HHIP基因多态性与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病易感性的关系研究

目的探讨HHIP基因多态性与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性之间的关系。方法选取2016年1月—2017年6月新疆巴音郭楞蒙古自治州医院和新疆博尔塔拉蒙古自治州医院诊断为COPD的蒙古族患者259例(病例组),选取同期体检中心的体检健康的蒙古族志愿者245例(对照组)。测定研究对象的第1秒用力呼气末容积占预计值百分比(FEV_1%)、用力肺活量(FVC)及FEV_1/FVC。提取患者外周血DNA,运用SNaPshot分型技术检测HHIP基因rs1489758、rs1492820位点多态性。结果病例组与对照组HHIP基因rs1489758、rs1492820位点基因型、等位基因分布比较,差异有统计学意义(P<0.05)。病例组HHIP基因rs1489758、rs1492820位点不同基因型患者的FEV_1%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HHIP基因rs1489758位点基因型GT[OR=0.582,95%CI(0.396,0.854)]、等位基因T[OR=0.639,95%CI(0.463,0.884)]和rs1492820位点基因型GG[OR=1.975,95%CI(1.153,3.384)]、等位基因G[OR=1.388,95%CI(1.076,1.790)]是发生COPD的影响因素(P<0.05)。结论 HHIP基因rs1489758、rs1492820位点多态性可能与新疆蒙古族人群COPD的发生有关。

中国汉族人群COPD吸烟史患者HHIP基因多态性与肺癌的相关性研究

目的探讨中国汉族人群COPD吸烟史患者HHIP基因多态性与发生肺癌风险的相关性。方法以672例COPD患者作为研究对象,依据病情分为试验组(COPD合并肺癌患者,n=265)和观察组(单纯COPD患者,n=207),采用连接酶检测反应法对患者HHIP基因的多态性位点rs1489758、rs1489759、rs10519717、rs13131837、rs1492820、rs7689420进行多态性分析。对连锁不平衡性分析及SNP点基因型与肺癌风险进行Logistic回归分析。结果HHIP基因位点rs1489758、rs1489759、rs10519717、rs13131837、rs1492820、rs7689420经Hardy·Weinberg平衡检验,均符合H.W平衡定律(P>0.05),具有群体代表性。以是否合并肺癌为因变量,各研究位点基因型多态性为自变量,行Logistic回归分析(年龄、性别、吸烟状况进行校正),结果显示,HHIP基因位点rs1489758、rs1489759、rs10519717、rs13131837、rs1492820、rs7689420与COPD患者是否并发肺癌无统计学关系(P>0.05)。结论本研究未发现HHIP基因的6个多态性位点与中国汉族COPD患者的肺癌发病风险有明确相关性。

HHIP基因rs13118928、rs13141461与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病易感性的相关性研究

目的探讨HHIP基因单核苷酸多态性与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病易感性之间的关系。方法以259例蒙古族吸烟慢性阻塞性肺疾病患者为病例组,245例蒙古族吸烟健康体检者为对照组,提取外周血标本DNA,运用Taqman分型技术检测HHIP基因rs13118928、rs13141461位点多态性。结果HHIP基因rs13118928、rs13141461位点基因型与等位基因在病例组和对照组之间的频率分布,结果显示差异有统计学意义(P<0.05)。rs13118928位点基因型AG、GG,等位基因G在病例组与对照组分布差异有统计学意义(P<0.001),且OR<1,可能降低发生COPD的风险。rs13141461位点基因型TC在病例组与对照组分布差异无统计学意义(P>0.05),rs13141461位点基因型CC,等位基因C在病例组与对照组分布差异有统计学意义(P<0.05),且OR>1,可能增加发生慢阻肺的风险。rs13118928、rs13141461位点基因型与肺功能FEV1%预计值比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HHIP基rs13118928、rs13141461位点多态性可能与新疆蒙古族人群慢阻肺的发生有关。

人胰腺癌细胞株HHIP基因甲基化状态检测和分析

目的:探讨人胰腺癌细胞株HHIP表达与其甲基化的关系,为胰腺癌发生机制的研究提供新的信息。方法:以人胰腺癌细胞株BxPC-3、CFPAC-1、PANC-1、AsPC-1和PaTu8988s为研究对象,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学染色(S-P)法检测去甲基化制剂——DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后各胰腺癌细胞株HHIPmRNA/蛋白表达的变化,用甲基化特异性PCR(MSP)结合测序检测HHIP基因CpG岛甲基化状态。结果:5-Aza-CdR处理前,胰腺癌细胞株BxPC-3、CFPAC-1、PANC-1、AsPC-1和PaTu8988s无HHIPmRNA/蛋白表达;经5-Aza-CdR处理后,HHIPmRNA/蛋白重新表达。MSP结合测序显示上述胰腺癌细胞株HHIP基因CpG岛存在高甲基化。结论:人胰腺癌细胞株HHIP表达抑制与其基因CpG岛高甲基化相关。HHIP基因CpG岛高甲基化可能在胰腺癌的发生、发展中起一定作用。

HHIP基因CpG岛高甲基化水平参与胃癌的发生

目的:观察人胃癌、癌旁组织与胃癌AGS细胞中人音猬因子相互作用蛋白(human hedgehog interacting protein,HHIP)基因启动子区域CpG岛的甲基化水平,探索其与胃癌发生的关系。方法:RT-PCR检测30例人胃癌组织、癌旁组织及AGS细胞中HHIP mRNA的表达,免疫组织化学方法和甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)分别检测胃癌组织和癌旁组织的HHIP表达和HHIP基因启动子区域甲基化状态。AGS细胞予甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dc)处理前后,RT-PCR、MSP和硫化测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)分别检测AGS细胞中HHIP mRNA表达、启动子区域甲基化水平变化、CpG岛甲基化位点数量的变化;分析HHIP基因启动子区CpG岛甲基化水平变化与HHIP mRNA表达水平变化之间的相关性。结果:胃癌组织中的HHIP mRNA(0.82±0.38 vs 1.60±0.26,P=0.000)和蛋白(0.51±0.03 vs 0.83±0.27,P<0.05)的表达均低于癌旁组织,并且与年龄、性别、TNM分期、分化程度、淋巴结转移均无显著相关性(均P>0.05)。癌旁组织中HHIP基因启动子区甲基化水平显著低于胃癌和AGS细胞[(17.7±3.59)%vs(62.9±6.14)%、(99.7±0.67)%,均P<0.05]。AGS细胞在5-Aza-dc干预后HHIP mRNA表达明显增高(4.68±0.22 vs 0.21±0.12,P<0.01),HHIP基因启动子区甲基化水平明显下降[(10.1±0.21)%vs(90.2±0.67)%,P<0.01],CpG岛甲基化位点明显减少,并且HHIP基因启动子区甲基化水平与mRNA表达呈负相关(r=-0.693,P=0.00)。结论:HHIP基因启动子区CpG岛的高甲基化水平可能通过抑制HHIP基因表达参与胃癌的发生。

HHIP基因多态性与新疆哈萨克族慢性阻塞性肺疾病易感性的关系研究

目的探讨HHIP基因rs13118928、rs1828591位点单核苷酸多态性(SNPs)与新疆哈萨克族慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法选取2014年10月—2016年5月在伊犁州友谊医院、新华医院、石河子大学医学院第一附属医院呼吸科住院及门诊就诊的COPD患者214例为病例组。另选取同期在这几家医院进行体检的健康者350例为对照组。统一使用美国Medgraphics公司的肺功能仪进行用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气末容积(FEV1)测定,并记录FEV1占预计值百分比、FEV1/FVC。所有受试者抽取外周静脉血标本,提取标本DNA,运用im LDRTM多重SNP分型技术检测HHIP基因各位点的多态性。结果两组rs13118928位点基因型及等位基因分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组rs1828591位点基因型及等位基因分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组rs13118928位点不同基因型患者FEV1占预计值百分比、FEV1/FVC比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组rs1828591位点不同基因型患者FEV1占预计值百分比、FEV1/FVC比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组HHIP基因rs13118928、rs1828591两位点单体型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HHIP基因rs13118928、rs1828591位点SNPs与新疆哈萨克族COPD易感性无明显关系。

HHIP基因rs10519717、rs7689420位点多态性与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病易感性

目的探讨HHIP基因rs10519717、rs7689420位点多态性与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性及其肺功能的关系。方法选取259例吸烟的蒙古族COPD患者为病例组,245例吸烟的蒙古族健康者作为对照组。并测定受试对象的FVC、FEV1、FEV1pred%、FEV1/FVC。提取外周血标本DNA,运用SnaPshot-PCR分型技术检测HHIP基因rs10519717、rs7689420位点多态性。结果两位点与新疆蒙古族COPD发病风险相关性分析结果显示rs10519717位点基因型共显性模型中TT vs. TC在病例组和对照组间比较差异有统计学意义(P <0.05);显性模型、加性模型在病例组和对照组间比较差异有统计学意义(均P <0.05)。rs7689420位点基因型的共显性模型、显性模型、隐性模型、加性模型在病例组和对照组间比较差异有统计学意义(均P <0.05)。结论 HHIP基因rs10519717、rs7689420位点多态性可能与新疆蒙古族人群COPD的易感性相关。

基于基因芯片技术探讨HHIP对慢性不可预见性应激小鼠海马神经元的干预作用

目的观察刺猬相互作用蛋白(HHIP)基因对抑郁模型小鼠海马组织神经元的干预作用。方法采用慢性不可预见性温和刺激(CUMS)方法复制抑郁症模型。根据体质量通过分层法随机将小鼠分为模型组(30只)和对照组(20只)。慢性温和性应激刺激35 d后,糖水实验、走格实验、悬尾实验等评价其抑郁程度,然后取海马组织。应用基因芯片技术查找差异表达基因,通过聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)确认HHIP蛋白的表达下调。制备HHIP基因慢病毒,沉默HHIP基因进一步体外实验探索HHIP蛋白对海马组织神经细胞的干预作用。结果抑郁症模型小鼠呈现抑郁伴焦虑状态,基因芯片结果显示,焦虑、抑郁情绪与海马组织神经元,胶质细胞生育、分化及细胞外基因及其连通性有关。海马组织差异表达的mRNA有447个,其中mRNA下调281个,上调166个。下调基因包括Hedgehog信号通路中的3个基因HHIP、SHH、Claudin11。PCR及Western Blot显示HHIP mRNA及蛋白表达均降低。Western Blot法显示HHIP慢病毒感染后PC12细胞促凋亡因子Bcl-2表达下调,Bax表达上调,细胞凋亡百分数增加。结论HHIP参与了小鼠抑郁焦虑的发生,其发生机制可能与Hedgehog信号通路诱导了海马神经细胞凋亡有关。

非小细胞肺癌Hedgehog信号通路关键调节因子HHIP基因甲基化状态检测的研究

目的采用甲基化基因检测技术对肺癌组织HHIP基因启动子区CpG岛甲基化状态进行分析。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应和亚硫酸盐测序聚合酶链式反应技术,对在上海中医药大学附属第七人民医院接受手术治疗的非小细胞肺癌患者的肿瘤组织及距离肿瘤5cm的癌旁组织进行HHIP启动子区甲基化分析,并使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测HHIP基因及Hedgehog信号通路PTCH、GLI1、SHH基因的mRNA表达。结果肿瘤组织HHIP基因启动子区CpG位点部分甲基化,甲基化程度为(3.36±2.35)%,而癌旁组织HHIP基因启动子区CpG位点少数甲基化,甲基化程度为(0.85±0.27)%,差异有统计学意义(t=-3.349,P=0.008)。肿瘤组织的HHIPmRNA相对表达量明显低于癌旁组织(Z=-4.038,P<0.001),其下游PTCH、GLI1、SHH基因的mRNA相对表达量明显高于癌旁组织(Z值均为-4.038,P值均<0.001)。结论在非小细胞肺癌中,抑癌基因HHIP启动子呈甲基化状态并出现表达沉默或下调,可作为肺癌的早期预测指标。

HHIP基因在吸烟介导的气道炎症中的作用

目的 以香烟提取物刺激 HHIP 基因沉默的 A549 细胞与正常对照组细胞,比较其释放炎症介质的 mRNA 和蛋白表达水平差异,从而探讨 HHIP 基因在吸烟介导的气道炎症反应中的调控作用。方法 将 A549 细胞分为对照组与实验组,以 siRNA 技术瞬时沉默实验组细胞中 HHIP 基因的表达。以 2.5% 、 5.0% 、 10% 浓度的香烟提取物刺激两组细胞, Westernblot 法检测细胞释放的IL-6 、 IL-8 、细胞间黏附分子 1 的蛋白水平,实时荧光定量法检测其 mRNA 水平,比较两组细胞之间的差异。结果 除 5% 浓度香烟提取物作用下检测到的 IL-6 、 IL-8 水平之外,其余浓度作用下,实验组细胞释放的炎症介质水平均高于对照组,差异有统计学意义。 HHIP 基因低表达时, 3 种炎症介质mRNA 与蛋白表达较对照组都有升高,其中 IL-6 、 IL-8 较显著,而 ICAM-1 蛋白升高幅度相对较低。结论 HHIP 基因低表达可上调炎症介质水平,从而放大气道炎症反应,其通过调节炎症介质水平对吸烟介导的气道炎症产生一定的调控作用,从而影响个体对 COPD 的易感性。

HHIP基因rs13118928单核苷酸多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的荟萃分析

目的探讨Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)基因rs13118928位点单核苷酸多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关联。方法系统检索PubMed、EMBASE、Web of Science、中国知网和万方五个电子数据库。检索时间为建库到2018年1月5日,根据制定的纳入标准筛选出相关研究文章,提取数据后利用RevMan5.3软件进行统计分析,计算出各种遗传模型下的比值比(OR)和95%的可信区间(95%CI)。结果本项研究共纳入7篇文献,包括5157个COPD患者和9768个健康对照者。荟萃分析结果显示HHIP基因rs13118928多态性在五种遗传模型下均与COPD有显著相关性:Avs.G,OR=1.14,95%CI,1.08~1.20,P<0.001;AAvs.GG,OR=1.36,95%CI,1.20~1.55,P<0.001;AGvs.GG,OR=1.27,95%CI,1.03~1.58,P=0.030;AA+AGvs.GG,OR=1.31,95%CI,1.10~1.57,P=0.003;AAvs.AG+GG,OR=1.12,95%CI,1.04~1.21,P=0.002。亚组分析结果显示在亚洲人种和高加索人种中,rs13118928多态性在Avs.G和AAvs.GG遗传模型下与COPD的发生有显著相关性。结论HHIP基因rs13118928单核苷酸多态性与COPD的发生有显著相关性。A等位基因和AA基因型携带者对COPD有较高的易感性。

HHIP基因多态性与汉族哮喘合并慢阻肺易感性的关系研究

目的探讨HHIP基因多态性与汉族哮喘合并慢性阻塞性肺疾病(ACOS)易感性之间的关系。方法选取2016年10月~2018年10月于哈尔滨医科大学附属第二医院确诊为ACOS的汉族患者384例(病例组)及健康志愿者342例(对照组)。测定研究对象的FEV1%及FEV1/FVC。运用SNPs质谱分析技术检测HHIP基因rs1032295、rs1512288位点多态性。结果病例组与对照组HHIP基因rs1032295、rs1512288位点基因型、等位基因分布比较,差异有统计学意义(P<0.05)。rs1032295位点基因型GT、等位基因T和rs1512288位点基因型TC、基因型CC、等位基因C是发生ACOS的影响因素(P<0.05)。病例组HHIP基因rs1032295位点不同基因型患者FEV1%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HHIP基因rs1032295、rs1512288位点多态性可能与汉族人群ACOS的发生有相关性。

HHIP基因去甲基化对HCC827肺腺癌细胞Hedgehog信号通路及增殖影响

[目的]探讨HHIP基因去甲基化后对HCC827肺腺癌细胞Hedgehog信号通路及其增殖的影响。[方法]应用细胞转染技术获得HHIP高表达的HCC827细胞,并将HCC827细胞分为空白对照组、过表达转染组及5-氮杂-2′脱氧胞苷(5-Aza-2′-de-oxycytidine,5-AzaCd R)处理组。采用甲基化特异性聚合酶链式反应和亚硫酸盐测序PCR检测5-Aza-CdR处理前后HCC827细胞HHIP基因启动子区甲基化状况,应用Real-time qPCR及Western-blot方法检测各组细胞的Hedgehog信号通路相关基因及细胞周期素D2(CCND2)mRNA及蛋白表达水平,CCK8分析细胞增殖的变化。[结果] HHIP基因去甲基化或过表达质粒转染后,HHIP基因表达明显上调,其Hedgehog信号通路相关基因PTCH、SHH基因表达均明显下调,CCND 2表达上调(P均<0.01),HCC827增殖能力出现降低(P<0.01)。[结论]高甲基化抑癌基因HHIP基因去甲基化后,可抑制HCC827腺癌细胞Hedgehog信号通路的活化并抑制其增殖,这可能与其Hedgehog信号通路负性调节因子HHIP基因恢复表达相关。