高迁移率族蛋白B1的生物学特性与应用

高迁移率族蛋白（highmobilitygroupprotein，HMG）是一类广泛分布于真核细胞中的非组蛋白核蛋白，主要作用是维持核小体结构稳定及调节基因复制、重组等．高迁移率族蛋白B1（highmobilitygroupproteinbox1，HMGBl）是HMG家族成员之一，广泛存在于各型细胞的胞核和胞质中．随着Wang等口’提出HMGBl可释放到胞外并可介导晚期炎症反应，HMGBl的致炎作用引起了国内外学者的广泛关注，诸多的研究表明，胞外的HMGBl在多种疾病的发生、发展中发挥着重要作用，针对HMGBl靶点治疗的研究也日益展开。

高迁移率族蛋白1基因多态性与中国南方农村常用高血压药物疗效的关系

目的:研究参与AGER氧化损伤通路的高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的遗传变异对于高血压药物效果的影响。方法:采用流行病学现况调查方法,对服用复方利血平、珍菊降压片和降压片的高血压患者(780例)进行流行病学和临床生化指标资料的收集。位点选择采用连锁不平衡分析和生物信息学的功能预测相结合的方法,选择HMGB1基因的3个标签单核苷酸多态性(tagSNPs)与服用不同降压药物后人群血压水平的关系。结果:服用复方利血平的高血压病人中,rs1412125位点与舒张压水平呈线性负相关,携带CC等位基因的病人舒张压水平明显低于TT和TC等位基因,调整混杂因素后P值为0.040。服用珍菊降压片的女性高血压病人中,rs1045411的G到A的突变和rs2249825的C到G的突变,收缩压都有明显的下降,校正混杂因素后P值分别为0.044、0.043。服用降压片的≥55岁人群中,rs2249825位点不同基因型之间的收缩压的差异,校正协变量后仍有统计学意义(P=0.048)。结论:HMGB1基因多态性可能影响复方利血平、珍菊降压片和降压片的降压效果。

脂多糖诱导肝细胞HMGB1释放及其信号通路研究

目的研究脂多糖对肝细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用及其胞内信号通路。方法采用正常大鼠肝细胞BRL-3A培养,观察100μg/L脂多糖诱导不同时间后细胞HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1含量的变化,及不同浓度的丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂SB202190、U0126对其诱导作用的影响。HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测。结果脂多糖诱导BRL-3A肝细胞6 h后HMGB1 mRNA表达水平和培养上清液中HMGB1含量明显升高(P<0.01),后者随着诱导时间延长而进一步升高;20μmol/L SB202190和20μmol/LU0126对脂多糖诱导HMGB1胞外释放有不完全的抑制作用,但对HMGB1 mRNA表达无影响。结论内毒素脂多糖诱导肝细胞HMGB1的mRNA表达和胞外释放,丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与其释放过程。

NALP3炎性体活化对脓毒症发病过程中HMGB1释放的调节作用

失控性全身炎性反应和免疫功能障碍是脓毒症发生的主要病理生理过程。HMGB1是脓毒症致死效应的最重要的晚期炎性递质,HMGB1由病原体或早期炎性反应分子活化免疫细胞释放,在脓毒症的发生、发展过程中它不仅发挥促炎效应,而且还与细胞免疫功能障碍密切相关。脓毒症和内毒素血症中HMGB1的分泌和释放继发于NALP3炎性体的活化。越来越多的证据表明,炎性体(尤其是NALP3炎性体)对单核/巨噬细胞释放HMGB1起着重要的调节作用。在炎性反应过程中,免疫细胞主动释放HMGB1的过程主要以一种炎性反应小体参与的、依赖caspase活化的方式进行。通过调节NALP3炎性体活化,抑制HMGB1释放,调节免疫功能紊乱状态,为脓毒症等免疫紊乱相关疾病的治疗提供了新的策略。

理肺化瘀方治疗支气管哮喘疗效及对患者血清内IgG、IgA、IgM的变化研究

目的:分析理肺化瘀方对支气管哮喘患者的疗效及患者血清内免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M的变化。方法:选取支气管哮喘患者302例,根据治疗方法不同分为两组,每组151例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上给予自拟理肺化瘀方剂治疗,分析两组患者治疗后的临床疗效。结果:治疗后,观察组喘息、哮鸣音积分及嗜酸性粒细胞(EOS)、白三烯D4(LTD4)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、二氧化碳分压(PaCO2)、免疫球蛋白E(lgE)水平低于对照组,环磷酸腺苷(cAMP)、酸碱度(pH)、氧分压(PaO2)、IgG、IgA、IgM水平高于对照组(P<0.05)。结论:自拟理肺化瘀方剂治疗支气管哮喘,可改善患者临床症状、血气指标及免疫功能。

血清高迁移率族蛋白B1与脓毒症小鼠心肌细胞凋亡的相关性研究

目的探讨血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)水平与心肌细胞凋亡率及血清脑钠肽(brain natriupeptide,BNP)的相关性;评价正丁酸钠(sodium butyrate,SB)对脓毒症小鼠心肌凋亡的影响及心功能不全的保护效应。方法采用小鼠盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症模型。120只小鼠随机分为假手术组(Sham组)、CLP组及SB组,每组40只。用ELISA法检测各组0、12、24、48、72 h血清HMGB1与BNP浓度,用流式细胞仪测定各组0、12、24、48、72 h心肌细胞凋亡率,分别对HMGB1与心肌细胞凋亡率、HMGB1与BNP进行相关性分析。另外,研究正丁酸钠对脓毒症小鼠心肌细胞凋亡率、血清BNP以及120 h生存率的影响。结果血清HMGB1浓度在CLP术后12 h开始升高,并与心肌细胞凋亡率及血清BNP浓度在12、24、48、72 h各时间点均呈显著相关性(P<0.05);正丁酸钠能明显降低心肌细胞凋亡率及血清BNP浓度,并显著改善脓毒症小鼠生存率(P<0.05)。结论 HMGB1可能参与脓毒症小鼠心肌凋亡的过程,并导致心功能不全;应用正丁酸钠干预能减轻心肌凋亡,改善心功能。

加味参芪寿胎汤治疗早期先兆流产合并亚临床甲减的临床疗效及其对外周血中HMGB1、RAGE细胞因子的影响

目的:探究加味参芪寿胎汤联合优甲乐治疗治疗早期先兆流产合并亚临床甲减的临床疗效及其对外周血中高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Box 1 Protein,HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(Receptor for Advanced Glycationend Product,RAGE)的影响。方法:选取2015年3月到2016年3月收治患早期先兆流产合并亚临床甲减及符合本研究标准的患者78例作为观察对象,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组39例。观察组给予加味参芪寿胎汤联合优甲乐治疗,对照组给予黄体酮注射液及优甲乐治疗。观察2组患者治疗前后血清β-人绒毛膜促性腺激素、雌二醇、孕酮、促甲状腺激素及外周血HMGB1及RAGE水平变化。结果:治疗后观察组HMGB1、RAGE阳性反应率优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),观察组总有效率为84.62%优于对照组69.23%,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后观察组血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-human Chorionic Gonadotrophin,β-HCG)、雌二醇(Estradiol2,E2)、孕酮(Progesterone,P)及促甲状腺激素(Thyroid Stimulating Hormone,TSH)指数优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味参芪寿胎汤联合优甲乐治疗早期先兆流产合并亚临床甲减具有显著临床效果,可帮助患者改善临床症状,维持患者黄体,恢复正常妊娠水平,降低促甲状腺激素分泌,改善甲状腺功能,降低外周血中HMGB1、RAGE细胞因子指数,帮助机体内该炎性介质因子的分泌,增强机体免疫能力,充分调节机体内体液和细胞免疫,促使机体免疫状态相对平稳。

HMGB1在肝癌及癌旁肝组织中的表达及意义

目的了解高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在肝炎、肝癌癌旁组织、肝癌组织中的表达,及其与肝组织损伤程度、肝癌发生发展的关系。方法慢性乙型肝炎(CHB)患者46例,肝癌癌旁组织标本20例,肝癌组织标本20例(配对组织),采用常规HE染色法观察肝组织炎症与纤维化程度,用免疫组化方法判断HMGB1在肝组织中的表达。结果 (1)正常肝、CHB、癌旁组织、肝癌组织中的HMGB1的表达差异有统计学意义(H=7.29,P=0.027);(2)肝组织炎症不同分级与HMGB1的表达有等级相关关系(rs=0.318,P=0.031),肝组织纤维化不同程度与HMGB1的表达有等级相关关系(rs=0.296,P=0.042);(3)肝癌组织中HMGB1的表达与肝癌Edmondson分级间无等级相关关系(rs=0.206,P>0.05)。结论 HMGB1有可能作为反映肝脏炎症和纤维化的间接指标,与肝癌的发生发展密切相关。

HMGB1对角质形成细胞自分泌三种细胞因子的影响

目的探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)影响人永生化角质形成细胞(HaCaT)分泌维持黑素细胞生长相关细胞因子的作用。方法 ELISA法检测HMGB1在正常对照组和白癜风患者血清中的表达。免疫荧光和实时定量PCR检测HMGB1及其受体Toll样受体2(TLR2),Toll样受体4(TLR4)和糖基化终产物受体(RAGE)在HaCaT中的表达。ELISA检测白癜风患者血清对于HaCaT分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、干细胞因子(SCF)、内皮素-1(ET-1)的影响。结果相比于对照组,HMGB1在白癜风患者血清中表达升高;HMGB1及其受体在HaCaT中有表达,HMGB1表达在细胞核内;白癜风患者血清培养能够显著降低bFGF,SCF,ET-1的表达。结论角质形成细胞能够在病理状态下(白癜风)释放HMGB1,HMGB1可以降低角质形成细胞分泌的三种细胞因子从而参与白癜风的病理进程。

HMGBl和β-catenin的表达在非小细胞肺癌中的临床病理研究

目的:高迁移率族蛋白B1(HMGBl)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达在非小细胞肺癌中的临床病理的关系。方法:将48例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的病理标本分为鳞癌组20例,腺癌组20例及大细胞癌组8例,选取正常肺组织切片20例作为正常组,用免疫组化法染色,试剂选用抗HMGB兔抗人多克隆抗体及β-catenin鼠抗人单克隆抗体,以1∶100的比例稀释。用SP法测定HMGBl、HMGB1mRNA的表达水平及β-catenin的胞质表达水平,用Image-Pro Plus图像分析系统测量HMGBl的光密度值,用确定的NSCLC切片为阳性对照.磷酸缓冲液代替一抗作阴性对照。结果:3组HMGBl光密度值和HMGB1mRNA的转录水平明显高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);而3组HMGBl光密度值的组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组HMGB1mRNA的转录水平的组间比较,鳞癌组高于腺癌组及大细胞癌组,差异具有统计学意义(P<0.05);正常组与3组β-catenin的胞质表达的比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:HMGBl、β-catenin与NSCLC的发病有相关性,HMGBl及β-catenin均参与了NSCLC的发病,HMGB1mRNA在鳞癌的转录水平高于腺癌及大细胞癌,而β-catenin与NSCLC的病理学分类无关。

胰岛素对缺氧/复氧神经元上的HMGB1、NF-κB表达的影响

目的探讨胰岛素(insulin,In)对缺氧/复氧诱导新生大鼠皮质神经元损伤的保护作用及其机制。方法将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组单纯采用缺氧/复氧(H/R),C组采用In预处理加H/R,各组在H/R后0、3、6、12、24h各时间点,以TUNEL比较各组凋亡细胞,免疫组化比较各组高迁移率族蛋白B1(high mobilitygroup protein box 1,HMGB1)、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)表达。结果①B组凋亡神经元明显多于A组,C组显著少于B组,3组比较差异有统计学意义。②B组HMGB1、NF-κB的表达较正常对照组明显增加,C组HMGB1、NF-κB表达较B组明显减少。结论In可使H/R后神经元HMGB1、NF-κB表达降低,抑制神经元凋亡,这可能是其脑保护作用的机制之一。

HMGB1在高温致金黄地鼠神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

为了探讨高温致神经管畸形(NTDs)作用的分子机制,为预防人类NTDs的发生提供理论依据,本研究在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,研究HMGB1在高温致金黄地鼠NTDs神经上皮细胞中的表达变化。将孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于水浴处理后8、16、24、40、64 h(相当于胚龄第8、8.5、9、9.5、10.5 d)处死孕鼠,剖腹取鼠胚,制备石蜡切片,应用免疫荧光染色技术检测NTDs发生过程中HMGB1在神经上皮细胞中的表达变化。结果显示:对照组和模型组孕鼠在水浴处理后8、16、24h,HMGB1免疫阳性产物分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞浆中;水浴后40、64 h,HMGB1表达部位出现了由胞浆向胞核的转移;高温处理后,HMGB1在实验组各期胚胎神经上皮细胞内的表达均比对照组减弱。上述结果提示,HMGB1的表达变化与神经管发育密切相关,其表达降低是高温致神经管畸形发生的重要途径之一。

基于HMGB1-TLR4信号通路探讨黄芩甲苷对DDC诱导胆汁淤积性肝病小鼠的保护作用研究

目的探讨黄芩甲苷对胆汁淤积性肝病小鼠的影响。方法40只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机、平均分为正常对照组、模型组、熊去氧胆酸组和黄芩甲苷组。动物通过自由喂食0.1%利用喂食3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)饲料建立小鼠胆汁淤积性肝病模型,于造模5 d后以灌胃方式给药,连续给药3 d,1次/d。观察各组小鼠肝组织病理形态学变化,检测肝组织炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、和氧化应激指标[丙二醛(MDA)]超氧化歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]水平,检测各组小鼠血清肝功能酶[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)]、胆红素[总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)、间接胆红素(I-BIL)]和胆汁酸(TBA)的水平,Western blot法检测HMGB1-TLR4信号通路高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组肝组织损伤严重,可见较多炎性细胞浸润以及肝细胞凋亡、坏死,肝组织SOD和GSH-PX活力显著降低(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平显著升高(P<0.01),血清T-BIL、D-BIL、I-BIL、TBA、ALT、AST、ALP水平显著升高(P<0.01),肝组织HMGB1和TLR4蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。与模型组比较,黄芩甲苷组和熊去氧胆酸组均能改善肝组织损伤程度,减少炎症细胞浸润和肝细胞凋亡、坏死,显著升高肝组织SOD和GSH-PX活力(P<0.01)以及降低TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平(P<0.01),显著降低血清T-BIL、D-BIL、I-BIL、TBA、ALT、AST、ALP水平(P<0.01),下调肝组织HMGB1和TLR4蛋白表达水平(P<0.01)。结论黄芪甲苷对DDC诱发的小鼠胆汁淤积性肝病具有明显的保护作用,其保护作用可能与调节HMGB1-TLR4信号通路相关。

退变腰椎间盘髓核组织HMGB2、LEF-1、Col Ⅱ的表达及相关性

目的探讨腰椎间盘髓核组织高迁移率族蛋白B2(HMGB2)、淋巴样增强因子-1(LEF-1)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)mRNA及蛋白表达水平及其临床意义。方法收集腰椎间盘突出症患者手术摘除的髓核组织标本20例,根据术前腰椎MR片Pfirrmann分级标准均分为轻度退变组和重度退变组。qRT-PCR和Western boltting检测两组髓核组织HMGB2、LEF-1、ColⅡ的mRNA及蛋白表达水平,并分析其相关性。结果与轻度退变组比较,重度退变组HMGB2 mRNA及蛋白、COLⅡmRNA降低(P<0.05),LEF-1 mRNA升高(P<0.05)。HMGB2水平与ColⅡ水平呈正相关,与LEF-1水平呈负相关(P<0.05);LEF-1水平与ColⅡ水平呈负相关(P<0.05)。结论HMGB2、LEF-1、ColⅡ在不同退变程度腰椎间盘髓核组织中表达水平不同,提示其可能与椎间盘退变的发生相关。

高迁移率族蛋白1及晚期糖基化终产物受体在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的研究高迁移率族蛋白1（HMGBI）和晚期糖基化终产物受体（RAGE）在宫颈鳞状细胞癌（CSCC）组织中的表达及其与临床病理间的关系，探讨HMGB1／RAGE信号通路在CSCC转移中的作用。方法采用荧光实时定量PCR、免疫组化及Western blot方法分别检测CSCC组织和正常宫颈鳞状上皮组织中HMGBI、RAGE基因及蛋白的表达。结果HMGB1在CSCC中的表达水平高于正常宫颈鳞状上皮组织（P〈0．05），其在CSCC组织中的表达与肿瘤分期、侵袭及转移明显相关（P〈0．05），而与肿瘤大小、分化程度无关（P〉0．05）。RAGE mRNA的表达与CSCC转移明显相关（P〈0．05）。转移组中的HMGBI mRNA和RAGEmRNA表达水平呈显著相关性。结论HMGB-1与CSCC发生、侵袭和转移相关，RAGE与CSCC转移相关，HMGBI／RAGE信号通路在CSCC转移过程中可能发挥重要作用。

缺血再灌注诱导小鼠肝细胞释放高迁移率族蛋白B1对P38MAPK信号通路的影响

目的探讨P38MAPK通路在缺血再灌注诱导小鼠肝细胞释放高迁移率族蛋白Bl（HMGBl）中的作用及其可能机制。方法建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型，分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（IR）与HMGBl释放抑制剂组（GA）。检测各组小鼠血清ALT、TNF-α和HMGBl变化，HE染色观察肝组织病理学改变，TUNEL法检测肝脏细胞凋亡情况，免疫组化与Westernblot法检测HMGBl、P-P38、P38和Caspase-3的表达。结果与Sham组相比，在IR组可见ALT（423．4±99．6）、TNF-α（84．3±21．4）和HMGB1（0．79±0．04）表达增高，而GA组则较IR组降低（P〈0．05）。病理学检查可见IR组肝细胞肿胀、肝窦变窄和灶状坏死等变化，而GA组肝组织病理改变较IR组明显改善。与Sham和GA组相比，IR组HMGB1从细胞核向核外释放增加，并且IR组的细胞凋亡率[（59．3±9．1）％]、肝组织HMGB1、p-P38和Caspase-3的表达水平最高（P〈0．05）。结论缺血再灌注诱导小鼠肝细胞释放HMGBl导致肝细胞损伤的机制可能与通过释放HMGB1而激活P38MAPK通路有关。

高迁移率族蛋白1与心血管疾病关系概述

高迁移率族蛋白1(HMGB1)是典型的核内非组蛋白,可以通过活化细胞的主动分泌和受损坏死细胞的被动释放两种方式,进入胞外并介导炎性反应,为一种重要的炎性介质和促炎细胞因子。HMGB1在多种心血管疾病中高表达,已在《高迁移率族蛋白1在炎症和心血管疾病中的作用》[1]中对其参与炎症反应的过程进行了详细阐述,并且指出了其在损伤与修复中的矛盾作用。随着对HMGB1研究的深入,对其在心血管系统中的作用有了进一步认识,该文将重点对其在动脉粥样硬化、心肌梗死、缺血再灌注、心力衰竭等几种常见心血管病中所发挥的作用进行概述。

小檗碱抑制巨噬细胞HMGB1释放及机理研究

目的探讨小檗碱对高迁移率族蛋白BI（highmobility groupbox1，HMGB1）胞外释放的影响及其机理。方法通过培养细胞实验，观察不同浓度小檗碱对内毒素脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1、TNF-α释放和HMGB1mRNA表达的影响。结果小檗碱明显抑制内毒素脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1 mRNA的表达和HMGB1的释放（P〈0．05），但对TNF-α释放无明显影响。结论小檗碱通过影响HMGB1基因表达抑制巨噬细胞HMGB1释放。

首发精神分裂症患者血清中高迁移率族蛋白B1及细胞因子的变化分析

目的 观察首发精神分裂症患者抗精神病药治疗前后血清中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1 β）、白细胞介素-6（IL-6）的变化及其相互关系,探索HMGB1在精神分裂症免疫机制中的作用.方法 收集郑州大学第一附属医院2013年1月至2014年12月住院治疗的首发未用药精神分裂症患者30例和30名健康对照者.酶联免疫法（ELISA）测定用药前后血清IL-1β、IL-6、TNF-αHMGB1水平,以阳性和阴性症状量表（PANSS量表）评定患者用药前后的精神症状.结果 （1）首发精神分裂症患者血清HMGB1[（80±13） μg/L]、IL-1β[（51 ±6） ng/L]、IL-6[（44±18） ng/L]、TNF-α水平[（59±10） ng/L]均高于健康对照组[（54±13）μg/L,（25 ±19、17 ±8、41±16） ng/L]（均P＜0.05）;经利培酮治疗后,患者血清中上述因子水平均低于治疗前,且差异均有统计学意义（均P＜0.05）.（2）精神分裂症患者血清HMGB1水平与IL-1β、IL-6、TNF-α水平、PANSS量表阴性症状评分均呈正相关（r=0.377、0.426、0.454、0.558,均P＜0.05）.结论 精神分裂症患者存在免疫激活,HMGB1可能在精神分裂症免疫机制中发挥促炎作用,抗精神病药物治疗后HMGB1水平的下降可能为精神症状改善的一个监测指标。