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HIV-1 Nef通过Erk/Mapk途径调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达 被引量:3
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作者 杨凡 刘朝奇 +1 位作者 覃晓琳 史继静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期44-46,共3页
目的:研究HIV-1Nef基因对内皮细胞ECV304细胞ICAM-1表达的影响及其信号途径。方法:选用Nef基因稳定表达细胞株ECV304-Nef和对照细胞株ECV304pcDNA3.1(+),应用Westernblot分析ECV304-Nef细胞ERK的磷酸化水平,利用ERK磷酸化抑制剂通过West... 目的:研究HIV-1Nef基因对内皮细胞ECV304细胞ICAM-1表达的影响及其信号途径。方法:选用Nef基因稳定表达细胞株ECV304-Nef和对照细胞株ECV304pcDNA3.1(+),应用Westernblot分析ECV304-Nef细胞ERK的磷酸化水平,利用ERK磷酸化抑制剂通过Westernblot、流式细胞术分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平与信号分子ERK磷酸化的相关性。结果:Westernblot显示ECV304-Nef细胞ICAM-1和p-ERK蛋白的表达水平均高于对照组;流式细胞术检测结果表明ECV304-Nef细胞和对照组ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P<0.01)。加入p-ERK抑制剂PD98059后,ECV304-Nef细胞p-ERK水平被显著抑制,ICAM-1降至对照组水平,ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(11.4±1.1)%和(10.4±1.5)%(P>0.05)。结论:HIV-1Nef基因上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达与ERK信号分子磷酸化有关,为HIV-1感染的致病机制及临床治疗提供实验基础。 展开更多
关键词 hiv-1 nef ICAM-1 血管内皮细胞 信号转导
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早期半定量检测HIV-1 nef RNA的水平 被引量:1
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作者 姜拥军 康辉 +4 位作者 范霞 王亚男 尚红 Tylor Thacker 李莎 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期927-928,共2页
目的 早期半定量检测HIV - 1nefRNA。方法 以nef基因引物nef6 ,nef7和β-actin基因引物BA1,BA4 在同一反应体系中对标本进行逆转录聚合酶链反应 ,用BIO - 1D软件对条带密度进行分析 ,半定量测定HIV - 1nefRNA水平。结果 所试 7例实... 目的 早期半定量检测HIV - 1nefRNA。方法 以nef基因引物nef6 ,nef7和β-actin基因引物BA1,BA4 在同一反应体系中对标本进行逆转录聚合酶链反应 ,用BIO - 1D软件对条带密度进行分析 ,半定量测定HIV - 1nefRNA水平。结果 所试 7例实验标本均扩增出HIV - 1nef和 β -actin的基因产物。且通过BIO - 1D软件分析条带密度 ,判断艾滋病病毒感染情况。结论 该方法灵敏 ,简便 ,经济 。 展开更多
关键词 hiv-1nef 逆转录聚合酶链反应 半定量测定 艾滋病
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HCK SH3结构域与HIV-1 Nef蛋白体外结合活性的检测
3
作者 覃晓琳 刘朝奇 +1 位作者 任东明 周永芹 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期262-265,共4页
目的构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,检测原核表达的SH3蛋白的生物学活性。方法利用PCR方法扩增HCK SH3基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,转化E.coli DH5α,进行双酶切和测序鉴定。筛选阳... 目的构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,检测原核表达的SH3蛋白的生物学活性。方法利用PCR方法扩增HCK SH3基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,转化E.coli DH5α,进行双酶切和测序鉴定。筛选阳性质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质印迹检测,同时纯化SH3蛋白。表达并纯化HIV-1 Nef蛋白,利用GST pull-down方法检测SH3蛋白与Nef蛋白的结合活性。结果成功获得重组质粒pGEX-4T-1/SH3,测序正确,高效表达并纯化了SH3蛋白。GST pull-down实验结果显示SH3与HIV-1 Nef蛋白具有良好的结合活性。结论成功地克隆、表达和纯化了GST-SH3蛋白,SH3与Nef蛋白具有体外特异性结合活性,为进一步研究针对Nef与SH3结合的靶向药物的筛选提供了实验基础。 展开更多
关键词 hiv-1 nef基因产物 HCK基因 src同源域 结合活性
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HIV-1 Nef基因在THP-1细胞的表达和活性检测
4
作者 覃晓琳 刘朝奇 +2 位作者 任东明 韩莉 杨凡 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期842-845,849,共5页
目的将HIV-1 Nef基因转染THP-1细胞,获得稳定表达Nef蛋白的细胞克隆,为研究Nef对巨噬细胞生物学活性的影响奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3.1(+)-Nef和pcDNA3.1(+()阴性对照)转染THP-1细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western b... 目的将HIV-1 Nef基因转染THP-1细胞,获得稳定表达Nef蛋白的细胞克隆,为研究Nef对巨噬细胞生物学活性的影响奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3.1(+)-Nef和pcDNA3.1(+()阴性对照)转染THP-1细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、细胞免疫荧光等方法检测目的蛋白在真核细胞内的表达及定位,采用共转染法将荧光报告基因转染THP-1Nef和THP-13.1细胞,通过测定荧光(RLU)值来评价Nef蛋白的生物学活性。结果转染细胞经G418筛选后获得稳定表达Nef的THP-1细胞株,RT-PCR及Western blot结果表明Nef在真核细胞中成功表达,细胞免疫荧光结果显示,THP-1-Nef细胞表达的Nef蛋白主要定位于细胞质中。荧光酶标仪检测转染了HIV-1LTR-Luc和NFκB-Luc荧光报告基因的THP-1-Nef和THP-1-3.1细胞的RLU值。结论成功建立了THP-1-Nef细胞稳定表达细胞株,检测了其生物学活性,为进一步研究其作用机制实验奠定基础。 展开更多
关键词 hiv-1 nef THP-1细胞 稳定表达 荧光报告基因
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BCBL-1细胞重组表达HIV-1 Nef蛋白对重组IL-6启动子的影响
5
作者 赵丽娟 韦红玉 +1 位作者 唐华英 曾怡 《右江民族医学院学报》 2013年第6期752-754,共3页
目的探讨重组真核表达的HIV-1Nef蛋白对IL-6启动子活性的调节作用。方法将pNefF或pCI-neo与重组IL-6启动子虫荧光素酶报告质粒pIL6-Luc共转染BCBL-1细胞,同时用TPA刺激同样转染的BCBL-1细胞,于转染后24h、48h、72h、96h收集细胞,用Brigh... 目的探讨重组真核表达的HIV-1Nef蛋白对IL-6启动子活性的调节作用。方法将pNefF或pCI-neo与重组IL-6启动子虫荧光素酶报告质粒pIL6-Luc共转染BCBL-1细胞,同时用TPA刺激同样转染的BCBL-1细胞,于转染后24h、48h、72h、96h收集细胞,用Bright-Glo虫荧光素酶检测系统进行虫荧光素酶活性检测。结果未经TPA刺激的BCBL-1细胞中,转染96h时pNefF和pIL6-Luc共转染细胞中虫荧光素酶活性比pCI-neo和pIL6-Luc共转染细胞增加了3.66倍。BCBL-1细胞经TPA刺激后,转染96h时,pNefF和pIL6-Luc共转染细胞中虫荧光素酶下降1.72倍(P<0.05)。结论 Nef蛋白可在BCBL-1细胞内影响IL-6启动子活性。 展开更多
关键词 hiv-1 nef BCBL--1细胞 白细胞介素6
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分泌性HIV-1 Nef-EGFP融合蛋白表达载体的构建与鉴定
6
作者 郝婷婷 马新廷 +1 位作者 朱小飞 卢春 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2012年第1期14-18,共5页
目的:构建含有人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)负性调节因子(nega-tive regulation factor,Nef)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的重组融合蛋白分泌性表达载体,... 目的:构建含有人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)负性调节因子(nega-tive regulation factor,Nef)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的重组融合蛋白分泌性表达载体,并检测该融合蛋白在真核细胞中的表达及其在培养上清中分泌情况,为进一步研究Nef功能奠定基础。方法:利用PCR扩增出HIV-1 Nef和EGFP基因,插入到分泌性表达载体pSecTag2B中。构建的pSecTag2B-Nef-EGFP融合蛋白表达质粒,转染293T细胞,荧光显微镜下观测细胞中Nef-EGFP融合蛋白的表达。收集细胞及上清液,蛋白质印迹和ELISA法分别检测Nef-EGFP融合蛋白的表达及其分泌。结果:限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实,成功构建了含有Nef-EGFP基因的分泌性表达载体,该质粒转染293T细胞后,蛋白质印迹法能够检测到Nef-EGFP融合蛋白的表达条带,ELISA法检测上清液中目的蛋白分泌量为1.7 ng/ml。结论:成功构建含有Nef-EGFP的融合蛋白表达质粒,融合蛋白Nef-EGFP在293T细胞中获得表达,并能分泌到胞外。 展开更多
关键词 分泌性表达载体 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型负性调节因子 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白
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HIV-1Nef调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达 被引量:3
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作者 杨凡 刘朝奇 +3 位作者 覃晓琳 吕佰瑞 周永芹 韩钰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期197-201,共5页
目的研究HIV-1的调节基因Nef对ECV304细胞ICAM-1表达的影响,从而为分析HIV-1感染引起内皮细胞生物学活性的变化,以及为阐明Nef参与HIV-1致病的分子机制奠定基础。方法应用本实验室已经建立保存的HIV-1Nef基因在内皮细胞的稳定表达细胞株... 目的研究HIV-1的调节基因Nef对ECV304细胞ICAM-1表达的影响,从而为分析HIV-1感染引起内皮细胞生物学活性的变化,以及为阐明Nef参与HIV-1致病的分子机制奠定基础。方法应用本实验室已经建立保存的HIV-1Nef基因在内皮细胞的稳定表达细胞株ECV304-Nef和其阴性对照细胞株ECV304 pcDNA 3.1(+),通过RT-PCR、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot、FCM和细胞黏附试验分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平。结果 RT-PCR、real-time PCR结果显示ECV304-Nef细胞ICAM-1 mRNA表达水平明显升高,为对照组的(4.3±0.2)倍;Western blot结果示ECV304-Nef细胞I-CAM-1蛋白的表达水平高于对照组;FCM分析显示ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P<0.01),两组间ICAM-1表达有显著差异。细胞黏附实验观察到ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞数明显多于对照组,荧光仪定量分析结果显示ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞的荧光强度值显著高与对照组(P<0.05)。结论本实验证实了HIV-1Nef基因可以上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达。 展开更多
关键词 hiv-1 nef ICAM-1 血管内皮细胞
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HIV-1C亚型调控蛋白Nef在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 戴青 孙明 +3 位作者 周东霞 蒋国润 黄小琴 褚嘉祐 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期347-348,共2页
目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型调控蛋白Nef,为研制HIV疫苗寻找新的途径。方法通过PCR扩增,获得HIV-1C亚型Nef基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE和Westernblot分析表达... 目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型调控蛋白Nef,为研制HIV疫苗寻找新的途径。方法通过PCR扩增,获得HIV-1C亚型Nef基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。结果表达产物是相对分子质量为50000的GST融合蛋白,且能与p27单克隆抗体发生特异性反应。结论重组Nef蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒Ⅰ型 nef蛋白 原核表达
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HAD患者来源的HIV-1 Nef蛋白对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β细胞因子的影响
9
作者 李丹迪 秦泽明 +4 位作者 贺淑婷 温红玲 黄涛 张克胜 赵丽 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2021年第3期241-245,共5页
目的探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用。方法从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia,HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system,CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HI... 目的探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用。方法从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia,HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system,CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HIV-1 nef基因,与载体pcDNA3.1连接构建重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体,转染人神经胶质瘤细胞U87。转染后22 h、27 h、32 h、37 h和42 h经免疫组化法和Western blot检测Nef蛋白表达情况,采用JEDA801D和JD-801软件对结果进行半定量分析。转染后27 h~62 h,每间隔5 h收集U87细胞的培养上清,ELISA测定上清中两种细胞因子TNF-α和IL-1β的含量,分析两种细胞因子的动态表达情况。结果成功构建5株来自一例HAD患者不同部位组织的nef基因的重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体,转染U87细胞。免疫组化实验的结果显示,Nef蛋白在转染后42 h开始表达,Western blot进一步证实了这一结果。ELISA结果显示,转染后22 h、27 h、32 h、37 h,各组上清中细胞因子的含量随时间逐渐增多,但各组间的差异均无统计学意义(TNF-α:F=0.445,P=0.837;F=0.579,P=0.742;F=0.617,P=0.714;F=2.728,P=0.057。IL-1β:F=2.656,P=0.062;F=0.485,P=0.809;F=0.165,P=0.982;F=2.463,P=0.093);42 h后,各组细胞因子含量逐渐降低,57 h~62 h,TNF-α及IL-1β含量基本维持稳定;转染后42 h、47 h、52 h、57 h、62 h,实验组两种细胞因子的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(TNF-α:F=241.310,P<0.001;F=242.638,P<0.001;F=250.114,P<0.001;F=143.877,P<0.001;F=146.172,P<0.001。IL-1β:F=251.578,P<0.001;F=188.816,P<0.001;F=276.240,P<0.001;F=238.136,P<0.001;F=163.361,P<0.001),各对照组间或实验组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论HIV-1 Nef蛋白能诱导并增强U87细胞分泌TNF-α和IL-1β的能力,而HAD患者体内不同来源的HIV-1 Nef蛋白发生氨基酸变异对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β无影响。 展开更多
关键词 hiv-1 hiv-1相关痴呆 hiv-1 nef蛋白 TNF-Α IL-1Β
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HIV-1 Nef下调MHC—Ⅰ分子研究进展 被引量:2
10
作者 李杰 吴南屏 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2009年第4期255-258,共4页
HIV-1感染机体后,HIV-1 Nef可以下调患者体内受染CD4^+细胞表面MHC—Ⅰ分子,同时使受染细胞表面HIV-1抗原暴露水平降低,从而引起CILs识别该类受染细胞能力下降。这使得体内HIV-1躲避CTLs免疫应答和形成人体长期的慢性感染。Nef的这... HIV-1感染机体后,HIV-1 Nef可以下调患者体内受染CD4^+细胞表面MHC—Ⅰ分子,同时使受染细胞表面HIV-1抗原暴露水平降低,从而引起CILs识别该类受染细胞能力下降。这使得体内HIV-1躲避CTLs免疫应答和形成人体长期的慢性感染。Nef的这种功能与人体内HIV-1长期潜伏性有重要关系,对其深入研究可能为艾滋病治疗带来新的理论依据。此文就此进行相关综述。 展开更多
关键词 HW-1 调节机制 分子生物学 nef MHC—Ⅰ AP-1
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黑龙江省服刑人员HIV-1nef基因分析
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作者 王福祥 刘盛元 +4 位作者 林元龙 孙丽萍 荆明 钟敏 王滨有 《传染病信息》 2012年第6期343-346,共4页
目的研究黑龙江省服刑人员中HIV-1感染者病毒流行株的起源及其序列变异特征。方法采集黑龙江省16例感染HIV-1服刑人员的抗凝全血,分离血浆,用巢式聚合酶链反应对HIV-1附属基因(nef)进行扩增,并直接进行序列测定。应用BioEdit和MEGA软件... 目的研究黑龙江省服刑人员中HIV-1感染者病毒流行株的起源及其序列变异特征。方法采集黑龙江省16例感染HIV-1服刑人员的抗凝全血,分离血浆,用巢式聚合酶链反应对HIV-1附属基因(nef)进行扩增,并直接进行序列测定。应用BioEdit和MEGA软件进行序列及系统发育分析。结果系统进化树显示12例体内HIV的nef区序列属于泰国B亚型,3例属于重组型BC,1例属于重组亚型AE。各隔离株nef区的组内基因距离为13.53%。按传播途径分组,各组基因距离差异无统计学意义(P>0.05),表明nef区序列变异可能与传播途径无关。与国际标准株(HBX2)进行比较时,可发现某些nef序列的氨基酸变异。但是,大多数序列还是有较好的保守性。结论本组HIV-1病毒株可能有共同的起源,本文所讨论的氨基酸序列有望对nef功能区的未来研究提供参考信息。 展开更多
关键词 hiv-1 基因 nef 聚合酶链反应
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HIV-1及其nef蛋白存在有与正常人组织呈交叉反应的表位
12
作者 史良如 卫丹 +5 位作者 M.E.Schneider H.Th.Bruesster P.Wernet R.Schauder F.O.Gombert G.Jung 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期147-150,165,共5页
本文报导了从大量抗HIV-1结构蛋白单抗和抗nef肽、nef蛋白单抗中发现的HIV-1及其nef蛋白存在有与正常人组织呈交叉反应的表位。这些单抗的特异性为抗HIV-1 p55+p24;抗gp160+gp120+gp41;抗p18+p27;抗nef蛋白(表位为由LHGM组成的四个氨基... 本文报导了从大量抗HIV-1结构蛋白单抗和抗nef肽、nef蛋白单抗中发现的HIV-1及其nef蛋白存在有与正常人组织呈交叉反应的表位。这些单抗的特异性为抗HIV-1 p55+p24;抗gp160+gp120+gp41;抗p18+p27;抗nef蛋白(表位为由LHGM组成的四个氨基酸顺序)及抗nef蛋白肽(表位为由HPE或HPEY组成的氨基酸顺序)。它们与正常人扁桃体中的基质、血管内皮或平滑肌起反应。文中对AIDS病人自身免疫反应性进行了讨论。 展开更多
关键词 hiv-1 nef蛋白 单克隆抗体 艾滋病
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艾滋病痴呆综合征患者体内HIV-1 Nef氨基酸位点变异分析 被引量:2
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作者 贺淑婷 刘建伟 +5 位作者 温红玲 王志玉 宋艳艳 赵丽 迟媛媛 蒲双双 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期102-105,共4页
目的研究艾滋病痴呆综合征(ADC)患者体内不同部位HIV-1 nef基因变异导致氨基酸位点的改变,为研究ADC发病机制提供思路。方法克隆1例ADC病例尸检标本的外周(脾)和中枢神经系统(基底核、额叶灰质、脑膜、颞叶)共5个部位HIV-1 nef... 目的研究艾滋病痴呆综合征(ADC)患者体内不同部位HIV-1 nef基因变异导致氨基酸位点的改变,为研究ADC发病机制提供思路。方法克隆1例ADC病例尸检标本的外周(脾)和中枢神经系统(基底核、额叶灰质、脑膜、颞叶)共5个部位HIV-1 nef。基因并测序,利用Bioedit、MEGA4等生物学软件与HIV-1标准株HXB2Nef氨基酸序列进行比对,分析氨基酸位点变异情况。结果该ADC患者Nef蛋白某些氨基酸位点发生改变,且外周组织与中枢神经系统问及中枢神经系统不同部位问的变异情况不同,某些变异为外周和中枢所共有,某些变异仅发生在外周脾,而某些变异仅发生于中枢神经系统。这些变异可能不同程度地改变Nef蛋白某些生物学活性及功能,进而影响到HIV-1病毒的复制、感染及凋亡等。结论ADC患者体内的HIV-1 nef基因变异可导致Nef蛋白某些氨基酸位点改变,且可能对其生物学活性造成影响,这些变异是否与ADC的发病机制有关有待进-步研究。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1 hiv-1负调控因子 艾滋病痴呆综合征 氨基酸序列
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HAD及非HAD患者中枢神经系统来源的HIV-1 Nef蛋白对U87细胞自噬的影响 被引量:2
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作者 单晓宇 曹馨月 +5 位作者 郑文慧 郭帅志 温红玲 王志玉 黄涛 赵丽 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期7-11,共5页
目的研究HIV-1 Nef蛋白氨基酸位点变异对其抑制神经细胞自噬的影响,探讨Nef蛋白致中枢神经系统损伤的机制。方法分别扩增和克隆1例HIV相关性痴呆(HIV-associated dementia,HAD)患者(H)及1例非AIDS HAD患者(N)中枢神经系统颞叶(temporal ... 目的研究HIV-1 Nef蛋白氨基酸位点变异对其抑制神经细胞自噬的影响,探讨Nef蛋白致中枢神经系统损伤的机制。方法分别扩增和克隆1例HIV相关性痴呆(HIV-associated dementia,HAD)患者(H)及1例非AIDS HAD患者(N)中枢神经系统颞叶(temporal cortex,TC)部位的HIV-1 nef基因,进行序列分析,研究氨基酸位点变异;构建H-TC和N-TC来源的Nef真核表达载体p EGFP-N1-nef,并分别转染U87细胞,观察绿色荧光蛋白并初步判断Nef蛋白表达情况;同时Western blot检测U87细胞Nef蛋白及细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ、p62蛋白的表达,分析不同来源的Nef对U87细胞自噬的影响。结果PCR扩增并构建H-TC及N-TC nef基因克隆载体pMD-19T-nef,测序证实为HIV-1B亚型,氨基酸序列分析显示,H-TC与N-TC关键氨基酸位点存在差异;成功构建pEGFP-N1-nef重组质粒,在U87细胞内表达Nef蛋白,转染后48 h Nef蛋白表达量最高;Western blot结果分析表明,LC3-Ⅱ蛋白的表达量在组间的差异有统计学意义(F=11.764,P=0.001),两组细胞中LC3-Ⅱ含量较低,Western blot未能检测到。,空白组与空载体组之间LC3-Ⅱ的表达量差异无统计学意义(P=0.169),H-TC、N-TC及阳性对照CQ组LC3-Ⅱ表达升高,与空白对照或空载体相比,差异具有统计学意义(P=0.017,P=0.039,P=0.031),且H-TC组LC3-Ⅱ的表达量高于N-TC组(P=0.023);H-TC、N-TC及阳性对照CQ组p62蛋白的表达量较空白对照或空载体组有所升高,但组间差异无统计学意义(F=2.049,P=0.163)。结论HAD及非HAD患者中枢神经系统中HIV-1 Nef氨基酸位点存在差异,对U87细胞自噬的影响也因此不同,H-TC来源的Nef诱导自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达的能力更强。 展开更多
关键词 HIV相关性痴呆 hiv-1 nef 自噬标记蛋白LC3-Ⅱ 自噬标记蛋白p62
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HIV-1 Nef蛋白最新功能及其增强病毒感染性分子机理的研究进展 被引量:2
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作者 时静 张险峰 郑永辉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期113-120,共8页
Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症(AIDS)疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用。抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理... Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症(AIDS)疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用。抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理解这一附属蛋白的功能和其分子作用机制具有重要意义。Nef蛋白通过三个主要活性调节宿主细胞环境,增强病毒复制。下调细胞表面分子如CD4,MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ等的表达,使病毒逃逸宿主的免疫应答;通过调节T细胞的信号通路降低T细胞的活化,从而营造有利于病毒复制的环境;直接增强新生子代病毒粒子的感染性。这一功能的分子机制直到最近宿主限制性因子丝氨酸转运蛋白(SERINC5)的发现才得以明晰。本文总结了Nef的功能及其增强病毒感染性的最新研究进展,同时也归纳了SERINC5蛋白与Nef蛋白的相互作用的研究报道,为深入了解病毒复制机理,改善HIV-1防治方案提供新的理论线索。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(hiv-1) nef SERINC5 感染性
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重组HIV-1 CN54 Nef抗原的制备及鉴定
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作者 马涛 李鼎锋 +4 位作者 傅晶晶 李亮助 孙茂盛 刘勇 邵一鸣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期318-321,共4页
目的原核表达HIV-1CN54调控蛋白Nef,并进行纯化、复性及鉴定。方法将CN54 Nef基因克隆至pThio-HisA载体,构建非融合表达载体,转化大肠杆菌BL21 Codonplus-RIL,IPTG诱导表达,通过尿素梯度洗涤包涵体纯化Nef蛋白,透析复性。Western blot... 目的原核表达HIV-1CN54调控蛋白Nef,并进行纯化、复性及鉴定。方法将CN54 Nef基因克隆至pThio-HisA载体,构建非融合表达载体,转化大肠杆菌BL21 Codonplus-RIL,IPTG诱导表达,通过尿素梯度洗涤包涵体纯化Nef蛋白,透析复性。Western blot检测目的蛋白的特异性。结果Nef蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上。用尿素洗涤法可直接纯化Nef,纯度达到90%以上。Nef蛋白透析后溶解于PBS缓冲液中。Western blot检测显示了良好的特异性。结论HIV-1 CN54 Nef抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达,采用的纯化和复性Nef蛋白的工艺简便、快捷,为开发针对Nef基因的HIV-1疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 hiv-1/CN54 nef蛋白 DNA疫苗 原核表达
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Nef Mutations in Long-term Non-progressors from Former Plasma Donors Infected with HIV-1 Subtype B in China
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作者 SHU-HUA WANG HUI XING +4 位作者 XIANG HE FENG-XIA ZHU ZHE-FENG MENG Yu-HUA RUAN YI-MING SHAO 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2008年第6期485-491,共7页
Objective To study the specific amino acid variation in Nef that may be related to disease progression after infection with HIV-1 subtype B, a predominant strain circulating in China, and to determine whether changes ... Objective To study the specific amino acid variation in Nef that may be related to disease progression after infection with HIV-1 subtype B, a predominant strain circulating in China, and to determine whether changes in Nef secondary structure may influence different stages of AIDS development based on the concept that the Nef gene of HIV infection dramatically alter the severity of viral infection and virus replication and disease progression, and that long-term non-progressors (LTNP) of HIV infection are commonly associated with either a deletion of the Nef gene or the defective Nef alleles. Methods The study subjects were divided into LTNPI(n=14), LTNP2 (n=16) and slow progressor (SP, n=19) groups for mutational analysis of the Nef sequence. The data were obtained by using Bioedit, MEGA, Anthewin and SAS software. Results Residues in Nef TA48/49 and K151 occurred more frequently in the LTNP group while AA48/49 was more frequently observed in the SP group. Of the differences observed in the secondary structure comparison using Nef consensus sequences of these three groups, one was roughly corresponding to the Nef48/49 mutation site. Conclusion TA48/49, Kiss, and AA48/49 in the Nef gene might be associated with the different stages of HIV infection, and there may be a link between the Nef secondary structure and the progression of HIV- 1 infection. 展开更多
关键词 hiv-1 nef Long-term nonprogressors Sequence mutations Secondary structure prediction
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人类免疫缺陷病毒-1 nef诱导凋亡及下调人类白细胞抗原-I类分子
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作者 黄官友 黄秀艳 +2 位作者 曾耀英 曾祥凤 吴晓萍 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期250-253,共4页
【目的】研究人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 nef调节细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)-I类分子及诱导细胞凋亡情况。【方法】将293T细胞分为两组,用脂质体法将含HIV-1 nef基因的质粒及空载体分别转染细胞,Western blot检测HIV-1 nef在转染细胞... 【目的】研究人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 nef调节细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)-I类分子及诱导细胞凋亡情况。【方法】将293T细胞分为两组,用脂质体法将含HIV-1 nef基因的质粒及空载体分别转染细胞,Western blot检测HIV-1 nef在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子表达及细胞凋亡情况。【结果】HIV-1 nef在转染细胞中有表达。转染HIV-1 nef的细胞与转染空载体的细胞经抗HLA-A,B,C-FITC染色后,平均荧光强度分别为205±22及269±15,两者相比有显著性差异(P<0.01);经Annexin V-APC/PI染色后,阳性细胞百分率分别为(60.82±8.32)%及(8.12±5.43)%,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。【结论】HIV-1 nef下调细胞表面的HLA-I类分子及诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒-1 nef 人类白细胞抗原-Ⅰ类分子 凋亡 转染
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犬Serinc5对HIV-1复制能力影响的研究
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作者 林玉美 时静 +2 位作者 高雪 张险峰 郑永辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期182-185,共4页
丝氨酸整合因子5(Serinc5)是最新报道能够被携带到病毒粒子中的宿主限制性因子,具有抵抗人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染性的作用。与人Serinc5(hSerinc5)具有高度同源性的犬Serinc5存在两种形式,一种为全长基因组编码的犬Serinc5(cSeri... 丝氨酸整合因子5(Serinc5)是最新报道能够被携带到病毒粒子中的宿主限制性因子,具有抵抗人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染性的作用。与人Serinc5(hSerinc5)具有高度同源性的犬Serinc5存在两种形式,一种为全长基因组编码的犬Serinc5(cSerinc5),另一种为转录剪接体(cSerinc5X2),该剪接体在N端缺少1~37位氨基酸。为鉴定这两种犬Serinc5是否具有抑制HIV-1的复制能力,本研究从犬肾细胞系MDCK中提取犬总RNA,经RT-PCR分别扩增两种犬Serinc5的cDNA,并克隆到pcDNA3.1载体中,构建编码两种犬Serinc5的重组质粒。将这两种重组质粒分别与编码HIV-1野生型或Nef缺失型的质粒共转染293T细胞,收获所产生的HIV-1病毒粒子,通过ELISA方法检测到这两种犬Serinc5对HIV-1病毒粒子的产量无影响。进一步将病毒粒子分别感染TZM-bl细胞,通过荧光强度检测结果显示,与对照组相比,cSerinc5X2对HIV-1感染性无显著抑制作用,而携带cSerinc5的HIV-1感染性与携带cSerinc5X2的病毒和对照组相比降低约9倍(p<0.01),表明cSerinc5的N端对于病毒感染活性的抑制具有关键作用。本研究为鉴定Serinc5抗病毒的功能区提供实验依据。 展开更多
关键词 hiv-1病毒 犬Serinc5 跨膜蛋白nef 感染性 限制性因子
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非复制重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒Bostwana C亚型Nef蛋白及免疫效果的观察 被引量:2
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作者 辛伟 郭斐 +7 位作者 陆柔剑 王世峰 邓瑶 王文玲 张相民 李仁清 吕亦晨 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期97-103,共7页
从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)BostwanaC亚型全基因的质粒pJM4 HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southernblot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源... 从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)BostwanaC亚型全基因的质粒pJM4 HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southernblot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源细胞后,经Westernblot和免疫荧光检测表明,重组病毒能很好地表达Nef蛋白,并定位于细胞质中。NTVJ1175nef免疫BALB/c小鼠后,经Pep IFN ′γ Assay法检测,可诱导产生针对表位肽P1特异的可分泌IFN ′γ的CD+8T细胞(占脾细胞总数0 20%);经乳酸脱氢酶(LDH)法检测证实,诱导的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性地杀伤表位肽P1特异P815靶细胞。这些结果表明,NTVJ1175nef具有良好的细胞免疫原性,为下一步构建表达包含HIV早期抗原的多组分重组痘苗病毒候选疫苗奠定了免疫学基础。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 hiv-1 nef蛋白 细胞毒性T细胞 疫苗
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