分泌抗HLA Class Ⅰ单态性单克隆抗体杂交瘤细胞的建株和鉴定

本文报道了应用杂交瘤技术制备抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,命名为CJH-F6,经流式细胞间接免疫荧光分析,放射免疫沉淀 SDS-PAGE 测定,微量淋巴细胞毒实验和血小板吸收试验均证明为抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,Ig 类别为 IgM,文内讨论了此单抗的应用。

卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子表达异常和TAP,LMP基因表达的关系

目的:肿瘤细胞表达MHCⅠ类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL进行肿瘤免疫治疗的关键,肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达异常是肿瘤逃脱免疫监视的重要机制.我们探讨了卵巢癌细胞HLAⅠ类分子表达异常的分子基础.方法:本文以West-ern blot、免疫组化和流式细胞术检测卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子的表达,以RT-PCR检测TAP,IMP基因的表达,探讨肿瘤细胞HLA Ⅰ类分子表达异常的分子基础.结果:卵巢癌中HLA Ⅰ类分子表达异常相当普遍(5/8),并涉及抗原加工相关基因TAP,LMP基因表达异常.25℃培养肿瘤细胞可部分诱导Ⅰ类分子的表达;结论:卵巢癌HLA Ⅰ类分子表达异常与其Ⅰ类抗原加工途径异常有关.

胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类分子表达降低的机制研究

目的:探讨胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类抗原表达水平异常的分子机制。方法:以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照,利用流式细胞仪检测细胞表面HLA-Ⅰ类复合物的表达情况,W estern b lot检测HLA-Ⅰ类分子重链及轻链表达情况,半定量RT-PCR检测HLA-Ⅰ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况,并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性。结果:胃癌细胞系MKN表面HLA-Ⅰ类复合物表达降低,重链A及B/C位点蛋白无表达而轻链表达无异常。在mRNA水平,胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失。微卫星DNA扩增结果初步显示,MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失。结论:胃癌细胞系MKN HLA-Ⅰ类分子复合物表达降低可能是由HLA-Ⅰ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的。

中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA-Ⅰ类抗原之间的相关性(英文)

目的 :探讨中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA Ⅰ类抗原之间的相关性 ,找出白血病的易感基因。方法 :采用特异性寡核苷酸探针杂交 (PCR SSO)法 ,初步对 4 3名白血病病人和 6 6名健康对照进行了HLA Ⅰ抗原分型。结果 :经过SSPS 10 0统计软件分析 ,中国甘肃地区汉族白血病患者HLA A 0 1和HLA A 11基因的统计结果分别为X2 =6 35 0 ,P =0 0 2 8、X2 =5 5 74 ,P =0 0 18。显示相关性。结论 :中国甘肃地区汉族人群中HLA A 0 1和HLA A

肝癌组织中HLAⅠ类抗原及相关分子的表达

目的研究在抗原提呈过程中HLAⅠ类抗原各相关分子的表达水平及临床意义。方法利用免疫组织化学法(ABC法)对165例肝癌的石蜡组织标本中HLAⅠ类分子的重链、轻链及抗原提呈相关分子calnexin、LMP2等的表达情况进行研究,并分析各表达分子的相关性。结果HLAⅠ类分子(A和B/C位点)的表达为膜型,β_2M的表达为膜浆型,以膜为主,而LMP2和calnexin的表达为浆型。肝癌组织除LMP2分子外,HLAⅠ类各分子均有明显的上调(上调率≥40%),其中以HLAⅠ类分子A位点上调最明显(54%)。肝癌组织中HLAⅠ类各分子之间表达趋势一致。结论肝癌表面HLAⅠ类分子表达增加与抗原提呈过程中多分子的表达增加和协同作用有关,而并非由其中某种单一分子的改变来决定。

γ-干扰素基因的导入及删除对人肿瘤细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达的影响

目的：制备有效的细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为“瘤苗”。方法：用缺陷型逆转录病毒作为载体将人γ－干扰素（ＩＦ－γ）含信号肽ｃＤＮＡ转导入人胃癌细胞株ＭＫＮ、４５，经Ｇ４１８筛选后得－ＩＦＮ－γ基因修饰株ＭＫＮ－４５－ＩＦＮ。ＰＣＲ方法测得有标记基因ＮｅｏＲ及ＩＦＮ－γ基因的存在，但经３个月连续传代培养后，ＰＣＲ仅能检测到ＮｅｏＲ基因，而未检出ＩＦＮ－γ基因、ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类单抗间接免疫荧光法流式细胞仪测定了上述相应时期ＩＦＮ－γ基因修饰肿瘤细胞ＨＬＡ－Ｉ、Ⅱ类抗原的表达。结果：随着ＩＦＮ－γ基因在染色体中被删除，ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类的表达又恢复至与ＭＫＮ－４５相同的水平。结论：为确保ＩＦＮ－γ基因的作用，应不断检测其基因的存在。

HBV野生株及C区突变株调节HLA-Ⅰ表达的作用

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)及其C区突变对机体人类白细胞抗原-Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响和机制。方法构建HBVC区突变株G87、V60的真核表达载体,转染HepG2细胞,检测转染细胞中HLA-Ⅰ的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1和tapasin的mRNA表达。结果各转染细胞株均能有效表达HBsAg;各转染细胞株均有HLA-Ⅰ表达,野生株略高于C区突变株G87、V60;TAP1mRNA表达上调,LMP和tapasinmRNA均未见明显表达。结论HBV能诱导HepG2细胞内HLA-Ⅰ分子的合成,使TAP1基因转录增强,HLA-Ⅰ的表达上调。相对于HBV野生株而言,C区突变株G87、V60使宿主细胞内HLA-ⅠmRNA及其蛋白的表达水平降低。

肺癌病人自然杀伤细胞活性改变与HLA Ⅰ类无关联

目的 研究发现控制自然杀伤 (NK)细胞低活性的基因与HLAⅠ类基因相关联。在此基础上 ,检测肺癌病人NK细胞活性和HLAⅠ类抗原 ,以期发现肺癌的HLAⅠ类基因分布的特点及其与NK细胞活性的关系。方法 采用国际标准的微量细胞毒分型方法对 46例肺癌病人和 34例正常人对照进行HLA A、 B分型 ;采用乳酸脱氢酶释放法测定其NK细胞活性 ;数据的统计学处理采用t′检验及卡方检验或Fisher精确概率法。另外 ,46例肺癌病人与已知其单倍型的96例正常人进行了传统的疾病关联分析。结果 发现肺癌病人的NK细胞活性 (4 1.87± 2 5 .44 )明显低于对照组 (6 2 .6 5±47.5 0 ) ,t′=2 .32 ,P <0 .0 5。肺癌病人NK细胞活性下降与HLA的型别分布无关 ,肺癌与HLA A , B抗原均无显著关联。

免疫抑制酸性蛋白与HLA－Ⅰ类分子在胃癌组织中的表达及其关系

本文应用抗ＨＬＡ－Ⅰ类重链单态决定簇和抗免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型（ＩＡＰ－２）单克隆抗体，分别对６４例胃癌、癌旁组织和６例正常胃粘膜冰冻和石蜡切片进行了免疫组化分析。结果表明，正常胃粘膜及癌旁上皮细胞ＩＡＰ－２表达阴性，ＨＬＡ－Ⅰ类分子表达阳性。但在胃癌组织Ⅰ类分子表达缺失（４２．２％），ＩＡＰ－２表达阳性（９０．５％）。其中肿瘤分化程度与Ⅰ类分子缺失和ＩＡＰ－２高表达均呈负相关，即分化程度越低，Ⅰ类分子缺失率越高，ＩＡＰ－２表达阳性率亦越高。提示：①ＨＬＡ－Ⅰ类分子表达缺失可能是胃癌细胞逃避宿主免疫监视而得以生长、扩散和转移的机理之一；②ＩＡＰ－２的高表达可能是胃癌细胞引起宿主免疫抑制的重要因素。

人群HBV易感性与HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因相关性研究

[目的]探讨人类白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类基因与乙型肝炎病毒（HBV）感染的相关性。[方法]2003～2004年，采用PCR-SSP方法对青岛市178例HBV感染者（实验组）和1383名无血缘关系的自愿骨髓捐献者（对照组）分别进行HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因分型检测。[结果]HLA-DR9、DR12的分布频率在实验组为30．9％（55／178）和28．0％（50／178），在对照组为20．7％（286／1383）和19．5％（270／1383）（P〈0．01）。[结论]HLA—DR9、DR12有助于HBV对宿主的感染，可能是HBV的易感基因。

HLA-Ⅰ类抗原在喉癌中的表达及意义

目的:研究HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化方法检测HLA-I类抗原在40例喉癌组织及癌旁正常组织中的表达。结果:HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中表达下调比例60%,缺失比例17.5%。有转移淋巴结组与无转移淋巴结组之间差异存在统计学意义。结论:HLA-Ⅰ类抗原在喉癌组织中表达下调或缺失,可能与淋巴结转移相关。

HLA-Ⅰ类分子与非小细胞肺癌的免疫治疗

通过分析HLA-Ⅰ类分子与肿瘤免疫逃逸的关系及其在非小细胞肺癌癌组织中的表达,来探讨HLA-Ⅰ类分子与与非小细胞肺癌的免疫治疗的关系。结果表明在考虑非小细胞肺癌免疫治疗方案时必须考虑癌组织HLA-Ⅰ分子表达状况,并据此选择合适的免疫治疗方案。

沙眼衣原体感染对Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达的影响

目的 探讨沙眼衣原体 (Ct)感染对上皮细胞系Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达的影响。方法 用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法 ,对感染Ct的Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达水平进行检测。结果 Ct感染的Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降 ,并且IL 10抗体能部分抑制这种下降。结论 Ct感染可下调Hela细胞HLA Ⅰ类分子表达 ,下调与感染过程中分泌的IL 10有关 。

各型乙型肝炎HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原免疫组织化学研究

用免疫组织化学桥联酶标APAAP法和PAP法对各型乙型肝炎113例检测了肝内的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原、T细胞亚群、HBsAg和HBcAg,同时测定血清HBV DNA(斑点杂交)和β_2微球蛋白(RIA)。结果表明;急性肝炎、慢性活动性肝炎、重症肝炎患者的肝细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达增强,尤以Ⅰ类抗原明显,慢性迁延性肝炎则几乎无表达。肝细胞HLA-Ⅰ类抗原表达与肝内炎症反应、肝细胞膜型HBSAg和浆膜型HBcAg关系密切,肝内活动性病变主要浸润细胞为CD_2^+细胞,CD_0^+细胞构成主要的细胞亚群。认为抗原依赖的、HLA限制的细胞毒性T细胞效应是构成乙型肝炎免疫损害的主要机制。

中国8个民族HLA多态性的血清学研究

本文报告了中国大陆8个民族,汉、满、蒙、回、藏、布依、苗和维吾尔的HLA多态性的血清学研究。此课题是第11届国际组织相容性会议(11th IHWC)的人类学协作研究题。结果表明,根据HLA Ⅰ类和Ⅱ类抗原的基因频率,布依族、苗族和南方汉族聚类在中国南方群体中,他们同属蒙古人种。树系图表明本文所研究的中国8个民族间与国内外其他民族相互之间的关系。

EBV-LMP2多肽激活的特异性CTL抑制同HLA-I亚型的鼻咽癌移植瘤形成

目的:研究异体的EBV-LMP2表位多肽所激活的特异性CTL对具有相同HLA-Ⅰ类分子亚型鼻咽癌细胞(CNE2) 移植瘤的抑制作用,探讨异体间的免疫治疗。方法:先将CNE2细胞接种于Scid鼠背部皮下建立移植瘤模型;然后通过SSP- PCR确定CNE2的HLA-Ⅰ类分子亚型,并选取与CNE2有相同HLA-Ⅰ类分子亚型的外周血淋巴细胞;实验再将3组不同细 胞分别接种于Scid鼠北部皮下,(1)对照组:仅接种CNE2细胞;(2)T细胞组:接种未激活的淋巴细胞与CNE2混合细胞。 (3)CTL组接种经EBV-LNP2多肽激活的特异性CTL与CNE2混合细胞。观察EBV-LMP2多肽激活的CTL对CNE2移植瘤生 长的影响。结果:CNE2于一周左右在Scid鼠背部形成肿块,病理学鉴定为低分化上皮癌;SSP-PCR显示CNE2含有HLA-A11 基因位点;含有相同基因位点的DC负载LMP2-A11多肽所激活的CTL,明显抑制CNE2移植瘤生长。结论:EBV-LMP2多肽 所激活的特异性CTL抑制HLA亚型相同的CNE2移植瘤的形成。

广州地区无偿献血者HLA抗体及HNA-3a抗体检测分析

目的分析广州地区无偿献血者中与免疫性TRALI相关的HLA抗体及HNA-3a抗体,进而评估白细胞抗体阳性献血者捐献的血液成分对TRALI诱发的风险。方法运用HLA抗体筛选试剂盒,对随机抽取的845份无偿献血者标本进行HLA抗体筛查,并通过LSA1&LSA2试剂盒进行HLA抗体特异性鉴定,比较不同献血人群的HLA抗体发生率;利用HNA-3a转染细胞对HNA-3bb基因型标本进行HNA-3a抗体检测。结果广州地区845名献血者中HLA抗体阳性标本102份(12.07%),其中男性献血者为28/454(6.17%),已婚已育女性献血者为66/248(26.61%),未婚未育女性献血者为8/143(5.59%);已婚已育女性献血者的HLA-Ⅰ类抗体、HLA-Ⅱ类抗体、HLA-Ⅰ+HLA-Ⅱ类抗体及HLA抗体总体发生率均明显高于男性和未婚未育女性献血者(P<0.01),且多次生育女性的HLA抗体发生率明显高于单次生育女性献血者(P<0.01);对获得的28份HNA-3bb基因型献血者进行HNA-3a抗体检测,未见阳性标本。结论已婚已育女性献血者(尤其是多次生育女性)HLA抗体发生率较高,其所捐献的血液成分有诱导免疫性TRALI发生的高风险。因此,对已婚已育女性献血者开展HLA抗体及HNA-3a抗体筛查可避免用血紧张,提高输血安全。

NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA I类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24h时CNE2细胞表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异.方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞(单纯培养的CNE2细胞),编辑后的CNE2细胞(NK细胞与CNE2细胞10∶1混合培养24h)表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为(88.67±2.81)%和(34.53±3.15)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);编辑前、后的CNE2细胞表面HLAI类分子表达率分别为(99.77±0.12)%和(97.80±0.87)%,两者相比差异无统计学意义(P>0.05).NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(6.60±0.86)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(11.57±2.02)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:CNE2细胞与NK细胞持续性接触24h,CNE2细胞表面HLAI类分子表达无改变,MI-CA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降.本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点.

沙眼衣原体感染对IFN-γ诱导的Hela细胞HLA-Ⅱ类分子表达的影响

目的 :为了探讨沙眼衣原体 (CT)感染对IFN -γ诱导的上皮细胞系Hela细胞HLA -Ⅱ分子表达的影响。方法 :用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法 ,对感染CT的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平进行检测。结果 :CT感染的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降 ,IL - 10抗体不能明显抑制这种下降。结论 :CT感染能下调Hela细胞膜上IFN -γ诱导的HLA -Ⅱ分子表达水平 ,这可能是造成衣原体持续感染的一种重要原因。

携带非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A穿膜区等位基因中晚期食管癌患者对NK细胞免疫治疗的敏感性高

目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响。方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管癌患者152例,均在姑息性手术后行全身化疗,根据患者MICA穿膜区等位基因是否为A5.1分为4组:(1)A5.1化疗+NK细胞治疗(A5.1+NK)组;(2)A5.1单纯化疗(A5.1)组;(3)非A5.1化疗+NK细胞治疗(no A5.1+NK)组;(4)非A5.1单纯化疗(no A5.1)组,观察各组患者临床疗效。构建食管癌组织标本MICA等位基因A5.1的真核表达载体p TE-1A5.1,转染食管癌TE-1细胞株;Western blotting检测p TE-1A5.1转染对TE-1细胞MICA蛋白表达的影响,LDH法检测TE-1细胞转染p TE-1A5.1前后对NK细胞杀伤敏感性的变化,ELISA法检测食管癌患者血清可溶性MICA及转染p TE-1A5.1前后TE-1细胞上清中可溶性MICA含量。结果:经过3年的随防,A5.1+NK组患者中位总生存期(medium overall survival,m OS)为15.0个月,A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组为22.4个月,no A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.05)。经Cox多因素回归分析发现,患者年龄、性别、ECOG评分及基因型与预后均无明显相关(P>0.05),将基因类型与是否NK细胞治疗进行交叉分析,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.01)。转染p TE-1A5.1后TE-1细胞内MICA表达显著升高,培养液上清可溶性MICA分泌明显增加[(256.2±45.3)vs(45.3±11.5)pg/ml,P<0.01];与转染前相比,NK细胞对过表达MICA的TE-1细胞的杀伤率明显降低[(29.5±7.2)%vs(42.5±7.1)%,P<0.05]。结论:相对中晚期食管癌MICA穿膜区A5.1等位基因患者,非A5.1基因患者手术后化疗联合NK细胞的疗效较好,其机制与其不容易产生可溶性MICA密切相关。