清毒汤保护肠屏障治疗慢加急性肝衰竭内毒素血症的机制研究

目的研究清毒汤对肠屏障的保护作用,探讨清毒汤保护肠屏障治疗慢加急性肝衰竭内毒素血症的机制。方法不同浓度的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)处理正常人肠上皮细胞(human intestinal epithelial cells-6,HIEC-6),通过细胞毒性法(cell counting kit-8,CCK-8)检测LPS对HIEC-6细胞存活率的影响。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的mRNA表达情况,在体外构建肠屏障损伤的模型。通过蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测清毒汤对肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平的影响。利用qRT-PCR法检测通路蛋白表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、Zonulin及miRNA122a的mRNA表达情况。结果CCK-8法、qRT-PCR法的检测结果显示120μg/mL的LPS作为构建肠屏障损伤模型的浓度较为合适。qRT-PCR的结果表明,5%清毒汤含药血清能显著改善LPS对肠上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的mRNA的下调作用,因此后续实验中选取5%清毒汤作为实验条件。WB的结果表明清毒汤能明显改善LPS对肠上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的下调作用。qRT-PCR的结果表明,清毒汤能明显降低通路蛋白EGFR、Zonulin及miRNA122a的表达。结论清毒汤可能通过miR122a靶向EGFR调控Zonulin蛋白从而调节肠道紧密连接的表达,保护肠屏障,治疗慢加急性肝衰竭内毒素血症。

羧酸富勒烯C_3的合成及其保护辐射损伤效应

通过Bingle环加成反应,利用富勒烯与丙二酸二乙酯催化合成羧酸富勒烯C3,经1H-NMR,13C-NMR以及MS-ESI确认其结构和分子量。通过芬顿体系检测了C3清除自由基的能力。利用CCK-8法和Annexin-V/PI染色和流式细胞分析法,分别检测C3对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率,细胞凋亡和细胞周期变化的影响。结果表明,C3具有良好的清除自由基的能力,当芬顿体系中C3终浓度为1000mg/L时,清除效率高达93%左右。对1-12Gyγ射线照射的细胞,C3具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,细胞凋亡率显著降低;且对于较高剂量的照射,辐射防护效果较好。说明C3对γ射线照射的细胞具有较好的辐射防护作用,其机理可能主要与其清除自由基的作用有关。

小鼠小肠RNA对人肠上皮细胞辐射损伤修复的研究

目的 研究小鼠小肠RNA对受照人肠上皮细胞辐射损伤修复的作用。 方法 采用四唑盐 (MTT)比色法和流式细胞仪分析细胞周期。 结果 照后 4d ,随着照射剂量的增加 ,人肠上皮细胞的存活率逐渐降低 ;照后给予小肠RNA组的LD5 0 为 14 2Gy ,照射对照组的LD5 0 为 12 6Gy ,DMF为 1 13;照后 2 4h ,小肠RNA组的G2 期细胞增多 ,而G1 期细胞减少。 结论 小鼠小肠RNA可提高受照人肠上皮细胞存活率 ,其机理可能与调控细胞周期有关。

原花青素预处理对体外人源细胞辐射损伤的防护作用

目的:探讨原花青素(PC)预处理对体外人淋巴母细胞AHH-1和肠腺上皮细胞HIEC电离辐射损伤的防护效果及可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测原花青素预处理对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率的影响,Annexin-Ⅴ/PI染色和流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2蛋白表达变化。结果:PC预处理的细胞辐照后存活率明显升高(P<0.01),4Gy照射用药组AHH-1细胞凋亡率(11.78%)显著低于单纯照射组(26.38%,P<0.01),8Gy照射用药组HIEC细胞凋亡率(5.32%)亦显著低于单纯照射组(12.45%,P<0.01)。PC预处理组AHH-1、HIEC细胞受照射后其Bcl-2蛋白表达下降受到抑制。结论:PC预处理对细胞的辐射损伤具有较好的防护效果,可能与其促进受损细胞Bcl-2蛋白表达有关。

CpG-ODN对辐射所致人小肠隐窝上皮细胞微核形成的影响

研究了CpG-ODN(CpG oligonucleotides)对非免疫细胞人小肠隐窝上皮细胞(HIEC)照射后微核变化的影响。采用MTT法检测不同浓度的CpG-ODN对HIEC的细胞毒性,检测CpG-ODN预处理后的HIEC细胞在不同剂量辐射后微核率和微核细胞率的变化。结果表明,CpG-ODN在0.00-1.25μmol/L浓度范围内对细胞的存活率没有显著影响,CpG-ODN能显著降低微核率和微核细胞率。实验结果提示CpG-ODN对HIEC有较小的毒性且能减少细胞辐照后的微核形成,具有一定的辐射保护作用。

评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1介导的重组BCG与上皮细胞的结合能力

目的:评价PEB1介导的屋尘螨抗原(Derp2)重组BCG疫苗(PEB1-Derp2-rBCG)与人上皮细胞的结合能力。方法:采用体外细胞培养的方法,分别将普通BCG、胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEB1-Derp2-rBCG与HeLa细胞及人类肠粘膜上皮细胞(HIEC)进行共孵育,利用HE和抗酸染色法对各组细胞与疫苗的黏附结果进行染色,光学显微镜下计数各组的黏附率,并进行比较;对以上各组分别加入PEB1蛋白,进行黏附阻断,观察对结合能力的影响。结果:孵育24小时后,无论HeLa细胞还是HIECPEB1-Derp2-rBCG组较普通BCG组和Derp2-rBCG组的黏附率明显提高,差异有显著性(P<0.05);PEB1蛋白的加入对PEB1-Derp2-rBCG的黏附功能有明显抑制作用(P<0.05);但是,Derp2-rBCG组与普通BCG组比较没有明显差异(P>0.05),PEB1蛋白的加入对二者的黏附亦无影响(P>0.05)。结论:PEB1具有介导增强PEB1-Derp2-rBCG与上皮细胞黏附的能力。