车屑螺旋状填充质HGMS处理FCC废催化剂

选用车屑螺旋状填充质高梯度磁分离对ＦＣＣ废催化剂进行了分离处理，并对分离后的催化剂进行了活性检验。试验表明：通过ＨＧＭＳ可将废催化剂分离，主要影响回收率及分离后催化剂中Ｎｉ含量的有背景场强、给矿流量、给矿量等因素。通过循环分离试验，可将不同金属含量的废催化剂分出，其活性随Ｎｉ含量降低而增加，其中活性达７７的催化剂占催化剂总量近４０％。

强脉冲光与HGM激光联合非侵入性治疗面部皮肤光老化

目的 观察强脉冲光治疗仪与HGM激光器联合应用非侵入性治疗面部皮肤光老化的效果。方法 对460例Fitzpatrick Ⅲ、Ⅳ型皮肤光老化患者，采用560nm强脉冲光与532nmHGM激光联合治疗4次，治疗分两步进行，首先使用560nm强脉冲光，能量密度30～40J／cm^2的光子嫩肤治疗，然后使用532nmHGM激光器，能量密度35～60J／cm^2，施行局部针对治疗。治疗间隔均为2周。分别于最后一次治疗的4、8周后，随访治疗效果和并发症情况。结果 经4次治疗8周后，随访90％患者毛细血管扩张、毛孔粗大、色素沉着和细小皱纹改善的程度均达到了75％以上。主要并发症为短暂红斑和水疱。结论 560nm强脉冲光治疗仪与532nmHGM激光器联合应用治疗面部皮肤光老化性毛细血管扩张、毛孔粗大、色素沉着和细小皱纹，疗效可靠，并发症少，是一种理想的非侵入性治疗亚洲人FitzpatrickⅢ、Ⅳ型皮肤光老化的方法。

PML-RARα和hGM-CSF双基因表达载体的构建

目的:构建急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα基因与人粒巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因真核双表达载体,为利用DNA疫苗治疗APL奠定基础。方法:利用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增出PML-RARα融合点附近的部分基因片段,通过PCR从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,并分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点(MCS)A和B中,构建真核双表达载体。利用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性。结果:NheI/M luI和XbaI/SalI双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,且序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。结论:成功构建了含有PML-RARα基因及hGM-CSF基因的真核双表达载体。

还原剂用量对HGM/Ni-P核/壳复合粒子微波吸收性能的影响

以NaH2PO2为还原剂,采用化学镀方法,在空心玻璃微球表面沉积Ni-P层,获得了轻质空心玻璃微球/Ni-P核/壳复合粒子(简称为HGM/Ni-P核/壳粒子)。采用扫描电子显微镜(SEM)、能谱仪(EDX)、X射线衍射仪(XRD)以及网络矢量分析仪(VNA)研究了化学镀过程中不同还原剂用量对复合粒子形貌、结构、成分及其微波吸收性能的影响规律。结果表明,随着还原剂NaH2PO2用量的增大,HGM/Ni-P核/壳粒子的表面形貌变化不大,壳层中P含量随之升高,非晶成分增多。HGM在镀覆后介电性质与磁导率较镀覆前显著提高。随着NaH2PO2由20g/L增加到30g/L时ε′和ε″的响应峰向高频移动,增加到40g/L时其响应峰消失,且介电常数下降。同时,HGM/Ni-P核/壳粒子的μ′和μ″曲线中6～8GHz处代表自然共振的峰随着NaH2PO2浓度的增加而消失。

环境因子对转hGM-CSF基因鱼腥藻生长与光合的调节

以转hGM-CSF基因鱼腥藻7120为对象,分别探讨了温度、pH、光强等环境因子和外加碳、氮等基本营养源对转基因藻生长与光合活性的影响.结果表明:当基本环境因子为30℃、pH9.5和90μmol·m-2·s-1光强时,转基因藻生长最快.添加10mmol·L-1的NaHCO3或5g·L-1的葡萄糖对转基因藻的光合活性促进最大;但外加氮源却抑制了转基因藻的光合活性.

用夹心酶联免疫法研究hGM－CSF在大鼠体内的药物代谢动力学

用灵敏的夹心酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）建立了检测重组人ｈＧＭ－ＣＳＦ药代动力学的方法。此方法ｈＧＭ～ＣＳＦ在１２．５～０．３９ｎｇ·ｍｌ￣（－１）范围内，检测呈线性相关。最低检测灵敏度为０．４ｎｇ·ｍｌ￣（－１）。本方法不受血清中潜在干扰因素的影响，检测具高度特异性。大鼠ｓｃｈＧＭ－ＣＳＦ５０，１００，２００μｇ·ｋｇ￣（－１）后１５ｍｉｎ，血中即有较高浓度的ｈＧＭ－ＣＳＦ，１ｈ左右达峰浓度，以后快速下降。皮下给药，尿中可检测到原型ｈＧＭ－ＣＳＦ，但累积排泄率较低。本研究为临床合理用药提供依据。

毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的构建及表达分析

为了探索利用毕赤氏酵母系统表达和生产人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,hGM-CSF)的可行性,使用经改造的hGM-CSF基因构建pGAPZa-A/hGM-CSF分泌型表达载体,转入毕赤氏酵母SMD1168(his 4,pep 4)菌株和GS115(his 4)菌株,利用斑点杂交技术筛选hGM-CSF基因阳性菌株,利用SDS-PAGE和TF-1依赖细胞株/MTT比色法对工程菌株的分泌产物进行表达和生物活性分析,最后筛选得到7个hGM-CSF基因阳性菌株,其中有3个工程菌株的杂蛋白较少且主带蛋白质相对分子质量与经改造的hGM-CSF基因相对分子质量保持一致,这3个工程菌株的分泌蛋白质样品都具有天然hGM-CSF的生物活性,经初步提取,活性单位分别为2.28×105U/ml、2.22×105U/ml和2.46 × 105U/ml。从而证明利用毕赤氏酵母系统表达hGM-CSF是可行的,为hGM-CSF的生产和临床应用打下了基础。

家蚕生物反应器表达hGM-CSF产业化若干问题的研究

报道了家蚕杆状病毒表达hGM CSF产业化过程中几个问题的研究结果。鲜茧在 4～ 7℃保存可显著抑制蚕蛹的发育 ,但随冷藏时间的延长 ,死笼率明显上升 ,接种成功率显著下降 ;接种蚕蛹血淋巴中hGM CSF的活性与鲜茧保存时间有明显的负相关关系 ;生产工艺不同 ,蚕蛹冻干粉中hGM CSF的活性有明显差异 ;60 Co辐照可使冻干蚕蛹粉中微生物的数量减少 ,但同时蚕蛹中hGM CSF的活性也随辐照剂量的增加而有所降低 ,hGM CSF蚕蛹粉经 30 0 0Gyγ射线辐照后 ,口服仍使小鼠白细胞明显上升。

结核杆菌Esat6与hGM-CSF双顺反子表达载体的构建及鉴定

目的从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定。方法以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒。然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES载体的MCS B进行重组,构建pIGM重组质粒,上述两重组质粒经PCR、限制性内切酶图谱及DNA序列测定分析等多种方法进行鉴定后,再通过酶切、连接把hGM-CSF构建于pIEsat6质粒中,形成双顺反子真核表达载体pIEG。结果通过PCR可克隆得到相应大小的产物,酶切鉴定所切下的两片段大小约为0.29 kb和0.47 kb,与预计相符。测序结果与报道一致。结论成功构建结核杆菌Esat6基因与hGM-CSF双顺反子真核表达载体,为进一步研究其结核融合DNA疫苗及其转染DC疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础。

转hGM－CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及其生物学特性

采用逆转录病毒载体将ｈＧＭ－ＣＳＦ基因导入人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７细胞中，建立转基因细胞株ＢＩＵ／ＧＭ。经ＰＣＲ－ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ杂交证实ＧＭ－ＣＳＦ基因已整合到ＢＩＵ／ＧＭ细胞基因组中。经流式细胞仪细胞ＤＮＡ周期分析表明，转基因前后ＢＩＵ－８７细胞增殖状态无变化。免疫荧光检测发现ＧＭ－ＣＳＦ基因导入及表达不能促进ＢＩＵ－８７细胞表面ＨＬＡ－ＡＢＣ、ＤＲ、ＤＱ抗原的表达。转基因细胞经６０Ｇｙ／ｓＸ线灭活后，丧失增殖能力，但能维持一定水平的ＧＭ－ＣＳＦ分泌活性达２周。本文为进行转基因瘤苗的深入研究奠定了初步基础。

突变型hGM-CSF在毕赤甲醇酵母中的分泌表达

临床研究发现 ,与大肠杆菌体系生产的hGM -CSF相比 ,利用酵母表达系统生产的hGM -CSF ,具有毒副作用小等优点。鉴于非糖基化的hGM -CSF生物活性比人体天然产生的糖基化GM -CSF活性更高 ,采用PCR定点突变的方法修改hGM -CSF基因中的糖基化位点 ,进而在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中实现该突变型基因的高效表达。实验结果表明 ,突变型基因的表达产物具有天然hGM -CSF的活性。

转hGM-CSF基因骨髓基质细胞在体外扩散盒中的表达

目的 研究转人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)基因骨髓基质细胞系在体外扩散盒中的表达。方法 采用阳离子脂质体介导法将构建好的真核表达载体pIRESIneo hGM CSF导入人骨髓基质细胞系HFCL ,建立转基因人骨髓基质细胞系HFCL hGM CSF ,用Southernblot和Northernblot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录 ,并将其移入体外扩散盒中 ,用ELISA法检测其蛋白表达量。结果 Southernblot和Northernblot分析表明hGM CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中 ,在mRNA水平上可以检测到其表达 ,移入扩散盒的HFCL hGM CSF细胞稳定分泌hGM CSF ,量为 5 1 6± 0 5ng 10 6 细胞 天。结论 转hGM CSF基因骨髓基质细胞可以在体外扩散盒中持续稳定表达hGM CSF 。

表达肾癌G250基因和hGM-CSF基因HEK293细胞系的建立

目的建立稳定表达肾癌G250基因与基因佐剂hGM-CSF基因编码蛋白的的HEK293细胞系。方法通过脂质体转染的方法,将表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的双顺反子pIG250-GM真核表达质粒导入HEK293细胞中;经持续G418压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系;用免疫组化、ELISA和Western Blot方法,检测目的蛋白在HEK293细胞中的表达。结果经600 μg / mL的G418压力筛选后,获得了抗性细胞克隆;免疫组织化学方法检测到表达G250的阳性细胞;ELISA方法检测到pIG250-GM转染组细胞培养上清中hGM-CSF的表达与空载体对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blotting方法检测到G250蛋白的表达,分子量约54Ku,与预期大小相符。结论成功建立可稳定表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的HEK293细胞系,为研究防治肾癌疫苗的免疫应答机制提供了实验基础。

HGM准双曲面齿轮小轮控制参数的确定

为了得到最终的HGM小轮控制参数,从齿面修正的数学模型出发,利用基于Matlab环境编写的TCA(Tooth Contact Analysis)程序,通过不断调整程序中的小轮控制参数初值,获得较为理想的齿面接触区域图和传动误差图。结果表明,该方法在确定小轮控制参数方面具有很好的效果。

HGMS在水处理中的研究现状和开发动向

本文对HGMS技术在水处理中的理论研究现状和动向进行了较详细的阐述,并介绍了国内外利用该项技术处理废水的研究概况和开发动向,提出了超导分离技术势必成为HGMS技术未来发展的趋向。

中国精酿啤酒装备领军企业HGM沪港

中国啤酒工业发展迅速，近二十年来取得了举世瞩目的辉煌成就，中国啤酒产量连续12年居世界第一。广大消费者对啤酒的喜爱与日俱增。近年，中国经济持续稳定发展，人民生活水平不断提高，消费理念也悄然变化。追求个性化口味的需求逐渐旺盛，得到业界高度重视，从而促进了中国精酿啤酒业的发展和精酿啤酒装备水平和技术的提高。目前，精酿酒吧在各大中型城市遍地开花。本刊特邀中国精酿啤酒技术研发和装备制造的排头兵企业之一——HGM沪港，与大家共享多年来积累的实战技术和成功经验。

肾癌G250基因和hGM-CSF基因双顺反子表达质粒的构建及鉴定

目的应用分子生物学技术,构建pIG250-GM双顺反子真核表达质粒并进行测序鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pIG250-GM真核表达质粒,并进行酶切鉴定。结果酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.44kμ和0.47kμ,测序分析表明克隆的G250和hGM-CSF序列与GenBank上公布序列完全一致。结论成功构建双顺反子表达pIGM-G250质粒,为研究G250-GMCSF基因负载的DC疫苗防治肾癌提供了必要的实验基础。

基于piggyBac转座子转hGM-CSF基因家蚕的研究

将由家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子控制下的hGM-CSF基因克隆到p igA3GFP载体中,构建了家蚕转基因载体p igA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将其与辅助质粒helper p igA3一起导入家蚕蚕卵,获得产生绿色荧光的家蚕,次代产生荧光蚕的比例分别为0.17%,0.15%。将次代荧光蚕与正常蚕交配后代(G1)的荧光蚕个体再相互杂交,连续进行多代选育,获得了稳定遗传的转hGM-CSF基因家蚕品系。

人肝癌特异性EB病毒载体-p^(EBAF)介导hGM-CSF基因的转移及表达

目的 :探索人粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (hGM -CSF)基因在肝癌细胞中特异性表达的新途径。方法 :构建 pEBAF/hGM -CSF基因克隆 ,用脂质体转染法将它分别导入分泌甲胎蛋白 (AFP)的肝癌细胞株HepG2和不分泌APF的细胞株SMMC772 1,构建两转基因的细胞克隆HepG2 /hGM -CSF、SMMC772 1/hGM-CSF ,用MTT比色法测定细胞上清中hGM -CSF活性。结果 :HepG2 /hGM -CSF细胞上清hGM -CSF活性平均为 46 .5ng/ml/10 6/2 4h ,SMMC772 1细胞上清中无明显hGM -CSF活性。结论

启动子Pcpcβ提高鱼腥藻7120中hGM-CSF基因表达效率的研究

利用聚球藻7002中编码藻蓝蛋白基因(cpcβ)的启动子(Pcpcβ),替代穿梭表达载体pDC-GM中的启动子PpsbA,启动外源人粒巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因在鱼腥藻7120中的表达。蛋白免疫印迹证实,在含Pcpcβ启动子的cGM藻株中,hGM-CSF基因的表达水平比原先构建的含PpsbA启动子的GM藻株中提高了90%,且该基因的高效表达对宿主细胞的生长未产生明显影响。结果表明,对于在蓝藻中表达hGM-CSF基因而言,Pcpcβ启动子可能是较适宜的强启动子之一。