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人脑源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建、鉴定及其在HEK293A细胞中的表达
1
作者
丛明
李谌
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第29期14-18,共5页
目的构建人脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)重组腺病毒真核表达载体,研究其在无BDNF分泌的HEK293A细胞中的表达情况,为临床上治疗创伤性脑损伤提供更多基础方面的研究资料。方法①以供体质粒和pAdEasy-1腺...
目的构建人脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)重组腺病毒真核表达载体,研究其在无BDNF分泌的HEK293A细胞中的表达情况,为临床上治疗创伤性脑损伤提供更多基础方面的研究资料。方法①以供体质粒和pAdEasy-1腺病毒系统作为底物构建人BDNF重组腺病毒真核表达载体并包装病毒,检测滴度;②将含人BDNF基因的腺病毒液(A组,实验组)及未含任何基因片段的空白病毒液(B组,对照组)分别转染HEK293A细胞,同时设立空白组(C组),72 h后通过倒置荧光显微镜观察转染情况;③采用RT-PCR方法检测转染后各组细胞中BDNF基因mRNA表达情况;④采用Western blotting方法检测转染后各组细胞BDNF蛋白表达情况。结果①成功构建人BDNF重组腺病毒真核表达载体,经过包装后病毒滴度为1.74×108pfu/mL;②B、C两组细胞BDNF的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),而A组细胞BDNF的mRNA表达量明显高于B、C两组,差异有统计学意义(P<0.05);③B、C两组细胞BDNF的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),A组蛋白表达相对OD值明显高于另外两组,差异有统计学意义P<0.05)。结论人BDNF重组腺病毒载体的成功构建不仅明显提高了BDNF基因在细胞中的表达水平,同时还为其进一步应用于创伤性脑损伤的体内实验研究打下基础。
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关键词
BDNF
创伤性脑损伤
腺病毒载体
hek293a
细胞
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职称材料
小鼠甘丙肽1型受体在HEK293A细胞中的表达和内化
2
作者
李晓晓
徐舒
+2 位作者
李慧
宫夏霓
徐志卿
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期30-34,共5页
目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pE...
目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况。结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1 047bp,共编码348个氨基酸;共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5~15min后受体下膜进入胞浆。结论:成功构建真核表达载体mGalR1-pEGFP并在HEK293A中表达;在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象。
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关键词
小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)
基因克隆
真核表达载体
hek293a
细胞
内在化
原文传递
题名
人脑源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建、鉴定及其在HEK293A细胞中的表达
1
作者
丛明
李谌
机构
辽宁医学院附属第一医院
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第29期14-18,共5页
基金
辽宁省自然科学基金(No:201102123)
文摘
目的构建人脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)重组腺病毒真核表达载体,研究其在无BDNF分泌的HEK293A细胞中的表达情况,为临床上治疗创伤性脑损伤提供更多基础方面的研究资料。方法①以供体质粒和pAdEasy-1腺病毒系统作为底物构建人BDNF重组腺病毒真核表达载体并包装病毒,检测滴度;②将含人BDNF基因的腺病毒液(A组,实验组)及未含任何基因片段的空白病毒液(B组,对照组)分别转染HEK293A细胞,同时设立空白组(C组),72 h后通过倒置荧光显微镜观察转染情况;③采用RT-PCR方法检测转染后各组细胞中BDNF基因mRNA表达情况;④采用Western blotting方法检测转染后各组细胞BDNF蛋白表达情况。结果①成功构建人BDNF重组腺病毒真核表达载体,经过包装后病毒滴度为1.74×108pfu/mL;②B、C两组细胞BDNF的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),而A组细胞BDNF的mRNA表达量明显高于B、C两组,差异有统计学意义(P<0.05);③B、C两组细胞BDNF的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),A组蛋白表达相对OD值明显高于另外两组,差异有统计学意义P<0.05)。结论人BDNF重组腺病毒载体的成功构建不仅明显提高了BDNF基因在细胞中的表达水平,同时还为其进一步应用于创伤性脑损伤的体内实验研究打下基础。
关键词
BDNF
创伤性脑损伤
腺病毒载体
hek293a
细胞
Keywords
BDNF
traumatic brain injury
adenovinis vector
hek293a cell
分类号
R651.15 [医药卫生—外科学]
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
小鼠甘丙肽1型受体在HEK293A细胞中的表达和内化
2
作者
李晓晓
徐舒
李慧
宫夏霓
徐志卿
机构
首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室
Departments of Neuroscience
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期30-34,共5页
基金
国家"973"计划项目(2010CB912003)
国家自然科学基金项目(30870815)
+1 种基金
北京市自然科学基金重点项目(09G0013)
北京市人才强教深化高层次人才计划(PHR20100510)资助
文摘
目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况。结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1 047bp,共编码348个氨基酸;共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5~15min后受体下膜进入胞浆。结论:成功构建真核表达载体mGalR1-pEGFP并在HEK293A中表达;在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象。
关键词
小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)
基因克隆
真核表达载体
hek293a
细胞
内在化
Keywords
Mouse Galanin R1 receptor(mGalR1)
gene cloning
eukaryotic expression vector
hek293a cell
s
internalization
分类号
Q189 [生物学—神经生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人脑源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建、鉴定及其在HEK293A细胞中的表达
丛明
李谌
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
下载PDF
职称材料
2
小鼠甘丙肽1型受体在HEK293A细胞中的表达和内化
李晓晓
徐舒
李慧
宫夏霓
徐志卿
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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