不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA的干扰验证分析

目的探讨多重聚合酶链式反应(PCR)技术在献血者血液标本中不同浓度HBV DNA和(或)HIV-1 RNA对低浓度HCV RNA检测结果的影响。方法采用阴性血浆对HCV RNA标准物质、已定量的HBV DNA和HIV-1 RNA血浆进行稀释,配制成2种病毒或3种病毒的混合液,HCV RNA浓度稳定在20.4 IU/mL[该PCR检测系统95%平均检测下限(LoD)的3倍],HBV DNA浓度为20 IU/mL、200 IU/mL、2000 IU/mL和(或)HIV-1 RNA浓度为50 copies/mL、500 copies/mL、5000 copies/mL的混合液,同时设置对照组(只有3×LoD的HCV RNA溶液),模拟献血者血液样本,分别在Roche Cobas s201核酸检测系统进行单检模式和混样模式(与5个阴性标本混合)至少检测20次,统计分析不同浓度病毒核酸检测Ct值差异以及单检模式与混检模式的漏检率。结果不同浓度HIV-1 RNA和(或)HBV DNA在单检模式下对HCV RNA检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05);HCV RNA在单检模式下的Ct值中位数36.60(36.20,37.10)明显低于混检模式的Ct值39.30(38.60,40.00)(P<0.05),10个分组中HCV RNA在单检模式的漏检率均为0%,而在混检模式的平均漏检率为12.62%,差异有统计学意义(P<0.05);此外,浓度20 IU/mL的HBV DNA进行单检的漏检率为7.55%,进行混检的漏检率为81.4%;50 copies/mL的HIV-1 RNA和20.4 IU/mL的HCV RNA在单检时漏检率为0%,而混检漏检率分别为28.57%和12.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA结果无影响,但弱阳性HCV RNA、HBV DNA和HIV-1 RNA标本在单检模式下的漏检率低于混检模式,为提高血液安全,血液核酸检测应尽可能采用单检模式。

应用全自动核酸检测系统MPLC-COBAS筛查献血员HIV-1 RNA

目的建立一套全自动核酸检测系统筛检献血员艾滋病病毒1型(HIV-1)核糖核酸(RNA)。方法应用MagNAPureLC(MPLC)系统提取核酸,COBASAmplicor系统进行基因扩增与检测,再应用国际标准品和临床标本验证MPLC-COBAS系统。结果该系统的检测灵敏度(95%CI)HIV1RNA病毒为45～67IU/ml,5124份标本混样检测结果为阴性,81份HIV抗体(抗HIV)酶联免疫吸附试验(ELISA)假阳性混样检测结果及6份追踪样本核酸检测结果均为阴性。结论该系统具有全自动检测、灵敏度高、特异性好的特点,可进一步扩大临床标本检测量,探索出切实有效的核酸检测系统进行献血员筛查HIV1RNA。

HIV-1抗体不确定者37例的随访及治疗分析

目的分析人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)抗体不确定者的随访结果,为快速诊断和制定治疗方案提供依据。方法对2019-01~2020-06广西壮族自治区龙潭医院接诊的37例HIV-1抗体不确定者的临床资料进行整理,分析其诊断和治疗经过,归纳其临床特点。结果37例HIV-1抗体初筛阳性者的首次确认试验结果均判断为不确定,经过追踪随访及核酸检测,证实21例为HIV/AIDS患者,15例为HIV-1以外的其他疾病,1例未复诊。21例HIV/AIDS患者中合并机会性感染11例,无症状10例。经随访,21例HIV/AIDS患者从HIV-1抗体初筛阳性到HIV-1 WB确证阳性时间为70(40.0,152.5)d,从HIV-1抗体初筛阳性到核酸阳性时间10(2,15)d,两者差异有统计学意义(Z=4.318,P=0.000)。21例HIV/AIDS患者CD4+T淋巴细胞计数和初筛试验S/CO值分别为(191.10±154.55)/mm3、71.93(27.46,150.87),排除HIV-1感染者分别为(422.07±219.68)/mm3、1.53(1.30,1.98),两者差异均有统计学意义(P<0.05)。13例HIV/AIDS患者于该院接受抗逆转录病毒治疗(ART)6个月后,CD4+T淋巴细胞计数上升至(403.23±237.05)/mm3,病毒抑制率达92.31%。结论抗体检测仍是诊断HIV-1感染的主要方法,抗体结果不确定给HIV/AIDS诊断增加了难度。对HIV-1抗体结果不确定者应及时予以随访并进行确证试验或核酸检测,可为早诊断、早治疗提供证据。

新型冠状病毒20合1混采检测研究

目的研究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)样本20合1混采对检测结果的影响。方法取1、10、20份健康人咽拭子分别放入3、6、12 mL病毒保存液,充分混匀后加入SARS-CoV-2假病毒质控品,以模拟单采、10合1混采和20合1混采研究,经磁珠法提取核酸后,分别采用两种扩增试剂检测,比较不同采集方式对检测结果的影响;探索两种扩增试剂对低浓度样本检出能力。结果随着样本浓度的稀释,N和ORF1ab基因的Ct值均有不同程度的升高,0.76~1.35个循环;模拟单采、10合1混采和20合1混采检测500 copy/mL样本,N和ORF1ab基因的Ct值差异甚微,无统计学意义;两种扩增试剂对500、250 copy/mL样本检出率均为100.00%;其中一种扩增试剂对125、62.5、31.25 copy/mL样本N基因检出率分别为95.83%、79.17%、0.00%,ORF1ab基因的检出率分别为100.00%,100.00%、16.67%;另一种扩增试剂对125、62.5、31.25 copy/mL样本N基因检出率分别为100.00%,100.00%、33.33%,ORF1ab基因的检出率分别为100.00%,100.00%、54.17%。结论在扩增试剂盒声称的检测限范围内,20合1混采不影响样本检测结果。

重度地中海贫血患者接受基因治疗后出现HIV-1核酸检测结果假阳性1例

患者女,11岁,因患重度β型地中海贫血于2022年7月27日在深圳市儿童医院接受细胞与基因治疗(CGT)。出院后2次随访检测均发现患者的HIV-1病毒抗原及抗体筛查实验(化学发光法)结果呈阳性,2次HIV-1核酸定量试验病毒载量结果均>5000拷贝/ml,按照《全国艾滋病检测技术规范(2020年修订版)》可判定为HIV/AIDS感染。但经深入调查与比对实验发现:该患者HIV-1核酸检测结果异常,系其CGT治疗过程中自体造血干祖细胞基因组整合的慢病毒载体片段与现用HIV-1核酸检测试剂盒检测靶位点存在交叉反应所致,提示在对接受过CGT的人群进行HIV-1核酸检测时,需根据其所用基因工程载体选择合适的、不会引起交叉反应的检测平台。同时建议设计开发专门用于HIV核酸补充试验的采用多靶点不同荧光标记的检测平台,以降低艾滋病病毒感染的假阳性诊断风险。

HIV-1核酸检测在抗体确证不确定和阴性病例中的应用研究

目的明确上海市HIV抗体确证不确定或阴性病例中可通过HIV-1核酸检测进行诊断的感染者规模,探讨常规化开展核酸检测对增加感染者发现的价值。方法对上海市三家艾滋病检测确证实验室在HIV抗体确证检测中发现的136例不确定和210例阴性病例的检测余样(多来源分析)进行HIV-1核酸定量检测,结合样本来源进行分析;根据初步结果在某自愿咨询及检测点(VCT试点)开展HIV-1核酸检测工作试点,对抗体确证不确定和阴性样本进行HIV-1核酸定量检测、HIV-1 DNA定性检测,对可根据HIV-1病毒载量诊断的病例进行CD4^(+)T淋巴细胞检测。结果2021年2月—2022年2月多来源样本的HIV-1核酸定量检测结果显示:136例确证不确定样本中,24例(17.7%)超过5000 CPs/ml、2例(1.5%)检出但低于5000 CPs/ml;210例确证阴性样本中,4例(1.9%)超过5000 CPs/ml。VCT来源的抗体不确定病例病毒载量高于检测限的比例(85.7%)高于此外来源。根据上述结果,在2022年1—9月某VCT开展试点:84例HIV抗体筛查有反应的样本中,70例确证阳性;14例确证不确定或阴性者中8例(57.1%)可由核酸检测诊断,占同期病例报告数的10.3%。结论目前以HIV抗体确证为主要补充试验方法的框架下,有必要对确证不确定者进行HIV-1核酸检测。HIV-1核酸检测对VCT来源的HIV感染者发现有重要贡献,且包含核酸检测的工作流程在基层艾滋病确证实验室具有较强的可操作性。

2019—2022年泸州市HIV-1抗体阴性和不确定确证结果与核酸定量检测结果一致性分析

目的 分析HIV-1抗体阴性和不确定确证结果与HIV-1核酸定量检测结果的一致性,探讨抗体确证为HIV-1阴性和不确定血清标本进行核酸检测的必要性。方法 收集2019年1月至2022年6月抗体确证为HIV-1阴性和不确定的血清标本,进行HIV-1核酸定量检测,采用Excel 2013、SPSS 25.0软件进行描述性统计学分析,率的比较采用χ^(2)检验,检验水准(双侧检验)为0.05。结果 875份血清标本中有228份核酸定量检测大于5 000 Cps/ml,其年龄均值为56.39,男女比例为2.26∶1,46.93%(107/228)为大于50岁的男性血清标本;医院、疾控、妇幼机构的血清标本分别有35.64%(129/362)、24.01%(97/404)和1.83%(2/109)核酸定量检测大于5 000 Cps/ml;无论筛查S/CO数值高低及抗体确证检测情况,各组均有HIV-1核酸定量检测值大于5 000 Cps/ml的血清标本。结论 筛查S/CO值比较或抗体确证检测结果均不能完全有效区分是否感染HIV,使用灵敏度更高的筛查试剂进行初步的抗体筛查,再使用特异性更高的抗体确证试剂检测,HIV-1抗体阳性可以直接诊断HIV感染,而HIV-1抗体阴性和不确定血清标本再进行HIV核酸检测可最大程度的发现感染者,减少传播。

基于CRISPR均相电化学生物传感器检测SARS-CoV-2和HIV-1方法的建立

目的建立基于CRISPR-Cas13a系统的均相电化学生物传感器并用于病原微生物的核酸检测。方法通过逆转录-重组酶介导链替换核酸扩增技术(RT-RAA)对目标核酸进行扩增,经过体外转录后,激活Cas13a蛋白高效切割单链RNA的活性并对标记有亚甲基蓝(MB)的报告RNA进行剪切,构建CRISPR均相电化学生物传感器;通过遴选报告RNA上寡核苷酸的长度优化该传感器;利用该传感器检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RNA和Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)RNA,并对其检测性能进行评价。结果建立了一种基于CRISPR-Cas13a系统和RT-RAA等温扩增技术的均相电化学生物传感器,利该方法使用相对应的扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)后能稳定检测出低至10^(2)拷贝/μl的SARS-CoV-2 RNA和HIV-1 RNA,并与其他多种病原体未发生交叉反应。结论该基于CRISPR-Cas13a系统的均相电化学生物传感器具有制备简单、灵敏度高、特异性好和通用性强等优点,为病原微生物的现场快速检测提供了新的可行方案。

不同标本保存条件对人类免疫缺陷病毒核酸鉴别试验的影响

目的:评估保存时间和温度对低载量[3倍检测限(limit of detection,LOD)]和极低载量(0.5倍LOD)人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)阳性标本核酸检测(NAT)鉴别检出率的影响,选择适合的核酸鉴别检测前标本保存条件。方法:分别将60 IU/ml和5 IU/ml的HIV-1阳性标本于4℃、-20℃及-80℃的3种温度条件下保存7 d,以0 d保存标本的阳性检出率作为对照。当60 IU/ml标本保存0 d和7 d时以及5 IU/ml保存1 d、3 d和7 d时,使用Procleix Utrio Plus鉴别检测试剂对标本进行30次重复检测,记录和比较不同保存条件下HIV-1阳性标本的检出率及其变化趋势。结果:60 IU/ml HIV-1标本,在3种温度条件下0 d和7 d时HIV-1阳性检出率均为100%。5 IU/ml浓度的标本在0 d时均有50%以上的阳性检出率;保存3 d后,4℃内保存的标本阳性检出率下降至50%以下,-20℃及-80℃两个温度保存的标本的检出率虽有不同程度的下降,但仍保持50%以上的检出率;保存7 d后3种温度条件下标本的阳性检出率均明显下降,仅-80℃条件下阳性检出率与0 d对照一致,仍为56.67%,并且4℃条件下保存7 d的标本检出率与0 d的检出率比较,差异具有统计学意义(x^2=4.34,P<0.05)。结论:极低病毒载量(0.5倍LOD)的HIV-1阳性标本易受环境因素影响,应尽早完成核酸鉴别检测,如需保存应存放于-80℃条件下。

核酸检测用于诊断HIV-1抗体不确定和阴性感染者的可行性分析

目的 分析HIV抗体确证结果特征和明确HIV核酸检测意义,为艾滋病病毒感染诊断提供科学依据。方法 对2020年南充市HIV抗体确证检测结果为不确定和阴性者进行HIV核酸检测和追踪随访。结果 2020年全市接受抗体确证检测样本1 596份,阳性1 292份(80.95%),不确定132份(8.27%),阴性168份(10.53%)。结果为不确定和阴性者分别随访到52例和26例。52例不确定者中,抗体阳转23例(44.23%),抗体阴转2例(3.85%),抗体仍为不确定27例(51.92%);带型阳转构成比超过10%的有2种:gp160(8例)占15.38%;gp160,P24(9例)占17.31%。26例阴性者中,抗体阳转3例(11.54%),抗体仍为阴性22例(84.62%),抗体转为不确定1例(3.85%);5例仅出现P17条带抗体阳转1例(3.85%);21例无HIV病毒特异性条带阳转2例(7.69%)。52例结果为HIV抗体不确定的随访者对应首次样本HIV-1病毒载量(VL)检测,大于5 000 CPs/ml 27例(51.92%),20~5 000 CPs/ml 1例(1.92%),小于20 CPs/ml 24例(46.15%)。26例结果为HIV抗体阴性的随访者对应首次样本HIV-1 VL大于5 000 CPs/ml 3例(11.54%),小于20 CPs/ml 23例(88.46%)。78例随访者中,抗体阳转感染者首次VL均大于5 000 CPs/ml。结论 HIV抗体确证试验存在漏检,HIV核酸检测可有效缩短HIV窗口期;同时,建议对HIV抗体确证试验阴性者开展HIV核酸检测。

1例易漏检HIV-1早期感染病例分析

目的分析1例HIV-1感染病例初筛确证及核酸检测结果,为临床医生采取合理的治疗方案提供辅助诊断依据。方法选取1例HIV-1抗体初筛有反应,确证(WB)试验无带,核酸阳性的样本进行跟踪随访调查,结合流行病学史对该病例确定其感染状况。结果该病例第一次检测结果用初筛检测方法均为有反应性,确证检测方法均为无带,核酸结果21779220 CPs/ml,第2次23 d后随访结果,初筛试验均为有反应性,确证结果转阳,核酸减少100倍(213270 CPs/ml),CD4结果109个/μl。结论仅依据抗体确证检测结果出具HIV抗体阴性报告,有可能造成漏检。应将核酸检测方法和流行病学史结合,以便及时发现早期感染者,从而实现早发现、早诊断、早治疗的目标,有效预防和控制艾滋病的传播。

2014-2019年自贡市HIV-1抗体检测结果回顾性分析

目的通过对2014—2019年自贡市8286例人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)抗体检测结果进行回顾性分析,为本地区制定艾滋病防控策略提供科学依据。方法初筛试验阳性样本上送至自贡市疾控中心HIV确证实验室,使用免疫印迹法(Western blotting,WB)进行确证检测,人口学特征及结果使用SAS 9.2趋势分析软件和SPSS 19.0软件进行分析。结果2014—2019年共收到待确证样本8286份,其中HIV-1抗体阳性5963份(71.96%),HIV抗体阴性808份(9.75%),HIV-1抗体不确定560份(6.76%),既往阳性955份(11.53%),各年份间整体呈下降趋势(Z=-2.9048,P<0.05)。男性感染者占74.07%(4417/5963);≥50岁组阳性最多,占63.99%(3816/5963);文化程度以小学文化最多,占42.06%(2508/5963);婚姻状况以已婚为主,占58.14%(3467/5963);传播方式以异性传播为主,占90.94%(5423/5963)。疾控中心确证阳性构成比最高,为89.95%;医疗系统送检构成比最高,为61.10%。WB带型以gp160、gp120出现率最高,为100.00%,不确定带型以gp160出现率最高,为65.00%。结论随着报告年份的变化,HIV-1抗体确证检测结果阳性率呈下降趋势。应继续加强实验室质量管理,保证检测结果的可靠性,不确定结果的病例应结合核酸检测尽快明确诊断。

大理市HIV感染者中HCV感染状况的研究

目的探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者中丙型肝炎病毒(HCV)的混合感染率,并了解HCV对HIV-1感染者CD4+T细胞计数的影响。方法采用横断面研究方法,在云南大理市招募HIV-1感染者,分别采用血清学和核酸方法检测HCV混合感染。结果在526例HIV-1感染者中,静脉吸毒者占94.3%,其余为性途径感染。86.9%(457/526)为HCV血清学检测抗体阳性,其中HCV核酸阳性者占78.3%。在HCV血清学阴性的69例中,24例HCV RNA>1 000 IU/mL。由于引入HCV核酸检测方法,现场HCV混合感染的发现率增加了4.6%(24/526),所调查的HIV-1感染者中HCV混合感染率为91.4%。HCV混合感染者的CD4+T细胞计数明显低于HIV-1单纯感染者。结论在HCV感染的高流行区或髙危人群中,HCV与HIV-1共感染率较高。筛查HIV-1感染时应加强对HCV的检测,有助于对HCV感染进行早期诊断并开展HCV的早期治疗,减少HCV对HIV-1感染者的不利影响。

青岛市无偿献血者单人份核酸检测结果分析

目的了解青岛市血清学检测阴性的无偿献血者单人份核酸检测结果。方法在Chiron Procleix TIGRIS平台上,对98 953份血清学检测阴性的全血无偿献血者血液标本进行了单人份HBV/HCV/HIV-1三联检(Procleix Ultrio检测)。对核酸检测的结果进行统计分析。结果 98 953份HBsAg阴性的无偿献血者标本,Procleix Ultrio阳性152份,41份HBV DNA阳性,111份Procleix鉴别试验阴性,其中70份Ultrio再检,11份重复Ultrio阳性。结论核酸检测能增加血液筛查的检出率,降低输血残余风险率,保证血液安全。

HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充实验检测策略的临床应用评价

目的对艾滋病病毒（HIV）4代区分抗原抗体试剂筛查结合核酸定量补充实验的HIV检测策略临床应用进行评价。方法 2015年9月1日至2017年5月31日,HIV4代区分抗原抗体试剂筛查有反应的病例样本1 122例,用3代试剂双份复检、蛋白印迹法（WB）抗体确证,抗体不确定或阴性的样本采用核酸定量检测或随访检测。按2015版《全国艾滋病检测技术规范》中区分抗原抗体的抗体诊断策略对数据进行统计,分析4代试剂早期感染检出能力和HIV核酸定量检测作为补充实验的可行性。结果 1 122例样本中,非性病门诊筛查样本中,有反应的66例,均为Ag^-/Ab~＋;性病门诊筛查样本中,有反应的1 056例,其中4代试剂筛查Ag~＋/Ab~＋病例3例,Ag~＋/Ab^-32例。性病门诊的32例Ag~＋/Ab^-病例中,3代试剂Ab^-病例13例,占性病门诊初筛有反应病例的1.23%;26例进行了核酸定量检测,核酸检测率占81.3%（26/32）;抗体确证结果显示,WB阳性6例,WB阳性率为18.8%（6/32）。所有32例病例经WB抗体确证和/或核酸定量检测,结合CD4~＋T淋巴细胞和流行病史,均诊断为HIV感染。4代试剂筛查单独抗原有反应的,与HIV诊断阳性符合率为100%。按新的策略,共74例需进行核酸定量补充实验或随访检测,对补充实验选用核酸定量和随访的病例人数进行卡方检验,χ2=3.28,P=0.07,选择做核酸检测和随访检测的病例不具有统计学意义。结论 HIV区分抗原抗体试剂用作初筛结合核酸定量检测,作为补充实验的检测策略可提高HIV早期感染的检出率,在高危人群中具有推广的可行性,不同实验室宜根据检测对象的特点对HIV检测策略进行临床评估后选用。

使用四代HIV抗原抗体试剂筛查联合蛋白印迹或核酸补充实验的检测策略临床评价

目的对使用四代艾滋病病毒（HIV）抗原抗体试剂筛查,联合蛋白印迹试验（WB）或核酸补充实验的检测策略进行临床效果评价。方法第四代HIV抗原抗体检测试剂筛查阳性样本282例,采用第三代HIV抗体检测试剂复检,复检阳性样本进行WB确证,复检阴性样本同时进行WB检测及HIV核酸检测。结果 282例样本,经WB检测HIV抗体阳性195例,占69.1%,阴性71例,占25.2%,抗体不确定16例,占5.7%。71例WB阴性样本,HIV核酸检测阳性5例。16例WB不确定样本,经核酸检测阳性11例。四代阳性＋三代阳性样本206例中,WB确认为HIV抗体阳性195例,占94.7%;9例不确定样本的WB带型主要为p24gp160。四代阳性＋三代阴性样本76例,WB检测HIV抗体阴性69例,其中5例经核酸检测为阳性,核酸值均〉1×10^6拷贝/mL。结论四代阳性＋三代阳性样本,WB确证阳性符合率高;四代阳性＋三代阴性样本,WB检测存在漏检的问题,需要补充核酸试验确证。WB不确定样本,核酸检测可以实现早期诊断的目的。