Circ_HECTD1调节miR-135a-5p/TP53INP1轴对OGD/R诱导的海马神经元损伤的影响

目的通过进行体外氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导海马神经元损伤,观察环状RNA含HECT结构域的E3泛素连接酶1(Circ_HECTD1)对HT22细胞增殖、凋亡的影响以及对微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)/肿瘤蛋白53诱导型核蛋白1(TP53INP1)轴的调控机制。方法常规培养HT22细胞,将细胞分为Con组、OGD/R组、si-NC组、si-Circ_HECTD1组、miR-NC组、miR-135a-5p组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-NC组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-135a-5p组。qRT-PCR法检测Circ_HECTD1、miR-135a-5p、TP53INP1 mRNA表达;MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验验证Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2、TP53INP1蛋白表达。结果OGD/R诱导后HT22细胞中Circ_HECTD1与TP53INP1表达上调,miR-135a-5p表达下调,细胞存活率和Bcl-2蛋白表达显著下降,凋亡率和Bax蛋白表达显著升高(均P<0.05)。沉默Circ_HECTD1表达能够显著上调OGD/R诱导的HT22细胞中miR-135a-5p表达,下调TP53INP1表达,提高细胞存活率和Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达(均P<0.05)。Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1之间均存在靶向关系。过表达miR-135a-5p能够显著下调TP53INP1表达,提高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达(均P<0.05)。而抑制miR-135a-5p表达能够部分逆转沉默Circ_HECTD1对HT22细胞损伤的保护作用。结论沉默Circ_HECTD1可通过调节miR-135a-5p/TP53INP1轴,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,保护OGD/R诱导的海马神经元损伤。

HECW2基因与肿瘤的研究进展

含HECT,C2和WW域E3泛素蛋白连接酶2(HECW2)基因通过调节蛋白质的泛素化和降解过程参与细胞周期调控、信号转导以及细胞死亡等关键的生物学过程。既往有关HECW2基因的研究多聚焦于神经发育障碍与智力障碍等非肿瘤方面,而关于其在肿瘤发生发展中的作用机制的报道较少。近年研究认为HECW2基因在多种肿瘤类型中异常表达,并在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭过程中发挥重要功能,可影响肿瘤的生物学行为,这为后续探索肿瘤的分子机制提供了新的视角,为肿瘤的个性化靶向治疗奠定了前期基础。

HACE1在恶性肿瘤中的研究进展

含HECT域和瞄蛋白重复序列的E3泛素蛋白连接酶1(HACE1)蛋白属于HECT家族的重要成员之一,其不仅具有保护心脏、抗氧化应激及调节细胞动力学等生物学功能,而且在多种恶性肿瘤(乳腺癌、肝癌、胃癌等)中发挥肿瘤抑制因子的作用。其作用机制是通过靶向活化形式的Rac家族进行蛋白酶体降解及泛素化视神经蛋白,激活细胞自噬,进而发挥抗肿瘤作用。HACE1与多种肿瘤的发生、进展、侵袭及预后密切相关,其有望成为恶性肿瘤诊断和预后的预测标志物及肿瘤治疗的新靶点。

泛素连接酶E3

蛋白质的泛素化修饰具有高度的特异性,它参与调节细胞内许多的生理活动。蛋白质的泛素化修饰涉及一系列的酶参与反应,包括泛素激活酶E1、结合酶E2以及连接酶E3。而其中泛素连接酶E3对靶蛋白的特异性识别起关键作用。泛素连接酶E3主要由HECT结构域家族、RING结构域家族和U-box结构域家族组成。现对泛素连接酶E3的分类、结构及其对靶蛋白的识别机制等进行综述。

人泛素连接酶AREL1催化结构域的晶体结构

泛素化是一种重要的翻译后修饰,几乎调控着生命活动的所有方面.泛素连接酶是泛素化过程中唯一对底物蛋白质有特异性识别能力的一类酶,它们在泛素化过程中是不可或缺的,起到非常关键的作用.人抗凋亡E3泛素连接酶(AREL1)是HECT泛素连接酶家族成员之一,它能够泛素化促凋亡蛋白SMAC、HtrA2和ARTS,并通过蛋白酶体将它们降解,从而发挥抵抗细胞凋亡的作用.本文解析了3.2?分辨率的人AREL1蛋白催化结构域(AREL1HECT)的晶体结构,并将其与HECT家族中其他成员的结构进行了比对.尺寸排阻色谱和X射线小角散射的结果表明,AREL1HECT在溶液中是以多种聚集状态形式存在的,小角散射的3D模型进一步表明AREL1HECT在溶液中会发生二聚化.这些结果将为AREL1HECT与泛素复合物结构的解析及功能的分析提供坚实的结构基础,为揭示AREL1泛素化底物蛋白质的分子机制提供重要的依据.

含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1在肝癌中表达的意义及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的 观察含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1（HACE1）在肝癌中的表达水平与预后的关系及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学检测100例肝癌和癌旁组织HACE1的表达,Kaplan-Meier和Log-rank分析HACE1表达水平与患者预后的关系;利用脂质体质粒转染建立Huh7-HACE1细胞株,通过细胞计数试剂盒（CCK-8）观察HACE1过表达对Huh7细胞增殖的影响,应用Transwell检测HACE1过表达对Huh7细胞侵袭能力的影响.结果 肝癌组织中HACE1表达低于和高于癌旁组织的患者分别为68和32例,两者5年生存率对比（70.8％比90.3％）和5年复发率对比（59.7％比30.6％）差异有统计学意义（P＜0.01）.细胞增殖实验结果显示4d后Huh7-HACE1组吸光度（A）值显著低于对照组（P＜0.05）;Transwell结果显示Huh7-HACE1组侵袭能力显著低于对照组（P＜0.05）.结论 HACE1基因在肝癌组织表达水平显著低于癌旁组织,其表达水平与肝癌预后相关;过表达HACE1可抑制肝癌Huh7细胞的增殖和侵袭能力.该基因可能在肝细胞肝癌的发生发展中起重要作用.

HECT E3泛素连接酶的分类、功能和进化分析

泛素连接酶(E3s)在真核生物生命活动重要的调控过程,即泛素化降解过程中起着关键作用,具有HECT结构域的E3酶(HECT E3 ubiquitin ligase)根据其N端结构域的不同可分为三类:HERC E3酶,Nedd4/Nedd4-like E3酶和SI(ngle)-HECT E3酶。本文总结了至今有关这三类E3酶的结构域、生物学功能以及与人类疾病关系的研究进展,其中一些E3酶的生物学功能还不是很清楚,特别是HERC E3s和SI-HECT E3s。还阐述了近年来国际上对HECT E3酶进化分析的研究结果,进化分析有助于进一步研究HECT泛素连接酶的生物学功能。最后对作用于泛素-蛋白酶体通路的疾病治疗策略和HECT E3酶底物的识别研究做了展望,底物数据的缺乏限制了HECT E3的研究,因此高通量识别底物将是今后研究的主要方向。