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中国汉族人群HLA-B^*40组的多态性研究 被引量:5
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作者 李桢 金士正 +4 位作者 程良红 王大明 周丹 邹红岩 吴国光 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期215-218,共4页
为了研究中国汉族人群HLA-B*40等位基因的分布特点,探讨其可能对临床供者选择的影响,从中华骨 髓库深圳分库中随机抽取381名志愿供者,用PCR-SSO方法进行HLA-B基因分型;另从已分型的1 270例供者中 选出低分辨率结果为B*40纯合子的样本。... 为了研究中国汉族人群HLA-B*40等位基因的分布特点,探讨其可能对临床供者选择的影响,从中华骨 髓库深圳分库中随机抽取381名志愿供者,用PCR-SSO方法进行HLA-B基因分型;另从已分型的1 270例供者中 选出低分辨率结果为B*40纯合子的样本。所有B*40阳性标本采用PCR-SBT及PCR-SSP方法进行高分辨率分 型。结果表明:随机抽取的381例样本通过Hardy-Weinberg平衡检验,HLA-B*40的基因频率为0.1692。在实验 中仅检测到B*4001,B*4002,B*4003,B*4006,其血清学特异性分属B60,B61。各等位基因相对频率B*4001为 0.1192.B*4002为0.0154,B*4003为0.0038,B*4006为0.0308。B*40纯合子在高分辨水平上检测,其等位基因 表现出一定的规律性,低分辨结果为B*40XX(B*4001组),-,高分辨都是B*4001;低分辨为B*40XX(B*4002 组),一,高分辨则为B*4002或B*4006或二者杂合子。结论:中国汉族人群B*40基因家族中B*4001占绝对优 势。为了选择最适供者,建议临床配型中使用高分辨率基因分型。 展开更多
关键词 HLA—B基因 HLA—B^*40基因 高分辨率分型 基因多态性
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HLA-B40组等位基因多态性和血清学分型不明确标本分析 被引量:4
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作者 冯明亮 马 俊 +3 位作者 季 芸 陆 琼 稽月华 杨 颖 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期215-217,共3页
目的 利用DNA分型技术调查上海汉族人群HLA-B40组等位基因多态性并比较配型标本中HLA-B40抗原血清学和DNA分型的结果。方法 采用反向PCR-SSOP技术进行DNA分型,可检出HLA-B*4001-4011等11个等位基因。结果所有样本DNA分型均获成功,无假... 目的 利用DNA分型技术调查上海汉族人群HLA-B40组等位基因多态性并比较配型标本中HLA-B40抗原血清学和DNA分型的结果。方法 采用反向PCR-SSOP技术进行DNA分型,可检出HLA-B*4001-4011等11个等位基因。结果所有样本DNA分型均获成功,无假阳性和假阴性结果出现。质控DNA分型结果与UCLA结果相符。上海地区汉族人群共检出B*4001-4003、4005-400、4011等等位基因,未检出B*4004、4008-4010等等位基因。296名无关个体中HLA-B40*组等位基因频率为0.140 2。血清学方法检测HLA-B40组抗原错误率为12.82%(10/78)。结论 该技术用于HLA-B40分型分辨率高,分型结果较血清学方法更加精确,可确保HLA分型的准确。 展开更多
关键词 hla-b40 DNA分型 血清学分型 基因多态性 等位基因
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新等位基因HLA-B*40:162测序分析及确认
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作者 杜占慧 胡彬 +2 位作者 冯智慧 焦淑贤 吴振军 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期192-194,共3页
本研究旨在识别并确认中国人群中HLA-B位点的一个新等位基因。应用PCR-SBT对中华骨髓库供者样本进行HLA分型,对可能的HLA-B新等位基因利用组序列特异性引物(GSSP)及单链测序基因分型技术进行测序,并与已知同源性最高的等位基因进行序列... 本研究旨在识别并确认中国人群中HLA-B位点的一个新等位基因。应用PCR-SBT对中华骨髓库供者样本进行HLA分型,对可能的HLA-B新等位基因利用组序列特异性引物(GSSP)及单链测序基因分型技术进行测序,并与已知同源性最高的等位基因进行序列比对,分析二者差异。结果发现,有1个样本的HLA-B位点与目前已知的HLA-B基因序列均不一致,与其同源性最高的B*40:06:01的差异表现在第2外显子272位碱基由C>T,导致第67位密码子由丝氨酸变为苯丙氨酸。结论:确认该基因为HLA-B位点的1个新等位基因,已经被WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*40:162。 展开更多
关键词 HLA 新等位基因 hla-b40 162 组序列特异性引物 单链测序
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Correlation between peripheral blood Cx40 gene polymorphism and atherosclerotic plaque property development in patients with cerebral infarction
4
作者 Yu-Xin Li Sheng Zhou 《Journal of Hainan Medical University》 2018年第16期13-17,共5页
Objective:To study the correlation between peripheral blood connexin 40 (Cx40) gene polymorphism and atherosclerotic plaque property development in patients with cerebral infarction.Methods: Patients who were treated ... Objective:To study the correlation between peripheral blood connexin 40 (Cx40) gene polymorphism and atherosclerotic plaque property development in patients with cerebral infarction.Methods: Patients who were treated in the Second Affiliated Hospital of Xi'an Medical University due to acute cerebral infarction between March 2015 and March 2018 were selected as cerebral infarction group, and healthy subjects who received physical examination during the same period were selected as control group. Peripheral blood was collected to detect the polymorphism of Cx40 gene rs35594137 locus, and serum was collected to determine the contents of cytokines, proteases and related molecules.Results: The constituent ratio of Cx40 gene AA+AG genotype in peripheral blood of cerebral infarction group was higher than that of control group whereas the constituent ratio of GG genotype was lower than that of control group;serum IL-17, HMGB1, VCAM1, MCP-1, P-selectin, YKL-40, MMP9, TIMP1 and Caspase-3 contents as well as MMP9/TIMP1 ratio of cerebral infarction group were significantly higher than those of control group whereas ADAMTS13 and Vaspin contents were significantly lower than those of control group;serum IL-17, HMGB1, VCAM1, MCP-1, P-selectin, YKL-40, MMP9, TIMP1 and Caspase-3 contents as well as MMP9/TIMP1 ratio of cerebral infarction group of patients with CX40 gene AA+AG genotype were significantly higher than those of patients with GG genotype whereas ADAMTS13 and Vaspin contents were significantly lower than those of patients with GG genotype.Conclusion: The mutation from Cx40 gene rs35594137 allele G to A in peripheral blood of patients with cerebral infarction can promote the development of atherosclerotic plaque properties. 展开更多
关键词 Cerebral infarction CONNEXIN 40 gene polymorphism ATHEROSCLEROTIC plaque
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稳定型冠心病患者血清SAA、sST2、sCD40L变化及其对不良心血管事件的预测价值
5
作者 魏欣 申辽辽 +2 位作者 崔晗 王玉艳 孙颖 《分子诊断与治疗杂志》 2024年第11期2094-2098,共5页
目的分析稳定型冠心病(SCAD)患者血清淀粉样蛋白A(SAA)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)变化,探讨其对不良心血管事件的预测价值。方法选取2020年1月至2023年6月西安凤城医院收治的284例SCAD... 目的分析稳定型冠心病(SCAD)患者血清淀粉样蛋白A(SAA)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)变化,探讨其对不良心血管事件的预测价值。方法选取2020年1月至2023年6月西安凤城医院收治的284例SCAD患者作为研究对象,根据Gensini积分将患者分为轻度组(Gensini评分≤26分,n=93)、中度组(Gensini评分27~40分,n=158)、重度组(Gensini评分>40分,n=33),比较三组血清SAA、sST2、sCD40L水平,并分析血清SAA、sST2、sCD40L对主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。结果血清SAA、sST2、sCD40L水平:重度组>中度组>轻度组(P<0.05);MACE组血清SAA、sST2、sCD40L水平高于非MACE组(P<0.05);Logistic回归分析显示,患有糖尿病、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)升高、SAA升高、sST2升高、sCD40L升高均为影响SCAD患者发生MACE的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清SAA、sST2、sCD40L联合预测SCAD患者MACE的AUC为0.837,高于三指标单独检测(P<0.05)。结论SCAD患者血清SAA、sST2、sCD40L水平与冠脉病变程度相关,三者对MACE的预测价值较高,可作为临床预测预后的潜在途径。 展开更多
关键词 稳定型冠心病 淀粉样蛋白A 可溶性生长刺激表达基因2蛋白 可溶性白细胞分化抗原40配体 不良心血管事件
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NEP1-40基因克隆及蛋白的原核表达和纯化 被引量:4
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作者 宫福良 王坤正 +4 位作者 余鹏博 党晓谦 王春生 时志斌 杨佩 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期9-12,共4页
目的通过基因工程手段从大鼠脊髓中获取Nogo-66、NEP1-40基因并实现其蛋白的体外表达。方法从幼年大鼠的脊髓组织中,通过RT-PCR技术获得Nogo-66、NEP1-40基因,将目的基因通过基因连接反应与T载体连接,重组质粒进行基因序列测序,构建PQE3... 目的通过基因工程手段从大鼠脊髓中获取Nogo-66、NEP1-40基因并实现其蛋白的体外表达。方法从幼年大鼠的脊髓组织中,通过RT-PCR技术获得Nogo-66、NEP1-40基因,将目的基因通过基因连接反应与T载体连接,重组质粒进行基因序列测序,构建PQE30-GST和目的基因的高表达质粒,异丙基-β-D-硫代半乳糖(isopropy-lthiogalactoside,IPTG)诱导表达,Ni柱纯化,Western-blot法检测纯化的目的蛋白。结果成功获得大鼠Nogo-66、NEP1-40基因,加上两端的酶切位点和保护性碱基,大小分别为215bp和137bp。序列测序显示基因突变率为0,表达质粒构建双酶切(BamH和Hind)可见目的基因的条带,经IPTG诱导表达,获得带GST标签的融合蛋白Nogo-66和NEP1-40,相对分子质量分别为33.2×103和30.3×103。蛋白纯化结果理想,经Western-blot分析证实抗原性正确。结论Nogo-66、NEP1-40蛋白可通过基因工程手段获得体外高效表达,这将对其功能的研究及脊髓损伤疫苗的研究提供基础。 展开更多
关键词 NEP1-40 蛋白表达 脊髓损伤
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siRNA沉默HBx基因对肝癌细胞YKL-40蛋白表达影响的研究 被引量:3
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作者 张永红 贺兴鄂 +2 位作者 唐晓鹏 王文龙 罗开忠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期241-244,共4页
目的观察HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒X(HBx)基因沉默对酿酒酵母YKL-40蛋白表达的影响。方法构建靶向HBx基因的siRNA真核表达载体pRNAT-HBx和阴性对照质粒,同时设空白对照组,采用Lipofectinamine 2000脂质体转染法转染人肝癌细胞系HepG... 目的观察HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒X(HBx)基因沉默对酿酒酵母YKL-40蛋白表达的影响。方法构建靶向HBx基因的siRNA真核表达载体pRNAT-HBx和阴性对照质粒,同时设空白对照组,采用Lipofectinamine 2000脂质体转染法转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞。采用RT-PCR检测各组中HBx和YKL-40的mRNA水平,Western blot、细胞免疫荧光检测各组中HBx蛋白和YKL-40蛋白的表达。结果pRNAT-HBx明显抑制HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达,同时YKL-40的mRNA和细胞内蛋白表达水平也随之相应下调。结论抑制HBx基因的表达能下调HepG2.2.15细胞中YKL-40蛋白的表达,提示HBx蛋白对YKL-40蛋白的表达具有一定的激活作用。 展开更多
关键词 小干扰RNA HEPG2.2.15细胞 乙型肝炎病毒X基因 YKL-40蛋白
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YKL-40 RNA干扰对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响 被引量:3
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作者 张辉 周文平 +2 位作者 刘刚琼 张文静 张金盈 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第14期2200-2203,共4页
目的研究YKL-40 RNA干扰(RNAi)对载脂蛋白E基因敲除小鼠(apoE^-/-小鼠)动脉粥样硬化(AS)的影响。方法72只apoE^-/-小鼠高脂饮食并采用左颈总动脉缩窄性套管法诱导AS形成。8周后apoE^-/-小鼠随机分为对照组,病毒阴性对照(NC)组和观察组,... 目的研究YKL-40 RNA干扰(RNAi)对载脂蛋白E基因敲除小鼠(apoE^-/-小鼠)动脉粥样硬化(AS)的影响。方法72只apoE^-/-小鼠高脂饮食并采用左颈总动脉缩窄性套管法诱导AS形成。8周后apoE^-/-小鼠随机分为对照组,病毒阴性对照(NC)组和观察组,并分别转染生理盐水、阴性对照病毒、YKL-40 RNA干扰慢病毒。转染6周后颈动脉斑块制作切片并进行HE和油红O染色,然后对斑块组分进行分析;采用ELISA法检测血浆单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平。结果慢病毒转染6周后,与对照组及NC组相比,观察组血浆YKL-40浓度明显降低(P<0.05);且观察组小鼠血浆炎症因子表达水平明显降低(P<0.05)。YKL-40 RNAi可增加颈动脉斑块纤维帽厚度,降低斑块脂质含量并减少斑块面积,进而增加斑块稳定性。本研究中RNAi的有益作用独立于降脂作用之外。结论YKL-40 RNAi可降低炎症基因表达并增加斑块的稳定性,且这种作用独立于降脂作用之外。 展开更多
关键词 YKL-40 动脉粥样硬化 载脂蛋白E基因敲除小鼠 RNA干扰 基因治疗
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SV40T基因转化的山羊乳腺上皮细胞系及其生物学特性 被引量:3
9
作者 宋红芹 孙怀昌 +1 位作者 许益民 王宝安 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第4期203-207,共5页
目的 建立能用于乳腺特异表达基因构件质量检验的山羊乳腺上皮细胞系。方法 根据已发表的SV4 0病毒T基因序列设计引物 ,以整合有SV4 0DNA早期基因区的COS 1细胞基因组DNA为模板 ,用高保真PCR扩增SV4 0T基因。将获得的SV4 0T基因克隆... 目的 建立能用于乳腺特异表达基因构件质量检验的山羊乳腺上皮细胞系。方法 根据已发表的SV4 0病毒T基因序列设计引物 ,以整合有SV4 0DNA早期基因区的COS 1细胞基因组DNA为模板 ,用高保真PCR扩增SV4 0T基因。将获得的SV4 0T基因克隆入真核表达载体 ,并用获得的重组表达质粒转染山羊原代乳腺上皮细胞。经有限稀释和反复传代后获得转化细胞克隆 ,对其生物学特性进行研究。结果 扩增出序列正确的SV4 0T基因 ,重组质粒转染获得的转化细胞的对数生长期为接种后第 4天 ,细胞群体倍增时间为 2 3 5h ,克隆形成率为2 6 7%。DNA斑点杂交试验证明转化细胞的基因组中整合有SV4 0T基因 ,染色体核型分析试验表明转化细胞的核型无明显异常 ,裸鼠接种试验证明转化细胞不能形成肿瘤 ,软琼脂集落形成试验表明转化细胞在软琼脂中不能生长。部分细胞克隆已在体外传 30代以上 ,保持正常乳腺上皮细胞的形态特征 ,在胶原基质上能形成腺泡样结构。结论 本研究获得的SV4 0T基因转化的山羊乳腺上皮细胞具有转化细胞系的生物学特性。 展开更多
关键词 猴病毒40T基因 山羊 乳房 上皮细胞 生物学特性 SV40T基因
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脑室注射Aβ_(1-40)对大鼠皮质和海马纤连蛋白基因表达的影响 被引量:3
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作者 金荣祥 吕立夏 +3 位作者 姚劲松 杨翠香 李咏梅 王尧 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2002年第2期117-118,共2页
目的 研究脑室注射Aβ1-4 0 对大鼠皮质、海马纤连蛋白基因表达的影响。方法 通过脑室注射Aβ1-4 0 ,建立大鼠AD模型 ,采用逆转录PCR方法研究纤连蛋白在皮质、海马的表达情况。结果 通过Morris氏水迷宫实验、脑片刚果红染色及胆碱乙... 目的 研究脑室注射Aβ1-4 0 对大鼠皮质、海马纤连蛋白基因表达的影响。方法 通过脑室注射Aβ1-4 0 ,建立大鼠AD模型 ,采用逆转录PCR方法研究纤连蛋白在皮质、海马的表达情况。结果 通过Morris氏水迷宫实验、脑片刚果红染色及胆碱乙酰转移酶表达水平等方面验证AD模型成功 ,在AD鼠皮质、海马纤连蛋白基因高表达。结论 纤连蛋白为整合素的配体 ,Aβ1-4 0 诱导其基因高表达可能介导Aβ1-4 0 与小胶质细胞的结合 ,激活小胶质细胞促进神经元死亡。 展开更多
关键词 AΒ1-40 纤连蛋白 基因表达 阿尔茨海默病 大鼠
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鸡40周龄蛋重主基因-多基因混合遗传模型分析 被引量:5
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作者 曲亮 马猛 +3 位作者 王克华 沈曼曼 窦套存 郭军 《中国家禽》 北大核心 2014年第7期10-12,16,共4页
本研究以黑羽绿壳蛋鸡(P1)和白来航鸡(P2)为材料,测定P1、P2及其F1、F2代的40周龄蛋重,应用SEA-G4F2软件分析蛋重遗传规律。结果表明,40周龄蛋重为2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性-上位性多基因混合遗传模型(E模型),主基因遗传率为... 本研究以黑羽绿壳蛋鸡(P1)和白来航鸡(P2)为材料,测定P1、P2及其F1、F2代的40周龄蛋重,应用SEA-G4F2软件分析蛋重遗传规律。结果表明,40周龄蛋重为2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性-上位性多基因混合遗传模型(E模型),主基因遗传率为0.4307,多基因遗传率为0.0254,主基因的遗传率远大于多基因的遗传率。 展开更多
关键词 40周龄蛋重 主基因-多基因混合遗传模型
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载脂蛋白E基因、TOMM40基因多态性与海南省百岁老人长寿的关联性 被引量:1
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作者 刘正旺 张明 +3 位作者 杨华 云美玲 蔡望伟 张云霞 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第15期69-75,共7页
目的探讨载脂蛋白E基因、线粒体外膜转位酶同工酶40的rs2075650多态性与海南省百岁老人长寿的关联性。方法用聚合酶链反应法分析百岁老人组(n=259)和对照组(n=529)载脂蛋白E基因、线粒体外膜转位酶同工酶40的rs2075650的基因型和等位基... 目的探讨载脂蛋白E基因、线粒体外膜转位酶同工酶40的rs2075650多态性与海南省百岁老人长寿的关联性。方法用聚合酶链反应法分析百岁老人组(n=259)和对照组(n=529)载脂蛋白E基因、线粒体外膜转位酶同工酶40的rs2075650的基因型和等位基因频率。结果 1载脂蛋白Eε2ε3、ε2ε4基因型频率百岁老人组低于对照组;ε2等位基因频率对照组高于百岁老人组。2百岁老人组线粒体外膜转位酶同工酶40型频率AA基因型频率高于对照组;等位基因频率分布差异无统计学意义。按载脂蛋白E基因分为携带ε4和非携带ε4等位基因进行分层分析:携带ε4的AA基因型频率百岁老人组高于对照组;A等位基因频率百岁老人组高于对照组。非携带ε4的GA、AA基因型频率百岁老人组高于对照组。等位基因A在非携带ε4等位基因频率百岁老人组高于对照组。结论载脂蛋白E和线粒体外膜转位酶同工酶40连锁分析显示,线粒体外膜转位酶同工酶40的rs2075650位点AA基因型与携带ε4与百岁老人长寿相关。等位基因A与携带ε4百岁老人长寿有关联。 展开更多
关键词 长寿 载脂蛋白E基因 线粒体外膜转位酶同工酶40 基因多态性
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脑室注射AB_(1-40)对海马NAPOR基因表达的影响 被引量:2
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作者 金荣祥 吕立夏 +3 位作者 姚劲松 杨翠香 李学礼 王尧 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2001年第6期4-6,22,共4页
目的 研究脑室注射Aβ1 40 对海马NAPOR基因表达的影响。方法 利用立体定向仪将Aβ1 40 注射脑室 ,建立大鼠AD模型 ,采用逆转录PCR方法研究NAPOR在海马的差异表达。结果 通过莫氏水迷宫实验及胆碱乙酰转移酶的基因表达验证AD模型成... 目的 研究脑室注射Aβ1 40 对海马NAPOR基因表达的影响。方法 利用立体定向仪将Aβ1 40 注射脑室 ,建立大鼠AD模型 ,采用逆转录PCR方法研究NAPOR在海马的差异表达。结果 通过莫氏水迷宫实验及胆碱乙酰转移酶的基因表达验证AD模型成功 ,NAPOR的RT PCR结果表明该基因片段在AD鼠海马高表达。结论 NAPOR为RNA结合蛋白 ,其表达的时空模式与神经元凋亡密切相关。结果提示Aβ1 40 对海马神经元的毒性可能通过改变NAPOR基因的表达 ,促进神经元凋亡而实现。 展开更多
关键词 AB_(1-40) 基因表达 海马 大鼠
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NEP1-40治疗增加大鼠脊髓损伤引起的降钙素基因相关肽CGRP的表达 被引量:3
14
作者 徐纪伟 孙丹华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期654-658,共5页
目的探讨大鼠脊髓损伤(spinal cord impairment,SCI)后Nogo受体拮抗剂NEP1-40对降钙素基因相关肽(calcitoningene related peptide,CGRP)表达的影响。方法取雌性SD大鼠,随机分成对照组、生理盐水组和NEP1-40治疗组,每组60只。生理盐水组... 目的探讨大鼠脊髓损伤(spinal cord impairment,SCI)后Nogo受体拮抗剂NEP1-40对降钙素基因相关肽(calcitoningene related peptide,CGRP)表达的影响。方法取雌性SD大鼠,随机分成对照组、生理盐水组和NEP1-40治疗组,每组60只。生理盐水组和NEP1-40治疗组的大鼠建立脊髓半切损伤模型,并在蛛网膜下腔留管,再分别注射生理盐水和NEP1-40;对照组的大鼠不损伤脊髓。SCI后1、3、7、14、21 d收集损伤部位的脊髓组织,再用免疫荧光、免疫印迹检测每组CGRP蛋白含量,并在术后7 d采用免疫荧光双标技术检测损伤部位的脊髓内生长相关蛋白-43(growth associated protein 43,GAP-43)、CGRP的表达量。结果生理盐水组CGRP阳性神经细胞减少,而NEP1-40组CGRP阳性神经细胞24 h内减少,然后开始增多,到术后7 d达到高峰,之后一直维持在高水平表达,而对照组发现CGRP阳性神经细胞在低水平表达。免疫印迹和免疫荧光的结果一致。术后7 d,NEP1-40组GAP-43阳性神经细胞数最多,生理盐水组次之,对照组未发现,而且发现GAP-43和CGRP有共表达。结论脊髓损伤后,NEP1-40可以降低神经细胞Nogo-A的表达而大量增加CGRP、GAP-43的表达,从而改善脊髓的内环境,促进神经突起的修复。 展开更多
关键词 脊髓损伤 NEP1-40 降钙素基因相关肽
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siRNA干扰YKL-40对乳腺癌增殖能力影响的实验研究 被引量:3
15
作者 程浩 董杰杰 +1 位作者 翟博 许军 《中国现代普通外科进展》 CAS 2017年第3期169-173,共5页
目的:探究YKL-40与乳腺癌的增殖能力的关系及其机制。方法:采用免疫荧光检测乳腺癌MCF-7细胞YKL-40的基础表达情况。荧光显微镜观察转染率,Real-time PCR筛选沉默效果最强的YKL-40 siRNA。Western blot检测PI3K/AKT通路相关蛋白PI3K、P-... 目的:探究YKL-40与乳腺癌的增殖能力的关系及其机制。方法:采用免疫荧光检测乳腺癌MCF-7细胞YKL-40的基础表达情况。荧光显微镜观察转染率,Real-time PCR筛选沉默效果最强的YKL-40 siRNA。Western blot检测PI3K/AKT通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT和P-AKT的表达水平,同时MTT和流式细胞仪分别验证YKL-40 siRNA处理的人乳腺癌MCF-7细胞,24、48和72 h各组细胞增殖能力和细胞周期的差异。结果:MCF-7细胞可表达YKL-40蛋白,主要定位于细胞质。Real-time PCR显示siRNA01、siRNA02、siRNA03组较NC组YKL-40基因沉默效果显著,其中以siRNA02沉默效果最强(P<0.01)。Western blot可见实验组较对照组总的PI3K和AKT保持不变,而P-PI3K、P-AKT表达量下降(P<0.05)。实验组较对照组G1期细胞增多(P<0.01),而S期细胞减少(P<0.01)。MTT显示实验组较对照组增值能力下降(P<0.01)。结论:乳腺癌中YKL-40可作为PI3K/AKT信号通路上游调控因子并影响细胞周期的进程,进而调节乳腺癌的增殖能力,提示YKL-40对于乳腺癌的治疗可能是一个重要靶点。 展开更多
关键词 人类软骨糖蛋白HCgp-39 乳腺肿瘤 P13K/AKT 细胞周期 基因调控
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SV40T/LoxP等外源性基因修饰与肝细胞永生化的研究 被引量:1
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作者 李炜 余卫业 +5 位作者 姚思敏 张振宇 李美中 傅佳鹏 黄华 王平 《江西医药》 CAS 2008年第7期656-659,共4页
目的构建永生化肝细胞系,观察其生长状态及检测其相关生物免疫学特性。方法拟利用基因重组克隆方法构建含有SV40T、EGFP基因片段以及LoxP序列,插入Cre基因片段,采用脂质体转染法将新载体pSV-GFP-Cre-LOX转染至来源于成人原代供肝细胞,... 目的构建永生化肝细胞系,观察其生长状态及检测其相关生物免疫学特性。方法拟利用基因重组克隆方法构建含有SV40T、EGFP基因片段以及LoxP序列,插入Cre基因片段,采用脂质体转染法将新载体pSV-GFP-Cre-LOX转染至来源于成人原代供肝细胞,建立新型肝细胞体系进行细胞培养;利用转化肝细胞能够表达绿色荧光蛋白特性观察该体系中转化肝细胞的生长状况,最后通过系列生化免疫反应检验转化肝细胞的生化免疫学特性;通过Cre重组酶定点切割导入的SV40T基因使转化肝细胞回复到永生化前的状态,并检测其细胞学相关特性。结果转染SV40T基因的肝细胞具备正常肝细胞生物学特性,且增殖较快,体外易培养。结论新建永生化肝细胞系可以为进一步肝细胞移植提供理想细胞材料作出研究基础。 展开更多
关键词 永生化 肝细胞 基因 SV40T
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缝隙连接蛋白40基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系 被引量:1
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作者 廖志敏 符家武 刘根 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2015年第2期115-118,共4页
目的探讨缝隙连接蛋白40(Cx40)基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)易感性的相关性。方法采用SNa Pshot技术对342例ACI患者(病例组)和296例健康者(对照组)的Cx40基因启动子区多态性位点rs35594137进行基因型检测,采用荧光定量PCR方... 目的探讨缝隙连接蛋白40(Cx40)基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)易感性的相关性。方法采用SNa Pshot技术对342例ACI患者(病例组)和296例健康者(对照组)的Cx40基因启动子区多态性位点rs35594137进行基因型检测,采用荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞Cx40 mRNA相对表达水平,并分析其与rs35594137位点多态性的相关性。结果病例组rs35594137位点的基因型和等位基因频率分布与对照组比较,差异均有统计学意义(基因型:P=0.003;等位基因A vs G:P=0.001,OR=1.479);病例组Cx40 mRNA相对表达水平低于对照组(P<0.05);对照组AG+AA基因型(A等位基因携带者)的Cx40 mRNA相对表达水平低于GG基因型(P<0.05)。结论 Cx40基因启动子区多态性位点rs35594137与ACI易感性相关,A等位基因是ACI发病的危险因素。 展开更多
关键词 缝隙连接蛋白40(Cx40) 动脉粥样硬化性脑梗死 基因多态性
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SV40LTag诱导鼠骨骺软骨细胞稳定分化的实验研究 被引量:1
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作者 李欣 黄仕龙 金润铭 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2008年第1期51-54,共4页
目的建立稳定分化大鼠骨骺软骨细胞株,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原(simian virus 40 large T antigen gene,SV40LTag)基因的质粒pEGFP-IRES... 目的建立稳定分化大鼠骨骺软骨细胞株,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原(simian virus 40 large T antigen gene,SV40LTag)基因的质粒pEGFP-IRES2-SV40LTag转染原代培养的新生大鼠骨骺软骨细胞,G418筛选,抗性克隆扩大培养传代。应用II型胶原、X型胶原和SV40LTag抗体进行细胞鉴定,体外检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制细胞生长曲线。用RT-PCR、Southern blot和免疫细胞化学法鉴定SV40LTag在转染细胞中的表达。结果转染后获得了阳性细胞克隆,免疫细胞化学证实为具有较强增殖能力和多分化潜能的骨骺软骨细胞。经Southern印迹杂交证实,SV40LTag已稳定转染入骨骺软骨细胞,表达mRNA及其蛋白。结论SV40LTag导入可诱导骨骺软骨细胞稳定分化,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓等疾病提供稳定的细胞来源。 展开更多
关键词 软骨细胞 永生化 猿肾病毒40
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猕猴肉瘤病毒SV40 T-ag-C基因克隆及序列分析 被引量:1
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作者 叶尤松 罕圆圆 +2 位作者 李跟党 匡德宣 唐东红 《实验动物科学》 2012年第6期5-9,共5页
目的对来源于一株自然感染猕猴肉瘤病毒SV40的猴肾细胞培养物进行大T抗原C-羧基端(T-ag-C)基因克隆及核苷酸序列分析。方法采用PCR法分别从一株自然感染SV40病毒的猴肾细胞培养物和SV40776标准株接种的vero细胞培养物提取的总DNA中扩增... 目的对来源于一株自然感染猕猴肉瘤病毒SV40的猴肾细胞培养物进行大T抗原C-羧基端(T-ag-C)基因克隆及核苷酸序列分析。方法采用PCR法分别从一株自然感染SV40病毒的猴肾细胞培养物和SV40776标准株接种的vero细胞培养物提取的总DNA中扩增出441bp的SV40大T抗原C-羧基端(T-ag-C)基因片段,分别将其克隆到PMD18-T载体中,转化至JM109感受态大肠杆菌细胞后,挑取阳性克隆进行测序鉴定,并对获得的目的基因核苷酸序列进行序列分析及同源性分析。结果来源于猴肾细胞培养物的SV40大T抗原片段与本实验室来源于云南野生猴群的猕猴外周血所得到的SV40大T抗原片段同源性为97.31%,与GenBank中登录号为NC_001669.1序列进行比对,同源性为96.33%;与SV40-776标准株接种的vero细胞培养物所扩增的大T抗原片段同源性为97.55%。结论对大T抗原基因克隆和序列分析是了解和掌握SV40病毒分子流行病学及其变异趋势的重要手段。 展开更多
关键词 猴病毒SV40 T—ag—C抗原基因 序列分析
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人脑胶质组织中SV40大T抗原表达及p53形成特异性复合物
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作者 步星耀 赵红卫 +3 位作者 于耀宇 连建敏 章翔 张永福 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期374-376,共3页
目的 探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑胶质瘤发生发展中的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 89例人脑胶质瘤组织和 11例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对Tag表达阳性瘤组织进行免... 目的 探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑胶质瘤发生发展中的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 89例人脑胶质瘤组织和 11例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对Tag表达阳性瘤组织进行免疫共沉淀和Westernblot检测Tag p5 3复合物的存在。结果  89例人脑胶质瘤组织Tag表达阳性 33例 (阳性率 37 1% ) ,Tag表达水平与胶质瘤病理分级呈显著正相关 (pearson列联系数 =0 72 ,P <0 0 1) ;33例Tag表达阳性瘤组织中均发现Tag与p5 3形成特异性复合物。 11例正常人脑组织Tag表达全部阴性。结论 SV40感染与人脑胶质瘤病因学密切相关 ,Tag可能是SV40在胶质瘤发生发展中起作用的重要因素 ;Tag与p5 3可形成特异性复合物 ,Tag p5 3特异性复合物的形成导致p5 3失活 ,可能是人脑胶质癌发生发展的一个重要机理。 展开更多
关键词 胶胶质瘤 SV40 大T抗原 P53 肿瘤抑制基因
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