血清CYFRA21-1、CA125联合HPV DNA检测在宫颈癌早期筛查中的价值及病理特征研究

目的分析血清细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)联合HPV DNA检测在宫颈癌早期筛查中的价值及病理特征。方法选取2019年8月至2023年6月沧州市中心医院收治的宫颈癌患者152例为观察组,另选取同期在本院行体检且各项正常女性80名为对照组;对比两组血清CYFRA21-1、CA125水平以及HPV DNA检测结果;对比观察组不同手术病理结果及血清CYFRA21-1、CA125表达水平以及HPV DNA检测结果;以病理学检查为金标准,分析血清CYFRA21-1、CA125水平以及HPV DNA检测单独以及联合诊断宫颈癌的一致性;绘制ROC曲线,分析血清CYFRA21-1、CA125联合HPV DNA单独检测及联合检测宫颈癌的效能。结果152例患者中,鳞状细胞癌104例,腺癌患者48例;其中轻度不典型增生66例、中度不典型增生57例、重度不典型增生29例。观察组血清CYFRA21-1、CA125水平以及HPV DNA阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清CYFRA21-1、CA125水平:鳞状细胞癌<腺癌,轻度不典型增生<中度不典型增生<重度不典型增生,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组不同分期、不同肿瘤增生类型的HPV DNA阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);血清CYFRA21-1、CA125水平、HPV DNA检测单独以及联合诊断宫颈癌与病理学检查结果的一致性Kappa值分别为0.677、0.731、0.756、0.902;CA125+CYFRA21-1+HPV DNA联合检测的AUC为0.894,高于CA125、CYFRA21-1、HPV DNA单独检测(P>0.05)。结论血清CYFRA21-1、CA125联合HPV DNA检测的诊断效能高于单一检测,提示三指标联合检测可显著提高宫颈癌早期筛查的诊断价值,可为制定临床治疗方案提供参考资料。

IL-18和HIV-1gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答

目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。

用分子对接方法研究HIV-1整合酶与病毒DNA的结合模式

用分子对接方法研究了HIV-1整合酶(Integrase,IN)二聚体与3′端加工(3′Processing,3′-P)前的8bp及27bp病毒DNA的相互作用,并获得IN与27bp病毒DNA的特异性结合模式.模拟结果表明,IN有特异性DNA结合区和非特异性DNA结合区;IN二聚体B链的K14,R20,K156,K159,K160,K186,K188,R199和A链的K219,W243,K244,R262,R263是IN结合病毒DNA的关键残基;并从结构上解释了能使IN发挥活性的病毒DNA的最小长度是15bp.通过分析结合能发现,IN与DNA稳定结合的主要因素是非极性相互作用,而关键残基与病毒DNA相互识别主要依赖于极性相互作用.模拟结果与实验数据较吻合.

HIV-1 RNA被有效抑制下T细胞与外周血中HIV-1前病毒DNA

目的:考察HIV-1 RNA被有效抑制下T细胞与外周血中HIV-1前病毒DNA的相关性。方法:对云南地区90例确诊为AIDS,HAART持续治疗时间超过6个月,血浆HIV RNA<50 Copies/ml的患者进行研究,采用Spearmans秩和相关回顾性分析CD4+、CD3+、CD8+、CD4+CD28+、CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD38+、CD8+CD38+T细胞的绝对计数和相对计数与外周血中HIV-1前病毒DNA的相关性,同时考察HIV-1前病毒DNA拷贝数与HAART持续治疗时间的相关性。将90例患者根据HAART后CD4+T细胞绝对计数分为A(CD4+<200 cells/μl)、B(200≤CD4+≤349 cells/μl)、C(CD4+≥350 cells/μl)3组,考察3组间T细胞亚群的差别。结果:HIV-1前病毒DNA的log拷贝数与CD4+CD45RA+T细胞绝对计数呈负相关(r=-0.231,P<0.05),与CD4+CD45RA+T细胞相对计数呈明显负相关(r=-0.270,P<0.01);与CD38+T细胞绝对计数呈正相关(r=0.250,P<0.05);与HAART持续治疗时间无相关性。B、C组的CD3+T细胞绝对计数明显高于A组(P<0.01);C组的CD8+T细胞绝对计数高于B组的(P<0.05);B、C组的CD4+CD28+T细胞绝对计数和相对计数明显高于A组(P<0.01),C组的CD4+CD28+T细胞绝对计数高于B组(P<0.05);B、C组的CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞绝对计数明显高于A组(P<0.01),C组的CD4+CD45RA+T细胞、CD4+CD45RO+T细胞绝对计数高于B组(P<0.05),B、C组的CD4+CD45RO+T细胞相对计数高于A组(P<0.05);B、C组的CD8+CD38+T细胞绝对计数低于A组(P<0.05),B组的CD8+CD38+T细胞相对计数低于A组(P<0.05);C组的CD38+T细胞绝对计数高于A组(P<0.05)。A、B、C组的HIV-1前病毒DNA的log拷贝数分别为3.561±0.297 9,3.605±0.277 6,3.434±0.289 1(copies/ml),3组间无显著性差异(P>0.05)。结论:经过HAART治疗后HIV-1前病毒DNA可能处于稳定状态,HIV-1前病毒DNA拷贝数只是某些T细胞亚群数量改变的原因之一。

HIV-1_(CN54) DNA疫苗滴鼻免疫小鼠诱发系统和黏膜免疫应答

目的 探讨重组痘苗病毒rVVsyngp12 0或rVVmCN5 4gp12 0候选疫苗是否增强HIV 1CN5 4合成gp12 0基因(syngp12 0 )DNA疫苗的免疫原性。方法 第 0、7、14、2 1天用DNA疫苗滴鼻免疫小鼠 ,第 2 8、35、4 2天再滴鼻接种rVVsyngp12 0或rVVmCN5 4gp12 0。体外测脾和肠系膜淋巴结 (MLN)淋巴细胞增殖应答与CD8+ CTL应答。测血清和黏膜洗液特异的IgG和IgA ,并测其是否中和实验室适应株HIV 1SF33。结果 单纯DNA免疫后 ,脾和MLN淋巴细胞在体外发生增殖应答和CTL应答 ,且测出血清特异的IgG和黏膜洗液特异的IgA。重组痘苗病毒末次免疫后第 2周 (第 5 6天 ) ,发现rVVmCN5 4gp12 0增强MLN淋巴细胞增殖应答和CTL应答 ,脾CTL应答也增强。rVVsyngp12 0则增强MLNCTL应答。同时发现 :2组重组痘苗病毒免疫的动物其血清中特异IgG抗体滴度均有所增高 ,但黏膜 (粪便和阴道 )洗液特异IgA抗体滴度却未增高 ,未测出血清特异IgA和黏膜洗液特异IgG。免疫血清可中和HIV 1SF33,而阴道洗液却不能。结论 单纯DNA疫苗滴鼻免疫可诱发较弱的系统和黏膜体液免疫与细胞免疫 ,但维持时间短。重组痘苗病毒主要增强局部黏膜的细胞免疫应答 ,且稍增强系统体液免疫应答 ,未增强黏膜的IgA应答。

不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA的干扰验证分析

目的探讨多重聚合酶链式反应(PCR)技术在献血者血液标本中不同浓度HBV DNA和(或)HIV-1 RNA对低浓度HCV RNA检测结果的影响。方法采用阴性血浆对HCV RNA标准物质、已定量的HBV DNA和HIV-1 RNA血浆进行稀释,配制成2种病毒或3种病毒的混合液,HCV RNA浓度稳定在20.4 IU/mL[该PCR检测系统95%平均检测下限(LoD)的3倍],HBV DNA浓度为20 IU/mL、200 IU/mL、2000 IU/mL和(或)HIV-1 RNA浓度为50 copies/mL、500 copies/mL、5000 copies/mL的混合液,同时设置对照组(只有3×LoD的HCV RNA溶液),模拟献血者血液样本,分别在Roche Cobas s201核酸检测系统进行单检模式和混样模式(与5个阴性标本混合)至少检测20次,统计分析不同浓度病毒核酸检测Ct值差异以及单检模式与混检模式的漏检率。结果不同浓度HIV-1 RNA和(或)HBV DNA在单检模式下对HCV RNA检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05);HCV RNA在单检模式下的Ct值中位数36.60(36.20,37.10)明显低于混检模式的Ct值39.30(38.60,40.00)(P<0.05),10个分组中HCV RNA在单检模式的漏检率均为0%,而在混检模式的平均漏检率为12.62%,差异有统计学意义(P<0.05);此外,浓度20 IU/mL的HBV DNA进行单检的漏检率为7.55%,进行混检的漏检率为81.4%;50 copies/mL的HIV-1 RNA和20.4 IU/mL的HCV RNA在单检时漏检率为0%,而混检漏检率分别为28.57%和12.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA结果无影响,但弱阳性HCV RNA、HBV DNA和HIV-1 RNA标本在单检模式下的漏检率低于混检模式,为提高血液安全,血液核酸检测应尽可能采用单检模式。

电喷雾质谱法研究聚酰胺、酰亚胺衍生物与HIV-1基因DNA的相互作用

利用电喷雾质谱(ESI-MS)研究了6种识别分子与HIV-1基因调控区DNA的非共价键相互作用.在研究中比较了不同识别分子与靶序列DNA结合的强弱,发现双萘酰亚胺衍生物4对此序列DNA具有高亲合性的结合,并分析了识别分子与DNA复合物的碎裂机理以及结合模式.

HIV-1 Tat蛋白抑制DNA修复和增强细胞辐射敏感性

近年来临床研究发现,艾滋病合并肿瘤患者放疗后产生的正常组织和皮肤毒性反应明显高于普通肿瘤患者.本研究将探讨HIV-1Tat蛋白是否影响细胞对电离辐射敏感性及机理.两个表达Tat蛋白的细胞系TT2和TE671-Tat均来源于人的横纹肌肉瘤细胞(TE671)并已转染了不同来源的tat基因.使用细胞辐射后克隆形成率检测辐射敏感性,RT-PCR和Western印迹检测基因表达,彗星电泳和γ-H2AX位点检测DNA双链断裂和修复.TT2和TE671-Tat细胞的辐射敏感性与转染空载体及对照细胞相比明显增加.彗星电泳和γ-H2AX位点检测表明,在表达Tat蛋白的细胞中,辐射诱导DNA双链断裂的修复水平明显降低.通过RT-PCR和Western印迹检测进一步证实,表达Tat蛋白的细胞中DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达被抑制.HIV-1Tat蛋白抑制DNA-PKcs的表达,降低DNA双链断裂的修复,使细胞的电离辐射敏感性增高.本研究为了解AIDS合并肿瘤患者对放射治疗敏感性变化提供了重要信息.

HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达

目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。

HIV-1感染者免疫活化对宿主限制因子SAMHD1表达和HIV-1 DNA水平的影响

目的研究HIV-1感染者CD4;T细胞免疫活化与外周血宿主限制因子SAMHD1表达水平和HIV-1 DNA的关系。方法选取未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者57例,接受抗病毒治疗且病毒载量低于检测限的HIV-1感染者62例,健康对照48例。分离外周血单个核细胞(PBMC)和CD4;T细胞,提取总RNA,RT-PCR法检测SAMHD1 mRNA表达水平及血浆HIV-1 RNA水平,流式细胞术检测CD4;T和CD8;T细胞数量及CD4;T细胞免疫活化水平,ELISA检测血浆干扰素α水平,PCR法检测外周血HIV-1 DNA水平。结果未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者CD4;T细胞免疫活化水平最高,抗病毒治疗组显著降低,但仍高于健康对照组(P <0.01)。未接受抗病毒治疗组外周血HIV-1 DNA水平显著高于抗病毒治疗组(P <0.01)。HIV-1感染者PBMCs中SAMHD1 mRNA水平显著高于健康对照组(P <0.01),而CD4;T细胞中SAMHD1 mRNA表达水平显著低于健康对照组(P <0.01)。CD4;T细胞SAMHD1 mRNA表达水平与免疫活化呈负相关,但与HIV-1 DNA水平无相关性。结论 HIV-1感染者CD4;T细胞SAMHD1表达水平降低,与免疫活化水平负相关,但与HIV-1 DNA水平无直接相关。

HIV-1复制型DNA疫苗与非复制型重组痘苗病毒疫苗在小鼠体内细胞免疫效果的研究

目的:用HIV-1复制型DNA疫苗和非复制型重组痘苗病毒疫苗(rNTV-C)进行单独免疫和联合免疫的研究(2种疫苗分别包含HIV-1 B'/C亚型的gp160、gag-pol、rev-tat-nef等6种基因),以了解这2种新型HIV疫苗单独免疫及联合免疫的效果,并为临床免疫方案的制定提供实验依据。方法:将HIV-1 DNA疫苗和rNTV-C疫苗免疫BALB/c小鼠,设计rNTV-C单独免疫组、DNA单独免疫组,以及DNA初免、rNTV-C加强的联合免疫组,并设计不同免疫途径和不同剂量的各种组合。用IFN-γELISPOT检测各组的细胞免疫效果,用统计学方法分析比较各组细胞免疫效果的差异。结果:DNA疫苗和rNTV-C疫苗单独免疫时,二者都能诱发针对各抗原的特异性免疫反应;联合免疫能够诱发比DNA或rNTV-C单独免疫都强的特异性细胞免疫反应。统计分析显示,2种疫苗采用肌肉注射途径的免疫效果显著高于皮内注射,1μg和5μg DNA疫苗的免疫效果差异不显著,而1×108 PFU的rNTV-C比2×107PFU的免疫效果要强。结论:联合免疫策略能够显著增强HIV-1疫苗各抗原的免疫原性,通过对2种HIV-1疫苗单独免疫及二者联合免疫的细胞免疫反应的分析比较,确定了较好的免疫方案,为疫苗临床前免疫效果评价和临床方案的制定提供了实验依据。

传统DNA疫苗载体与Semliki森林病毒复制子对HIV-1 Pr55^(gag)表达与体液免疫原性的比较性研究

为探索Semliki森林病毒 (SFV)衍生的复制型DNA载体可否用于HIV疫苗的候选载体 ,对该载体与传统DNA疫苗载体对HIV - 1Pr5 5 gag的表达与体液免疫原性进行了系统比较研究。将野生型 (wtgag)及密码子改造(syngag)的HIV - 1ⅢBgag 基因分别克隆于SFVDNA载体及传统DNA疫苗载体 [pCDNA3 1(+) ],对其Pr5 5 gag细胞内表达水平、Pr5 5 gag病毒样颗粒释放、以及在BALB/c鼠的体液免疫原性进行了比较。在 2 93T、H12 99、C2C12和BHK细胞系中 ,SFV -wtgag可以Rev非依赖方式有效表达Pr5 5 gag ,而 pC -wtgag转染的细胞不能有效表达Pr5 5 gag,从而不能诱导小鼠产生免疫反应。虽然SFV质粒的细胞转化效率明显低于pCDNA载体 ,SFV -wtgag和SFV -syngag在细胞内Pr5 5 gag的表达量与 pC -syngag相似 ,而Pr5 5 gag病毒样颗粒的释放明显低于 pC -syngag。在肌内注射免疫的小鼠中 ,低剂量 (0 1和 1 0 μg)的SFV及 pCDNAgag表达质粒均未诱导出GAG特异性免疫反应。在高剂量 (10 ,30 ,10 0 μg)免疫组中 ,与SFVgag表达质粒相比 ,pC -syngag可诱导出较高水平的TH1型GAG特异性抗体。SFV -syngag较SFV -wtgag可诱导出高水平的体液免疫反应。结果提示 ,SFV衍生的复制子单独使用不能在小鼠诱导出优于传统DNA疫苗载体的HIV - 1GAG特异性?

中国人HIV-1感染相关的基因CCR5多态性检测和不同方法提取的基因组DNA的比较

目的 检测中国人基因组中HIV-1感染相关的特异性协同受体(CCR5)的基因多态性和比较提取人基因组DNA方法的优缺点。方法 我们分别用常规法和柱层析法从1219名中国人外周血PBMC中提取基因组DNA样品,对纯化后的DNA样品质量进行定性和定量分析;并对其基因组DNA中CCR5基因进行了PCR、Southern杂交和直接DNA测序等分析。结果 在中国人基因组中,检测的CCR5基因多态性是wt/wt 1 210例、wt/△32 3例,未检测到CCR5△32/△32纯合子突变,CCR5等位基因突变率为0.125％。常规法提取的基因组DNA所需的外周静脉血多(5ml);DNA的量较少且不稳定;操作步骤复杂。相反,QIAamp Boold Kit柱层析法提取DNA仅需要外周血200μl,可稳定地获得一定量的DNA,操作简便。结论 首次报道了中国人CCR5等位基因突变率是0.125％,提示我国绝大多数人群对嗜巨细胞HIV-1病毒的遗传易感性较高;同时证实试剂盒法提取的DNA更适合于CCR5基因多态性分析。

外周血HIV-1 DNA在艾滋病疗效评估中的应用

目的通过研究HIV感染者HIV-1 DNA与HIV-1 RNA及CD4^(+)T淋巴细胞间的关系,探讨外周血HIV-1 DNA在艾滋病疗效评估中的应用。方法筛选2018年6—9月贵州省贵阳市公共卫生救治中心的HIV感染者80例,采用面对面问卷调查收集患者资料,并采集患者K2EDTA抗凝血,完成CD4^(+)T淋巴细胞、HIV-1 RNA及HIV-1 DNA的检测并得出结果。通过SPSS等软件分析HIV感染者的病毒库水平,以及HIV-1 DNA与HIV临床分期、CD4^(+)T淋巴细计数及HIV-1 RNA的相关性。结果HIV感染者CD4^(+)T淋巴细胞数量越多,HIV-1 RNA含量越低,其全血中HIV-1 DNA的水平越低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HIV-1 DNA可反映抗逆转录病毒治疗(HAART)期间病毒库水平,提示疾病进展情况,评价治疗效果,可为贵州省艾滋病的治疗提供更精准的监测手段。

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答

目的 :检测表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答效果。方法 :将真核表达质粒pVAXGE肌肉注射BALB C小鼠 ,观察免疫小鼠脾T淋巴细胞亚群的数量、特异性CTL杀伤率及小鼠免疫后不同时间点血清中IgG抗体滴度。结果 :重组质粒pVAXGE免疫组小鼠脾淋巴细胞进行了增殖 ,脾特异性CTL杀伤率显著高于对照组 (P <0 0 1) ;小鼠免疫后于第 8周血清抗体达到最高。结论 :表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗质粒可诱导BALB

HIV-1融膜肽的编码DNA序列比较

通过分析GenBank中的全部 95个HIV 1完整基因组序列 ,设计融膜肽“探针序列” ,对所获得的 95段融膜肽的编码DNA序列进行了翻译、对准和分析。得到融膜肽及其编码序列的“优势序列”及突变分布。