卡马西平致HLA-A*31:01基因携带者发生超敏反应综合征一例

目的:明确一例可能由卡马西平诱发的药物超敏反应综合征的诊断,确定致敏药物。方法:收集患者临床资料,提取患者外周血单个核细胞,进行HLA等位基因分型和淋巴细胞转化实验(lymphocyte transformation test,LTT)。结果:该患者HLA等位基因分型提示患者携带HLA-A*31:01;LTT结果显示在卡马西平刺激后,淋巴细胞进行增殖。结论:结合患者临床表现、HLA分型和LTT结果,诊断为由卡马西平诱发的药物超敏反应综合征。

卡马西平致HLA-A*3101基因阳性中国汉族人发生Stevens-Johnson综合征1例

1病例资料患者女,39岁,因“发热5天,躯干四肢皮疹伴疼痛4天”于2020年3月24日入北京大学第三医院皮肤科病房治疗。患者入院前18天开始因三叉神经痛服用卡马西平0.1 g,每日两次,甲钴胺0.5 mg,每日三次,入院前5天出现发热,体温最高达38.3℃,血常规提示血小板减少,外院考虑“上呼吸道感染”,并予口服头孢地尼0.1 g,每日三次;莲花清瘟颗粒6 g,每日三次;利可君20 mg,每日三次。入院前4天前胸和腹部出现红斑,并停用以上所有药物,后皮疹逐渐增多并扩散至四肢,部分红斑上出现米粒至黄豆大小水疱,口腔黏膜糜烂,双眼结膜充血,遂至北京大学第三医院皮肤科治疗。入院查体:体温36.3℃,脉搏90次/min,呼吸18次/min,血压130/85 mmHg,系统查体未见明显异常。

HLA-A*02等位基因与云南宣威肺癌相关性研究

目的:探讨HLA-A*02等位基因及其亚型在云南宣威肺癌患者中的分布频率,为肺癌高发区的防治研究提供群体遗传学资料。方法:选取宣威籍肺癌患者与健康对照组,运用序列特异性引物基因分型技术(PCR-SSP)进行HLA-A位点及其HLA-A*02亚型分型。按照病例-对照研究方法分析HLA-A等位基因在两组之间频率分布的差异及肺癌HLA-A*02亚型多态性分布。结果:肺癌组与健康对照组HLA-A*02阳性率分别为68.75%及47.50%,肺癌组HLA-A*02阳性率显著增加(P=0.004,OR=2.432,95%CI=1.314～4.500);两组间HLA-A*02等位基因频率分别为41.67%及25.00%,具有显著性差异(P<0.05);宣威健康人群HLA-A等位基因分布频率总体特征与中国南方汉族人群一致;HLA-A*02阳性的肺癌组样本经高分辨检出HLA-A*0201、0203、0206、0207四种等位基因亚型,频率分别为29.73%、16.22%、13.51%、40.54%,符合中国南方汉族人群以A*0207为主的特征。结论:HLA-A*02可能与宣威肺癌易感相关,肺癌患者HLA-A*02亚型以A*0207为主,宣威地区人群属于南方汉族人群。

丙型肝炎病毒HLA-A*1101和A*2402限制性CD8^+T细胞表位的研究

目的:鉴定出丙型肝炎病毒(HCV)特异性HLA-A*1101限制性和A*2402限制性CD8+T细胞表位。方法:采用T细胞表位预测软件SYFPEITHI预测HCV特异性CD8+T细胞表位,合成HLA-A*1101限制性、A*2402限制性候选表位;建立永生化的HLA-A*1101阳性、A*2402阳性B细胞株,采用竞争性肽结合实验检测候选表位与HLA-A*1101或A*2402分子的结合力;候选表位体外分别刺激HLA-A*1101阳性或A*2402阳性HCV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)后,采用酶联免疫斑点(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICS)实验分别检测肽特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的细胞的水平和肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞的水平。结果:5条HLA-A*1101限制性候选表位中,NS3_609(ITLTHPITK)和NS2_165(VVFSDMETK)与HLA-A*1101分子具有高结合力。3条HLA-A*2402限制性候选表位中,NS3_373(KCDELASKL)和NS5b_382(YYLTRDPTI)与HLA-A*2402具有高结合力;在HLA-A*1101阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3_609和NS2_165特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞,而在HLA-A*2402阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3_373和NS5b_382特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞。结论:本研究证实NS3_609(ITLTHPITK)和NS2_165(VVFSDMETK)为全新的HCV特异性HLA-A*1101限制性CD8+T细胞表位,NS3_373(KCDELASKL)和NS5b_382(YYLTRDPTI)为全新的HCV特异性HLA-A*2402限制性CD8+T细胞表位。

sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测

目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4∶1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。

可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定

为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的生成率。利用HLA-A2构象特异性抗体(BB7.2)及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物进行鉴定。结果表明:在折叠体系中,主要含有HLA-A*0201-BSP聚合体、HLA-A*0201-PR1复合物及β2m,其中可溶性复合物生成率约18%。获得的HLA-A*0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化。结论:成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A*0201-PR1四聚体创立了基础。

加载HPV6E7抗原肽的HLA-A2单体及其四聚体的制备和鉴定

目的制备可生物素化的可溶性HLA-A2/HPV6E7单体,进一步组装成PE标记的可溶性HLA-A2/HPV6E7四聚体。方法以原核表达的sHLA-A2BSP为重链,β2m为轻链,与人工合成的HPV6E7(22-30)抗原肽(GLH-CYEQLV)利用稀释法进行共折叠复性得到单体。利用HLAI类分子单抗(W6/3)和抗Bzm抗体进行Westernblot和ELISA鉴定折叠产物的构象。以BirA酶对其进行生物素化,经过超滤离心后得到纯化的sHLA-A2/HPV6E7单体,再与Streptavidin-PE按4:1比例混合形成四聚体。结果该四聚体具有与HLA-A2阳性HPV6感染的CA患者的抗原特异性CTL结合活性。结论成功获得了天然构象的sHLA-A2/HPV6E7单体及PE标记的HLA-A2/HPV6E7四聚体。

应用PCR-SSOP技术研究中国汉族、维吾尔族HLA-A基因座基因多态性(英文)

人类白细胞抗原 (HumanLeukocyteAntigen ,HLA)基因复合物位于 6p2 1.3,有 2 2 0多个不同的功能基因 ,是人类基因组最复杂的遗传多态系统。HLA等位基因的变异在医学、法医学、人类学等领域具有重要的意义。自从 196 4年以来 ,HLA分型一直采用经典的微量淋巴细胞毒实验 ,但该方法是血清学水平的分型 ,不能识别很多特异性的等位基因 ,而且高质量的抗体也不易获得。从 2 0世纪 90年代起 ,在国家自然科学基金的资助下 ,首先开展HLAⅡ类位点基因分型研究及大规模群体多态性调查 ,所获得的中国主要民族基因数据已应用于多个领域。相比之下 ,HLAⅠ类基因数量更丰富 ,包含了A、B、C、E、F、G和假基因H、J、K、L等 10个位点 ;基因分子结构更复杂 ,更具多态性。因此 ,HLAⅠ类DNA分型比HLAⅡ类分型有许多困难。直至目前中国人群HLA A基因座基因多态性和分布频率的研究尚未充分进行。而任何DNA标记用于遗传分析、法医鉴定等领域之前 ,必须先进行群体调查 ,建立不同民族基因数据库 ,这是不可逾越的基础工作。鉴于此 ,采用灵敏而非同位素污染的PCR SSOP基因分型技术 ,对 16 5个汉族和 16 2个维吾尔族个体的HLA A基因座多态性进行调查。结果在汉族群体中发现 2 2种等位基因 ,频率最高的是HLA A 110 1(19.7% ) 。

中国北方汉族人群HLA-A、HLA-B、HLA-DR等位基因频率检测及其临床意义

目的从基因水平了解中国北方地区汉族人群人类白细胞抗原HLA-A、HLA-B、HLA-DR位点的 等位基因(以下分别简称为A等位基因、B等位基因及DR等位基因)频率,获得更完整、准确的HLA群体遗传学 数据。方法 应用聚合酶链反应一序列特异性引物(PCR-SSP)方法对2000名北方汉族健康志愿者进行A、B、DR 等位基因分型。结果鉴定了17个A等位基因,32个B等位基因,13个DRB1等位基因。最常见的基因型分别 为A*02、B*13、DRB1*15,其相应基因频率范围分别为0.2400-0.2767、0.1330-0.1432和0.1557-0.1707。结 论 本结果可作为我国HLA多态性研究的群体资料和正常参考值,对群体遗传、疾病关联研究以及寻找HLA 相合的异基因造血干细胞供者具有重要意义。

中国鲁南地区汉族人群HLA-A,B,DRB1高分辨等位基因多态性分析

本研究旨在分析中国鲁南地区汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因的高分辨多态性分布特征。采用PCR-SBT对中国鲁南地区688名无血缘关系的汉族健康人群进行HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型,并对分型结果做统计学分析。结果表明:688例样本A、B、DRB1座位分别检出31、63、39个等位基因,其中频率大于0.05的常见等位基因为A*24:02、A*30:01、A*11:01、A*02:01、A*33:03、A*02:06、B*13:02、B*44:03、B*51:01、B*46:01、B*15:01、B*58:01、DRB1*07:01、DRB1*15:01、DRB1*09:01和DRB1*08:03。上述A、B、DRB1位点常见等位基因累计基因频率分别为0.7223、0.4432、0.5453。最常见的A*-B*-DRB1*单倍型是A*30:01-B*13:02-DRB1*07:01(0.1151),最常见的两位点连锁单倍型分别是A*30:01-B*13:02(0.1303)、A*30:01-DRB1*07:01(0.1157)和B*13:02-DRB1*07:01(0.1307)。结论:获得了中国鲁南汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因和单倍型分布特征,为评估该地区患者找到HLA匹配供者的机率,为合理选择移植供者及移植免疫、HLA与疾病相关性研究提供了参考数据。

人肿瘤转移相关抗原肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定

目的预测并鉴定肿瘤转移相关抗原肝素酶来源的HLA-A2.1限制性CTL表位。方法采用超基序、量化基序和分子模拟相结合的方法,对肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位进行预测,合成候选表位肽;利用T2细胞的特点,对合成的候选肽与HLA-A2.1分子进行亲和力分析,初步验证预测结果;利用标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)可在体外有效诱导肝素酶特异性CTLs的产生,对肝素酶阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ细胞具有明显的杀伤效应。结论Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)有可能是肿瘤抗原肝素酶HLA-A2.1的限制性CTL表位。

HPV16E7抗原HLA-A2限制性CTL表位预测及其合成

目的 预测、合成、纯化及鉴定人乳头瘤病毒E7抗原的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位 ,为表位抗原特异性鉴定和临床研究提供靶肽。方法 采用超模体、多项式和量化模体方案相结合的方法 ,对靶抗原HPV16E7的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyte ,CTL)表位进行预测 ,并运用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化及纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果 分别预测出了 16个、10个和 3个九肽表位 ,确定其中 5个九肽为候选合成表位 ,各合成肽的纯度都在 95 %以上。经质谱分析 ,各肽的分子量测定值与理论值相符。结论 超模体、多项式和量化模体方案联合应用可提高预测效率 ,避免了在研究E7抗原表位时盲目合成多肽 ;所合成的多肽为高纯度靶肽 。

4082名上海骨髓库汉族无关供者HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性研究

目的了解上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1在高分辨分型水平上的等位基因及单体型频率分布特征。方法采用PCR-测序分型技术(Sequence-based typing,SBT)对4 082名随机、无血缘关系、健康的中华骨髓库上海分库汉族造血干细胞捐献者进行HLA-A、B、DRB1高分辨基因分型,利用计数法和最大似然性原理方法分别计算HLA-A、B、DRB1等位基因及单体型频率。结果 4 082例样本中,共观察到204个HLA等位基因,其中频率>0.1的HLA-A、B、DRB1等位基因分别有A*11∶01、A*24∶02、A*02∶01、B*46∶01、DRB1*09∶01、DRB1*15∶01。841条A-B单体型中,70条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),8条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),17条单体型的频率高于0.01;1 027条B-DRB1单体型中,99条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),12条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),12条单体型的频率高于0.01;3 344条A-B-DRB1单体型中,681条单体型是"可靠的"(频率≥3.67×10-4),单体型频率高于0.001有135条。结论获得上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因频率和单体型分布数据及相关遗传参数,为临床移植供者的选择、中国人群CWD表的制订、骨髓库最适库容的评估及人类遗传学研究提供参考数据。

人Ⅱ型胶原的HLA-A~＊0201限制性CTL表位的预测及初步鉴定

目的预测和初步鉴定类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)主要自身抗原Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,CⅡ)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测工具预测该抗原HLA-A*0201限制性结合肽;人工合成待测表位肽,利用T2细胞株通过直接免疫荧光法测定各肽与HLA-A*0201分子的结合力。利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immunospotassay,ELISPOT)方法检测候选肽刺激关节滑液单个核细胞(synovial fluid mononuclear cell,SFMC)分泌IFN-γ的能力。结果综合BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测结果筛选出来可能与HLA-A*0201结合的5条肽。MHC亲和力实验表明,在候选的5条肽中,P1261、P1365及P1399具有与HLA-A*0201分子结合的能力,平均荧光强度分别为:1.35、2.53、1.78。ELISPOT试验结果表明,P1365具有刺激SFMC分泌IFN-γ的能力。结论表位预测结果与初步鉴定结果具有一致性,两者联合应用初步认为P1365是HLA-A*0201限制性CTL表位的可能性最大,为下一步表位鉴定及基于人CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定理论基础。

HLA-A02基因型与中国高发区肝细胞癌的密切关联

目的：探讨ＨＬＡＡ０２型及其亚型与启东肝细胞癌的相关性。方法：用ＰＣＲＳＳＰ法分析启东肝细胞癌和正常人中ＨＬＡＡ０２型及其亚型的分布。结果：１０３例经病理诊断的肝细胞癌中５７例为ＨＬＡＡ０２型，其比例达到５５％，显著高于启东正常人群ＨＬＡＡ０２型３２％（３３／１０２）的比例，Ｐ＜０．００１。同时揭示包括ＨＬＡＡ０２型在内的ＨＬＡＡ位点的等位基因多为杂合型。启东肝细胞癌ＨＬＡＡ０２型中Ａ０２０１亚型所占的比例稍高于正常人群，但没有显著差异。分析比较表明，启东肝细胞癌中ＨＬＡＡ０２型的相对集中与当地肝癌中ｐ５３基因２４９密码子突变的高频度发生并没有关联。结论：在乙肝病毒和黄曲霉毒素均为危险因子的启东地区，ＨＬＡＡ０２型与肝细胞癌密切相关。

西北地区汉族HLA-A ,B基因座单元型分析

目的 调查分析西北地区汉族人群中HLA A ,B基因座单元型频率。方法 采用PCR SSO反向斑点杂交技术对 87个家系 2 76名西北地区汉族个体HLA A ,B基因座进行检查 ,通过HLA以单元型遗传方式遗传的规律归结出单元型。结果 居单元型频率前三位的是A0 2 B4 6、A30 B13、A0 2 B4 0 ;具有明显连锁不平衡的单元型 11种。结论 西北地区汉族人群中HLA A ,B基因座单元型频率与国内其他地区汉族人群相比有其自身特点 ,A30 B13、A0 1 B37、A32 B4

中国4个民族群体HLA-G基因14bp插入/缺失多态的分布特征及其HLA-A位点的相关性

近年来,位于HLA-G基因第8外显子3′UTR的一个14 bp插入/缺失多态位点与复发性流产、自身免疫性疾病和肝癌等疾病相关而引起广泛关注。本实验室前期的研究表明,不同群体的HLA-G基因14 bp插入/缺失频率具有群体语系分布特点。文章对土族、裕固族、傈僳族和怒族进行HLA-G基因14 bp插入/缺失的基因分型,结合HLA-A基因分型数据,分析土族、裕固族、傈僳族和怒族4个民族群体中14 bp插入/缺失与HLA-A等位基因的关系。研究结果显示:(1)尽管HLA-G基因14 bp插入频率在不同群体中的分布具有各自群体的特点,但遵循着按语系及语族分布的规律,除汉藏语系汉语族与阿尔泰语系蒙古语族无差异外,语族间差异明显;(2)不同群体中,14 bp插入与不同的HLA-A等位基因相关联。

HLA-A~*02等位基因分型技术及汉族HLA-A~*02多态性研究

建立高分辨率的套式ＰＣＲ－ＳＳＰ，对１７个ＨＬＡ－Ａ＊０２等位基因分型。利用国际标准分型细胞进行特异性鉴定，并在５４例Ａ＊０２阳性的无血缘关系汉族健康人中应用。共检测到５个Ａ＊０２亚型，显示出较高多态性：其中Ａ＊０２１１（ｎ＝２）首次在东方人群检测到；Ａ＊０２０１频率最高，占有４８．２％；其余依次为Ａ＊０２０６、Ａ＊０２０７和Ａ＊０２０３。套式ＰＣＲ－ＳＳＰ既适用于移植供体选择，又可用于人类进化研究。