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针对HLA-I类分子高效基因编辑方法的建立及其应用
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作者 和艳敏 吴知盼 +2 位作者 何吉 章伟 朱发明 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1896-1902,共7页
目的:建立一种HLA-I类分子高效基因编辑的方法,以制备编辑HLA-I类通用型造血干细胞。方法:针对β2微球蛋白基因设计并合成sgRNA,将NLS-Cas9-NLS核酸酶与sgRNA按照不同的摩尔比(1∶1-1∶4)形成RNP复合物,分别设置对照组和四个转染组,通... 目的:建立一种HLA-I类分子高效基因编辑的方法,以制备编辑HLA-I类通用型造血干细胞。方法:针对β2微球蛋白基因设计并合成sgRNA,将NLS-Cas9-NLS核酸酶与sgRNA按照不同的摩尔比(1∶1-1∶4)形成RNP复合物,分别设置对照组和四个转染组,通过核转染方式转入HEK-293细胞或者CD34+造血干细胞。培养72 h后,应用流式细胞术检测转染细胞表面HLA-I类分子表达情况,T7E1酶切反应鉴定切割作用,DNA直接测序方法鉴定序列套峰出现情况。结果:流式细胞术检测发现转染后HEK-293细胞或者CD34+造血干细胞有不同程度的HLA-I类分子阴性表达细胞群,直接测序不同转染组在sgRNA PAM序列附近均有明显套峰出现。在HEK-293细胞转染中,NLS-Cas9-NLS核酸酶与sgRNA摩尔比为1∶4时HLA-I类分子阴性表达细胞群比例最高(87.69±0.83)%,摩尔比为1∶3时T7E1酶切割效率最高(38±2.0)%。在CD34+造血干细胞转染中,NLS-Cas9-NLS核酸酶与Easyedit sgRNA摩尔比为1∶2时,HLA-I类分子阴性表达细胞群比例为(91.56±3.39)%,摩尔比为1∶1时T7E1酶切割效率为64±8.45%。结论:本研究提供了一种针对HLA-I类分子进行高效基因编辑的方法,该方法可以有效地将细胞表面的HLA-I类分子进行沉默表达,并成功应用于编辑CD34+造血干细胞。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 hla-I类分子 β2微球蛋白基因 造血干细胞
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Relationship between polymorphism of class Ⅱ transactivator gene promoters and chronic hepatitis B 被引量:2
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作者 Ying-RenZhao LingGong +2 位作者 Ying-LiHe FangLiu ChangLu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第6期854-857,共4页
AIM: To investigate the relationship between the polymorphism of class Ⅱ transactivator (CIITA) gene promoters and chronic hepatitis B (CHB). METHODS: Genomic DNA was prepared from peripheral blood leukocytes. Promot... AIM: To investigate the relationship between the polymorphism of class Ⅱ transactivator (CIITA) gene promoters and chronic hepatitis B (CHB). METHODS: Genomic DNA was prepared from peripheral blood leukocytes. Promoters Ⅰ,Ⅲ and Ⅳ of gene were analyzed respectively with polymerase chain reaction single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) in 65 patients with CHB, 26 patients with acute hepatitis B (AHB) and 85 normal controls. RESULTS: No abnormal migration was found in PCR-SSCP analysis of the three promoters in the three groups. Also, no sequential difference was observed at the three promoters among the CHB patients, AHB patients and normal controls. CONCLUSION: No polymorphism in promoters I, III and IV of CIITA gene exists in CHB patients, ABH patients and normal controls, suggesting that the promoter of CIITA gene might be a conserved domain. 展开更多
关键词 class transactivator gene promoter Hepatitis B
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RFLP OF HLA CLASS I GENES IN CHINESE POPULATION AND ITS CORRELATION WITH SEROLOGICALLY DEFINED ANTIGEN SPECIFICITIES
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作者 王亚新 林性玉 +4 位作者 孙婕 张来仪 陈诗书 王福庆 徐静娟 《Medical Bulletin of Shanghai Jiaotong University》 CAS 1991年第1期1-5,共5页
The restriction fragnent length polymorphisms (RFLPs) of HLA class I genes in 104 unrelated healthy Chinese individuals were analyzed with Southern blot assay. The DNAs from peripheral blood leucocytes were digested... The restriction fragnent length polymorphisms (RFLPs) of HLA class I genes in 104 unrelated healthy Chinese individuals were analyzed with Southern blot assay. The DNAs from peripheral blood leucocytes were digested with EcoRI, EcoRV and XbaI respectively, and hybridized with <sup>32</sup>P-labeled HLA class I probe ( 1.4Kb, B7 cDNA ). The results showed that 3 EcoRI fragments (13.7, 8.1 and 5.2 Kb ), 3 EcoR V fragments (11.3, 7.8 and 4.1 Kb) and 7 Xbal fragmnents (21.9, 19.2, 16.3, 6.0, 3.8, 1.8 and 1.5 Kb) were polymorphic. Ten of the fragments were found to be correlated significantly with the serologically de fined antigen specificities. The significance of this kind of correlation is discussed. 展开更多
关键词 hla class I gene RESTRICTION fragrnent length POLYMORPHISM Chinese population
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Allelic Polymorphism,Gene Duplication and Balancing Selection of MHC Class ⅡB Genes in the Omei Treefrog(Rhacophorus omeimontis)
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作者 Li HUANG Mian ZHAO +1 位作者 Zhenhua LUO Hua WU 《Asian Herpetological Research》 SCIE CSCD 2016年第1期1-11,共11页
The worldwide declines in amphibian populations have largely been caused by infectious fungi and bacteria. Given that vertebrate immunity against these extracellular pathogens is primarily functioned by the major hist... The worldwide declines in amphibian populations have largely been caused by infectious fungi and bacteria. Given that vertebrate immunity against these extracellular pathogens is primarily functioned by the major histocompatibility complex(MHC) class Ⅱ molecules, the characterization and the evolution of amphibian MHC class Ⅱ genes have attracted increasing attention. The polymorphism of MHC class Ⅱ genes was found to be correlated with susceptibility to fungal pathogens in many amphibian species, suggesting the importance of studies on MHC class Ⅱ genes for amphibians. However, such studies on MHC class Ⅱ gene evolution have rarely been conducted on amphibians in China. In this study, we chose Omei treefrog(Rhacophorus omeimontis), which lived moist environments easy for breeding bacteria, to study the polymorphism of its MHC class Ⅱ genes and the underlying evolutionary mechanisms. We amplified the entire MHC class ⅡB exon 2 sequence in the R. omeimontis using newly designed primers. We detected 102 putative alleles in 146 individuals. The number of alleles per individual ranged from one to seven, indicating that there are at least four loci containing MHC class ⅡB genes in R. omeimontis. The allelic polymorphism estimated from the 102 alleles in R. omeimontis was not high compared to that estimated in other anuran species. No significant gene recombination was detected in the 102 MHC class ⅡB exon 2 sequences. In contrast, both gene duplication and balancing selection greatly contributed to the variability in MHC class ⅡB exon 2 sequences of R. omeimontis. This study lays the groundwork for the future researches to comprehensively analyze the evolution of amphibian MHC genes and to assess the role of MHC gene polymorphisms in resistance against extracellular pathogens for amphibians in China. 展开更多
关键词 MHC class B POLYMORPHISM gene duplication balancing selection Rhacophorus omeimontis
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Ⅱ类抗原反式激活因子与HLA-DR抗原的关系及其意义(英文) 被引量:5
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作者 徐开林 李慧 +6 位作者 潘秀英 李振宇 鹿群先 张颖 主鸿鹄 杜冰 曾令宇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期147-151,共5页
本研究探讨Ⅱ类抗原反式激活因子(CIITA)和人类白细胞抗原(HLA-DR)表达时相的关系和差异,及STAT1-α反义寡核苷酸(STAT1-αAS)对CIITA和HLA-DR的抑制作用。分离健康志愿者外周血T淋巴细胞,给予不同剂量干扰素-γ(IFN-γ)后,用RT-PCR法检... 本研究探讨Ⅱ类抗原反式激活因子(CIITA)和人类白细胞抗原(HLA-DR)表达时相的关系和差异,及STAT1-α反义寡核苷酸(STAT1-αAS)对CIITA和HLA-DR的抑制作用。分离健康志愿者外周血T淋巴细胞,给予不同剂量干扰素-γ(IFN-γ)后,用RT-PCR法检测CIITAmRNA,Westernblot分析HLA-DR抗原表达,然后给予不同浓度STAT1-αAS和STAT1-α寡核苷酸有义链(STAT1-αS),再次检测CIITAmRNA和HLA-DR的表达。结果表明:CIITAmRNA在IFN-γ作用后5小时开始表达,14小时达峰值;HLA-DR在28小时后可被检测出,52小时达高峰。5、10和20μmol/LSTAT1-αAS作用于细胞后,CIITAmRNA的表达显著低于对照组(P<0.01),而在S组明显高于AS处理组(P<0.01),S组与对照组间无显著差异;HLA-DR的表达可被STAT1-αAS抑制,AS组仅为对照组的64.3%(P<0.01),S组与对照组间仍无差异;STAT1-αAS作用后,HLA-DR变化同CIITA。结论:CIITAmRNA表达与HLA-DR表达呈正相关且早于后者;STAT1-αAS可特异性抑制CIITA和HLA-DR的表达,并能预防T淋巴细胞激活,CIITA在移植免疫病因中起重要作用。 展开更多
关键词 类抗原反式激活因子 hla-DR STAT1-α 反义寡核苷酸 干扰素-Γ
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不同IL-15转染对NCI-H446HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响 被引量:3
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作者 丁军颖 王润田 +5 位作者 张征峥 杨志强 韩志鹏 李铁民 邓郁青 王平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期468-470,共3页
目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以... 目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以IL2信号肽替代IL15信号肽的改型IL15基因的NCIH446/IL2spIL15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCIH446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCIH446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCIH446/IL15、NCIH446/IL15mp和NCIH446/IL2spIL15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因,抑制NCIH446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL15基因均可增强NCIH446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL15者最高,IL15成熟肽者次之,原型IL15者最低。 展开更多
关键词 IL-15 基因转染 NCI-H446 hla-Ⅰ hla- NK杀伤敏感性
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华东地区汉族HLA-Ⅱ类基因与白癜风临床特征的相关性 被引量:5
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作者 吴文育 傅雯雯 +2 位作者 廖康煌 汤芦艳 李剑 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期697-699,共3页
目的探讨华东地区汉族HLA-Ⅱ类基因与白癜风临床特征的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法检测华东地区汉族白癜风患者HLA-DRB1、DQA1和DQB1位点的等位基因,使用SPSS10.0统计软件分析。结果HLA-DQA1010... 目的探讨华东地区汉族HLA-Ⅱ类基因与白癜风临床特征的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法检测华东地区汉族白癜风患者HLA-DRB1、DQA1和DQB1位点的等位基因,使用SPSS10.0统计软件分析。结果HLA-DQA10103与伴发内分泌疾病的患者有显著正相关,DRB109与C4降低的患者明显负相关。按临床类型分析,发现局限型与DRB109和DQA103正相关,非节段型与DQA103正相关。结论:在华东地区汉族人群中,白癜风的临床特征与HLA-Ⅱ类基因有一定的相关性。 展开更多
关键词 白癜风 hla-类基因 临床特征 汉族
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癫痫患者脑组织TNF-αmRNA、IL-6mRNA以及HLA-Ⅱ抗原表达的改变 被引量:24
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作者 杜静 方敏 +5 位作者 龚非力 李卓娅 黄家强 徐勇 熊平 李龄 《同济医科大学学报》 CSCD 2000年第2期111-113,共3页
为探讨肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白细胞介素 6 (1L - 6 )以及 HL A- 抗原表达在癫痫免疫学发病机制中的作用 ,采用地高辛标记 c DNA探针技术组织原位杂交方法研究癫痫患者 TNF- α m RNA和 IL- 6 m RNA在脑组织中的表达与分布 ;同时借... 为探讨肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白细胞介素 6 (1L - 6 )以及 HL A- 抗原表达在癫痫免疫学发病机制中的作用 ,采用地高辛标记 c DNA探针技术组织原位杂交方法研究癫痫患者 TNF- α m RNA和 IL- 6 m RNA在脑组织中的表达与分布 ;同时借助免疫组织化学技术检测癫痫患者脑组织中 HL A- 抗原的表达水平。结果发现 :癫痫患者脑组织中星形胶质细胞异常高表达 TNF- α m RNA和 IL- 6 m RNA;星形胶质细胞和小胶质细胞异常高表达 HL A- 类抗原。结果提示 :脑组织局部自分泌或旁分泌的细胞因子 (TNF-α和 IL - 6 )水平以及胶质细胞表面 HL A- 展开更多
关键词 癫痫 肿瘤坏死因子 白细胞介素6 hla- mRNA
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山西地区HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性研究 被引量:4
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作者 王晓丽 杨海澜 +1 位作者 孙晓玲 韩方 《中国优生与遗传杂志》 2008年第2期37-38,共2页
目的探讨本地区人群HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性。方法以序列特异引物聚合酶链反应技术,对本地区39例GDM孕妇及42例同期正常健康孕妇的HLA-Ⅱ类基因进行检测。结果GDM组DRB1*0301、DQB1*0201等位基因频率分别为38.5%和28.... 目的探讨本地区人群HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性。方法以序列特异引物聚合酶链反应技术,对本地区39例GDM孕妇及42例同期正常健康孕妇的HLA-Ⅱ类基因进行检测。结果GDM组DRB1*0301、DQB1*0201等位基因频率分别为38.5%和28.2%,明显高于对照组的16.7%和9.5%,两组比较有统计学意义;GDM组DQA1*0103等位基因频率为7.7%,明显低于对照组的14.3%,两组比较有统计学意义。结论HLA-DRB1*0301、DQB1*0201等位基因可能是该地区妊娠期糖尿病的易感基因,而DQA1*0103等位基因可能是该地区妊娠期糖尿病的保护基因。 展开更多
关键词 hla-类基因 妊娠期糖尿病
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MHCⅡ类反式激活因子在上调HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用 被引量:6
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作者 柏秀娟 张绪清 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第21期2019-2022,共4页
目的探讨主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用。方法将含CⅡTAcDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTAcDNA的空... 目的探讨主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用。方法将含CⅡTAcDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTAcDNA的空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞。用RT-PCR技术检测未经转染的HepG2细胞、转染EBS-NPL-CⅡTA及空载体EBS-NPL的HepG2细胞CⅡTA mRNA的表达,并用间接细胞免疫荧光技术及流式细胞技术检测其3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达。结果未经转染的HepG2细胞和转染空载体EBS-NPL的HepG2细胞均无CⅡTA mRNA和HLAⅡ类分子的表达。转染EBS-NPL-CⅡTA后的HepG2细胞出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子。结论CⅡTA是调控HepG2细胞是否表达HLAⅡ类分子的关键因子,HepG2细胞不表达HLA-Ⅱ类分子与其缺乏CⅡTA表达有关,为进一步研究CⅡTA在肝癌治疗中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 MHC类反式激活因子 HEPG2细胞 hla类分子
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γ-干扰素基因的导入及删除对人肿瘤细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达的影响 被引量:3
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作者 张腾飞 陈诗书 《胃肠病学》 1999年第1期6-7,共2页
目的:制备有效的细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为“瘤苗”。方法:用缺陷型逆转录病毒作为载体将人γ-干扰素(IF-γ)含信号肽cDNA转导入人胃癌细胞株MKN、45,经G418筛选后得-IFN-γ基因修饰株MKN-45-... 目的:制备有效的细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为“瘤苗”。方法:用缺陷型逆转录病毒作为载体将人γ-干扰素(IF-γ)含信号肽cDNA转导入人胃癌细胞株MKN、45,经G418筛选后得-IFN-γ基因修饰株MKN-45-IFN。PCR方法测得有标记基因NeoR及IFN-γ基因的存在,但经3个月连续传代培养后,PCR仅能检测到NeoR基因,而未检出IFN-γ基因、HLA-Ⅰ、Ⅱ类单抗间接免疫荧光法流式细胞仪测定了上述相应时期IFN-γ基因修饰肿瘤细胞HLA-I、Ⅱ类抗原的表达。结果:随着IFN-γ基因在染色体中被删除,HLA-Ⅰ、Ⅱ类的表达又恢复至与MKN-45相同的水平。结论:为确保IFN-γ基因的作用,应不断检测其基因的存在。 展开更多
关键词 基因表达 Γ-干扰素基因 hla-Ⅰ、类抗原
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沙眼衣原体感染对IFN-γ诱导的Hela细胞HLA-Ⅱ类分子表达的影响 被引量:4
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作者 余俊龙 余平 李立新 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第9期83-86,共4页
目的 :为了探讨沙眼衣原体 (CT)感染对IFN -γ诱导的上皮细胞系Hela细胞HLA -Ⅱ分子表达的影响。方法 :用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法 ,对感染CT的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平进行检测。结果 :CT感染的Hela细胞IF... 目的 :为了探讨沙眼衣原体 (CT)感染对IFN -γ诱导的上皮细胞系Hela细胞HLA -Ⅱ分子表达的影响。方法 :用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法 ,对感染CT的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平进行检测。结果 :CT感染的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降 ,IL - 10抗体不能明显抑制这种下降。结论 :CT感染能下调Hela细胞膜上IFN -γ诱导的HLA -Ⅱ分子表达水平 ,这可能是造成衣原体持续感染的一种重要原因。 展开更多
关键词 HELA细胞 沙眼衣原体 Γ干扰素 hla-类分子
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SLE患者抗U1RNP抗体与HLA-Ⅱ类基因的相关性分析 被引量:2
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作者 李晓岚 冒长峙 +3 位作者 李学平 刘桂兰 孙浩 褚嘉祐 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2002年第1期4-5,共2页
目的 探讨云南汉族系统性红斑狼疮 (SLE)患者抗U 1RNP抗体与HLA DRB1、DQA1、DQB1等位基因及单体型的相关性。方法 采用多聚酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术对 63例云南汉族SLE患者进行DRB1、DQA1、DQB1基因分型。结果 抗U1... 目的 探讨云南汉族系统性红斑狼疮 (SLE)患者抗U 1RNP抗体与HLA DRB1、DQA1、DQB1等位基因及单体型的相关性。方法 采用多聚酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术对 63例云南汉族SLE患者进行DRB1、DQA1、DQB1基因分型。结果 抗U1RNP抗体阳性的SLE病人中DQA1 0 10 1及DR15 DQA1 0 10 2 DQB1 0 60 1单体型频率亦显著增高 (P =0 .0 40 ,P =0 .0 0 0 )。结论 云南汉族SLE抗U 1RNP抗体的产生与DQA1 0 10 1等位基因及DR15 DQA1 0 10 2 DQB1 0 60 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 抗U1RNP抗体 基因 hla-
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癫痫患者PBMC分泌TNF-α、IL-6及HLA-Ⅱ类抗原表达的改变 被引量:6
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作者 杜静 黄家强 +4 位作者 龚非力 李卓娅 熊平 徐勇 阮旭中 《同济医科大学学报》 CSCD 1997年第3期187-190,共4页
采用ELISA方法检测了30例癫痫患者外周血单个核细胞(PBMC)经脂多糖(LPS)诱生后培养上清中的细胞因子水平。结果发现,癫痫患者PBMC分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平分别为(5.705±0.702)μg/L和(17... 采用ELISA方法检测了30例癫痫患者外周血单个核细胞(PBMC)经脂多糖(LPS)诱生后培养上清中的细胞因子水平。结果发现,癫痫患者PBMC分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平分别为(5.705±0.702)μg/L和(177.60±54.50)ng/L,较正常对照组[分别为(3.118±0.373)μg/L和(78.67±6.47)ng/L]明显升高(均为P<0.01),并且TNF-α与IL-6的升高存在明显的正相关(r=0.705,P<0.05)。应用Dot-ELISA及图像分析技术证实,癫痫患者PBMC表面人白细胞Ⅱ类抗原(HLA-Ⅱ抗原)的表达密度也显著高于正常对照组(P<0.01)。结果提示,IL-6、TNF-α的分泌紊乱及HLA-Ⅱ类抗原的表达异常可能与癫痫的发病有关。 展开更多
关键词 癫痫 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素6 ELISA
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心脏移植中HLA-Ⅱ类抗原基因配型的实验研究 被引量:4
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作者 董然 陈宝田 +1 位作者 邱长春 石镜 《心肺血管病杂志》 CAS 2000年第3期203-206,共4页
建立人类白细胞抗原 (HLA) Ⅱ型抗原 4个基因位点DRB1、DQA1、DQB1、DPB1的聚合酶链式反应 -单 -链构象多态分析 (PCR -SSCP)配型方法。实验分三部分 :1 通过预实验确定使用PCR -SSCP检测HLA -DRB1、DA1、DQB1、DPB14个位点的实验条件 ... 建立人类白细胞抗原 (HLA) Ⅱ型抗原 4个基因位点DRB1、DQA1、DQB1、DPB1的聚合酶链式反应 -单 -链构象多态分析 (PCR -SSCP)配型方法。实验分三部分 :1 通过预实验确定使用PCR -SSCP检测HLA -DRB1、DA1、DQB1、DPB14个位点的实验条件 ;2 使用以上方法对 1例拟行心脏移植的患者在 12 7例健康人群中进行基因位点的检测配型 ;3 对配型一致及不一致的供体和受体 ,进行体外混合淋巴细胞培养(MLC) ,以检验这种基因配型方法的可靠性。通过PCR -SSCP的检测配型 ,在 12 7例供体中 ,2例DRB1位点、2例DQA1位点、3例DQB1位点、2例DPB1位点与受体相一致。体外MLC证实与受体不一致的供、受体MLC中 ,受体淋巴细胞呈高度增殖反应 ;而与受体某一位点一致的供体 ,其MLC中受体淋巴细胞增殖反应明显降低 (P <0 0 1)。PCR -SSCP是一种快速、准确的HLA 展开更多
关键词 心脏移植 hla-类抗原基因配型 PCR-SSCP
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MHC-Ⅱ基因反义RNA导入脐血CD34^+细胞抑制HLA-DR抗原的表达(英文)
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作者 邓宇斌 李树浓 +2 位作者 黄绍良 谢强 黄仁魏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期263-268,共6页
将HLA-DRBI基因cDNA片段反向插入逆转录病毒质粒pZIP-neo SV(x)BamHI位点中,构建了HLA-DRB1基因的逆转录病毒反义RNA重组表达载体,用脂质体法导入PA317细胞。用免疫磁珠法分离、富集脐血CD34^+细胞。将培养的病毒上清感染脐血CD34^+细胞... 将HLA-DRBI基因cDNA片段反向插入逆转录病毒质粒pZIP-neo SV(x)BamHI位点中,构建了HLA-DRB1基因的逆转录病毒反义RNA重组表达载体,用脂质体法导入PA317细胞。用免疫磁珠法分离、富集脐血CD34^+细胞。将培养的病毒上清感染脐血CD34^+细胞,筛选获得抗性克隆和进行CFU-GM的培养。用RT-PCR法从经G418选择产生的抗性克隆已证实有反义RNA目的基因的表达。流式细胞仪(FACS)检测转染的脐血细胞中HLA-DR抗原阳性率为28%(对照组为45%),其抑制率为38.2%。结果表明导入脐血细胞的MHC-Ⅱ类基因反义RNA重组体可降低其HLA-DR抗原的表达。本实验结果为用反义核酸技术在临床脐血移植中防止移植物抗宿主反应提供了新方法。 展开更多
关键词 脐血 CD34^+细胞 hla-DR抗原 反义RNA MHC-类基因 基因
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人群HBV易感性与HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因相关性研究 被引量:2
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作者 李建忠 李长缨 《预防医学论坛》 2007年第4期314-316,共3页
[目的]探讨人类白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类基因与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。[方法]2003~2004年,采用PCR-SSP方法对青岛市178例HBV感染者(实验组)和1383名无血缘关系的自愿骨髓捐献者(对照组)分别进行HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因分型检测。... [目的]探讨人类白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类基因与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。[方法]2003~2004年,采用PCR-SSP方法对青岛市178例HBV感染者(实验组)和1383名无血缘关系的自愿骨髓捐献者(对照组)分别进行HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因分型检测。[结果]HLA-DR9、DR12的分布频率在实验组为30.9%(55/178)和28.0%(50/178),在对照组为20.7%(286/1383)和19.5%(270/1383)(P〈0.01)。[结论]HLA—DR9、DR12有助于HBV对宿主的感染,可能是HBV的易感基因。 展开更多
关键词 HBV 感染 hla-Ⅰ类基因 hla-类基因 hla-DR9 hla—DR12
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广东汉族白癜风与HLA-Ⅱ类基因相关性研究
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作者 刘玉梅 田歆 +3 位作者 黄振明 何伟强 毕超 师晋平 《中国麻风皮肤病杂志》 2010年第9期612-614,共3页
目的:确定广东籍汉族白癜风发病与HLA-Ⅱ类基因的相关性。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对57例广东籍汉族各型白癜风患者和60例健康对照者静脉血样本HLA-DR,DQ等位基因多态性进行研究。结果:白癜风患者DR7(DRB1*0... 目的:确定广东籍汉族白癜风发病与HLA-Ⅱ类基因的相关性。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对57例广东籍汉族各型白癜风患者和60例健康对照者静脉血样本HLA-DR,DQ等位基因多态性进行研究。结果:白癜风患者DR7(DRB1*0701)等位基因频率显著升高(RR=6.213,Pc<0.05),DRw52(DRB3*0101/02 DRB3*0201 DRB3*0301),DRw53(DRB4*0101/03/05)和DRw51(DRB5*0101/02 DRB5*0202)基因频率明显低于正常对照组,以上三者两组间比较均有显著性差异(Pc<0.05)。白癜风患者DQ5(DQB1*0501-04)基因频率显著高于正常对照组(Pc<0.05);DQ4(DQB1*0401/02)基因频率显著低于正常对照组(Pc<0.05)。结论:提示HLA-DR7(DRB1*0701)等位基因可能与广东籍汉族白癜风的发病有关。DRw52(DRB3*0101/02 DRB3*0201 DRB3*0301),DRw53(DRB4*0101/03/05)和DRw51(DRB5*0101/02 DRB5*0202)对白癜风发病可能有一定保护作用。DQ5(DQB1*0501-04)可能为白癜风患者的易感基因。 展开更多
关键词 自癜风 hla-类基因 hla—DR DQ 聚合酶链反应-序列特异性引物技术
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CⅡTA反义基因体外转染对HLA-Ⅱ类抗原表达的抑制作用的研究
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作者 范华骅 郭荣 +5 位作者 崔磊 刘伟 路丽明 曹谊林 高峰 陆华中 《中国临床医学》 2004年第2期174-176,共3页
目的:针对同种异体细胞移植的免疫反应主要由HLA-Ⅱ类抗原介导,而CⅡTA基因对HLA-Ⅱ分子的表达起严格且专一性的调控作用,拟通过CⅡTA的反义cDNA抑制细胞表面HLAⅡ分子的表达。方法:以RT-PCR从HLAⅡ抗原组成型表达的Raji细胞株克隆CⅡT... 目的:针对同种异体细胞移植的免疫反应主要由HLA-Ⅱ类抗原介导,而CⅡTA基因对HLA-Ⅱ分子的表达起严格且专一性的调控作用,拟通过CⅡTA的反义cDNA抑制细胞表面HLAⅡ分子的表达。方法:以RT-PCR从HLAⅡ抗原组成型表达的Raji细胞株克隆CⅡTA反义片段(arⅡ),插入腺相关病毒载体psNAV中(pAarⅡ)。将该质粒通过脂质体稳定转染Heda细胞(pAar Ⅱ H),检测其表面HLAⅡ分子表达,并以RT-PCR检测其CⅡTA、HLA-Ⅱ(DR、DP及DQ)及Ii分子的mRNA水平。结果:pAarⅡH在重组人IFN-γ诱导下,DR、DP及DQ抗原表达分别降低了79±12%、90±15%及40±8%;同时HLA-Ⅱ及Ii分子的mRNA被明显抑制。结论:提示CⅡTA反义基因片段抑制了自身组成型及诱导型表达量,并相应阻止了CⅡTA所调控的基因(HLA-Ⅱ及Ii)的表达,从而为进一步探讨免疫耐受形成及其在组织工程中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 CTA 反义基因 基因转染 hla-类抗原 同种异体细胞移植 免疫反应
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HLA-Ⅱ类基因与人类妊娠期特定疾病的相关性
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作者 刘国成 李雪兰 苟文丽 《国外医学(妇幼保健分册)》 2003年第6期373-375,共3页
通过DNA分型技术 ,已经明确了人类妊娠期多种疾病的发生、发展与HLA Ⅱ类基因相关联。目前可通过计算相对危险因子来判断HLA等位基因的频率。HLA Ⅱ类基因多态性可以改变HLA分子、抗原、T细胞之间相互作用的特性 ,并因此控制对外来抗原... 通过DNA分型技术 ,已经明确了人类妊娠期多种疾病的发生、发展与HLA Ⅱ类基因相关联。目前可通过计算相对危险因子来判断HLA等位基因的频率。HLA Ⅱ类基因多态性可以改变HLA分子、抗原、T细胞之间相互作用的特性 ,并因此控制对外来抗原的免疫应答。HLA Ⅱ类基因编码的某一氨基酸序列调控对疾病的易感性和临床性状。构成HLA基因群的各个基因是高度连锁的 ,因此与某一特定疾病关联的易感基因有可能不是单一的 ,而是一些连锁基因的组合。 展开更多
关键词 hla-类基因 妊娠 疾病易感性 聚合酶链反应
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