吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞增殖的抑制作用

本研究探讨两种分子靶向治疗药物酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和拉帕替尼对JAK2 V617F阳性的骨髓增殖性疾病(MPD)的潜在治疗作用。吉非替尼(0.5、1、5、10、25μmol/L)和拉帕替尼(0.5、1、2、4、8、16μmol/L)分别作用于携带JAK2 V617F突变的人红白血病细胞株(HEL细胞系)。用MTT法检测2种药物对HEL细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果表明,吉非替尼可明显抑制HEL细胞的增殖,呈浓度依赖性(24和48 h的相关系数为0.991和0.895),48 h的IC50为5.4μmol/L。拉帕替尼作用48 h抑制细胞增殖的IC50为19.6μmol/L。吉非替尼对HEL细胞有显著的诱导凋亡作用,呈浓度依赖性(相关系数为0.896),随药物浓度的增加,凋亡细胞比例的增加。此外,吉非替尼明显地影响细胞周期,将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞有显著的抑制增殖作用,可进一步用于JAK2 V617F阳性的MPD靶向治疗的研究。

髓清丸对HEL细胞系作用的血清药理学研究

目的 :研究中药复方髓清丸对白血病细胞的作用。方法 :采用血清药理学方法体外培养观察人红白血病细胞系 (HEL)的增殖、凋亡、细胞周期、细胞形态等细胞学指标。结果 :活细胞百分率各含药血清组均较对照组低 ,MTT法测定髓清丸中剂量组和高剂量组OD值明显低于对照组 (p<0 0 1) ,中剂量组和高剂量组细胞毒活性均大于 2 0 %,高剂量含药血清组G1期DNA含量明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,中剂量组凋亡细胞百分率较高 (P <0 0 5 )。结论 :髓清丸能抑制HEL细胞的增殖 ,并有一定的诱导HEL细胞分化、凋亡的作用。

转染miR-223对HEL细胞增殖和分化的影响

通过在体外将miR-223 duplex转染至红白血病细胞株(HEL),观察其对HEL细胞增殖作用的影响,来探讨miR-223对白血病细胞诱导分化及作用机理。以白血病HEL细胞株为靶细胞,采用MTT法和半固体集落法观察不同浓度的miR-223对HEL细胞增殖的影响;流式细胞术观察红系细胞分化的表面标志(CD71+、GPA+)表达;RT-PCR检测miR-223对LMO2转录因子表达的影响以及用免疫印迹反应观察相应蛋白的表达情况。结果表明:低浓度的miR-223(10nM、20nM)抑制HEL细胞增殖,且随浓度增加(50nM、100nM)时,抑制作用更明显(P<0.05或P<0.01)。半固体集落培养结果显示与MTT结果相一致。流式细胞术检测用不同浓度的miR-223转染HEL细胞中发现红系细胞表面标志GPA+表达随其浓度升高而增加,而CD71+在细胞中表达无显著差异。在miR-223作用前后提取RNA进行RT-PCR检测显示,LMO2基因表达随浓度增加而降低。对LMO2蛋白免疫印迹分析发现,经miR-223处理过的细胞中LMO2蛋白含量随浓度增加逐渐下降。结论:转染一定浓度miR-223至红白血病HEL细胞中,能够抑制细胞增殖,其作用机制有可能通过竞争性抑制LMO2转录因子表达,恢复与分化相关的转录因子的表达,来诱导红白血病细胞向成熟方向分化。

双吲哚马来酰亚胺衍生物GZWM-051诱导白血病细胞凋亡的作用及机制

目的:探讨双吲哚马来酰亚胺衍生物GZWM-051诱导人白血病HEL细胞凋亡的作用及机制。方法:分别使用不同浓度的GZWM-051处理HEL细胞,采用MTT法测定HEL细胞的存活率,计算抑制率及 IC 50 值;采用Hoechst 33258染色观察处理HEL细胞24 h时的凋亡现象,采用流式细胞术检测处理HEL细胞24及48 h时细胞凋亡水平,Western blot法检测处理HEL细胞24 h时细胞凋亡蛋白表达水平。结果: GZWM-051能抑制HEL细胞的增殖活性,显著提高其凋亡率( P <0.01);Western blot结果显示,0.050 μmol/L或0.100 μmol/LGZWM-051处理HEL细胞后,其Bcl-2蛋白表达水平显著下调( P <0.01),Caspase-3剪切体表达水平显著上调( P <0.01)。结论: GZWM-051可能是通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平和激活Caspase-3剪切体水平诱导HEL细胞凋亡。

埃罗替尼对JAK2V617F阳性细胞体外增殖分化的影响

本研究探讨埃罗替尼对JAK2V617F阳性细胞体外增殖分化的影响,为埃罗替尼用于真性红细胞增多症靶向治疗提供实验依据。采用体外集落形成试验检测埃罗替尼在体外对真性红细胞增多症患者骨髓造血祖细胞增殖分化的影响,MTT比色法检测埃罗替尼对含有JAK2V617F纯合突变的HEL细胞株增殖的作用。结果表明:埃罗替尼在5μmol/L对真性红细胞增多症患者JAK2V617F突变阳性的造血祖细胞体外增殖分化具有抑制作用,而对患者正常造血祖细胞无明显抑制作用。埃罗替尼可以抑制HEL细胞株的增殖活性,IC50为4.1μmol/L。结论:埃罗替尼对JAK2V617F阳性细胞体外增殖分化具有一定的抑制作用。

白细胞介素13对HEL细胞分化和转录因子c-fos表达的影响

目的研究白细胞介素13(IL-13)对红白血病细胞系 HEL 细胞分化作用及对 HEL 细胞转录因子 c-fos 表达的影响。方法用 RT-PCR 方法检测 HEL 细胞 IL-13受体α1、GPⅡb、vWF 和 c-fos基因 mRNA 表达,用 Western blot 和流式细胞术分别检测 IL-13受体α1、c-fos、GPⅡb和 vWF 蛋白水平的表达。结果 HEL 细胞表达 IL-13受体α1,用 IL-13(100 ng/ml)作用于 HEL 细胞,GPⅡb和 vWF 基因 mRNA 表达上调,实验组和对照组 GPⅡb/β-actin 吸光度比值分别为2.912,1.303,实验组为对照组的2.23倍(P<0.05);实验组和对照组 vWF/β-actin 吸光度比值分别为0.506,0.217,实验组为对照组的2.33倍(P<0.05)。流式细胞术分析结果显示,实验组 GPⅡb和 vWF 蛋白表达明显高于对照组。IL-13作用于 HEL 细胞30 min,c-fos 基因 mRNA 表达水平达高峰,IL-13作用 HEL 细胞60 min,c-fos 蛋白表达达高峰,30 min 组、60 min 组 c-fos/β-actin 吸光度比值高于其它各组(P<0.05)。结论IL-13可促进 HEL 细胞分化,并上调 c-fos 表达。

IFN-α2b对JAK2V617F突变的骨髓增殖性肿瘤COX-2表达及血管新生的影响

目的研究干扰素-alpha-2b(IFN-α2b)对骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者JAK2激酶、环氧化酶-2(COX-2)及微血管密度的影响及人红白血病HEL细胞系中JAK2V617F与COX-2之间的关系。方法收集在保定市第一医院接受初次治疗的42例有JAK2V617F突变的MPN患者,其中17例患者为IFN-α2b治疗组(给予IFN-α2b肌肉注射治疗),25例为初治组(未行治疗)。另取同期10例特发性免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MPN患者JAK2V617F/JAK2突变量,免疫组化检测MPN患者和ITP患者骨髓病理组织p-JAK2、COX-2及CD105标记的微血管密度(MVD)。用不同浓度IFN-α2b作用于HEL细胞系,CCK-8检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移能力,半定量PCR检测HEL细胞中JAK2、COX-2mRNA表达水平,Western blot检测p-JAK2、COX-2蛋白表达水平。结果初治组患者p-JAK2、COX-2表达水平及MVD高于对照组,IFN-α2b治疗后患者p-JAK2、COX-2及MVD表达水平减低。不同剂量IFN-α2b作用HEL细胞48h,细胞增殖抑制率和细胞凋亡率随其剂量增加逐渐上升,JAK2及COX-2mRNA及p-JAK2、COX-2蛋白表达随其剂量增加逐渐降低。细胞迁移实验结果发现加入0.5×104 U/L IFN-α2b处理HEL细胞24h,迁移至下室的细胞数低于对照组(P<0.05)。结论 IFN-α2b通过调控JAK2信号通路抑制COX-2及MPN患者血管新生。