蒺藜状苜蓿HK1的基因组解析

利用生物信息学的方法,从蒺藜状苜蓿的基因组中解析得到一个与拟南芥渗透胁迫感受器基因AtHK1同源的基因,命名为MtHK1,并对它的基因结构、蛋白基序、启动子区的顺式元件和基因的遗传进化进行了分析。结果显示,蒺藜状苜蓿基因MtHK1编码的蛋白具有组氨酸蛋白激酶的结构特征,而且在进化上与拟南芥的AtHK1分属同一个类群。从基因顺式反应元件分析来看,蒺藜状苜蓿基因MtHK1具有数个响应不同逆境和激素的顺式元件,预示这个基因在逆境响应和植物生长发育过程中具有一定功能。本文为下一步深入研究这个基因的生物学功能奠定了基础。

小鼠DNAJB13与HK1的相互作用

目的探讨小鼠DNAJB13与HK1是否具有相互作用。方法应用双酶切连接方法构建p GEX-4T-1/Dnajb13原核表达载体,测序验证;重组质粒转化感受态细胞DH5α,用IPTG诱导融合蛋白GST-DNAJB13表达,采用SDS-PAGE考马斯亮蓝染色和Western blotting分析蛋白和鉴定;提取小鼠睾丸蛋白,采用GST pull down检测DNAJB13与HK1是否具有相互作用。结果成功构建p GEX-4T-1-Dnajb13重组质粒,测序结果与标准序列一致;转化重组质粒的大肠杆菌在37℃,IPTG浓度1 mmol/L诱导下高效表达融合蛋白;GST pull down检测结果阳性,显示DNAJB13与HK1存在相互作用。结论在小鼠睾丸中,DNAJB13与HK1存在相互作用,可能参与精子形成和精子运动。

五十铃6HK1发动机典型故障分析及排除

简要的阐述了电喷柴油机的原理及共轨喷射技术,针对日立ZX330-3挖掘机上使用的五十铃6HK1电喷发动机的典型故障,进行重点分析并给出相应的解决方案。

Downregulation and CpG island hypermethylation of NES1/hK10 gene in the pathogenesis of human

The normal epithelial cell-specific-1(NES1)/Kallikrein 10 gene is proposed to be a novel putative tumor suppressor gene in several malignant diseases.The role of NES1 gene in gastric cancer has not been fully understood.Our study revealed that CpG island hypermethylation plays an important role in the downregulation of NES1 mRNA expression in gastric cancer.In situ hybridization showed that loss or reduction of NES1 mRNA expression is associated with differentiation level during tumor progression suggesting that NES1 inactivation might contribute to the malignant progression of human gastric cancers.

人工培养冬虫夏草胞外多糖的分离纯化研究

本文以乙醇沉淀法提取得到的人工培养冬虫夏草(Cs-HK1)粗胞外多糖为研究对象,采用DEAE-52纤维素(Cl-)离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进行分离、纯化得到一水溶性胞外多糖分EPS-1A。紫外光谱、比旋光度和凝胶渗透色谱法研究表明该多糖为相对均一组分,中性糖含量为99.0%,重均相对分子质量为4.0×104。多糖特征反应表明该多糖为非淀粉类,不含单糖、糖醛酸、蛋白质、核酸和多酚类物质的中性多糖。

一个番茄细胞分裂素受体类激酶基因的生物信息学分析

利用生物信息学的方法从番茄的基因组中解析得到一个与拟南芥渗透胁迫相关的细胞分裂素受体类激酶HK1高度同源的基因,命名为LeHK1,并对它的序列结构、蛋白基序、启动子区的顺式元件和基因的遗传进化进行了分析。结果显示,番茄基因LeHK1编码的蛋白具有组氨酸蛋白激酶的结构特征,而且在进化上与拟南芥的渗透胁迫感受基因AtHK1分属同一个类群。从基因顺式反应元件分析来看,番茄基因LeHK1具有多个响应不同环境信号如热、干旱、激素信号的顺式元件,预示这个基因在环境响应和植物生长发育过程中具有重要功能。

己糖激酶缺乏症1例报告并文献复习

目的探讨己糖激酶缺乏症的临床特点及基因变化。方法回顾分析1例己糖激酶缺乏症患儿的临床资料,并进行相关文献复习。结果男性患儿,6个月,临床表现为新生儿期高胆红素血症、非球形红细胞溶血性贫血、网织红细胞升高等。基因检查发现HK1存在2个杂合突变位点c.995+5G>A(内含子12)和c.2216G>C(外显子20);患儿父母均为复合杂合突变,c.995+5G>A来自父亲,c.2216G>C来自母亲。文献检索已有报道的32例患者,多表现为出生时贫血、新生儿黄疸及肝脾肿大,基因检测以HK1基因外显子和内含子核苷酸点突变为主。结论本例患儿为中国首例经基因检测确诊的已糖激酶缺乏症。临床疑似己糖激酶缺乏症时,应尽早进行基因检测。

NFE2L2对宫颈癌细胞系糖酵解关键酶及侵袭迁移的作用

目的探讨核因子E2相关因子2(NFE2L2)对宫颈癌迁移、侵袭及糖酵解中关键酶己糖激酶(HK1)、乳酸脱氢酶(LDHA)的影响。方法培养宫颈癌细胞株SiHa(鳞癌,HPV+)和C33a(鳞癌,HPV-),用人工合成的NFE2L2过表达载体(高表达组)转染宫颈癌SiHa,NFE2L2 siRNA(低表达组)转染C33a细胞株,将两者的空载组分别作为相应对照组。通过蛋白印迹法(Western blot)检测NFE2L2的本底表达,及转染后NFE2L2、HK1、LDHA蛋白水平相应改变。应用Transwell实验检测转染后NFE2L2在SiHa、C33a细胞侵袭迁移能力的变化。结果在本底检测中,C33a中NFE2L2蛋白表达水平较SiHa高,故将NFE2L2高表达慢病毒用于转染SiHa细胞,而低表达NFE2L2慢病毒转染C33a细胞。Western blot结果显示,与相应对照组比较,高表达NFE2L2组中HK1、LDHA的表达量增高(P<0.05),低表达NFE2L2组中HK1、LDHA的表达量降低(P<0.05)。迁移侵袭实验中,与相应对照组相比,NFE2L2高表达组SiHa细胞迁移的细胞数目和侵袭数目增加(P<0.05),NFE2L2低表达组C33a细胞迁移的细胞数目和侵袭数目减少(P<0.05)。结论NFE2L2增强糖酵解关键酶表达,促进宫颈癌SiHa、C33a细胞的侵袭迁移能力。

M/H_k/1排队系统性能指标的估计

应用EM算法,研究了M/Hk/1排队系统各参数的估计方法.给出了性能指标的极大似然估计.模拟结果表明:利用EM算法估计排队系统的性能指标是一种非常有效的方法,估值精度满足要求.

生产弹性和非弹性织物的HKS4-1四梳特里科经编机

卡尔·迈耶(Karl Mayer)纺机公司开发了一种新型的HKS4高速特里科经编机,它使用短动程复合针,机速达1 600r/min^2 000r/min,满足了纺织工业对生产弹性织物的四梳特里科经编机的高速度要求(机型代号中-1表示短动程复合针的动程)。新机型是在KS3机型基础上改进的,其动程更短,居于HKS3和HKS4机型之间,这种机器适应市场需求,也能生产非弹性织物。

1株海洋真菌产青霉酸的发酵优化研究

目的对1株海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6进行发酵优化,提高其代谢产物青霉酸的产量,以期获得足量的化合物研究青霉酸对水稻纹枯病菌的拮抗性。方法采用正交实验设计对真菌HK1-6产青霉酸的土豆液体培养基进行优化,采用高效液相色谱法对青霉酸产量进行定量分析。结果研究表明,真菌HK1-6高产青霉酸的土豆液体培养基各因素最优水平为葡萄糖30g·L^(-1),土豆200g·L^(-1),海盐10g·L^(-1),pH为4,产量可达0.908g·L^(-1),而原发酵条件下青霉酸产量约为0.423g·L^(-1)。结论真菌HK1-6采用最优土豆液体培养基发酵后,青霉酸的产量显著提高,产量较原培养条件提高约1.1倍。

Hsa-microRNA-138-5p抑制胃癌细胞增殖与糖代谢机制探讨

目的肿瘤细胞通过有氧糖酵解增加葡萄糖的消耗。现有研究表明,微小RNA(microRNA,miRNA)在调控肿瘤细胞糖代谢中也发挥重要作用。本研究探讨Hsa-miR-138-5p对胃癌细胞糖代谢的影响及其潜在的作用机制。方法选取2017-03-01-09-01符合入选标准的宁夏第三人民医院普通外科12例胃癌组织与相应癌旁标本,定量PCR检测miR-138-5p在胃癌组织及胃癌细胞系BGC-823和AGS中的表达水平。将miR-138-5p类似物(miR-138-5p mim-ics)与阴性对照(miR-NC)分别转染BGC-823和AGS细胞,通过CCK-8检测miR-138-5p对细胞增殖的影响;利用葡萄糖、乳酸、ATP检测试剂盒检测miR-138-5p对胃癌细胞糖代谢的影响。通过生物信息学预测及双荧光素酶报告基因和蛋白印迹实验检测miR-138-5p与己糖激酶1(hexokinase 1,HK1)基因的靶向调控关系。结果 miR-138-5p在12例胃癌组织中的表达水平(296.87±20.63)显著低于配对的癌旁组织(611.47±24.89),t=5.83,P=0.035;胃癌细胞BGC-823(4.60±0.82)和AGS(4.27±0.67)中miR-138-5p的表达水平低于正常人胃黏膜细胞GES-1(8.87±0.64),t值分别为7.32和9.69,均P=0.001。在BGC-823和AGS细胞中转染miR-138-5p mimics后72与96h,葡萄糖〔BGC-823的miR-138-5p(4.31±0.27)与miR-NC(5.58±0.65)比较,t=4.60,P=0.018;AGS的两者(4.01±0.44和5.27±0.64)比较,t=2.59,P=0.028〕、乳酸〔BGC-823的miR-138-5p(3.15±0.23)与miR-NC(4.78±0.32)比较,t=6.19,P=0.002;AGS的两者(3.63±0.30和5.44±0.39)比较,t=4.40,P=0.003〕及ATP水平〔BGC-823的miR-138-5p(0.08±0.01)与miR-NC(0.13±0.04)比较,t=2.64,P=0.009;AGS的两者(0.10±0.01和0.17±0.01)比较,t=5.13,P=0.002〕均低于转染miR-NC的阴性对照组。生物信息学软件预测HK1为miR-138-5p的候选靶基因。双荧光素酶报告基因检测显示,miR-138-5p mimics与野生型HK1载体共转染细胞后,荧光素酶活性(0.97±0.08)低于miR-NC与野生型HK1载体共转染组(1.79±0.08),t=13.51,P<0.001。蛋白印迹实验结果表明,miR-138-5p mimics转染BGC-823和AGS细胞中HK1蛋白的表达水平(62.61±9.44,59.51±10.32)低于miR-NC转染组(122.75±11.08,128.10±11.39),t值分别为3.68和11.50,P值分别为0.016和0.017。结论 miR-138-5p在胃癌组织和细胞中低表达,可抑制人胃癌细胞BGC-823和AGS的增殖与糖代谢,其机制可能是通过miR-138-5p直接靶定并负性调控HK1而实现。

红细胞己糖激酶缺乏症患者诊治的临床研究

目的 通过报道1例红细胞己糖激酶缺乏症患者的诊疗过程并复习相关文献,探讨基因测序及蛋白质构型研究在其诊断过程中的价值.方法 选择2016年5月23日于中山大学孙逸仙纪念医院儿科就诊并拟诊为红细胞己糖激酶缺乏症的1例患儿及其家系为研究对象.采用回顾性分析方法收集患儿相关临床资料.采用目标序列捕获和高通量第二代基因测序的方法筛查患儿致病基因,并且通过观察蛋白质三维结构的变化研究突变基因对己糖激酶功能的影响.结果 该患儿出生后存在慢性溶血性贫血.患儿DNA样本经高通量第二代基因测序结果显示,其10号染色体HK1基因第1号外显子第34位核苷酸由胞嘧啶突变为胸腺嘧啶,编码精氨酸的密码子突变为终止密码子：NM_033496：exon1：c.C34T：p.Arg12X,该突变为无义突变.经生物信息学分析和蛋白质功能模拟验证,证实该基因突变可导致肽链的合成提前终止,突变后合成的短肽不包含红细胞己糖激酶的结合基团和催化基团,导致酶的活性丧失.该患儿最终确诊为HK1基因突变所致红细胞己糖激酶缺乏性溶血性贫血.结论 在临床实践中,对于表现为慢性非球形红细胞性溶血性贫血的患者,需警惕红细胞己糖酶缺陷疾病.有条件者应行基因测序及蛋白质构型分析明确诊断.