华东地区汉族HLA-Ⅱ类基因与白癜风临床特征的相关性

目的探讨华东地区汉族HLA-Ⅱ类基因与白癜风临床特征的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法检测华东地区汉族白癜风患者HLA-DRB1、DQA1和DQB1位点的等位基因,使用SPSS10.0统计软件分析。结果HLA-DQA10103与伴发内分泌疾病的患者有显著正相关,DRB109与C4降低的患者明显负相关。按临床类型分析,发现局限型与DRB109和DQA103正相关,非节段型与DQA103正相关。结论:在华东地区汉族人群中,白癜风的临床特征与HLA-Ⅱ类基因有一定的相关性。

癫痫患者脑组织TNF-αmRNA、IL-6mRNA以及HLA-Ⅱ抗原表达的改变

为探讨肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白细胞介素 6 (1L - 6 )以及 HL A- 抗原表达在癫痫免疫学发病机制中的作用 ,采用地高辛标记 c DNA探针技术组织原位杂交方法研究癫痫患者 TNF- α m RNA和 IL- 6 m RNA在脑组织中的表达与分布 ;同时借助免疫组织化学技术检测癫痫患者脑组织中 HL A- 抗原的表达水平。结果发现 :癫痫患者脑组织中星形胶质细胞异常高表达 TNF- α m RNA和 IL- 6 m RNA;星形胶质细胞和小胶质细胞异常高表达 HL A- 类抗原。结果提示 :脑组织局部自分泌或旁分泌的细胞因子 (TNF-α和 IL - 6 )水平以及胶质细胞表面 HL A-

应用微量SSP法进行器官移植供受者HLA-Ⅱ类基因分型

目的：探讨应用于临床器官移植的组织配型新技术。方法：采用快速ＤＮＡ抽提技术，建立微量ＰＣＲ－ＳＳＰ－ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型方法，并与单克隆抗体一步法分型结果进行对比研究。结果：应用２种方法对７３份标本进行ＨＬＡ－Ⅱ类抗原／基因分型，结果完全相符，但微量ＰＣＲ－ＳＳＰ法不但快速、需血量少，而且分辨率高。结论：微量ＰＣＲ－ＳＳＰ法具有快速、准确、省血等优点，适合在临床器官移植配型中推广应用。

不同IL-15转染对NCI-H446HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响

目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以IL2信号肽替代IL15信号肽的改型IL15基因的NCIH446/IL2spIL15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCIH446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCIH446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCIH446/IL15、NCIH446/IL15mp和NCIH446/IL2spIL15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因,抑制NCIH446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL15基因均可增强NCIH446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL15者最高,IL15成熟肽者次之,原型IL15者最低。

HLA-Ⅱ类基因多态性与乙型肝炎转归的相关性

目的探讨HLAⅡ类基因多态性与乙型肝炎转归之间的关系。方法采用PCRSSP对52例慢性乙型肝炎、30例急性乙型肝炎和106例正常人的HLADRB1、DQA1和DQB1等位基因多态性进行了分析。应用结晶紫染色法检测淋巴母细胞系(LCL)分泌TNF的细胞毒活性。采用MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果HLADRB10301、DQA10501和DQB10301在慢性乙型肝炎组的等位基因频率明显高于正常对照组。HLADRB111011104和DQA10301在慢性乙型肝炎组的等位基因频率明显低于急性乙型肝炎组。HLADRB10301、HLADQA10501、HLADQB10301阳性组LCL分泌TNF的活性和淋巴细胞增殖指数明显低于阴性组,HLADRB111011102、HLADQA10301阳性组LCL分泌TNF的活性和淋巴细胞增殖指数明显高于阴性组。结论HLADRB10301、DQA10501和DQB10301与慢性乙型肝炎的易感性相关,HLADRB111011104和DQA10301与慢性乙型肝炎的抗性相关。HLAⅡ类基因可通过影响TNF和淋巴细胞增殖反应来发挥免疫调节作用,与HBV感染慢性化或HBV清除有关。

沙眼衣原体感染对IFN-γ诱导的Hela细胞HLA-Ⅱ类分子表达的影响

目的 :为了探讨沙眼衣原体 (CT)感染对IFN -γ诱导的上皮细胞系Hela细胞HLA -Ⅱ分子表达的影响。方法 :用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法 ,对感染CT的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平进行检测。结果 :CT感染的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降 ,IL - 10抗体不能明显抑制这种下降。结论 :CT感染能下调Hela细胞膜上IFN -γ诱导的HLA -Ⅱ分子表达水平 ,这可能是造成衣原体持续感染的一种重要原因。

SLE患者抗U1RNP抗体与HLA-Ⅱ类基因的相关性分析

目的 探讨云南汉族系统性红斑狼疮 (SLE)患者抗U 1RNP抗体与HLA DRB1、DQA1、DQB1等位基因及单体型的相关性。方法 采用多聚酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术对 63例云南汉族SLE患者进行DRB1、DQA1、DQB1基因分型。结果 抗U1RNP抗体阳性的SLE病人中DQA1 0 10 1及DR15 DQA1 0 10 2 DQB1 0 60 1单体型频率亦显著增高 (P =0 .0 40 ,P =0 .0 0 0 )。结论 云南汉族SLE抗U 1RNP抗体的产生与DQA1 0 10 1等位基因及DR15 DQA1 0 10 2 DQB1 0 60

HLA-Ⅱ类基因与慢性乙型肝炎重型化的相关性

目的:探讨HLA-DRB1、-DQA1和-DQB1等位基因多态性与慢性乙型肝炎重型化之间的关系. 方法:采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术对52例慢性乙型肝炎和32例性慢性重症乙型肝炎的HLA DRB1、-DQA1和-DQB1等位基因多态性进行了分析. 结果:HLA-DRB1*1 001在慢性重症乙型肝炎组的等位基因频率明显高于慢性乙型肝炎组(14.1% vs 1.9%,X2= 19.2 997,Pc=0.0281,RR=9.78).HLA-DQA1和HLA- DQB1等位基因频率在慢性重症乙型肝炎组和慢性乙型肝炎组间差异无显著性. 结论:HLA-DRB1*1 001与慢性乙型肝炎的重型化有关, 可能是—个对判断病情和预后有价值的实验指标.

低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP基因分型在骨髓移植中的应用

为满足临床骨髓移植对HLA配型的要求，本研究采用先进、快速的DNA提取方法和低分辨率与高分辨率HLA-ⅡPCR—SSP分型方法，对150例临床骨髓移植供、受者进行HLA-Ⅱ类分型研究，并且对分型方法进行了改进，建立了随时间释放DNA聚合酶活性的分型方法。结果表明：DNA提取方法可以满足微量HLA-Ⅱ类DNA分型方法对DNA样本的要求，200μl全血DNA产量为4—12μg，A260／A280为1．7～1．9。低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP均具有良好稳定性、可靠性和准确性。低分辨率HLA-Ⅱ类PCR—SSP方法耗时1．5小时，适用于同胞兄弟姐妹间的骨髓移植配型。高分辨率HLA-Ⅱ类亚型PCR-SSP分型方法耗时2小时50分钟，适用于同胞兄弟姐妹间骨髓移植配型的特殊病例和无血缘关系骨髓移植供、受者间的配型。本研究的分型方法对于推动我国骨髓移植工作的开展和未来的发展均具有重要的意义。

肺癌患者肺泡巨噬细胞上HLA-Ⅱ类抗原的表达

通过检测肺癌患者肺泡巨噬细胞（AM）上人主要组织相容性抗原Ⅱ类（HLA-Ⅱ类）抗原的表达来探究肺癌患者局部的免疫情况。经支气管肺泡灌洗获取肺癌患者（n=18）病变累及处及对照组（n=15）的AM,利用SABC法检测两组人AM上的HLA-DR和HLA-DQ抗原的表达。结果显示肺癌患者AM上的这两种HLA-Ⅱ类抗原的表达均较对照组明显减少（HLA-DR的表达分别为72.9％和81.3％,P<0.01;HLA-DQ的表达分别为 42.7％和 60.4％, P<0.001）,其中 HLA-DQ抗原减少更明显。提示肺癌患者病变局部AM的抗原识别和提呈能力是下降的,这对肺癌的免疫是不利的,AM上HLA-Ⅱ类抗原表达的减低可能影响到肺癌患者的预后。

献血人群中HCV感染与HLA-Ⅱ类基因的相关性研究

目的人类白细胞抗原(HLA)在机体抗病毒免疫中起重要作用,探讨献血人群中丙型肝炎病毒(HCV)感染与HLA-II类基因的相关性。方法选择2011年10月至2013年10月在浙江省血液中心献血的人员中HCV RNA阳性的样本45例,同时以健康人群为对照,其中HLA-DRB1位点对照样本8 333例,HLA-DRB1位点对照样本72例,用PCR-SBT方法测定献血者HLA-II类基因中DRB1和DQB1等位基因情况。结果 HLA-DRB1基因的DRB1*01:02(P=0.0394,OR=23.4,95%CI=2.89~189.1),DRB1*13:01(P=0.0095,OR=5.60,95%CI:1.74~18.00);HLA-DQB1基因的DQB1*03:03(P=0.0402,OR=0.45,95%CI:0.21~0.94),DQB1*06:01(P=0.0456,OR=2.47,95%CI:1.05~5.83),这些基因位点的多态性在HCV RNA阳性献血者中的频率与健康对照人群比较有统计学差异。结论在献血人群中HCV感染与HLA-II类基因中部分多态性位点有相关性。

心脏移植中HLA-Ⅱ类抗原基因配型的实验研究

建立人类白细胞抗原 (HLA) Ⅱ型抗原 4个基因位点DRB1、DQA1、DQB1、DPB1的聚合酶链式反应 -单 -链构象多态分析 (PCR -SSCP)配型方法。实验分三部分 :1 通过预实验确定使用PCR -SSCP检测HLA -DRB1、DA1、DQB1、DPB14个位点的实验条件 ;2 使用以上方法对 1例拟行心脏移植的患者在 12 7例健康人群中进行基因位点的检测配型 ;3 对配型一致及不一致的供体和受体 ,进行体外混合淋巴细胞培养(MLC) ,以检验这种基因配型方法的可靠性。通过PCR -SSCP的检测配型 ,在 12 7例供体中 ,2例DRB1位点、2例DQA1位点、3例DQB1位点、2例DPB1位点与受体相一致。体外MLC证实与受体不一致的供、受体MLC中 ,受体淋巴细胞呈高度增殖反应 ;而与受体某一位点一致的供体 ,其MLC中受体淋巴细胞增殖反应明显降低 (P <0 0 1)。PCR -SSCP是一种快速、准确的HLA

HLA-Ⅱ类抗原与妇科恶性肿瘤的研究进展

HLA-Ⅱ类抗原主要表达于专职抗原递呈细胞表面,其生物学作用是将外源性抗原肽递呈给CD4+T细胞从而参与机体的免疫应答过程。HLA-Ⅱ类抗原的等位基因具有多态性从而导致其分子的抗原决定簇不同,可能与肿瘤的遗传易感性相关。HLA-II类抗原在恶性肿瘤组织中的异常表达,与肿瘤细胞逃避免疫监视形成肿瘤转移浸润相关。本文就HLA-Ⅱ抗原在妇科恶性肿瘤方面的研究作一综述。

HLA-Ⅱ类分子与肿瘤

细胞免疫在机体抗肿瘤免疫中占主导作用 ,其中HLA分子的作用更为关键。本文从HLA Ⅱ类分子的角度 ,阐述它们在肿瘤的发生、发展和预后中的作用 。

γ-干扰素基因的导入及删除对人肿瘤细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达的影响

目的：制备有效的细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为“瘤苗”。方法：用缺陷型逆转录病毒作为载体将人γ－干扰素（ＩＦ－γ）含信号肽ｃＤＮＡ转导入人胃癌细胞株ＭＫＮ、４５，经Ｇ４１８筛选后得－ＩＦＮ－γ基因修饰株ＭＫＮ－４５－ＩＦＮ。ＰＣＲ方法测得有标记基因ＮｅｏＲ及ＩＦＮ－γ基因的存在，但经３个月连续传代培养后，ＰＣＲ仅能检测到ＮｅｏＲ基因，而未检出ＩＦＮ－γ基因、ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类单抗间接免疫荧光法流式细胞仪测定了上述相应时期ＩＦＮ－γ基因修饰肿瘤细胞ＨＬＡ－Ｉ、Ⅱ类抗原的表达。结果：随着ＩＦＮ－γ基因在染色体中被删除，ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类的表达又恢复至与ＭＫＮ－４５相同的水平。结论：为确保ＩＦＮ－γ基因的作用，应不断检测其基因的存在。

HLA-Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析

目的验证微量序列特异性引物(SSP)技术进行HLA-Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法采用聚合酶链反应结合微量SSP技术(简称微量PCR-SSP法)以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果(1)微量PCR-SSP法检测的110例样本中,99例检出HLA-DR的396个等位基因、11例检出HLA-DQ的22个等位基因,检出10%的单倍型个体;(2)两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误或漏检率较高,其误差在DR和DQ分别为38.81%和50.75%;(3)错误发生和易混淆的抗原为:DR15/16、11/12、13/14、8、12和DQ5/6、8/9。结论微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。

山西地区HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的探讨本地区人群HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性。方法以序列特异引物聚合酶链反应技术,对本地区39例GDM孕妇及42例同期正常健康孕妇的HLA-Ⅱ类基因进行检测。结果GDM组DRB1*0301、DQB1*0201等位基因频率分别为38.5%和28.2%,明显高于对照组的16.7%和9.5%,两组比较有统计学意义;GDM组DQA1*0103等位基因频率为7.7%,明显低于对照组的14.3%,两组比较有统计学意义。结论HLA-DRB1*0301、DQB1*0201等位基因可能是该地区妊娠期糖尿病的易感基因,而DQA1*0103等位基因可能是该地区妊娠期糖尿病的保护基因。

HLA-Ⅱ类基因DR_α及DRB_1 0401转基因小鼠模型的遗传与繁殖

采用类系祖建系的方法 ,对HLA -Ⅱ类基因DRα 和DRB1 0 4 0 1转基因小鼠模型进行了繁育。通过PCR和Southernblot分子杂交的方法 ,检测小鼠尾组织的DNA样品 ,以确定DR基因的整合和复制情况。结果表明 ,HLA -Ⅱ类基因DR已稳定地遗传至第五代(F5) ;共产仔 32 6只 ,PCR检测出阳性小鼠 95只 ,阳性率为 2 9.1 %。PCR—Southern印迹杂交检测 ,发现 68只仔鼠整合有DR基因 ,总有效率为 2 0 9%。经Nothern杂交和RT -PCR检测HLA -DR基因在脾脏和肾脏中均有表达。