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铁死亡在HIV-1 gp120 V3环致小胶质细胞炎症中的作用机制研究 被引量:1
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作者 干李梦 王琳琳 +6 位作者 左勤 颜学勤 潘锐 王会丽 唐海杰 付咏梅 董军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期819-826,共8页
目的:探讨人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)gp120 V3环致CHME-5小胶质细胞炎症反应与铁死亡的关系,并观察p53和铁死亡对该炎症反应的影响及可能机制。方法:体外培养人源CHME-5小胶质细胞,设立空白组、... 目的:探讨人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)gp120 V3环致CHME-5小胶质细胞炎症反应与铁死亡的关系,并观察p53和铁死亡对该炎症反应的影响及可能机制。方法:体外培养人源CHME-5小胶质细胞,设立空白组、随机肽段组、HIV-1 gp120 V3环组、HIV-1 gp120 V3环+ferrostatin-1(Fer-1;铁死亡抑制剂)组和HIV-1 gp120 V3环+pifithrin-α(p53抑制剂)组。分别采用HIV-1 gp120 V3环(终浓度2 mg/L)和随机肽段(终浓度2 mg/L)处理CHME-5细胞24 h;Fer-1(终浓度20μmol/L)和pifithrin-α(终浓度10μmol/L)预处理CHME-5细胞2 h,HIV-1 gp120 V3环(终浓度2 mg/L)再处理24 h。ELISA法检测各组细胞上清液中炎症因子水平;Western blot法检测铁死亡相关蛋白[转铁蛋白受体1(transferrin receptor-1,TFR-1)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]及p53的蛋白表达;酶标仪法检测细胞内亚铁离子(Fe2+)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果:(1)ELISA结果显示,与对照组相比,gp120 V3环组炎症因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平显著升高(P<0.01);与gp120 V3环组相比,gp120 V3环+Fer-1组和gp120 V3环+pifithrin-α组炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著下降(P<0.01);(2)Western blot结果显示,与对照组相比,gp120 V3环组蛋白p53显著上调(P<0.01),铁死亡相关蛋白TFR-1显著上调(P<0.01),SLC7A11和GPX4显著下调(P<0.01);与gp120 V3环组相比,gp120 V3环+pifithrin-α组铁死亡相关蛋白TFR-1显著下降(P<0.05),SLC7A11和GPX4蛋白显著升高(P<0.05);(3)与对照组相比,gp120 V3环组Fe2+含量显著增加(P<0.01),GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与gp120 V3环组相比,gp120 V3环+Fer-1组和gp120 V3环+pifithrin-α组Fe2+含量显著下降(P<0.05),GSH-Px活性显著升高(P<0.01)。结论:HIV-1 gp120 V3环致CHME-5小胶质细胞炎症中存在铁死亡,且抑制铁死亡能减轻炎症。HIV-1 gp120 V3环致CHME-5小胶质细胞炎症与p53蛋白调控铁死亡有关,抑制p53可减轻铁死亡和炎症反应。 展开更多
关键词 HIv相关神经认知障碍 hiv-1 gp120 v3 铁死亡 P53蛋白 神经炎症
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自噬对HIV-1gp120V3环介导的海马神经元L型钙离子通道电流的影响
2
作者 汪军兵 林丽清 +4 位作者 江明亮 陆大祥 陈桂玲 行妍妍 董军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1929-1933,共5页
目的:观察哺乳动物雷帕雷素靶蛋白(m TOR)依赖性自噬信号转导通路对HIV-1 gp120V3环介导的海马神经元L-型钙离子通道电流的影响。方法:取出生1 d内的乳鼠海马神经元原代培养7 d后用于实验。实验分为2个平行实验组,即空白对照组、gp120V... 目的:观察哺乳动物雷帕雷素靶蛋白(m TOR)依赖性自噬信号转导通路对HIV-1 gp120V3环介导的海马神经元L-型钙离子通道电流的影响。方法:取出生1 d内的乳鼠海马神经元原代培养7 d后用于实验。实验分为2个平行实验组,即空白对照组、gp120V3组、自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和gp120V3+3-MA组;空白对照组、gp120V3组、自噬激动剂雷帕雷素(rapamycin)组和gp120V3+rapamycin组。以膜片钳技术记录海马神经元的L型钙离子通道电流。结果:gp120V3组及3-MA组与空白对照组比较,L型钙离子通道电流密度增大(P<0.05);gp120V3+3-MA组与gp120V3组比较,L-型钙离子通道电流密度增大(P<0.05);rapamycin组与空白对照组比较,L型钙离子通道电流密度减小(P<0.05);gp120V3+rapamycin组与gp120V3组比较,L型钙离子通道电流密度减小(P<0.05)。结论:从电生理角度证明,自噬可能参与了HIV-1gp120V3环介导的海马神经元L型钙离子通道电流的改变。 展开更多
关键词 自噬 hiv-1 gp120v3 海马神经元 L型钙离子通道
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HIV-1膜蛋白gp120V3环的神经毒性研究
3
作者 张志丽 陈兵刚 +4 位作者 姜太一 乔录新 吴昊 陈德喜 张玉林 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第1期87-91,共5页
目的体外观察人类免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)膜蛋白gp120 V3环的神经毒性。方法通过小鼠大脑皮质原代神经细胞培养条件下TUNEL检测和培养上清乳酸脱氢酶释放试验,结合抗微管蛋白-2(microtubule associated p... 目的体外观察人类免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)膜蛋白gp120 V3环的神经毒性。方法通过小鼠大脑皮质原代神经细胞培养条件下TUNEL检测和培养上清乳酸脱氢酶释放试验,结合抗微管蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)免疫荧光试验,观察人重组gp120蛋白神经毒性,并通过蛋白印迹法初步探讨其与凋亡调控蛋白bax与bcl-2的关系。结果重组人gp120 V3环多肽可诱导神经元凋亡和抑制神经突起形成,并呈浓度依赖性。gp120 V3环诱导神经细胞凋亡与抑制bcl-2表达有关。结论 HIV-1膜蛋白gp120 V3环具有神经毒性。 展开更多
关键词 膜蛋白gp120 神经毒性 v3 凋亡
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p62/NF-κB通路调控HIV-1 gp120 V3环所致小鼠神经炎症的机制研究
4
作者 何翰阳 颜学勤 +7 位作者 温赛娴 干李梦 王琳琳 王会丽 唐海杰 潘锐 付咏梅 董军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期978-985,共8页
目的:探讨自噬关键蛋白p62在HIV-1 gp120 V3环所致小鼠神经炎症中的作用及相关信号分子机制。方法:野生型C57BL6小鼠随机分成4组:空白组、假手术组(人工脑脊液组)、模型组(gp120 V3环组)及gp120 V3环+NF-κB活化阻滞剂BAY 11-7082组,每... 目的:探讨自噬关键蛋白p62在HIV-1 gp120 V3环所致小鼠神经炎症中的作用及相关信号分子机制。方法:野生型C57BL6小鼠随机分成4组:空白组、假手术组(人工脑脊液组)、模型组(gp120 V3环组)及gp120 V3环+NF-κB活化阻滞剂BAY 11-7082组,每组12只。用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力;免疫荧光染色检测海马和皮层Iba-1表达水平;ELISA法检测海马和皮层炎症因子的表达水平;Western blot检测海马和皮层相关蛋白表达水平。结果:(1)Morris水迷宫结果显示,与空白组相比,模型组小鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.01),平台区域停留时间及穿越平台次数显著减少(P<0.05);与模型组相比,gp120 V3环+BAY 11-7082组小鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),平台区域停留时间及穿越平台次数显著增加(P<0.05)。(2)免疫荧光染色结果显示,与空白组相比,模型组海马和皮层Iba-1荧光强度显著增强(P<0.05);与模型组相比,gp120 V3环+BAY 11-7082组海马和皮层Iba-1荧光强度显著降低(P<0.05)。(3)ELISA结果显示,与空白组相比,模型组IL-1β、TNF-α和IL-6水平均显著上调(P<0.05);与模型组相比,gp120 V3环+BAY 11-7082组IL-1β、TNF-α和IL-6水平显著下调(P<0.05)。(4)Western blot结果显示,与空白组相比,模型组p62蛋白表达水平显著上调(P<0.01),p-p65/p65及p-IκB/IκB比值均显著升高(P<0.01);与模型组相比,gp120 V3环+BAY 11-7082组p62蛋白显著下调(P<0.05),p-p65/p65及p-IκB/IκB比值均显著下降(分别P<0.01和P<0.05)。结论:HIV-1 gp120 V3环所致小鼠学习记忆功能障碍的机制可能与通过激活p62/NF-κB信号通路引起神经炎症有关,p62-NF-κB正反馈环的抑制可能会减轻神经炎症。 展开更多
关键词 HIv相关神经认知障碍 hiv-1 gp120 v3 p62/NF-κB信号通路 神经炎症
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HIV-1 gp120 V3区的结构特征及其生物学功能
5
作者 田海军 蓝灿辉 +1 位作者 姜世勃 陈应华 《自然科学进展》 北大核心 2003年第1期11-14,共4页
研究表明HIV-1包膜蛋白gp120上的V3环在病毒结合到靶细胞的过程中起着重要的作用。这个区域中的几个氨基酸残基与gp120同辅受体的结合相关联,在HIV-1感染过程的早期,V3环在患者体内诱导针对HIV病毒的抗体应答,并被确定为主要中和决定簇... 研究表明HIV-1包膜蛋白gp120上的V3环在病毒结合到靶细胞的过程中起着重要的作用。这个区域中的几个氨基酸残基与gp120同辅受体的结合相关联,在HIV-1感染过程的早期,V3环在患者体内诱导针对HIV病毒的抗体应答,并被确定为主要中和决定簇。一些针对V3环的抗体具有广泛的中和活性,但是,V3环是HIV包膜蛋白的一个高变区,发生着广泛的变异,综述了V3环的结构特征和变异以及生物学功能,并对V3环的免疫反应进行了探讨。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合症 I型人免疫缺陷病毒 hiv-1 包膜蛋白gp120 v3 结构特征 生物学功能
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HIV-1B亚型gp120基因密码子优化前后免疫原性的比较 被引量:8
6
作者 余双庆 冯霞 +3 位作者 陈国敏 龚非 周玲 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期214-217,共4页
对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两... 对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两者免疫Balb/C小鼠后的抗体和CTL应答。Westernblot检测结果显示:优化后基因的体外表达量明显高于野生型基因,rAAV modgp120与rAAV wtgp120相比可更好地诱导Balb/C小鼠的CTL应答,但检测不到明显的抗体反应。由此得出结论,优化后gp120基因的体外表达量明显高于野生型基因,并且可以诱导更强的特异性CTL应答,但检测不到gp120抗体。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒I型 hiv-1 gp120 基因 密码子 免疫原性 重组腺伴随病毒
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HIV-1 GP120主要抗原性片段的制备及其在HIV诊断中的应用 被引量:6
7
作者 郝彦玲 张梦华 +6 位作者 黄云坚 袁国亮 陈佩 朱旭辉 傅晶晶 刘勇 邵一鸣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期64-67,共4页
目的研制HIV中国流行株RL42GP120主要抗原性片段,以便进一步开发HIV抗体检测试剂。方法克隆RL42毒株GP120蛋白C-端250个氨基酸的编码序列,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220进行表达。通过包涵体处理和离子交换层析纯化目的蛋白。将纯化后... 目的研制HIV中国流行株RL42GP120主要抗原性片段,以便进一步开发HIV抗体检测试剂。方法克隆RL42毒株GP120蛋白C-端250个氨基酸的编码序列,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220进行表达。通过包涵体处理和离子交换层析纯化目的蛋白。将纯化后的蛋白用狭缝电转技术转印硝酸纤维素膜,利用HIV参考品血清检测其灵敏度和特异性。结果目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的10%左右。纯化后其纯度高于95%,HIV参考品血清检测显示出良好的灵敏度和特异性,检测8份阳性临床标本无一漏检,而7份阴性临床标本无交叉反应。结论已研制出具有良好灵敏度和特异性的HIV-1GP120主要抗原性片段。为开发HIV抗体检测试剂创造了条件。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 主要抗原性片段 诊断
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HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
8
作者 楚鹰 宫祥丹 +5 位作者 高建伟 苏艾荣 陈德燕 宋红勇 吴喜林 吴稚伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期540-545,共6页
目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠... 目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1型(hiv-1) gp120可变区1/2 单克隆抗体 真核蛋白表达 疫苗
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HIV-1膜蛋白基因gp120和gp41的合成及在毕赤酵母中的表达 被引量:3
9
作者 洪国强 胡波 李朝霞 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期198-200,共3页
目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 g... 目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 gp120和gp41基因,构建分泌型重组质粒并转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HIV-1外膜糖蛋白gp120和gp41。结果DNA测序证实合成的HIV-1 gp120和gp41基因正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示gp120和gp41在毕赤酵母中高效分泌表达。结论gp120和gp41合成基因在毕赤酵母表达系统高效分泌表达。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 gp41 合成基因 毕赤酵母
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共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察 被引量:2
10
作者 江文正 金宁一 +2 位作者 李子健 张立树 韩文瑜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期337-341,共5页
为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示... 为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示 ,HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达 ,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性 ,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应 ,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV_1基因工程活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 白细胞介素18 鸡痘病毒 抗体 细胞毒T淋巴细胞
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抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达 被引量:2
11
作者 王宏 金宁一 +4 位作者 金洪涛 张立树 江文正 徐一鸣 连海 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第11期38-41,共4页
人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因,将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT,并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—S... 人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因,将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT,并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120,经条件优化,pBV—120和pBV—SL120分别在E.coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达,表达量分别占菌体总蛋白的27.673%和32.519%。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。 展开更多
关键词 gp120 原核 单链抗体 HIv1 hiv-1 基因 Bv 密码子 表达载体构建 融合蛋白
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HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达 被引量:1
12
作者 江文正 金宁一 +3 位作者 李子健 金洪涛 王宏 韩文瑜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期257-259,共3页
目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELIS... 目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。 展开更多
关键词 hiv-1 表面糖蛋白gp120 DNA疫苗 质粒 构建 表达 艾滋病
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共表达HIV-1 gp120与IFN-α重组鸡痘病毒诱导特异性CTL的初步研究 被引量:1
13
作者 江文正 金宁一 +2 位作者 李子健 张立树 金洪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期254-256,共3页
目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为... 目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为靶细胞,用乳酸脱氢酶释放法测定免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性。结果:重组病毒可有效地诱导特异性CTL的产生,且重组病毒免疫组小鼠脾特异性CTL对靶细胞的杀伤活性显著高于FPV对照组(P <0 .0 1)和PBS对照组(P <0. 0 1)。结论:共表达HIV- 1gp12 0和IFN -α的重组鸡痘病毒可激发强烈的细胞免疫,可作为我国HIV- 1疫苗候选株。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 重组鸡痘病毒 细胞毒性T淋巴细胞
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抗HIV-1 gp120单链抗体基因的克隆及序列测定 被引量:1
14
作者 王宏伟 金宁一 +2 位作者 许崇波 赵宝华 殷震 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期468-468,470,共2页
关键词 艾滋病 hiv-1gp120 单链抗体 克隆
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抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
15
作者 张永臣 文剑 +1 位作者 张亮 赵磊 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期26-28,31,共4页
目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫... 目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120抗原 原核表达 单克隆抗体 杂交瘤细胞
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姜黄素对gp120 V3环损伤大鼠海马神经元突触体的保护作用 被引量:1
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作者 龚正 唐红梅 +3 位作者 汪军兵 董军 杨丽娟 邓钦莹 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期127-132,共6页
目的:探讨姜黄素对gp120 V3环所致大鼠海马神经元突触体损伤的保护作用及其机制。方法:采用无血清培养法培养大鼠海马神经元,MTT法确定姜黄素神经元保护性剂量和gp120 V3环神经元毒性剂量。应用Fu-ra-2/AM钙离子探针检测各组突触体内Ca2... 目的:探讨姜黄素对gp120 V3环所致大鼠海马神经元突触体损伤的保护作用及其机制。方法:采用无血清培养法培养大鼠海马神经元,MTT法确定姜黄素神经元保护性剂量和gp120 V3环神经元毒性剂量。应用Fu-ra-2/AM钙离子探针检测各组突触体内Ca2+浓度,透射电镜观察突触体形态改变,体视学方法分析线粒体体密度Vvm、线粒体数密度Nm、线粒体的平均体积Vm。结果:浓度为1μmol/L的姜黄素在48h内对细胞的存活率无明显影响,浓度为2μmol/L的姜黄素作用12 h以及更高浓度,显著抑制细胞存活率(P<0.05);gp120 V3环对大鼠海马神经元的毒性具有时间依赖性,其中各浓度gp120 V3环在作用2~8h范围内对细胞存活率无明显影响,在作用12 h后细胞存活率显著降低(P<0.05),浓度为1 nmol/L的gp120 V3环作用24 h后细胞存活率降低为(85.3±2.8)%,因此采用浓度1 nmol/L gp120 V3环观察其对大鼠海马神经元突触体损伤效应。与对照组相比,gp120 V3环孵育的突触体内线粒体明显肿胀,Vvm、Nm、Vm增大,Ca2+浓度升高(P<0.01);与模型组相比,姜黄素+gp120 V3环组与尼莫地平+gp120 V3环组Vvm、Nm、Vm明显减小(P<0.01),Ca2+浓度降低(P<0.05),差异有统计学意义。姜黄素或尼莫地平单独作用于突触体对其形态及Ca2+浓度无影响。结论:姜黄素对大鼠海马神经元的药理作用具有浓度依赖性;gp120 V3环对大鼠海马神经元的损伤具有时间依赖性。姜黄素可减轻gp120 V3环导致的神经元突触体损伤,减小gp120 V3环引起的突触体内增大的线粒体Vvm、Nm、Vm,其机制可能抑制gp120 V3环过度激活的Ca2+通道,从而降低细胞内升高的Ca2+浓度。 展开更多
关键词 姜黄素 gp120 v3 海马神经元 突触体 CA2+ HIv相关神经认知紊乱
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HIV-1糖蛋白gp120激发人小胶质细胞钙内流效应和ERK磷酸化 被引量:1
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作者 黄秀艳 曾耀英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2439-2444,共6页
目的:探讨HIV-1糖蛋白gp120对人小胶质细胞钙离子内流和ERK磷酸化的作用及其机制。方法:用钙离子探针Fluo-4标记粘附在盖玻片上的人小胶质细胞,运用共聚焦显微镜以荧光强度为指标实时观察各种条件下的细胞内钙离子水平的变化;用gp120处... 目的:探讨HIV-1糖蛋白gp120对人小胶质细胞钙离子内流和ERK磷酸化的作用及其机制。方法:用钙离子探针Fluo-4标记粘附在盖玻片上的人小胶质细胞,运用共聚焦显微镜以荧光强度为指标实时观察各种条件下的细胞内钙离子水平的变化;用gp120处理并用anti-gp120-FITC进行染色,运用共聚焦显微镜术和流式细胞术分析人小胶质细胞与gp120结合情况;用抗磷酸化ERK抗体免疫荧光方法进行染色,运用共聚焦显微镜术和流式细胞术进行ERK磷酸化水平分析。结果:共聚焦显微镜检测结果显示HIV-1糖蛋白gp120能够激发人小胶质细胞钙离子内流效应;共聚焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示gp120可以与人小胶质细胞结合;共聚焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示gp120刺激可增加人小胶质细胞ERK磷酸化。结论:HIV-1糖蛋白gp120能在人小胶质细胞激发钙离子内流并且增加胞内ERK的磷酸化,从而导致了小胶质细胞的活化,这一效应提示,在HIV-1相关性脑炎中,gp120可能参与了某些发病机制。 展开更多
关键词 人小胶质细胞 hiv-1糖蛋白gp120 钙离子内流
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Curcumin improves synaptic plasticity impairment induced by HIV-1gp120 V3 loop
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作者 Ling-ling Shen Ming-liang Jiang +9 位作者 Si-si Liu Min-chun Cai Zhong-qiu Hong Li-qing Lin Yan-yan Xing Gui-lin Chen Rui Pan Li-juan Yang Ying Xu Jun Dong 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2015年第6期925-931,共7页
Curcumin has been shown to significantly improve spatial memory impairment induced by HIV-1 gp 120 V3 in rats, but the electrophysiological mechanism remains unknown. Using extracellular microelectrode recording techn... Curcumin has been shown to significantly improve spatial memory impairment induced by HIV-1 gp 120 V3 in rats, but the electrophysiological mechanism remains unknown. Using extracellular microelectrode recording techniques, this study confirmed that the gp120 V3 loop could suppress long-term potentiation in the rat hippocampal CA1 region and synaptic plasticity, and that curcumin could antagonize these inhibitory effects. Using a Fura-2/AM calcium ion probe, we found that curcumin resisted the effects of the gp120 V3 loop on hippocampal synaptosomes and decreased Ca2+ concentration in synaptosomes. This effect of curcumin was identical to nimodipine, suggesting that curcumin improved the inhibitory effects of gpl20 on synaptic plasticity, ameliorated damage caused to the central nervous system, and might be a potential neuroprotective drug. 展开更多
关键词 nerve regeneration CURCUMIN neurons hiv-1 gp l20 v3 loop plasticity hiv-associatedneurocognitive disorders output^input curve long-term potentiation excitatory postsynaptic potential paired-pulse facilitation Cd+ SYNAPTOSOME NSFC grants neural regeneration
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HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究
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作者 王莉馨 金宁一 +4 位作者 罗坤 秦云龙 王宏伟 郭志儒 殷震 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第2期8-11,共4页
将HIV 1中国流行株 gp12 0基因在痘苗病毒中进行表达 ,以期获得重组痘苗病毒 ,与核酸疫苗混合免疫 ,评价免疫效果 ,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV 1中国流行株 gp12 0基因片段插入到 pJ38载体启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴... 将HIV 1中国流行株 gp12 0基因在痘苗病毒中进行表达 ,以期获得重组痘苗病毒 ,与核酸疫苗混合免疫 ,评价免疫效果 ,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV 1中国流行株 gp12 0基因片段插入到 pJ38载体启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4 +、CD8+T细胞数目及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38gp12 0能够表达Gp12 0蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫 ,具有良好的免疫原性 ,其免疫效果以 2rVV DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp12 展开更多
关键词 hiv-1 中国流行株gp120 痘苗病毒 DNA疫苗 实验免疫
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HIV-1-gp120在重组杆状病毒系统中的表达
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作者 张应玖 金宁一 +4 位作者 王宏伟 张东威 邵一鸣 殷霞 沈家骢 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期7-8,11,共3页
将中国株HIV 1B亚型 gp1 2 0全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游 ,构建成重组转座载体 pFastBacI gp1 2 0 ,利用细菌 /杆状病毒 (BactoBac)表达系统筛选重组杆状病毒 ,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV 1的外膜... 将中国株HIV 1B亚型 gp1 2 0全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游 ,构建成重组转座载体 pFastBacI gp1 2 0 ,利用细菌 /杆状病毒 (BactoBac)表达系统筛选重组杆状病毒 ,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV 1的外膜糖蛋白 gp1 2 0 ,SDS -PAGE和Westernblot分析结果一致 ,证明表达了 2种糖基化程度不同的 gp1 2 0。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 杆状病毒 昆虫细胞 重组表达
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