运中所常见的,针对材料氢脆性能的评价试验方法在国际上已经有许多标准发行,我国尚无相关标准,本文即针对材料氢脆的测试方法进行了介绍及讨论。根据载荷作用机制的不同,材料高压氢脆的测试方法可以分为三大类,分别为圆片试验方法、基于断裂力学的试验方法与基于慢应变速率拉伸的试验方法。这三类试验方法根据试样形式的不同会有所变动,在材料性能测试中所检测的指标也会有所不同,需根据工程实际进行合理选择。此外,为了推进材料氢脆性能评价研究,需加快对高压氢气试验装备的研发。

不孕女性中慢性子宫内膜炎的临床诊断研究

目的:探讨不孕女性中,慢性子宫内膜炎(CE)的分布及诊断。方法:回顾性分析了2019年3月至2020年6月在成都西囡妇科医院就诊的411例不孕女性,根据子宫内膜组织跨膜硫酸已酰肝素蛋白聚糖合癸聚糖-1(CD138)免疫组织化学分析(IHC)染色结果分为CD138+组和CD138-组,其中CD138+诊断为CE。比较两组间患者的基础资料、宫腔形态特征和伊红(HE)染色结果。结果:CD138 IHC染色CE检出率高于HE染色(52.1%vs 38.0%,P<0.05)。宫腔镜下子宫内膜形态在CD138+组和CD138-组差异无统计学意义(P>0.05);分泌期子宫内膜和HE阳性是影响CD138结果的独立影响因素(OR 5.25,95%CI 1.37~20.04;OR 4.99,95%CI 3.09~8.07,P<0.05)。结论:CD138 IHC染色可以提高CE的检出率;宫腔镜检查不能独立诊断CE。

戊型肝炎疫苗评价用小鼠品系的比较

目的比较不同品系及相同品系不同来源BALB/c小鼠对戊型肝炎疫苗(HE疫苗)的免疫应答,探讨适用于HE疫苗评价的小鼠品系,规范疫苗效力评价用动物。方法分别用2家企业制备的HE疫苗免疫BALB/c、C57BL/6、KM和NIH 4种品系小鼠及3种不同公司来源的BALB/c小鼠,均免疫1针,28 d后采血,分离血清,检测抗体应答,计算效力ED_(50)。结果 2家疫苗免疫C57BL/6、KM和NIH小鼠时,各剂量组均表现出敏感应答,提示C57BL/6、KM和NIH小鼠对本研究中的2家疫苗不能灵敏地反映出剂量变化趋势,不适用于HE疫苗效力评价;BALB/c小鼠对2家企业各剂量组HE疫苗均呈现良好的免疫应答,且呈明显的剂量效应关系。3种不同来源的BALB/c小鼠免疫HE疫苗后,抗体应答存在差异。结论 BALB/c小鼠可作为评价HE疫苗免疫原性和效力ED_(50)的模型动物;应用BALB/c小鼠进行疫苗评价时需固定小鼠来源。

预应变对DP600钢氢脆敏感性的影响

利用慢应变速率拉伸实验(SSRT)及双电解池渗氢实验,结合断口形貌观察和分析,探索了预应变对DP600钢氢脆敏感性的影响规律及机理。结果表明:在本实验预应变量范围内,预应变量小于15%时,随着预应变量的增大,DP600钢试样的氢脆敏感性不断增大,当预应变量达到15%以后,其氢脆敏感性基本趋于稳定。预应变增大了钢中的位错密度,使氢的有效扩散系数降低,有效捕获的氢量增加,从而使钢试样的氢脆敏感性增大;但当预应变量进一步增加至15%以上时,位错的相互缠结减缓氢的扩散和聚集速度,从而使试样的氢脆敏感性增加趋于平缓。