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The Tat Protein Enhances CTL Responses and Therapeutic Immunity of Gag-Specific Exosome-Targeted T Cell-Based Gag/Tat-Texo Vaccine in Transgenic HLA-A2 Mice
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作者 Aizhang Xu Jie Wu +3 位作者 Yufeng Xie Rajni Chibbar Andrew Fleywald Jim Xiang 《World Journal of Vaccines》 2017年第2期11-25,共15页
Human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) chronic infection causes millions of deaths each year. We previously developed a novel HIV-1 Gag-spe cific exosome (EXO)-targeted T cell-based vaccine (Gag-Texo) using ConAs... Human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) chronic infection causes millions of deaths each year. We previously developed a novel HIV-1 Gag-spe cific exosome (EXO)-targeted T cell-based vaccine (Gag-Texo) using ConAstimulated polyclonal CD8+T (ConA-T) cells armed with Gag-specific dendritic cell (DC)-released EXOs, and showed that Gag-Texo stimulated more efficient cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses than DCs. Tat HIV-1 early regulatory protein possesses immunomodulatory and adjuvant properties. To enhance Gag-Texo immunogenicity, we generated Tat-engineered OVA/Tat Texo and Gag/Tat-Texo vaccines using ConA-T cells armed with EXOs release by DCs infected with recombinant OVA/Tat- and Gag/Tat-expressing adenoviruses (AdVOVA/Tat and AdVGag/Tat). We then assessed vaccination-stimulated CTL responses in naive mice, and therapeutic immunity in transgenic HLA-A2 mice bearing Gag/HLA-A2-expressing BL6-10OVA/A2 melanoma lung metastases. We demonstrate that the OVA/Tat-Texo vaccine enhances functional OVA-specific CTL responses, compared to the OVA-Texo vaccine, and broadens CTL responses recognizing the cryptic OVA epitope in C57BL/6 mice. Furthermore, we determine that the Gag/Tat-Texo not only stimulates more efficient CTL responses than Gag-Texo, but also induces enhanced therapeutic immunity. We show that, 30% of Gag/Tat-Texo-immunized mice are free of tumor lung-metastases, compared to all Gag-Texo-immunized mice displaying lung-metastasis. In addition, the average number of tumor lung metastases colonies (32/lung) in the Gag/Tat-Texo-immunized mice was also significantly lower than that (78/lung) observed in Gag-Texo-immunized mice. Taken together, this indicates that HIV-1 Gag/Tat-Texo capable of stimulating enhanced Gag-specific CTL responses and therapeutic immunity may become a new immunotherapeutic vaccine candidate for controlling virus in HIV-1 patients. 展开更多
关键词 Tat T-Cell VACCINE Gag EXOSOME CTL Therapeutic IMMUNITY transgenic hla-a2 MICE
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B细胞淋巴瘤/白血病基因2在颅脑外伤后抗神经元凋亡作用 被引量:3
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作者 张燕飞 降建新 +4 位作者 王瑛 张夔鸣 庄仲伟 杨成 孙志扬 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期592-596,I0002,共6页
目的通过研究B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)高表达转基因小鼠和对照小鼠颅脑打击后神经元凋亡的差异,探寻Bcl-2抗凋亡及减轻颅脑损伤的作用。方法将构建的Bcl-2质粒转入C57BL/6J×CBA杂交小鼠的受精卵,培育得到携带Bcl-2的小鼠。B... 目的通过研究B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)高表达转基因小鼠和对照小鼠颅脑打击后神经元凋亡的差异,探寻Bcl-2抗凋亡及减轻颅脑损伤的作用。方法将构建的Bcl-2质粒转入C57BL/6J×CBA杂交小鼠的受精卵,培育得到携带Bcl-2的小鼠。Bcl-2转基因小鼠9只作为实验鼠,采用随机数字法分为实验1 d组、实验7 d组和实验14 d组,每组3只。同窝非转基因小鼠9只作为对照鼠,采用随机数字法分为对照1 d组、对照7 d组和对照14 d组,每组3只。采用液压打击法中侧方液压打击的方法,以中等打击力致小鼠中等颅脑外伤。余下3只同窝非转基因小鼠为假手术组,仅打开椎板,暴露硬脊膜,不予打击。分别于术后1、7、14 d处死小鼠,取脑组织切片行苏木精-伊红(H-E)染色,观察神经元变化;采用原位末端标记法(TUNEL)染色计数TUNEL标记的阳性细胞数即凋亡神经元,并计算TUNEL染色切片的积分光密度(IOD)值。结果经聚合酶链反应及Western印迹法检测证明所培育的转基因小鼠为Bcl-2高表达的小鼠。假手术组小鼠脑细胞未见明显变化。实验鼠和对照鼠的脑组织都有出血,结构被破坏,实验鼠的损伤肿胀及出现核固缩或解离的神经元数量少于对照鼠。假手术组小鼠的脑组织未见明显的凋亡神经元细胞。实验鼠和对照鼠的脑组织标本可见TUNEL染色阳性细胞,随时间的推移逐渐增多,在损伤后7 d达到高峰,然后稳定并逐渐减少。实验1 d组、实验7 d组、实验14 d组小鼠的每个光学显微镜高倍镜视野内的TUNEL阳性神经元数(P值分别为0.042、0.039、0.033)和TUNEL染色切片的IOD值(P值均为0.000)均分别显著少于对照1 d组、对照7 d组、对照14 d组。结论 Bcl-2蛋白是中枢神经系统内在的重要的抗凋亡因子,高表达Bcl-2能够抑制颅脑损伤后神经元的凋亡,从而减轻大脑的损害。 展开更多
关键词 颅脑损伤 白血病基因2 神经元凋亡 侧方液压冲击 转基因小鼠
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腭裂相关基因甲状腺转录因子-2转基因小鼠的生物学特征 被引量:4
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作者 黄磊 石冰 +2 位作者 郑谦 蒙田 王 《华西口腔医学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期345-349,共5页
目的建立腭裂相关基因甲状腺转录因子-2(TTF-2)转基因小鼠模型,利用转基因动物模型研究TTF-2基因的活动规律和表达模式发生变化时对腭突发育过程产生的影响。方法采用聚合酶链反应法扩增C57BL/6J小鼠基因组TTF-2基因,将其定向插入pBROAD... 目的建立腭裂相关基因甲状腺转录因子-2(TTF-2)转基因小鼠模型,利用转基因动物模型研究TTF-2基因的活动规律和表达模式发生变化时对腭突发育过程产生的影响。方法采用聚合酶链反应法扩增C57BL/6J小鼠基因组TTF-2基因,将其定向插入pBROAD3-mcs载体,构建重组表达质粒pBROAD3-TTF-2,利用显微注射技术把线性化表达载体注射到受精卵的雄原核中,建立TTF-2转基因小鼠。利用特异引物聚合酶链反应和Southern blot方法鉴定转基因小鼠的基因型,采用免疫组织化学法检测TTF-2基因在转基因小鼠腭突组织中的表达。结果共注射原核期受精卵982枚,发育为2-细胞胚胎的580枚,均移植入48个假孕受体昆明白小鼠中,得到胎鼠68只。提取基因组DNA,发现有13只转基因阳性的胎鼠。免疫组织化学法检测显示TTF-2在转基因小鼠腭突中持续表达。结论通过显微注射法使外源基因pBROAD3-TTF-2整合入小鼠基因组中,成功建立了腭突持续表达TTF-2的转基因小鼠模型,其表现型为腭裂。 展开更多
关键词 甲状腺转录因子-2 持续表达 转基因小鼠 腭裂
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Bcl-2高表达转基因小鼠脊髓损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析 被引量:1
4
作者 王瑛 孙志扬 +3 位作者 降建新 张夔鸣 许国强 李光 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期618-624,共7页
目的通过建立B细胞淋巴瘤/白血病-2(B—celllymphoma/leukemia-2,Bcl-2)高表达转基因小鼠与野生型小鼠急性脊髓损伤组织的双向电泳图谱,比较蛋白质组的变化和差异表达,初步探讨Bcl-2保护脊髓损伤的分子机制。方法转基因(A组)... 目的通过建立B细胞淋巴瘤/白血病-2(B—celllymphoma/leukemia-2,Bcl-2)高表达转基因小鼠与野生型小鼠急性脊髓损伤组织的双向电泳图谱,比较蛋白质组的变化和差异表达,初步探讨Bcl-2保护脊髓损伤的分子机制。方法转基因(A组)及同窝非转基因小鼠(B组)各15只,随机分为三组(1d、7d、14d),采用垂直打击(weightdropping,WD)方法,以2.5×3.0g·cm致伤力致伤小鼠脊髓。于术后1d、7d、14d处死,取脊髓标本进行检测:①采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白,建立双向凝胶电泳图谱;②用ImageMaster软件分析图像,基质辅助激光解析电离飞行时间,质谱(MALDl2TOF2MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF);③用Mascot软件系统和NCBIMS数据库检索确定蛋白质。结果鉴定出差异蛋白质33个,其中1d8个,7d12个,14d13个。与B组小鼠比较,A组小鼠表达上调的蛋白质有热休克蛋白、含缬酪肽蛋白、peroxiredoxin6等,下调的蛋白质为钙蛋白酶、泛素羧基末端水解酶-1等。多数差异蛋白质涉及到应激保护、抗氧自由基损伤、促进神经修复等过程,具有神经保护功能。结论除了抗凋亡作用,Bcl-2蛋白可能还具有抗氧自由基损伤、促进神经修复、加强应激等多方面的神经保护功能。 展开更多
关键词 脊髓损伤 转基因小鼠 B细胞淋巴瘤/白血病-2差异表达蛋白质 蛋白质组学 质谱
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TTF-2在甲状腺转录因子-2转基因小鼠腭突发育过程中的表达
5
作者 黄磊 倪旭英 +3 位作者 石冰 郑谦 蒙田 王龑 《昆明医科大学学报》 CAS 2015年第6期26-30,共5页
目的探讨甲状腺转录因子-2转基因小鼠继发腭发育过程中,TTF-2 m RNA及蛋白表达的规律.方法于妊娠12 d、13 d、14 d、15 d分别断颈处死各3只孕鼠,无菌条件取出胚胎,解离腭突.应用RT-PCR技术和Western印记方法检测TTF-2在腭突中的表达.结... 目的探讨甲状腺转录因子-2转基因小鼠继发腭发育过程中,TTF-2 m RNA及蛋白表达的规律.方法于妊娠12 d、13 d、14 d、15 d分别断颈处死各3只孕鼠,无菌条件取出胚胎,解离腭突.应用RT-PCR技术和Western印记方法检测TTF-2在腭突中的表达.结果在甲状腺转录因子-2转基因小鼠胚胎的腭突形成、上抬和融合的发育过程中均有TTF-2的表达,但m RNA及蛋白表达水平变化无统计学意义(P>0.05),RT-PCR检测和Western印记结果一致.结论甲状腺转录因子-2转基因小鼠继发腭发育过程中,TTF-2在腭突中的持续高表达,这可能是甲状腺转录因子-2转基因小鼠出现腭裂的原因之一. 展开更多
关键词 TTF-2 转基因小鼠 腭突
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Bc1-2高表达小鼠模型的建立
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作者 张燕飞 降建新 +3 位作者 王瑛 张夔鸣 范慧敏 孙志扬 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2012年第3期1-4,共4页
目的建立Bcl-2高表达的转基因小鼠品系,为在活体动物上研究bcl-2蛋白的功能提供动物模型。方法构建含人Bcl-2基因的质粒;通过显微注射将该质粒转入C57BL/6J×CBA的杂交小鼠的受精卵,并植入假孕母鼠的子宫,PCR检测后携带人Bcl-2基因... 目的建立Bcl-2高表达的转基因小鼠品系,为在活体动物上研究bcl-2蛋白的功能提供动物模型。方法构建含人Bcl-2基因的质粒;通过显微注射将该质粒转入C57BL/6J×CBA的杂交小鼠的受精卵,并植入假孕母鼠的子宫,PCR检测后携带人Bcl-2基因的小鼠即为"Founder"鼠;将"Founder"鼠与C57BL/6J×CBA杂交小鼠不断回交,经PCR和Western bilotting筛选后即可获得阳性小鼠。结果共获得5只"Founder"鼠,其中#6、#14成功建系,连续回交繁殖7代后,PCR和Western筛选后获得bcl-2高表达阳性小鼠42只。结论成功将人bcl-2基因转入小鼠基因组内,并稳定传代,建立Bcl-2高表达小鼠,为进一步研究Bcl-2蛋白提供了很好的动物模型。 展开更多
关键词 BCL-2蛋白 转基因 高表达 小鼠
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EAAT2过表达对匹鲁卡品诱导小鼠癫痫持续状态模型的保护作用(英文)
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作者 曹锐峰 章翔 +2 位作者 章薇 林源 王丽娜 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2007年第6期484-490,共7页
目的研究兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)过表达对癫痫发作及SE诱导的海马神经元死亡的作用。方法实验采用野生型或者EAAT2转基因FVB/N小鼠,腹腔注射匹鲁卡品诱导癫痫持续状态(SE)。SE后3d,取脑、固定、切片,进行EAAT2、生长抑素的免疫组化... 目的研究兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)过表达对癫痫发作及SE诱导的海马神经元死亡的作用。方法实验采用野生型或者EAAT2转基因FVB/N小鼠,腹腔注射匹鲁卡品诱导癫痫持续状态(SE)。SE后3d,取脑、固定、切片,进行EAAT2、生长抑素的免疫组化染色以及甲酚紫染色,分别对海马CA1和齿状回门区阳性神经元进行计数。结果与野生型动物相比,EAAT2在转基因小鼠海马中表达显著增加。野生型小鼠达到SE或者死亡所需的总匹鲁卡品剂量为344±40.3mg/kg,,而EAAT2转基因小鼠达到同等效应所需剂量为657±119.9mg/kg,显著高于野生型所用剂量(P<0.05)。SE后3d,野生型小鼠海马CA1区锥体细胞层神经元相对数量为0.56,而转基因动物中为0.9,显著高于野生型动物(P<0.05)。同时,野生型和转基因小鼠癫痫后齿状回门区中间神经元相对数量分别为0.11和0.67,转基因组数量显著高于野生型组(P<0.05)。野生型小鼠癫痫后齿状回门区生长抑素阳性神经元数量为0,但是,在EAAT2转基因小鼠,数量为0.4,显著高于野生型(P<0.05)。结论EAAT2过表达对SE产生及其诱导的神经元死亡具有显著保护作用。过表达的EAAT2可能通过加强细胞外谷氨酸转运而调控其兴奋毒性。 展开更多
关键词 癫痫 海马 兴奋性氨基酸转运体2 匹鲁卡品 转基因 小鼠模型
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MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生 被引量:5
8
作者 何泉 陈兰英 +2 位作者 戴蕴平 陈永福 刘力生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期144-150,共7页
为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系,并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达,构建肌球蛋白轻链-2启动子(myosinlightchain-2promoter,MLC2)-糜酶融合基因并产生转基因小鼠.通过... 为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系,并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达,构建肌球蛋白轻链-2启动子(myosinlightchain-2promoter,MLC2)-糜酶融合基因并产生转基因小鼠.通过删除糜酶基因启动子序列,构建结构基因克隆,然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链-2启动子序列相拼接,构建MLC2-糜酶融合基因克隆,回收并纯化融合基因片段,显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠,经PCR扩增、Southern印迹杂交和PCR扩增产物的测序,筛选和确定转基因鼠.在新出生的46只小鼠中有2只为转基因阳性鼠,且外源基因能稳定遗传给后代,从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型. 展开更多
关键词 糜酶 肌球蛋白轻链 转基因
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转基因人源化ACE2裸小鼠模型的建立
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作者 孙路 付函君 +6 位作者 刘云鹏 武婧 林凯丽 石桂英 王敬竹 孙井江 高虹 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期408-415,共8页
目的建立BALB/c-Nude裸小鼠为背景的人源化ACE2(hACE2)转基因裸小鼠动物模型。方法利用hACE2转基因小鼠与雄性BALB/c-Nude裸小鼠杂交获得F1代,将F1代hACE2小鼠与BALB/c-Nude裸小鼠回交获得F2代,再将F2代hACE2小鼠互交获得F3代hACE2转基... 目的建立BALB/c-Nude裸小鼠为背景的人源化ACE2(hACE2)转基因裸小鼠动物模型。方法利用hACE2转基因小鼠与雄性BALB/c-Nude裸小鼠杂交获得F1代,将F1代hACE2小鼠与BALB/c-Nude裸小鼠回交获得F2代,再将F2代hACE2小鼠互交获得F3代hACE2转基因裸小鼠。对F3代中hACE2转基因裸小鼠的生长发育、生理指标及免疫指标与C57BL/6J野生型小鼠、hACE2小鼠和BALB/c-Nude裸小鼠对比分析。结果(1)hACE2转基因裸小鼠生长发育指标与C57BL/6J野生型小鼠、hACE2小鼠和BALB/c-Nude裸小鼠无明显差异。(2)hACE2转基因裸小鼠生理指标中,建立的hACE2转基因裸小鼠与BALB/c-Nude裸小鼠相似,病理解剖观察发现,小鼠体内均无胸腺。脏器系数结果与BALB/c-Nude裸小鼠比较,脾系数和肝系数出现显著性差异(P<0.05)。血常规检测指标与C57BL/6J野生型小鼠、hACE2小鼠比较,中性粒细胞百分比(NEU)、淋巴细胞百分比(LYM)和单核细胞百分比(MONO)均出现显著性差异(P<0.01)。(3)hACE2转基因裸小鼠免疫指标中,与C57BL/6J野生型小鼠和hACE2小鼠比较,CD45+CD3+、CD45+CD3+CD4+、CD45+CD11B+和CD45+NK+均出现显著差异(P<0.01),与BALB/c-Nude裸小鼠无明显差异。结论成功建立了BALB/c-Nude为背景的hACE2转基因免疫缺陷裸小鼠动物模型。 展开更多
关键词 宿主血管紧张素转换酶2 转基因 人源化 裸小鼠
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Overexpression of fibrinogen-like protein 2 protects against T cell-induced colitis 被引量:2
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作者 Agata Bartczak Jianhua Zhang +6 位作者 Oyedele Adeyi Achiya Amir David Grant Reginald Gorczynski Nazia Selzner Andrzej Chruscinski Gary A Levy 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2017年第15期2673-2684,共12页
AIMTo determine the effect of overexpression of fibrinogen-like protein 2 (FGL2) on regulatory T cell (Treg) and effector T (Teff) cell function on T cell-induced colitis in Rag1<sup>-/-</sup> mice.METHODS... AIMTo determine the effect of overexpression of fibrinogen-like protein 2 (FGL2) on regulatory T cell (Treg) and effector T (Teff) cell function on T cell-induced colitis in Rag1<sup>-/-</sup> mice.METHODSTreg and Teff cells from fgl2<sup>-/-</sup>, fgl2<sup>+/+</sup>, and fgl2<sup>Tg</sup> mice were purified by FACS. They were studied in vitro for immunosuppressive activity and cell proliferation and in vivo for their effects on the development and prevention of T cell-induced colitis in Rag1<sup>-/-</sup> mice.RESULTSIn vitro, fgl2<sup>Tg</sup> Treg had enhanced immunosuppressive activity, and fgl2<sup>Tg</sup> Teff had reduced proliferation to alloantigen stimulation. Transfer of Teff from C57Bl/6J mice (fgl2<sup>+/+</sup>) into Rag1<sup>-/-</sup> mice produced both clinical and histologic colitis with dense infiltrates of CD3<sup>+</sup> T cells, crypt abscesses and loss of goblet cells. Fgl2<sup>Tg</sup> Treg prevented the development of T cell-induced colitis, whereas fgl2<sup>+/+</sup> and fgl2<sup>-/-</sup> Treg were only partially protective. In mice that received fgl2<sup>Tg</sup> Treg, the ratio of Foxp3<sup>+</sup> to CD3<sup>+</sup> cells was increased both in the colon and in mesenteric lymph nodes, and Teff cell proliferation as determined by staining with Ki67 was reduced. Teff cells from fgl2<sup>Tg</sup> mice did not produce colitis.CONCLUSIONHere we show that fgl2<sup>Tg</sup> Teff are hypoproliferative and do not induce colitis. We further demonstrate that fgl2<sup>Tg</sup> Treg prevent colitis in contrast to fgl2<sup>+/+</sup> Treg, which were only partially protective. These studies collectively provide a rationale for exploring the use of FGL2 or Treg expressing high levels of FGL2 in the treatment of inflammatory bowel disease. 展开更多
关键词 Fibrinogen-like protein 2 COLITIS Regulatory T cells transgenic mouse Inflammatory bowel disease
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Bcl-2 in suppressing neuronal apoptosis after spinal cord injury 被引量:6
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作者 Ying Wang Zhi-yang Sun +2 位作者 Kui-ming Zhang Guo-qiang Xu Guang Li 《World Journal of Emergency Medicine》 CAS 2011年第1期38-44,共7页
BACKGROUND: Apoptosis plays an important role in central neural diseases and trauma. B-cell lymphoma/Leukemia-2 (Bcl-2) can inhibit apoptosis in a wide variety of cells including neurons. In this experiment, by stu... BACKGROUND: Apoptosis plays an important role in central neural diseases and trauma. B-cell lymphoma/Leukemia-2 (Bcl-2) can inhibit apoptosis in a wide variety of cells including neurons. In this experiment, by studying Bcl-2 over-expression transgenic (TG) mice subjected to spinal cord injury (SCI), we investigated whether Bcl-2 could reduce posttraumatic neuronal apoptosis, reduce the range of damage, and improve the behavioral functional recovery after contusive SCI.METHODS: Nine Bcl-2 TG mice and nine control mice were subjected to SCI of moderate severity at T10, with the use of weight dropping (WD) method (impact force 2.5×3.0 g/cm). At times up to 1 day, 7 days and 14 days after SCI, functional defi cits were evaluated with Basso, Beattie, and Bresnahan (BBB) scales, and apoptosis of neurons was investigated by using the TUNEL method. Another three control mice only underwent lamina opening, but were not subjected to SCI, to provide blank comparison.RESULTS: The mean functional scores for the control mice (5.05 ±0.35) were lower than those for the Bcl-2 TG mice (5.45 ±0.15), although the unpaired T-test revealed no signifi cant difference (P=0.67). On the other hand, the number of TUNEL positive neurons and integrated option density (IOD) scores for the Bcl-2 TG mice were both signifi cantly lower than those for the control mice (P〈0.05).CONCLUSIONS: This experiment suggests that overexpression of Bcl-2 may suppress neuronal apoptosis after SCI. Bcl-2 may be an important factor within the central nervous system that can relieve the damage after trauma. 展开更多
关键词 Spinal cord injury BCL-2 Apoptosis of neurons Weight dropping transgenic mouse
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蛋白酪氨酸激酶7和受体酪氨酸激酶样孤儿受体2在hSOD1-G93A突变肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脑干中的表达
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作者 孟凡迪 管英俊 +5 位作者 赵振涵 陈燕春 刘金梦 王雪枚 张皓云 周风华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期689-697,共9页
目的 探讨脑干中蛋白酪氨酸激酶7(PTK7)和受体酪氨酸激酶样孤儿受体2(ROR2)的表达变化与肌萎缩侧索硬化症(ALS)发病的关系。方法 选取44只人超氧化物歧化酶1(hSOD1)-G93A突变型ALS转基因小鼠,以同等数量的同窝野生型小鼠作为对照,于出生... 目的 探讨脑干中蛋白酪氨酸激酶7(PTK7)和受体酪氨酸激酶样孤儿受体2(ROR2)的表达变化与肌萎缩侧索硬化症(ALS)发病的关系。方法 选取44只人超氧化物歧化酶1(hSOD1)-G93A突变型ALS转基因小鼠,以同等数量的同窝野生型小鼠作为对照,于出生后70 d、95 d、108 d和122 d分离脑干,尼氏染色法观察模型小鼠脑干舌下神经核(12N)及面神经核(7N)神经元形态变化,RT-PCR、Western blotting技术分别检测模型小鼠脑干中PTK7和ROR2 mRNA及蛋白表达变化,免疫荧光双标技术观察12N及7N中PTK7和ROR2的细胞定位及分布特点。结果 尼氏染色结果显示,ALS转基因小鼠脑干12N及7N可见神经元尼氏体明显减少,神经元空泡样变性,胞体萎缩,核体积变小。RT-PCR结果发现,与同窝野生型小鼠相比,ALS转基因小鼠脑干ROR2和PTK7 mRNA在70 d、95 d、108 d和122 d升高。Western blotting结果显示,与同窝野生型小鼠相比,ALS转基因小鼠脑干中PTK7在70 d、95 d、108 d和122 d表达升高,ROR2在70 d、95 d、108 d表达升高,122 d表达降低。免疫荧光结果显示,在ALS转基因小鼠和野生型小鼠脑干12N及7N均可检测到ROR2/神经元核抗原(NeuN)和PTK7/NeuN双阳性细胞,ROR2/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和PTK7/GFAP双阳性细胞,提示ROR2和PTK7在神经元和星形胶质细胞中共表达。结论 PTK7和ROR2在ALS转基因小鼠脑干中表达异常与ALS发病密切相关。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化症 脑干 蛋白酪氨酸激酶7 受体酪氨酸激酶样孤儿受体2 免疫荧光 转基因小鼠
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Integrin-interacting protein Kindlin-2 induces mammary tumors in transgenic mice 被引量:6
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作者 Bing Li Xiaochun Chi +8 位作者 Jiagui Song Yan Tang Juan Du Xiaokun He Xiaoran Sun Zhenwu Bi Yunling Wang Jun Zhan Hongquan Zhang 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期225-234,共10页
Kindlin-2, an integrin-interacting protein, regulates breast cancer progression. However, currently, no animal model to study the role of Kindlin-2 in the carcinogenesis of mammary gland is available. We established a... Kindlin-2, an integrin-interacting protein, regulates breast cancer progression. However, currently, no animal model to study the role of Kindlin-2 in the carcinogenesis of mammary gland is available. We established a Kindlin-2 transgenic mouse model using a mammary gland-specific promoter, mammary tumor virus(MMTV) long terminal repeat(LTR). Kindlin-2 was overexpressed in the epithelial cells of the transgenic mice. The mammary gland ductal trees were found to grow faster in MMTV-Kindlin-2 transgenic mice than in control mice during puberty. Kindlin-2 promoted mammary gland growth as indicated by more numerous duct branches and larger lumens, and more alveoli were formed in the mammary glands during pregnancy under Kindlin-2 overexpression. Importantly, mammary gland-specific expression of Kindlin-2 induced tumor formation at the age of 55 weeks on average. Additionally, the levels of estrogen receptor and progesterone receptor were decreased, whereas human epidermal growth factor receptor 2 and β-catenin were upregulated in the Kindlin-2-induced mammary tumors. These findings demonstrated that Kindlin-2 induces mammary tumor formation via activation of the Wnt signaling pathway. 展开更多
关键词 Kindlin-2 breast cancer mouse MAMMARY GLAND growth MAMMARY TUMORIGENESIS transgenic mouse
原文传递
Generation of fad2 transgenic mice that produce omega-6 fatty acids 被引量:1
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作者 CHEN Qing1, LIU Qing2, WU ZhiFang1, WANG ZongYi3 & GOU KeMian1 1 State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Beijing 100193, China 2 Blackmountain Laboratory, CSIRO Plant Industry, Canberra, Australia 3 College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100193, China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2009年第11期1048-1054,共7页
Fatty acid desaturase-2 (FAD2) introduces a double bond in position 12 in oleic acid (18:1) to form linoleic acid (18:2 n-6) in higher plants and microbes. A new transgenic expression cassette, containing CMV promoter... Fatty acid desaturase-2 (FAD2) introduces a double bond in position 12 in oleic acid (18:1) to form linoleic acid (18:2 n-6) in higher plants and microbes. A new transgenic expression cassette, containing CMV promoter/fad2 cDNA/SV40 polyA, was constructedto produce transgenic mice. Among 63 healthy offspring, 10 founders (15.9%) integrated the cotton fad2 transgene into their genomes, as demonstrated by PCR and Southern blotting analysis. All founder mice were fertile and heterozygous fad2 female and nontransgenic littermates were used for fatty acid analysis using gas chromatography. One fad2 transgenic line showed substantial differences in the fatty acid profiles and the level of linoleic acid was increased 19% (P<0.05) in transgenic muscles compared to their nontransgenic littermates. Moreover, it exhibited an 87% and a 9% increase (P<0.05) in arachidonic acid (20:4 n-6) in muscles and liver, compared to their nontransgenic littermates. The results indicate that the plant fad2 gene can be functionally expressed in transgenic mice and may playan active role in conversion of oleic acid into linoleic acid. 展开更多
关键词 FATTY ACID DESATURASE FAD2 transgenic mouse oleic ACID linoleic ACID arachidonic ACID
原文传递
Studies on renin-2 gene in transgenic rats
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作者 陈兰英 方福德 +2 位作者 田小利 刘红 赵淑华 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 1999年第5期20-25,共6页
Objective To determine the function of, in vivo, renin and its role in the pathogenesis of hypertension. Methods A renin 2 gene restriction map was constructed by endonuclease digest ion and Southern blotting hy... Objective To determine the function of, in vivo, renin and its role in the pathogenesis of hypertension. Methods A renin 2 gene restriction map was constructed by endonuclease digest ion and Southern blotting hybridization. Transgenic rats were produced via micro injection method.Results The 24 kb fragments containing mouse full length ren 2 and it s flanking sequence were cleaved by single enzymes (EcoRⅠ, KpnⅠ and BamHⅠ) an d combined enzymes (EcoRⅠ/KpnⅠ, KpnⅠ/BamHⅠ and BamHⅠ/EcoRⅠ), respectively. The digests were electrophoresed in 0.8% agarose plates and transferred onto NC membranes. Radioactive 735 bp and 1400 bp probes obtained from half and full l ength renin 1 cDNA were used in southern blotting hybridization. According to t he electrophoresis and hybridization patterns, a ren 2 restriction map was cons tructed. 1603 fertilized rat ova after injection with purified 24 kb renin 2 ge ne were implanted into the oviducts of 81 pseudopregnant recipients in about 2 0 ova per female rat. 306 progenies were obtained from 50 foster mothers (averag e of pregnancies was 56.6%). 248 survived pups were identified by PCR analys is and Southern hybridization, and eight positive rats were found to be the transgenic rats (founder, F). All of them carried long fragments (24 kb) of renin 2 gene with normal blood pressure. Preliminary breeding and screening were carried out in the founder. Total survival pups (17.8%) and overall efficiencies (1%) were h arvested as the same as those reported in the literatures. A systemic observatio n and the problems occurred during production of transgenic rats were also descr ibed besides the technique procedure used in this study.Conclusions Mapping of full length murine ren 2 can be used in invest igation of the structure and function of the gene. The results denoted that the ren 2 tran sgenic rats were successfully established in this study and the technique used i n the production of transgenic rats was proved to be valid in leading to wide s pread application of transgenic technique to many other related researches. 展开更多
关键词 mouse renin 2 gene · transgenic rat · pronucleus microinjection · hypertension · restriction map
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MKR转基因小鼠糖尿病发病特点的初步探讨 被引量:19
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作者 喻嵘 成细华 +3 位作者 胡伟 魏开春 Yubin Guo Jun-Li Liu 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期333-337,共5页
目的观察骨骼肌胰岛素样生长因子-1受体及胰岛素受体的功能缺失(Mouse overexpressing adominant-negative IGF-I receptor specifically in muscle,MKR mouse)转基因2型糖尿病小鼠的血糖及其生长情况。方法由美国国立卫生研究院(NIH)... 目的观察骨骼肌胰岛素样生长因子-1受体及胰岛素受体的功能缺失(Mouse overexpressing adominant-negative IGF-I receptor specifically in muscle,MKR mouse)转基因2型糖尿病小鼠的血糖及其生长情况。方法由美国国立卫生研究院(NIH)授权使用引进的MKR鼠,经自然交配后繁殖的子代作为研究对象,制备尾组织基因组DNA,经聚合酶链反应得到扩增产物,1%琼脂糖凝胶电泳观察鉴定。同时对MKR鼠子代出生后的血糖、体重、胰岛素定时检测。同期采用昆明种小鼠或C57野生型小鼠进行对照。结果MKR鼠所有子代鼠均会出现长度为330 bp的DNA片段,表明该MKR鼠后代能稳定遗传。新生MKR鼠自出生3周开始,即出现显著的血糖增高,5周以后血糖则较稳定地维持在高水平。与对照组小鼠同期的血糖比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01)。其体重增长随年龄的增长而减慢,至4月龄时体重基本稳定,但无下降趋势。MKR鼠在2月龄时即表现出显著的高胰岛素血症及糖耐量低下,与对照组小鼠同期比较,亦具有非常显著性意义(P<0.01)。MKR鼠在生长过程中无自然死亡发生。结论MKR鼠是至今为止一种非常良好的2型糖尿病的动物模型。 展开更多
关键词 2型糖尿病 小鼠 转基因技术 胰岛素样生长因子-1受体 胰岛素受体
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TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖与凋亡相关基因表达的关系 被引量:6
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作者 何迎春 卢芳国 +1 位作者 田道法 刘红萍 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2008年第5期363-366,共4页
背景与目的:探讨TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮癌前病变发生与细胞周期分布,凋亡相关基因bax、bcl-2和增殖相关基因PCNA的表达水平及它们与p53mt基因表达的相关关系。材料与方法:HE染色法观察G4代12月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT... 背景与目的:探讨TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮癌前病变发生与细胞周期分布,凋亡相关基因bax、bcl-2和增殖相关基因PCNA的表达水平及它们与p53mt基因表达的相关关系。材料与方法:HE染色法观察G4代12月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因阳性和阴性小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮病理组织学变化,流式细胞术测定细胞周期分布特点,免疫组织化学法检测组织中p53mt、bax、bcl-2和PCNA表达水平,综合分析其相关性。结果:转基因阴性小鼠和阳性小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变发生率分别为0和63.64%(P<0.01)。与转基因阴性小鼠比较,转基因阳性小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织G0/G1期细胞数量减少,S期、G2/M期细胞数量增多,细胞增殖指数增高(P均<0.01),p53mt、bcl-2和PCNA表达水平显著增高(P<0.01),bax表达水平显著降低,bcl-2/bax比值升高(P<0.01)。结论:TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因阳性小鼠p53mt的表达可引起bax表达抑制,bcl-2表达水平增高,bcl-2/bax比值升高,PCNA表达增强,由此导致细胞凋亡活性降低,细胞增殖活性升高,细胞转化机率增加,可能与鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变有密切关系。 展开更多
关键词 转基因小鼠 癌前病变 细胞周期 baxbcl-2比值 细胞增殖核抗原
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转sMTPGH基因小鼠胚胎的体外培养 被引量:1
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作者 孙燕 孙新明 +1 位作者 侯蓉 张家骅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期387-389,共3页
采用纯化的羊金属硫蛋白 (s MT)启动子指导的猪生长激素 (PGH )基因 (s MTPGH)为显微注射片段 ,将其导入小鼠受精卵原核 ,比较了几种不同培养液对导入外源基因的小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明 ,改进的 M16培养液(用 m M16表示 )能... 采用纯化的羊金属硫蛋白 (s MT)启动子指导的猪生长激素 (PGH )基因 (s MTPGH)为显微注射片段 ,将其导入小鼠受精卵原核 ,比较了几种不同培养液对导入外源基因的小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明 ,改进的 M16培养液(用 m M16表示 )能有效克服 2 -细胞阻断现象 ,并使转基因胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段。在 m M16培养液的基础上 ,再加入表皮生长因子 (EGF) ,可使 1-细胞胚胎发育到囊胚的比率进一步提高。在 3种培养液 (M16、m M16、m M16 +EGF)中 ,转基因胚胎突破 2 -细胞阻断期的比率分别为 12 %、6 8%、90 % ,发育到囊胚期的比率分别是 0 %、2 0 %、4 3%。采用 PCR方法检测 5 7枚经体外培养发育至囊胚的显微注射胚胎 ,4枚扩增出阳性条带 ,外源基因在囊胚期胚胎的滞留率为 7%。 展开更多
关键词 sMTPGH 显微注射 胚胎 体外培养 2-细胞阻断 PCR 转基因小鼠
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Tg-visfatin×ob/ob小鼠表型特征与内脂素表达 被引量:1
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作者 关菲菲 全雄志 +3 位作者 高珊 张晓娟 葛文平 张连峰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第3期31-35,共5页
目的研究Tg-visfatin×ob/ob小鼠的表型特征并探讨内脂素的作用。方法将visfatin转基因小鼠与ob(+/-)小鼠杂交,获取visfatin转基因ob/ob小鼠(Tg-visfatin×ob/ob),以ob/ob小鼠为对照,测定两种小鼠1~9月龄的体重变化,分别在3、5... 目的研究Tg-visfatin×ob/ob小鼠的表型特征并探讨内脂素的作用。方法将visfatin转基因小鼠与ob(+/-)小鼠杂交,获取visfatin转基因ob/ob小鼠(Tg-visfatin×ob/ob),以ob/ob小鼠为对照,测定两种小鼠1~9月龄的体重变化,分别在3、5、9月龄测定其腹腔糖耐受和胰岛素耐受情况,并对其从9月龄~11月龄的死亡率进行统计。结果两种小鼠在1~9月龄的体重差异无显著性。腹腔糖耐受和胰岛素耐受实验显示,与ob/ob小鼠相比,3月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的糖耐受受损及胰岛素耐受情况得以改善;5月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠仅糖耐受受损得以改善;9月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠具有更严重的糖耐受受损及胰岛素耐受。统计结果显示,从9月龄到11月龄之间,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的死亡率比ob/ob小鼠提高了44.4%。结论 visfatin体内的高表达对ob/ob小鼠糖耐受和胰岛素耐受有影响,作用效果随着小鼠的年龄不同而变化,在早期起到代偿性的缓解ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受的作用,到后期表现为失代偿性的加重了ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受,并增加了小鼠的死亡率。 展开更多
关键词 内脂素 转基因 ob ob小鼠 2型糖尿病 胰岛素耐受
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C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究 被引量:2
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作者 左琴 刘甦苏 +3 位作者 周舒雅 刘佐民 王金恒 范昌发 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第5期34-37,共4页
目的建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术。方法通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测。结果体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率... 目的建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术。方法通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测。结果体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78%,移植产仔率是21.31%,后代的阳性率是23.08%;体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33%,移植产仔率是15.78%,后代的阳性率是33.33%。结论两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法。 展开更多
关键词 C57-ras转基因小鼠 体外受精 胚胎冷冻 2细胞期胚胎
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