miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响。方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱。利用lipofectamine 2000转染HEC-1-B细胞。实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达。CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变。流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况。结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达。转染效率达73.43%。转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P<0.05)。实验组较NC组生长明显受抑(P<0.05)。实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P<0.05)。结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点。

真核表达质粒EX-Y2069-M 29的构建及LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达

目的构建LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将LRP16真核表达载体EX-Y2069-M29和EX-NEG-M29空质粒转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分析LRP16基因的表达情况。结果经LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29转染的HEC-1-B细胞中检测到LRP16基因的表达。结论构建的LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29转染HEC-1-B细胞后,可在HEC-1-B细胞中稳定表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础。

miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长

目的探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径。方法脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况。细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力。Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况。结果转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P<0.05)。miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P<0.05)。结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标。

白细胞介素17诱导子宫内膜癌HEC-1-B细胞对单核细胞趋化的研究

目的:探讨白细胞介素17(IL-17)诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞对单核细胞的趋化作用,及其对趋化因子CCL2、CCL5表达的影响。方法:分别采用0ng/ml(对照组)、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml浓度的IL-17诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,24h后收集细胞上清液置于transwell小室的下室,上室放入THP-1细胞,计数进入下室的THP-1细胞并计算趋化指数;采用荧光定量PCR方法和ELISA方法检测1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml IL-17对HEC-1-B细胞CCL2、CCL5 mRNA基因表达以及蛋白表达水平的影响。结果:单核细胞的趋化能力与IL-17呈浓度依赖性,趋化指数在对照组及1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml 3个实验组分别为2.05±0.17、2.93±0.22、3.53±0.28及4.57±0.37,4组的差异有统计学意义(P<0.01)。各实验组细胞CCL2及CCL5 mRNA和蛋白表达水平与对照组比较明显升高(P<0.05),表达水平均随着IL-17浓度增加而增高。结论:IL-17诱导后的子宫内膜癌细胞液可以促进单核细胞的趋化作用,其机制可能与IL-17促进HEC-1-B细胞分泌趋化因子CCL2、CCL5的表达上调有关。

HEC-1-B细胞培养上清液对子宫内膜癌树突状细胞成熟的影响

目的探讨子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液对子宫内膜癌患者外周血单核细胞源性树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法梯度离心法分离子宫内膜癌患者外周血单核细胞,在含重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的DCs培养液中培养,使其分化为DCs。实验组将收集的子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液过滤后与DCs共同孵育48 h,对照组不给予任何干预措施。镜下观察DCs形态变化,采用流式细胞术检测DCs表型(CD1α、CD83、CD86)表达,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素10(IL-10)、IL-12含量。结果实验组细胞生长状态较好,具有典型的树枝状突起,数量不等、形态不一;实验组DCs表型CD1α、CD83、CD86分子的表达分别较对照组升高(P<0.01);实验组DCs分泌的细胞因子IL-10水平较对照组降低(P<0.01),IL-12水平较对照组升高(P<0.01)。结论子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液能够在体外诱导子宫内膜癌患者外周血单核细胞源性DCs成熟。

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。

真核表达质粒EX-Y2069-M29的构建与LRP16在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达及作用

目的构建真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达,并观察LRP16对细胞增殖的影响。方法从HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Westernblot法检测LRP16蛋白的表达,用WST-1法检测细胞增殖情况。结果酶切和测序结果证明真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加;转染后HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力明显下降。结论 LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础;转染LRP16后并没有促进HEC-1-B细胞体外增殖,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。

紫杉醇对HEC-1-B细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的:探讨紫杉醇对体外培养的人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)细胞凋亡的诱导作用.方法:体外培养HEC-1-B细胞,用浓度2,4,8,16,20nmol/L的紫杉醇作用细胞12h,24h,48h后,提取细胞DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳;消化HEC-1-B细胞并经碘化丙锭(PI)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HEC-1-B细胞进行形态学分析.结果:体外培养的HEC-1-B细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于8nmol/L紫杉醇作用48h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7%;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变.结论:人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对HEC-1-B细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的.

竹节香附素通过抑制JAK/STAT3信号转导通路抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移

目的:探讨竹节香附素对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移影响,以及JAK/STAT3信号转导通路在此过程中发挥的作用。方法:选取正常贴壁生长的对数期人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,分成两组,一组用竹节香附素处理,为观察组;另一组用生理盐水处理,作为对照组。划痕实验比较两组的细胞在不同时间点的迁移情况;Transwell实验比较两组细胞的侵袭能力;CCK-8检测两组细胞的增殖能力;荧光定量PCR和Western blot检测细胞中Janus激酶(JAK)、信号转导子和转录激活子(STAT3)基因的表达情况。结果:48 h后,观察组的迁移距离小于对照组(P<0.05),Transwell实验观察组侵入下方小室的细胞数量低于对照组(P<0.05)。两组细胞在48 h内的细胞增殖结果差异并无统计学意义(P>0.05)。相比较对照组,荧光定量PCR和Western blot的结果均显示观察组的JAK和STAT3基因表达量下降(P<0.05)。结论:竹节香附素可显著抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭和转移能力,其机制可能通过调控JAK/STAT3信号通路而发挥作用。

醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及对PCNA表达的影响

目的研究醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及其分子作用机制。方法以不同浓度醋酸曲谱瑞林(0,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)体外作用于中分化人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B(0mol/L组作为对照组,其余各组作为实验组),用MTT法检测细胞抑制率;免疫细胞化学检测HEC-1-B细胞PCNA蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。RT-PCR法检测HEC-1-B细胞PCNAmRNA的表达。结果①当醋酸曲谱瑞林浓度为10-9mol/L时,HEC-1-B细胞即受到抑制,抑制率为36.8%;随着浓度的增大,抑制率渐高,到浓度为10-5mol/L时抑制率上升至57.4%。与对照组比较,实验组抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。②浓度从10-9-10-5mol/L的醋酸曲谱瑞林作用72h后,PC-NA蛋白和PCNAmRNA表达均有不同程度的下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论醋酸曲谱瑞林在体外对HEC-1-B细胞可能有直接的抑制作用,且呈剂量依赖关系。醋酸曲谱瑞林抑制HEC-1-B细胞增殖的分子机制可能与下调PCNA蛋白表达有关。

LRP16基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞增殖的作用

目的研究LRP16在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的表达;LRP16转染细胞,RT-PCR证实转染的成功性,WST-1法观察细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为83.33%、0.82±0.21)明显高于正常子宫内膜组织(分别为30.00%、0.47±0.18),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示转染后细胞LRP16mRNA表达明显增加。转染组HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力并没有增强。结论 LRP16的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。

白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移的影响

目的探讨白细胞介素(interleukin,IL)-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶(matric metalloproteinases,MMP)-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。方法选择对数生长期人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B,在无血清培养基中加入白细胞介素-17终浓度分别为1 ng/mL,10 ng/mL,100 ng/mL和无血清培养(空白对照)进行干扰处理后,分别纳入干扰组(干扰组1、干扰组2、干扰组3)及对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测子宫内膜癌细胞株HEC-1-B是否表达白细胞介素-17特异性受体C(IL-17RC)蛋白。采用逆转录荧光定量PCR法检测不同浓度白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9 mRNA基因表达水平的影响。采用transwell小室检测不同浓度白细胞介素-17干预后,子宫内膜癌细胞株HEC-1-B侵袭转移能力的变化。结果人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B高表达特异性白细胞介素-17受体C。白细胞介素-17各浓度干扰组(干扰组1,干扰组2,干扰组3)与对照组比较,干扰组基质金属蛋白酶-9 mRNA表达增加,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组基质金属蛋白酶-2 mRNA表达无明显变化;干扰组穿膜细胞数明显增多,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组2与干扰组3穿膜细胞数较干扰组1增多,差异有显著意义(P<0.05)。结论白细胞介素-17能增强基质金属蛋白酶-9基因表达,促进子宫内膜癌细胞侵袭转移。

白血病相关基因LRP16真核表达质粒的构建及其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达

目的:构建白血病相关基因LRP16真核表达质粒,并检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法:从人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Western blot法检测LRP16蛋白的表达。结果:酶切和测序结果证明LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加。结论:LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础。

华蟾素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞株凋亡和增殖的影响

目的:探讨华蟾素对体外培养子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡、增殖以及侵袭能力的影响。方法:体外培养HEC-1-B细胞,经不同浓度华蟾素(0.2mg/ml、2mg/ml和20mg/ml)干预24h后,采用MTT法观察细胞生长情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力。结果:华蟾素能有效抑制HEC-1-B细胞生长,诱导细胞凋亡。未经华蟾素处理的细胞凋亡率仅为2.5%,经0.2mg/ml、2mg/ml、20mg/ml的华蟾素作用24h后,细胞凋亡率分别为7.4%、44.3%和78.5%,趋势卡方检验x2=165.4983,P<0.0001。HEC-1-B细胞经华蟾素作用后,细胞侵袭能力降低。在高浓度时,华蟾素有可能存在细胞毒作用。结论:华蟾素能通过诱导HEC-1-B细胞凋亡,从而抑制HEC-1-B细胞生长,并且降低细胞的侵袭能力。

莪术油注射液诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡机制研究

目的:研究莪术油注射液对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞体外增殖及相关蛋白表达情况的影响。方法:将体外培养的HEC-1-B细胞随机分5组,对照组、莪术油Ⅰ组、莪术油Ⅱ组、莪术油Ⅲ组、莪术油Ⅳ组。分别给与不同浓度的莪术油注射液培养48 h、72 h。采用MTT法检测HEC-1-B生长抑制率、Hoechest33258荧光染色观察HEC-1-B细胞核形态的变化、Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果:不同浓度莪术油注射液均对HEC-1-B细胞增殖具有抑制作用,同时诱导HEC-1-B细胞凋亡,上调Caspase-3蛋白的表达,下调Survivin蛋白的表达,其强度随着药物作用浓度及时间的增加而增强,呈时间-剂量依赖性,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:不同浓度莪术油注射液在一定浓度范围内可抑制HEC-1-B细胞生长,且诱导其凋亡,其机制可能与下调子宫内膜癌HEC-1-B细胞Survivin蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白的表达有关。

姜黄素调节Bcl-2、Bax蛋白表达诱导子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞凋亡

目的:研究姜黄素诱导人子宫内膜癌(heC-1-B)细胞凋亡的分子机制。方法:将体外培养的heC-1-B细胞随机分5组,对照组、姜黄素i、姜黄素ii、姜黄素iii、姜黄素iV。分别给与不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/l处理heC-1-B继续培养48h、72h。mTT法检测姜黄素对细胞增殖的影响,WeSTern BloT法检测BCl-2、Bax蛋白表达。结果:mTT结果显示姜黄素对(heC-1-B)细胞具有抑制作用,抑制率随姜黄素浓度和作用时间的增加而上升(p<0.05);WeSTern BloT结果显示BCl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bax/BCl-2比值增大,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:姜黄素对(heC-1-B)细胞有抑制作用并能诱导其凋亡,其机制与下调BCl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。

苏拉明对人子宫内膜癌细胞增殖和乙酰肝素酶表达的影响

目的通过用苏拉明(suramin)处理体外培养的人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1-B,观察其对子宫内膜癌细胞增殖和乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)表达的影响,探讨苏拉明治疗子宫内膜癌的可能性。方法用不同浓度的苏拉明处理体外培养的人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B,分别在处理后的不同时间点,以MTT法检测HEC-1-B细胞增殖的情况,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,免疫细胞化学染色法检测HPSE表达水平的改变。结果苏拉明处理HEC-1-B细胞5 d后HEC-1-B的增殖活性与时间剂量呈负相关(P<0.01)。免疫细胞化学染色法结果表明不同浓度的苏拉明处理细胞96 h后HPSE的表达无明显变化。结论苏拉明能够抑制人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1-B的增殖。苏拉明对HEC-1-B细胞HPSE的蛋白表达无影响。苏拉明能否用于人子宫内膜癌的治疗,有待于进一步的研究。

黄芪注射液联合顺铂治疗子宫内膜癌的临床研究

目的:观察黄芪注射液联合顺铂辅助治疗子宫内膜癌宫腔镜电切术后的临床疗效。方法:将62例患者随机分为对照组和观察组,每组31例。对照组采用宫腔镜电切术联合顺铂化疗;观察组加用黄芪注射液静滴。检测2组患者治疗前后血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinaseassociated lipocalin,NGAL)及其受体NGALR表达和NGALR蛋白表达,流式细胞仪检测HEC-1-B细胞凋亡;比较2组患者生存质量问卷评分(EORTC QLQ-C30)和3年复发率。结果:躯体、角色、认知、情绪和社会功能评分治疗后2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。第1、2、3年KPS评分均高于对照组同期水平,与对照组同期比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组第1、2、3年复发率均低于对照组同期水平,与对照组同期比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组HEC-1-B细胞抑制率明显高于对照组(P<0.05)。血清NGAL及NGALR蛋白治疗前2组均高表达,但差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,观察组降低明显,与对照组和同组化疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪注射液可提高子宫内膜癌宫腔镜电切术后顺铂化疗疗效,其机制可能是黄芪注射液可促HEC-1-B细胞凋亡、抑制NGAL与其受体NGALR结合,使癌细胞铁依赖途径减弱,降低癌细胞侵袭及转移能力而发挥抑瘤抗癌作用。

甲蓉片对子宫内膜腺癌裸鼠移植瘤超微结构的影响

目的:观察甲蓉片对子宫内膜腺癌裸鼠移植瘤超微结构的影响。方法:利用子宫内膜腺癌细胞株HEC-1-B制备裸小鼠移植瘤模型。接种10天成瘤后,成瘤率100%。将荷瘤裸鼠随机分为3组(甲蓉片组、雌激素组、空白对照组)。成瘤后每天分别灌服含甲蓉片、倍美力的药液及生理盐水,28d后处死裸鼠,在透射电镜下观察3组移植瘤的超微结构。结果:3组均表现为肿瘤细胞增生分裂活跃与细胞凋亡、细胞坏死同时存在的现象。雌激素组与另2组比较,肿瘤细胞多处于增生活跃期。甲蓉片组肿瘤细胞中细胞溶解、死亡及凋亡的比例较多,与空白对照组一致。结论:甲蓉片对裸鼠移植瘤细胞生长无明显影响,可作为该药改善围绝经期诸证的安全性的重要依据之一。

黄花倒水莲雌激素活性成分筛选

目的:研究黄花倒水莲不同提取成分的雌激素活性。方法:体外培养子宫内膜癌细胞株Hec-1-B,种于96孔板,24h后给予黄花倒水莲总黄酮、总皂苷、总多糖提取物,并以补佳乐为阳性药,加药24h后,Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)分别检测不同成分对细胞生长的影响;另种96孔板,给予不同成分提取物,24h后,提取上清液,用人(Human)雌激素受体(ER)ELISA检测试剂盒,测得ER受体的含量,反应雌激素活性情况。结果:CCK-8结果显示总黄酮和总皂苷对细胞具有毒性,在0.5g·L^(-1)、1g·L^(-1)、2g·L^(-1)时有显著性差异(P<0.05或P<0.01),有明显的量效关系;总多糖和阳性药补佳乐对细胞没有毒性,能够促进细胞增殖。ELISA试剂盒显示,总多糖组和补佳乐组ER含量相同且低于正常组。结论:黄花倒水莲不同部位中总多糖具有雌激素活性。