类风湿关节炎患者HLA-DR_4与Th_1/Th_2细胞因子的平衡关系

目的了解类风湿关节炎(RA)患者HLA-DR4与Th1/Th2细胞因子平衡之间的关系,探讨HLA-DR4在RA患者免疫应答中的作用。方法分别用聚合酶链反应-序列特性引物基因扩增法(PCR-SSP)对98例RA患者进行HLA-DR4基因型鉴定,用酶联免疫吸附实验(ELISA方法)测定IL-4、INF-γ。以INF-γ/IL-4反映Th1/Th2免疫应答的强度。结果INF-γ、IL-4、INF-γ/IL-42组间比较有显著性差异(P<0.01)。RA组中HLA-DR4阳性与阴性组INF-γ、IL-4、INF-γ/IL-4、ESR、CRP比较均有显著性差异(P<0.01)。结论RA患者存在Th细胞分泌细胞因子失衡,失衡模式为Th1型细胞因子占优势,而Th2型细胞因子相对低下,其HLA-DR4阳性与阴性组比值失衡程度有显著性差异,且与病情活动性及严重程度相关。

多等位基因PCR-SSO反相杂交法及其在HLA-DR_4亚型结构分析中的应用

本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用PCR法对该基因位点进行扩增,扩增的同时加入α-^(32)P-dCTP以直接参入放射标记,然后将PCR产物与膜固定探针杂交,以四甲基氯化铵根据探针长度统一洗涤温度。该方法克服了以往对同一份样品进行多个等位基因检测时需要进行多次探针标记和杂交的缺点。我们用该方法对中国人群MHC-Ⅱ类DR4多等位基因进行了研究。

RA患者外周血HLA-DR4、PAD4、STAT4 mRNA表达及与疾病活动的相关性

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血人类白细胞抗原(HLA)-DR4、Ⅳ型肽精氨酸脱亚氨基酶(PAD4)、信号转导与转录激活因子4(STAT4)的表达及与RA病情活动的关系。方法患者来源于南方医院中医风湿科专科门诊及病房,根据DAS28评分分为活动期RA患者24例(DAS28≥2.6),缓解期RA患者14例(DAS28<2.6),以12例健康体检者为对照组,采用Quanti Gene Plex(QGB)方法测定外周血HLA-DR4、PAD4、STAT4 mRNA表达水平。分析RA患者HLA-DR4、PAD4、STAT4 mRNA表达水平及与病情活动程度、抗环瓜氨酸(抗-CCP)抗体、类风湿因子(RF)的关系。结果与对照组相比,活动期、缓解期RA HLA-DR4 mRNA表达均上调(P<0.05),但两者比较差异无统计学意义(P>0.05);活动期RA PAD4 mRNA表达水平高于缓解期RA和对照组(P<0.05),缓解期RA较对照组表达升高(P<0.05),活动期RA STAT4 mRNA表达水平高于缓解期RA和对照组(P<0.05),缓解期RA和对照组两组表达水平无明显差异(P>0.05);RA患者HLA-DR4 mRNA表达与DAS28、抗-CCP抗体、RF均无相关性(P>0.05);PAD4 mRNA表达与DAS28、抗-CCP抗体水平呈正相关(P<0.05),STAT4 mRNA表达与DAS28、RF呈正相关((P<0.05)。结论 1、RA患者外周血HLA-DR4、PAD4、STAT4基因表达上调;2、HLA-DR4 mRNA表达水平与RA活动性无明显相关;PAD4、STAT4 mRNA表达水平与疾病活动密切相关。检测PAD4、STAT4 mRNA表达水平有助于对RA疾病活动的判断。

新疆哈萨克族、汉族RA患者HLA-DR4等位基因及其与疾病活动的关联性研究

目的:探讨新疆哈萨克族、汉族类风湿关节炎(RA)患者的遗传易感基因的特点和其与临床及实验室指标的关系。方法:使用PCR-SSP方法检测新疆哈萨克族、汉族RA患者和健康者HLA-DR4的基因频率,分析其与RA临床、实验室指标之间的关系。结果:HLA-DR4等位基因在哈萨克族、汉族RA患者中出现频率均高于同族HC组(P<0.05或0.01),哈萨克族RA患者HLA-DR4阳性率高于汉族RA患者(P<0.01)。哈萨克族、汉族RA患者DR4阳性与DR4阴性患者发病年龄、病程、肿痛关节数、DAS28评分、ESR、CRP、RF、抗环瓜氯酸肽抗体、抗角蛋白抗体未发现有差异。哈萨克族HLA-DR4阳性患者出现早期骨破坏的发生率高于HLA-DR4阴性组(P<0.01)。结论:HLADR4是新疆哈萨克族、汉族RA患者主要的易感基因,哈萨克族患者中HLA-DR4阳性与骨破坏有关。

HLA-Ⅱ类基因DR_α及DRB_1 0401转基因小鼠模型的遗传与繁殖

采用类系祖建系的方法 ,对HLA -Ⅱ类基因DRα 和DRB1 0 4 0 1转基因小鼠模型进行了繁育。通过PCR和Southernblot分子杂交的方法 ,检测小鼠尾组织的DNA样品 ,以确定DR基因的整合和复制情况。结果表明 ,HLA -Ⅱ类基因DR已稳定地遗传至第五代(F5) ;共产仔 32 6只 ,PCR检测出阳性小鼠 95只 ,阳性率为 2 9.1 %。PCR—Southern印迹杂交检测 ,发现 68只仔鼠整合有DR基因 ,总有效率为 2 0 9%。经Nothern杂交和RT -PCR检测HLA -DR基因在脾脏和肾脏中均有表达。

广西壮族人群类风湿关节炎患者HLA-DR53、DR4基因及其与抗-CCP抗体的相关性研究

目的探讨广西壮族类风湿关节炎(RA)患者人类白细胞抗原(HLA)-DR53、DR4基因发生的频率数及其与抗-CCP抗体相关性。方法研究对象为49例RA患者及54例健康体检者,采用PCR-SSP法检测HLA-DR53、DR4基因;ELISA法检测抗-CCP抗体。结果 1DR4基因出现频率在RA患者与健康者相当(P>0.05)。2DR53基因出现频率在RA患者明显高于健康者(P<0.05)。3HLA-DR4基因阳性患者更易出现抗-CCP抗体阳性(P<0.05)。结论 1我区壮族人群DR4与RA的发病无相关。2DR4基因阳性RA患者更易出现抗-CCP抗体阳性。3DR53基因阳性RA者与抗-CCP抗体阳性无相关。

50例类风湿关节炎患者HLA-DR4基因检测及临床指标分析

目的了解宁夏地区类风湿关节炎患者HLA-DR4基因分布频率,以及类风湿关节炎临床指标。方法选取宁夏医科大学总医院收治的宁夏地区类风湿关节炎患者50例为病例组,同时期本院体检健康者50例为正常对照组,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)检测血液HLA-DR4基因分布频率,并检测血细胞[红细胞(WBC)、白细胞(RBC)、血小板(PLT)]计数、血红蛋白(HGB)、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、补体(C3、C4)、炎性指标[血沉(ESR)、超敏C反应蛋白(CRP)]以及双手X线片等相关实验室指标。结果宁夏地区50例类风湿关节炎患者中,HLA-DR4阳性患者26例,阴性患者24例,HLA-DR4表达频率(52%)高于正常对照组(14%),HLA-DR4基因阳性类风湿关节炎患者较阴性患者病程长(P<0.05)。结论 HLA-DR4可能为宁夏地区类风湿关节炎患者易感基因,HLA-DR4阳性类风湿关节炎患者病程更长。

Vogt-小柳原田综合征与HLA-DR4、DRw53相关的研究

目的 :探讨 HL A- DR4、HL A - DRw5 3抗原与 Vogt-小柳原田综合征的相关性。方法 :用聚合酶链反应一系列引物法对 6 1例 Vogt-小柳原田综合征和 10 2例健康人进行 HL A- DR4、HL A- DRw5 3分型。结果 :患者 HL A - DR4、HL A- DRw5 3阳性率分别为 45 .90 %和 6 2 .2 9% ,正常对照组阳性率则分别为 14.71%和 38.2 4% ,患者与正常对照组之间差异有显著性意义 ( P<0 .0 5 )。结论 :Vogt-小柳原田综合征与 HL A- DR4和 HL A- DRw 5

类风湿关节炎患者HLA-DR4/1亚型与抗环瓜氨酸肽抗体的关系

[目的]探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者HLA-DR4/1分子与血清抗环瓜氨酸肽(cyclic cit-rullinated peptide,CCP)抗体之间的关系。[方法]收集118例RA患者,以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对上述患者进行HLA-DR4/1分型,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测患者血清抗CCP抗体水平。[结果]在118例RA患者中,35例患者HLA-DR4阳性,其中DRB1*0405阳性20例;5例患者HLA-DR1阳性。在118例RA患者中,抗CCP抗体阳性有90例。其中,在40例HLA-DR4/1阳性的RA患者中,抗CCP抗体阳性的占82.5%(33/40);在其余78例HLA-DR4/1阴性RA患者中,73.1%(57/78)抗CCP抗体阳性。HLA-DR4/1阳性患者与HLA-DR4/1阴性患者抗CCP抗体的阳性率差异无统计学意义(P=0.255)。而20例HLA-DRB1*0405阳性的RA患者抗CCP抗体阳性者19例,HLA-DRB1*0405阳性RA患者抗CCP抗体阳性率高于其他HLA-DR4/1亚型阳性的RA患者,也高于HLA-DR4/1阴性患者。[结论]RA中HLA-DRB1*0405基因与抗CCP抗体具有一定的相关性。

中国拉祜族人HLA-DR4的快速DNA分型

应用扩增阻滞突变系统（ａｍ ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍ ｕｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ，ＡＲＭＳ）对１１０例云南拉祜族人进行ＨＬＡ－ＤＲ４基因分型，结果显示拉祜族人ＨＬＡ－ＤＲ４基因纯合子占４．５％ ，杂合子占１５．５％ ，非ＤＲ４占８０％ 。ＨＬＡ－ＤＲ４基因频率为０．１２２７，与我国已报道的北方、南方汉族和彝族ＨＬＡ－ＤＲ４频率基本一致，而与日本人、高加索人群存在显著差异。分型结果为人类学研究及ＨＬＡ 相关疾病研究提供了参考依据。

应用毛细管参考链介导的构象分析法进行HLA-DR4等位基因分型

目的 应用毛细管参考链构象分析法对HLA DR4进行等位基因分型,并与测序分型结果相比较,评价该方法的准确性及实用性。方法 首先应用FAM标记的引物扩增HLA DRB1等位基因为纯合型的样本DRB1 0 80 3、DRB1 0 90 1的第二外显子作为参考链,与标准样品HLA DRB1第二外显子杂交获得异源双链,借助测序仪通过毛细管电泳建立中国人HLA DR4 8个高频率等位基因的标准迁移率,再对30例DR4样本进行分型,并与测序分型法检测结果进行比较。结果 30例样本中2 8例与测序法测得的等位基因结果一致。结论 毛细管参考链介导的构象分析法具有准确性高、分辨率高的优势,与测序法相比具有成本低、高通量的特点,值得在移植、相关疾病等领域的HLA分型中推广应用。

HA308-317变构肽对HLA-DR4特异性T细胞活化的抑制作用

目的:研究流感病毒血凝素(HA) 30 8- 317变构肽对人类白细胞抗原(HLA) - DR4限制性Ⅱ型胶原(CII)特异性T细胞激活的抑制作用。方法:采用固相法合成3条HA30 8 317变构肽。流式细胞术分析HA30 8- 317变构肽与细胞表面HLA- DR4分子的结合作用;3H掺入法检测HA30 8- 317变构肽对CII2 6 3 2 72介导T细胞增殖的抑制作用;ELISA法检测上清液中IL- 2的水平;流式细胞术分析细胞表面CD2 5和CD6 9的表达情况。结果:HA30 8- 317变构肽能竞争性地抑制CII2 6 3 2 72与细胞表面HLA DR4分子的结合;HA30 8 317变构肽抑制了CII2 6 3 2 72诱导的T细胞增殖和IL 2的分泌;与CII2 6 3 2 72相比,HA30 8 -317变构肽诱导T细胞表面CD2 5或CD6 9的表达减弱。结论:替换HA30 8 317多肽中与T细胞受体结合的氨基酸形成的HA变构肽不改变其与HLA- DR4的结合能力,但它们抑制T细胞的活化。在T细胞介导的自身免疫病中,变构肽的应用可能是一种新的治疗策略。

白癜风与HLA-DR4相关性研究的meta分析

目的:汇总文献资料,探索白癜风与HLA-DR4之间的相关性及影响因素。方法:检索国内外文献数据库,提取相关文献中的数据,经汇总后,进行荟萃(meta)分析。结果:共获得有关文献9篇,其中共有白癜风患者478例,对照5 733例。Meta分析显示HLA-DR4在白癜风患者中的频率显著增高(OR=1.76,P=0.007)。文献无发表偏倚,但文献间有异质性。回归分析显示HLA-DR4与白癜风的相关性受到各文献中研究对象的数量及种族差异的影响。结论:白癜风与HLA-DR4之间可能存在相关性。由于文献间异质性的存在,这一相关性仍需要大样本量的研究加以证实。

HLA-DR4分子与抗类风湿性免疫活性肽构效关系的研究进展

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种自身免疫疾病,它和人类主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)的特异性表达有密切关系。其致病机理是MHC分子通过呈递內源或外源免疫活性肽,激活T淋巴细胞,从而引发关节滑膜炎症。研究发现,口服免疫活性肽可以降低RA的致病性,但其机制仍不清楚。因而本文从Anti Jen和相关数据库查阅了和RA相关的免疫活性肽,并结合免疫活性肽的氨基酸组成、带电性等性质深入研究其与MHC分子的构效关系。

使用PCR-SSP方法检测HLA-DR4抗原

目的:采用顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)建立人类白细胞抗原DR4位点的DNA分型方法。方法:合成特异性引物,组成PCR反应用于DR4位点,建立一步法PCR-SSP。结果:所有样本PCR-SSP基因分型获得成功,分型结果经标准DNA,限制性核酸内切酶分析证实符合,特异性和重复性100％。结论:PCR-SSP检测HLA—DR4的方法具有快速,准确,特异性高等优点,适合临床应用。

尪痹中医分型与HLA-DR4等位基因关系的研究

为探讨中国汉族人痹中医分型与人类白细胞抗原HLA -DR4等位基因的相关性 ,对 196名痹患者检测HLA -DR4等位基因 ,并根据其临床表现、舌脉等进行辨证分型。通过Excel 97建立数据库 ,用计算机进行统计分析。结果 :196名患者中HLA -DR4阳性者 110例 (阳性率为 5 6 1% )。风寒湿阻、风湿热郁、痰瘀互结、肝肾阴虚四型患者中HLA -DR4阳性率分别为 4 6 4 % ,5 1 2 % ,78 6 %和82 8% (P <0 0 5 )。提示痹中医分型与HLA -DR4等位基因相关 。

HLA-DR4、DR53与自身抗体检测在类风湿性关节炎的临床意义

目的研究在类风湿性关节炎中采取自身抗体、HLA-DR4、HLA-DR53检测的临床价值与意义。方法该次纳入分析的对象为2015年8月—2017年8月期间该院参与诊治的33例类风湿性关节炎患者,将其作为实验组,选取同期来该院进行体检的33名健康体检人员作为参照组,均实行自身抗体检测、HLA-DR4、HLA-DR53检测,比较两组受检人员的相关检测结果。结果实验组类风湿性关节炎患者HLA-DR53的54.54%、HLA-DR4的42.42%、ANA的63.63%、AKA的36.36%、anti-CCP的84.84%、APF的45.45%、anti-Sa的36.36%等对比参照组,差异有统计学意义(P<0.05)。检测类风湿性关节炎患者之后特异度最高指标为APF、anti-Sa、anti-CCP,约登指数与敏感性最高指标为anti-CCP。结论自身抗体检测与HLA-DR4、HLA-DR53检测之间的一致性比较高,采取联合检测,有利于临床诊断类风湿性关节炎疾病。

类风湿关节炎患者易感性与HLA-DR基因相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者易感性与HLA-DR基因的相关性。方法研究对象为75例RA患者及40例健康体检者,采用PCR-SSP法检测HLA-DR4和HLA-DR53基因分型、BNII全自动特定蛋白分析系统速率散射比浊法和乳胶凝集法同时定量和定性检测类风湿因子,并对结果进行回顾性分析。结果①RA患者HLA-DR4和HLA-DR53等位基因发生的频率数分别为44%和56%,与对照组比较均P<0.01,结果有非常显著性意义。组间比较,P>0.05结果无显著性意义,其DR基因与RA的相对危险率分别为3.70和2.64,HLA-DR4高于HLA-DR53。②75例RA患者其速率比浊法和乳胶凝集法分别有59例阳性和44例阳性,两法经χ2检验,结果均P<0.01,有非常显著性意义;组间比较经χ2检验,P<0.05有显著性意义说明速率比浊法好于乳胶凝集法。③75例类风湿性关节炎患者速率比浊法检测结果为198.59±379.21IU/ml,同对照组比较经t检验,P<0.01结果有非常显著性意义。结论RA患者其HLA-DR基因与RA的发生易感性明显有关,为临床诊断和鉴别诊断提供依据。

类风湿关节炎患者人类白细胞抗原-DR4/1表型与Ⅱ型胶原特异性T细胞增殖及血清Ⅱ型胶原抗体的关系

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者HLA-DR4/1表型与Ⅱ型胶原(CⅡ)263-272多肽特异性T细胞增殖和血清CⅡ263-272抗体之间的关系。方法将CⅡ263-272多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5天,用3H参入法测定T细胞增殖,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者血清CⅡ263-272抗体水平。以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对上述患者进行HLA-DR分型。结果在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性,43例HLA-DR4/1表型阴性。在HLA-DR4/1表型阳性的RA患者中,CⅡ263-272多肽可刺激T细胞增殖的有15例(55.6%),12例(44.4%)呈无反应性;18例(66.7%)患者抗CⅡ263-272抗体阳性。而在HLA-DR4/1表型阴性的RA患者中,T细胞对CⅡ263-272多肽有反应性者13例(30.3%),无反应性者30例(69.7%);15例(34.8%)RA患者抗CⅡ263-272抗体阳性。HLA-DR4/1表型阳性组CⅡ263-272特异性细胞增殖和CⅡ263-272抗体生成均高于HLA-DR4/1表型阴性组。结论RA患者CⅡ263-272特异性T细胞增殖和CⅡ263-272抗体生成与HLA-DR4/1表型有关。

PCR－SSCP用于HLA－DR4等位基因多态性研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术，分析了８例已知ＤＲ４等位基因型的个体，其中７例不同基因型的样本ＳＳＣＰ图谱有明显区别，２例均为ＤＲＢ１＊０４１０的样本，ＳＳＣＰ图谱则完全一致。笔者着重探讨了影响ＳＳＣＰ分析的主要因素：聚丙烯酰胺凝胶浓度和交联度，凝胶中是否含甘油，电泳温度、电流或电压大小等。提示ＰＣＲ－ＳＳＣＰ可用于研究ＨＬＡ的微观多态性、器官移植的配型及法医学上个体识别等方面，具有简便，快速、经济以及高度的分辨力和良好的重复性。