KCl-NaCl-K_2HfCl_6体系中熔盐电解精炼铪的研究

在KCl-NaCl-K2HfCl6熔盐体系中,对粗铪进行熔盐电解精炼。考察了电解温度、阴极电流密度以及电解质中铪的浓度等因素对电解的影响。结果表明,当电解温度低于810℃时,电解质的挥发损失和铪离子的浓度变化均较小;当阴极电流密度低于0.5 A/cm2、电解质中铪的浓度在5.1%左右时,有利于得到颗粒较大的金属铪。

HfCl_4/NaBH_4体系对亚砜的脱氧还原

对HfCl4/NaBH4体系下亚砜的脱氧还原反应进行了研究。考察了溶剂、温度、摩尔比等因素对该反应的影响。结果表明,在HfCl4/NaBH4体系下,当溶剂为四氢呋喃(THF)、n(底物):n(HfCl4):n(NaBH4)=0.8:0.34:4.0时,亚砜回流反应0.6～1.5 h,脱氧还原得收率88%～99%的硫醚产物。此外,在上述脱氧反应过程中,—NO2,—OMe,—F,—Cl,—Br等官能团具有兼容性。该法对二苯基亚砜、二苄基亚砜尤为适合,收率高达98%～99%。

HFCL细胞对U937细胞的诱导分化作用

为了观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对急性单核细胞白血病U937细胞促分化作用,及其对经典诱导分化剂TPA诱导分化作用的影响,先建立U937细胞和HFCL细胞共培养体系,以细胞形态学改变、硝基四氮唑蓝(NBT)、流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原作为诱导分化指标Western印迹检测P38蛋白的表达变化。结果发现,与HFCL细胞共培养后,U937细胞出现分化成熟的形态学改变,且与HFCL细胞直接接触组的诱导分化作用大于用transwell组。同时发现U937细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增高,S期细胞减少;CD11b、CD13、CD14和CD33表达增高;且NBT阳性细胞增高至46.3％。Western印迹检测结果显示,直接接触组总P38蛋白表达增加。而且HFCL细胞还能增强TPA对U937的诱导分化作用。

应用IRES序列研究人FL与Tpo基因在转染HFCL细胞中的表达

目的 探讨应用内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）序列对逆转录病毒介导的人Ｆｌｔ３ 配基（ＦＬ）与血小板生成素（Ｔｐｏ） 基因在骨髓基质细胞系ＨＦＣＬ中的表达。方法 利用基因重组技术将ＩＲＥＳ序列与ＦＬ和Ｔｐｏ 基因构建到逆转录病毒载体中，脂质体法将重组质粒ｐＬＦＴＳＮ 和空载体ｐＬＸＳＮ转染ＰＡ３１７细胞，经Ｇ４１８ 筛选。用抗性克隆培养上清感染ＨＦＣＬ细胞，ＲＴＰＣＲ和基因组ＤＮＡＰＣＲ分析ｍＲＮＡ的表达及基因组整合情况，ＣＦＵＧＭ 集落法和Ｔｐｏ 依赖株法测定生物学活性。结果 成功构建出含ＩＲＥＳ序列的ＦＬ与Ｔｐｏ 基因逆转录病毒载体，ｍＲＮＡ水平及基因组中整合有ＦＬ与Ｔｐｏ 基因，生物学活性测定表明转染的骨髓基质细胞同时分泌ＦＬ与Ｔｐｏ。结论 ＩＲＥＳ序列调控ＦＬ与Ｔｐｏ 双基因在骨髓基质细胞中同时独立表达，为进一步研究转基因骨髓基质细胞对造血调控的影响奠定了基础。

纳米TiO2粒子浓度对HFC134a／矿物油冰箱性能影响的实验研究

本文重点考察了HFC134a/矿物冷冻油/纳米TiO_2粒子工质体系中纳米粒子浓度和运行时间对冰箱性能的影响。实验结果表明:添加纳米粒子TiO_2之后,冰箱制冷系统性能提高,并随着纳米粒子浓度的提高而增大;冰箱长期运行性能稳定。

一种适合于挥发性液体黏度测量的毛细管黏度计

针对制冷工质等挥发性液体黏度的测量需要 ,研制了一种新的改进型 Ubbelohde毛细管黏度计 ;它的最大设计耐压能力为 1 0 MPa。在完成黏度计的设计和加工后 ,利用纯水和无水乙醇对毛细管黏度计的仪器常数进行了标定。最后利用新研制的毛细管黏度计 ,对 HFC1 5 2 a的饱和液体黏度进行了测量。实验结果表明 ,测量的实验结果与文献值的平均偏差为 0 .72 % ,最大偏差为 1 .67%。

HFC125/HCs二元混合工质理论制冷循环性能分析

利用NISTREFPROP数据库计算HFC1 2 5 /HCs(包括丙烷、丁烷、异丁烷 )三类二元混合工质的热力学性质 ,并对其理论制冷循环性能进行分析计算 ,筛选出最佳配比。结果显示其理论循环性能比HCFC2 2高 1 6 .9% 。

正常人骨髓成纤维样基质细胞对HL-60/VCR耐药细胞增殖的影响

目的 观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病多药耐药细胞HL-60／VCR增殖和分化的影响。方法 采用四唑氮蓝(MTT)法进行HL-60／VCR细胞药物敏感实验。建立HL-60／VCR细胞和HFCL细胞共培养体系,苔盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。结果 HL-60／VCR细胞对多种药物耐药。与HFCL细胞共培养后,HL-60／VCR细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用>用transwell组。同时发现HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增多,S期细胞减少;同时CD11b和CD14表达增高,CD13和CD33变化不大;且NBT阳性细胞轻度增多。Western blot检测结果显示,PCNA表达下调,以直接接触组为甚。但是P-gp表达无变化。结论 正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病MDR细胞HL-60／VCR的增殖,抑制PCNA的表达,出现G1期阻滞,并部分向单核细胞分化。

阳离子脂质体介导hFL真核表达载体在骨髓基质细胞系中的表达

目的 :阳离子脂质体介导hFL真核表达载体pIRESlneo/hFL转染人骨髓基质细胞系HFCL细胞 ,观察hFL在HFCL细胞中的表达。方法 :以阳离子脂质体介导法将重组真核表达载体 pIRESlneo/hFL导入人骨髓基质细胞系HFCL细胞 ,G418筛选获得的阳性细胞以Southernblot和Northernblot分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录 ,Westernblot检测其蛋白表达 ,ELISA及人脐血CD34+细胞增殖实验检测其蛋白表达量和活性。结果 :hFL基因己整合到靶细胞HFCL基因组DNA中 ,在mRNA和蛋白质水平上均可检测到其表达 ,ELISA法测得hFL的表达量为 (6 0 .3± 0 .3)ng .10 6Cell-1·d-1,分泌量在细胞传代 30次后仍保持稳定 ,并且表达的hFL具有良好的生物学活性。结论 :阳离子脂质体介导的hFL真核表达载体在人骨髓基质细胞系HFCL中获得持续稳定表达 ,并具有良好的生物学活性。

转FL、GM-CSF基因的人骨髓基质细胞促进脐血CD34^+细胞体外扩增

研究转FL、GM CSF基因的基质细胞对脐血CD34+ 细胞的扩增效应。将转FL、GM CSF基因的人骨髓基质细胞系与脐血CD34+ 细胞共培养 ,观察细胞总数、CD34+ 细胞数、CFU GM的变化情况。培养到第 4周时 ,第 (4 )组 (SCF+IL 3+IL 6 +GM CSF +FL)和第 (8)组 (HFCL/hGM CSF +HFCL/hFL +SCF +IL 3+IL 6 )的细胞总数增加到最大 ,分别扩增了 717± 2 4 4 7和 70 9± 6 3 6 3,第 1周 ,第 (5 )组 (HFCL +SCF +IL 3+IL 6 )扩增了 10 5± 2 0 8倍 ,较第 (8)组减少 (P <0 0 5 )。第 1周时 ,CD34+ 细胞总数第 (4 )组和第 (8)组分别扩增了 8 4 4倍和 11 5倍 (P <0 0 5 ) ,CD34+ 细胞百分率第 (7)组 (FCL/hFL +SCF +IL 3+IL 6 )为 5 0 2 % ,第 (6 )组 (HFCL/hGM CSF +SCF +IL 3+IL 6 )为 2 8 95 % (P <0 0 1)。第 2周 ,各组CFU GM增加显著 ,以第 (4 )组和第 (8)组增加最为明显 ,以后随扩增时间延长 ,造血细胞集落数、集落体积逐渐减少。表明转FL、GM CSF基因的基质细胞 ,能有效的协同其他细胞因子对脐血CD34+ 细胞产生明显的扩增作用 。

pIRES2-EGFP-hBMP2载体在人骨髓基质细胞中的表达及意义

目的 :研究人骨形成蛋白hBMP2真核表达载体pIRES2 -EGFP -hBMP2在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达及意义。方法 :利用DNA重组技术 ,将hBMP2片段克隆到真核表达载体pIRES2 -EGFP中 ;EcoRΙ/BamHΙ双酶切鉴定 ;脂质体介导的方法转染HFCL细胞 ;荧光显微镜下观察转染细胞 ;免疫组化染色检测hBMP2基因的表达。结果 :经酶切鉴定显示 ,成功地构建了重组载体pIRES2 -EGFP -hBMP2。转染HFCL 4 8h后在荧光显微镜下观察到转染的HFCL细胞发绿色荧光。免疫组化染色显示转染hBMP2基因的HFCL细胞浆内有细的棕色颗粒 ,而转染空载体的HFCL细胞免疫组化呈阴性。结论 :所构建的pIRES2-EGFP -hBMP2真核表达载体在HFCL细胞中有良好的表达 ,为进一步研究转基因骨髓基质细胞对放射和化疗所致的造血和骨微环境破坏的改善奠定了基础。

转hGM-CSF基因骨髓基质细胞在体外扩散盒中的表达

目的 研究转人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)基因骨髓基质细胞系在体外扩散盒中的表达。方法 采用阳离子脂质体介导法将构建好的真核表达载体pIRESIneo hGM CSF导入人骨髓基质细胞系HFCL ,建立转基因人骨髓基质细胞系HFCL hGM CSF ,用Southernblot和Northernblot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录 ,并将其移入体外扩散盒中 ,用ELISA法检测其蛋白表达量。结果 Southernblot和Northernblot分析表明hGM CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中 ,在mRNA水平上可以检测到其表达 ,移入扩散盒的HFCL hGM CSF细胞稳定分泌hGM CSF ,量为 5 1 6± 0 5ng 10 6 细胞 天。结论 转hGM CSF基因骨髓基质细胞可以在体外扩散盒中持续稳定表达hGM CSF 。

阳离子脂质体介导hGM-CSF真核表达载体在骨髓基质细胞系中的表达

目的 构建人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)真核表达载体pIRES1neo hGM CSF ,并观察其在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达。方法 用DNA重组技术 ,将hGM CSFcDNA插入到真核表达载体pIRES1neo的多克隆位点中 ,获得阳性重组载体pIRES1neo hGM CSF。以脂质体介导法转染人骨髓基质细胞系HFCL细胞 ,筛选获得的阳性细胞用Southernblot和Northernblot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录 ,用ELISA及依赖株 (TF 1)法检测其蛋白表达量和活性。结果 酶切鉴定表明成功地构建了重组真核表达载体pIRES1neo hGM CSF ;hGM CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中 ,在mRNA和蛋白质水平上均可检测到其表达 ;hGM CSF的表达量为 (5 6 .9± 0 .7)ng 10 6细胞 ,分泌量在细胞传代 30次后仍保持稳定 ,活性为 (6 .5 6± 0 .16 )× 10 3 U 10 6 细胞。结论 所构建的hGM CSF真核表达载体在人骨髓基质细胞系HFCL细胞中获得持续稳定表达 ,并具有良好的生物学活性 ,为细胞因子基因治疗的体内实验研究提供了实验依据。