构建可抑制HLA-DR/DQ表达的MHC-Ⅱ类分子反式激活因子基因的突变体及其机制

目的 :构建能抑制MHC Ⅱ类分子表达的MHC Ⅱ类分子反式激活因子 (MHCclassⅡtransactivator,CⅡTA)基因的突变体 ,并探讨其抑制MHC Ⅱ类分子表达的机制。方法 :用PCR、酶切及连接技术 ,构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2 ,含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3以及含起始密码子及NLS(nu clearlocalizationsignal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体。用脂质体转染法 ,将上述 3种突变体及空载体pcDNA3转入Hela细胞和Raji细胞中。用流式细胞术和RT PCR法 ,观察他们对Hela/Raji细胞HLA DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响。将mCⅡTA4转移到对四环素浓度依赖的质粒pUHD10 3上 ,通过改变培养环境中四环素的浓度 ,调节外源CⅡTA突变体的表达量 ,观察突变体的表达量与MHC Ⅱ类分子受抑率的关系。结果 :细胞和基因水平证实 ,pcDNA3mCⅡTA3和pcD NA3mCⅡTA4对Hela/Raji细胞HLA DR/DQ的表达均有明显的抑制作用 ;而pcDNA3mCⅡTA2和空载体pcDNA3无此作用。MHC Ⅱ类分子被抑制的程度与外源转入CⅡTA突变体(pUHD10 3mCⅡTA4 )的量明显相关。结论 :成功地构建pcD NA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4 ,并能抑制HLA Ⅱ类分子的表达。初步证实CⅡTA突变体是通过与胞内的野生型CⅡTA竞争性结合反式激活蛋白 ,来抑制MHC Ⅱ类分子的转录和表达。

中国汉族白血病患者及其相关人群罕见的HLA-DR/DQ连锁不平衡研究

目的研究中国汉族白血病患者及其相关人群罕见的HLA-DR/DQ连锁不平衡单倍型。方法对2000-2005年在我院进行异基因造血干细胞移植前HLA配型的白血病患者及与患者有血缘关系的家系供者共1500例的血液标本,采用低分辨序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法进行HLA-DR/DQ基因分型,并对两位点间连锁不平衡参数进行统计学分析。1500例中患者650例,平均年龄25岁;家系供者850例,平均年龄42岁。结果在41例的血液标本中发现13种罕见的连锁不平衡单倍型,主要为HLA-DQ8或HLA-DQ9与不同DR位点的连锁。其中DR14/DQ4、DR4/DQ5、DR9/DQ6、DR9/DQ7、DR8/DQ8、DR9/DQ8、DR12/DQ8、DR13/DQ8和DR14/DQ9共9种单倍型尚未见报道。650例白血病患者中有20例存在12种罕见的连锁不平衡单倍型,850例家系供者中有21例存在8种罕见的连锁不平衡单倍型。DR8/DQ8单倍型只见于家系供者,而DR14/DQ4、DR12/DQ6、DR11/DQ8、DR13/DQ8和DR14/DQ9单倍型则只见于白血病患者。41例HLA-DR/DQ基因分型结果显示,连锁不平衡单倍型与DR52(DRB3)宽抗原相关联者占58.5%(24/41),与DR53(DRB4)宽抗原相关联者占36.6%(15/41),而与DR51(DRB4)宽抗原相关联者仅占4.9%(2/41)。所发现单倍型频率最高的为DR12/DQ8(0.0023)和DR9/DQ8(0.0023),其次为DR11/DQ9(0.0020)和DR12/DQ9(0.0017)。13种连锁不平衡单倍型的绝对及相对连锁不平衡参数均为负值,说明它们在中国汉族人群中较为罕见,并处于连锁不稳定状态。结论发现了罕见的DR/DQ连锁不平衡单倍型,对补充中国汉族人群HLA-DR/DQ基因的连锁不平衡类型,提高HLA分型结果的准确性具有一定意义;同时,DR/DQ连锁不平衡单倍型在不同人群中的差异为疾病关联研究提供了思路。

HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热相关性的研究

目的:探讨HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热(EHF)的关联性。方法:采用群体研究方法,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对100例流行性出血热患者(患者组)和100例健康对照者(健康对照组)进行HLA-DR、DQ基因分型,比较其等位基因频率(GF),并计算其相对危险度(RR)。结果:EHF患者组HLA-DRB1*16基因频率较对照组明显增高(RR=3.58,χ2=4.916,P=0.0266<0.05);患者组HLA-DQ各等位基因频率与对照组比较差异无显著性。结论:研究提示在遵义地区汉族人群中,HLA-DRB1*16基因与EHF呈正相关,HLA-DRB1*16基因可能是EHF的易感基因。

新疆维吾尔族人群HLA-DR、DQ基因多态性与结核病易感性的研究

目的探讨人类白细胞抗原（HLA）-DRB1、DQB1基因多态性与新疆维吾尔族人群结核病易感性的关联。方法采用病例-对照的研究方法,应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术对226例新疆维吾尔族肺结核病患者（肺结核病例组）和231例新疆维吾尔族健康对照者（健康对照组）进行HLA-DRB1、DQB1基因分型,比较其等位基因频率（GF）,并计算其比值比（OR）。结果 1.肺结核病例组中HLA-DRB1＊11基因频率显著高于健康对照组,2组的GF分别为4.5%、1.1%,差异有统计学意义（OR=4.388、95%CI=1.618~11.905、Pc〈0.05）;肺结核病例组中HLA-DRB1＊04基因频率显著高于健康对照组,2组的GF分别为12.8%、8.4%,但P值经过校正后差异无统计学意义（OR=1.686、95%CI=1.060~2.684、Pc〉0.05）。2.肺结核病例组中HLA-DQB1＊0201基因频率显著高于健康对照组,2组的GF分别为40.1%、19.2%,差异有统计学意义（OR=3.379、95%CI=2.302~4.960、Pc〈0.05）;肺结核病例组中HLA-DQB1＊0301/4基因频率显著低于健康对照组,2组的GF分别为6.2%、10.3%,但P值经过校正后差异无统计学意义（OR=0.561、95%CI=0.334~0.941、Pc〉0.05）。结论 HLA-DRB1＊11、DQB1＊0201等位基因与新疆维吾尔族人群结核病强相关,DRB1＊11、DQB1＊0201可能是其易感基因。

广东地区妇女子宫平滑肌瘤遗传易感性与HLA-DRB1、DQA1、DQB1相关性的研究

目的分析子宫平滑肌瘤与ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＡ１、ＤＱＢ１等位基因的相关性，从而探讨子宫平滑肌瘤患者的遗传易 感性。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＰ及ＰＣＲ－ＳＳＯ技术对５１例外科手术后病理证实为子官平滑肌瘤患者和５０例正常妇女进行 ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＡ１、ＤＱＢ１等位基因的基因分型。结果 ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０２，ＤＱＡ１＊０６０１在子宫平滑肌瘤组明显高于对照 组（Ｐ＜０．０５，ＲＲ＝５．３７８，１５．４），而ＤＲＢ１＊０１、＊０７，ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０ｌ０２却表现为对照组增高（Ｐ＜０．０５，ＲＲ＝０．２２５，０．３７５， ０．３２９）。结论ＤＲＢ１＊０２、＊０１、＊０７，ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０６０１、＊０１０２基因与子宫平滑肌瘤的遗传易感性相关联。

HLA-DR、HLA-DQ分子在瘢痕疙瘩患者外周血单个核细胞中的变化

目的:探讨瘢痕疙瘩患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)HLA-DR和HLA-DQ分子的含量及其基因型的变化。方法:采用免疫细胞化学方法检测10例瘢痕疙瘩患者、10例扁平瘢痕患者及10例正常人外周血单个核细胞中HLA-DR、HLA-DQ分子的含量;应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primers,PCR-SSP)方法检测60例瘢痕疙瘩患者和110例正常人外周血单个核细胞HLA-DR和HLA-DQ的基因位点。结果:①瘢痕疙瘩患者外周血单个核细胞HLA-DR、HLA-DQ分子含量的变化:瘢痕疙瘩组HLA-DR+、HLA-DQ+细胞的积分光密度(813.16±62.77,420.12±94.25)高于扁平瘢痕组(636.22±133.95,302.77±89.77)和正常人组(597.88±166.36,308.57±44.05)(P<0.01);②瘢痕疙瘩患者外周血单个核细胞中HLA-DR和HLA-DQ基因位点的变化:瘢痕疙瘩组HLA-DR14和HLA-DQ5位点的抗原频率(0.16,0.28)明显高于对照组(0.06,0.15)(P<0.05),HLA-DR17和HLA-DQ8位点的抗原频率(0.02,0.03)明显低于对照组(0.13,0.15)(P<0.05)。结论:HLA-DR和HLA-DQ分子含量在瘢痕疙瘩患者外周血单个核细胞中增高提示瘢痕疙瘩患者机体可能处于高免疫应答状态;基因型检测结果则提示HLA-DR14、HLA-DQ5可能是瘢痕疙瘩的易感基因,HLA-DR17、HLA-DQ8可能是抵抗基因。

中国人群特异HLA-DR/DQ基因连锁不平衡研究

目的:探讨中国人群中HLA-DR/DQ基因连锁不平衡的分布规律,提高HLA配型结果的准确性。方法:用PCR-SSP分型方法对HLA-DR和DQ基因座位进行基因分型,对中国人群中拟接受肾移植患者HLA型别中HLA-DR和HLA-DQ基因的连锁不平衡进行了研究。结果:在830例受检者中发现了12例新的连锁组合。结论:该研究不但丰富了经典HLA-DR/DQ连锁组合,而且指出了该种组合分布的民族相关性,对提高HLA配型实验的准确性和减少无谓的重复劳动具有重要意义。

中国汉族人群类风湿性关节炎与HLA-DQ基因多态性和HLA-DR-DQ连锁性的关系

目的评价中国汉族人群类风湿性关节炎(RA)与HLA-DQ基因多态性和HLA-DR-DQ连锁性的关联情况。方法以RA组和对照组(正常人)各HLA-DQ、HLA-DR-DQ等位基因频数分布的OR值为统计量。全面检索已发表的有关中国汉族人群RA和HLA-DQ的文献,应用Me-ta分析对基因分型研究结果进行汇总分析。结果四项研究共入选348例RA患者和162名正常者进行对照,经Meta分析中国汉族人群RA的易感基因有HLA-DQA1*0301(OR=1.820,P=0.01)、DQB1*0401(OR=4.807,P<0.01)。DR4-DQA1*0301(OR=8.437,P=0.024)、DR4-DQB1*0401(OR=3.215,P<0.01)在中国汉族人群RA中有连锁性并且是RA的危险基因型。HLA-DQA1*0102(OR=0.352,P=0.040)、DQB1*0602(OR=0.404,P=0.01)、DQB1*0604(OR=0,P<0.05)是中国汉族人群RA的保护基因。结论DQA1*0301、DQB1*0401是中国汉族人群RA的易感基因,其中DR4-DQA1*0301和DQB1*0401与DR4相连锁是RA的危险基因型,DQA1*0102、DQB1*0602和DQB1*0604是中国汉族人群RA的保护基因。

广东汉族SLE患者HLA-DR、DQ、DP基因多态性研究

目的 :研究广东汉族SLE患者与HLA -DQ、DR、DP的相关性。方法 :采用聚合酶链反应一序列特异性引物 (PCR -SSP)技术 ,对 48例广东籍汉族SLE患者和 1 0 2例健康对照者静脉血样本HLA -DQ、DR、DP等位基因多态性进行研究。结果 :SLE患者DQA1 0 1 0 1等位基因频率显著升高 (RR =8 1 2 ,P =0 0 0 4) ,DQA1 0 3 0 2的明显低于正常组 (RR =0 0 9,P =0 0 0 5 )。DQB1 0 3 0 1基因频率明显低于正常组 ,两者比较有显著性差异 (P <0 0 1 )。SLE患者DR3 (DRB1 0 3 0 1 -DRB1 0 3 0 2 )基因频率显著高于正常组 ( χ2 =1 4 2 4,P <0 0 1 ,RR =2 0 2 0 ) ;DRw5 2 (DRB3 0 1 0 1 -DRB3 0 3 0 1 )基因频率显著高于正常组 ( χ2 =2 0 3 46,P <0 0 1 ) ;DRW1 4:DRB1 1 40 2 ,DRB1 1 40 3基因频率也显著高于正常组 (P <0 0 5 ) ;DR4(DRB1 0 40 1 -DRB1 0 41 1 )基因频率明显低于正常组 (P <0 0 1 ) ,DR9(DRB1 0 90 1 ) ,DRw1 1(DRB1 1 1 0 1 -DRB1 1 1 0 4)基因频率也显著低于正常组 (P <0 0 1 ) ,DPA1 0 2 0 2等位基因频率显著高于正常组 ( χ2 =4 1 2 4,P <0 0 5 ,RR =3 5 4) ,SLE患者DPA1 0 2 0 1等位基因频率显著低于正常组 ( χ2 =4 5 95 ,P <0 0 5 ,RR =0 3 7)。结论 :提示HLA -DQA1

HLA-DR-DQ单倍型与类风湿关节炎的相关性研究

目的 探讨DR -DQ单倍型与我国汉族人群类风湿关节炎 (RA)发生的关系。方法 以 10 0名健康人为对照 ,采用PCR -RFLP法对汉族人群中 35例RA患者的DRB1、DRB3、DRB5、DQA1和DQB1基因位点多态性进行分析。结果 DRB1 0 4 0 5 -DQA1 0 30 1-DQB1 0 4 0 1单倍型频率在RA患者中明显高于正常人 (分别为 14 %和 4 5 % ,RR =3 97,P <0 0 1) ,该单倍型阳性RA患者的病情重于其它RA患者 ,包括关节肿胀数、晨僵时间、RF滴度和病情严重例数在阳性组明显高于阴性组 (P <0 0 5 ) ;而DRB1 15 0 1-DRB5 0 10 1-DQA1 0 10 2 -DQB1 0 6 0 2单倍型频率在正常人明显高于RA患者 (分别为 12 %和 4 3% ,P <0 0 1)。结论 DRB1 0 4 0 5 -DQA1 0 30 1-DQB1 0 4 0 1单倍型与RA发病及病情严重程度相关 ;而DRB1 15 0 1-DRB5 0 10 1-DQA1 0 10 2 -DQB1 0 6 0

中国汉族人群HLA-DR和HLA-DQ基因频率及连锁单倍型特点研究

本研究旨在探讨中国汉族人群中人类白细胞抗原(HLA)DR和DQ基因连锁不平衡的分布规律,提高HLA配型的准确性。采用PCR-SSP基因分型方法,对1799例汉族受检者的DR和DQ基因进行了分型,对其基因的连锁不平衡进行了研究。结果发现,在1799例受检者中有29种不同于西方人种的新连锁组合,其中DR13-DQ5出现频数最高,达11次;DR11-DQ9出现8次,DR8-DQ8出现7次;DR9-DQ8和DR12-DQ6及DR14-DQ4各出现6次。所有29种新单倍型的连锁不平衡参数均为负,其连锁单倍型的发生频率低于理论频率,显示新发现的连锁不平衡单倍型都比较罕见,在人群中的分布频率较低。结论:本研究丰富了经典HLA-DR/DQ连锁组合,指出了该种组合分布的民族相关性,对提高HLA配型实验的准确性和工作效率具有重要意义。

HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5与HLA-DQ位点不关联病例的研究

目的：完善目前已知的HLA-DR与HLA-DQ关联表。方法：从2000-2006年间到我们实验室配型的供患者中选出与关联表不相符的16例标本并对这些标本进行高分辨鉴定。结果：发现在中国汉族人中的五条HLA-DR与HLA-DQ位点连锁遗传的单倍体。结论：为目前所用的HLA-DR与HLA-DQ位点关联表在中国人群中增加五个新的单倍体，使关联表更适合于中国人群。

HLA-DQ、HLA-DR基因多态性与广西南宁居民肠易激综合征的相关性研究

目的:探讨HLA-DQ、HLA-DR基因多态性与广西南宁市社区居民肠易激综合征(IBS)的相关性。方法:分别收集广西南宁市社区居民IBS患者、健康志愿者外周血标本102例、108例,常规提取DNA,采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)进行HLA-DQ、HLA-DR基因多态性鉴定,采用统计学方法分析IBS患者组与健康对照组HLA-DQ、HLA-DR的基因型和基因分布频率,并对两组间基因分布频率进行比较。结果:(1)IBS患者组HLA-DQ6基因表达频率高于健康对照组(44.1%vs29.6%,OR=1.875),而HLA-DQ2基因表达频率低于健康对照组(14.7%vs 28.7%),差异有统计学意义(P<0.05);(2)IBS患者组HLA-DR13基因表达频率高于健康对照组(17.6%vs 7.4%,OR=2.679),而HLA-DR17基因表达频率低于健康对照组(8.8%vs19.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。其余等位基因在两组间的基因频率经比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:广西南宁居民IBS的遗传易感性可能与HLA-DQ、HLA-DR基因多态性相关,HLA-DQ6、HLA-DR13基因可能是广西南宁居民IBS的易感基因,而HLA-DQ2、HLA-DR17基因可能具有保护作用。

肝细胞癌组织中HLA-DR,-DQ的表达及其意义

目的探讨人白细胞抗原(HLA)-DR和-DQ分子在肝细胞癌的表达及其意义。方法采用免疫组化法分别检测HLA-DR和HLA-DQ抗原在38例人肝癌组织芯片中的表达情况,并和临床病理资料进行相关性分析。结果肝癌组织中HLA-DR和HLA-DQ抗原信号主要定位于细胞浆。HLA-DR的阳性率为5.3%(2/38),HLA-DQ的阳性率为92.1%(35/38),但在4例伴淋巴结转移的肝癌中,3例无HLA-DQ的表达,HLA-DQ表达与肝癌的淋巴结转移负相关(P<0.0001)。HLA-DR和HLA-DQ表达与年龄和肝癌的组织分化无相关性(P>0.05)。结论 HLA-DQ的表达在肝癌组织中很常见,无HLA-DQ的表达可能提示与淋巴结转移有关。

延边地区朝鲜族HLA-DR,DQ基因多态性与流行性出血热的相关性

[目的]探讨延边地区朝鲜族HLA-DR,DQ基因多态性与流行性出血热(EHF)的相关性.[方法]采用聚合酶链反应-序列特异性引物技术对118例EHF患者(患者组)和120例健康对照者(对照组)进行HLA-DR, DQ基因分型,比较等位基因频率(GF),并计算相对危险度(RR).[结果]患者组HLA-DRB1*15,DRB1*16等位基因频率分别为4.66%,31.40%,较对照组(1.25%,15.80%)明显增高,χ^2值为4.92,11.50,P值为0.03,0.00,RR为3.58,3.63.两组其他HLA-DRB基因频率间差异均无统计学意义(P>0. 05);两组各HLA-DQB1基因频率间差异亦无统计学意义(P>0. 05).[结论] HLA-DRB1*15,DRB1*16可能是延边地区朝鲜族EHF的易感基因.

关于我国HLA－DR、DQ位点抗原多态性血清学研究的分析

就国内外１４家实验室的１５组（包括作者自己）ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ位点多态性的血清学研究，进行了评析，旨在对今后的发展提出其自己的建议。我国ＨＬＡ研究界的当务之急是团结合作，筛选研制出中国自己成套的Ⅱ类抗原分型血清。

成人隐匿性自身免疫性糖尿病与HLA-DQ、DR基因的关联性

探讨成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)与HLA-DQ、DR基因的关联性。方法用聚合酶链反应序列特异性引物(PCR-SSP)检测60例正常人、41例1型糖尿病人(TlDM)和39例LADA患者的HLA-DR、DQ基因频率。结果HLA-DR3、DR4、HLA-DQA10301、HLA-DQB10201与TlDM的易感性相关;HLA-DR15、HLA-DQB10601与TlDM的保护性相关。HLA-DR4、HLA-DQA10301、HLA-DQB10201与LADA的易感性相关,HLA-DQB10601的基因频率在LADA组中显著高于TlDM组(P<0.05)。结论不同的遗传背景可能是影响LADA和TlDM起病方式及病情进展的重要因素之一。

Graves病与HLA－DR、DQ抗原关联的研究

目的：探讨ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原与Ｇｒａｖｅｓ病发病的关系。方法：检测５０例Ｇｒａｖｅｓ病患者１４种ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原，并与５０例健康献血员对照，结果：Ｇｒａｖｅｓ病患者ＨＬＡ－ＤＲ１抗原频率和相对危险度明显高于对照组。结论：ＨＬＡ－ＤＲ１抗原与Ｇｒａｖｅｓ病呈强关联，Ｇｒａｖｅｓ病的发病有一定的遗传基础。

人类白细胞抗原HLA-DP,DQ,DR在新疆哈萨克族食管癌中的表达及意义

探讨人类白细胞抗原(HLA-DP,DQ,DR)在新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展中的表达及其临床意义。采用免疫组织化学技术链霉素-过氧化物酶(S-P)法检测66例新疆哈萨克族食管鳞癌和28例正常食管粘膜组织(癌旁正常组织)中HLA-DP,DQ,DR抗原的表达。新疆哈族食管鳞癌组织中HLA-DP,DQ,DR抗原的阳性表达率为36.4%,高于正常对照组的7.1%(X^2=8.389,P<0.05);HLA-DP,DQ,DR抗原在食管癌中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤生长部位、淋巴转移、分化程度无相关性。HLA-DP,DQ,DR的表达与新疆哈族食管鳞癌的发生发展密切相关。

人类白细胞Ⅱ类抗原DR、DQ基因型与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的探讨人类白细胞II类抗原DR、DQ基因型与妊娠期糖尿病的相关性。方法对26例GDM孕妇及同期入院的42例正常健康孕妇,采用序列特异性引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)检测HLA-II类抗原DR和DQ的等位基因。结果研究中发现,DQA1*0101、DQA1*0201、DQB1*0609、DRB l*07-DQA1*0201-DQB1*0201基因频率在GDM中显著高于正常对照组,两组比较,统计学有差异(Ρ<0.05)。DQB1*0301基因频率在GDM中显著低于正常对照组,两组比较,有统计学差异(Ρ<0.05)。结论人类白细胞II类抗原DR、DQ基因型与GDM的易感性和保护性存在关联。DQA1*0101、DQA1*0201、DQB1*0609、DRB l*07-DQA1*0201-DQB1*0201基因是GDM的易感基因。DQB1*0301基因是GDM的保护基因。