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防御素HNP-3成熟肽酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活和毒性检测 被引量:1
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作者 马生秀 邓璐霞 +8 位作者 罗林 彭媛媛 路会侠 张敏 熊文碧 冯云 吴琦 王伯瑶 黄宁 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期151-153,共3页
目的用含防御素HNP-3成熟肽cDNA片段构建酵母双杂交诱饵质粒,进行自激活和毒性检测。方法培养HL-60细胞,提取RNA,RT-PCR扩增含防御素HNP-3成熟肽的cDNA片段,克隆入pBlue-script-SK-II质粒,经测序鉴定后,再亚克隆到人酵母双杂交诱饵载体p... 目的用含防御素HNP-3成熟肽cDNA片段构建酵母双杂交诱饵质粒,进行自激活和毒性检测。方法培养HL-60细胞,提取RNA,RT-PCR扩增含防御素HNP-3成熟肽的cDNA片段,克隆入pBlue-script-SK-II质粒,经测序鉴定后,再亚克隆到人酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,PCR及测序鉴定。重组诱饵质粒用缺陷培养基筛选方法进行自激活和毒性检测。结果构建的重组质粒pBluescript-SK-II-HNP-3,经测序鉴定,插入片段为HNP-3成熟肽的cDNA序列。亚克隆构建的重组诱饵质pGBKT7-HNP-3,测序鉴定表明其插入目的基因序列无误。重组诱饵质粒自激活和毒性检测显示无自激活现象发生,对酵母细胞AH109无毒性作用。结论成功构建了防御素HNP-3成熟肽的酵母双杂交诱饵载体;为用酵母双杂交技术研究与防御素HNP-3成熟肽相互作用蛋白质打下了基础。 展开更多
关键词 防御素 hnp-3 成熟肽 酵母双杂交
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重组沙门菌C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3)的构建及生物学特性研究
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作者 陈慧敏 李银聚 +3 位作者 张鹏 陈松彪 张春杰 程相朝 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期801-806,共6页
目的:构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控下的人防御素3(HNP-3)的重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3),并对其生物学特性进行研究。方法将质粒pEGFP-WAP-HNP-3电转到减毒猪霍乱沙门菌C78-1△crp感受态,构建重组沙门... 目的:构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控下的人防御素3(HNP-3)的重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3),并对其生物学特性进行研究。方法将质粒pEGFP-WAP-HNP-3电转到减毒猪霍乱沙门菌C78-1△crp感受态,构建重组沙门菌C78-1△crp( pEGFP-WAP-HNP-3),并进一步研究其生物学特性。结果 PCR和测序结果表明C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3)构建成功。进行生物学特性分析表明,重组菌与亲本株C78-1相比失去了利用麦芽糖、鼠李糖等的能力,生长速度显著减慢,能够稳定遗传所携带的HNP-3基因,重组菌株的毒力约是亲本株C78-1的1/300,且重组菌注射到兔乳腺后的分泌乳中能够检测到HNP-3融合蛋白条带。结论重组菌C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3)构建成功,并能够分泌HNP-3融合蛋白,为进一步研究重组菌的功能提供基础资料。 展开更多
关键词 减毒沙门菌C78—1△crp 人防御素3 重组沙门菌 生物学特性
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人α-防御素-3基因乳腺特异性表达载体的构建及在兔乳腺中的瞬时表达 被引量:2
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作者 张鹏 张勇 +4 位作者 赵兴绪 李银聚 程相朝 张春杰 吴庭才 《湖南农业科学》 2010年第7期152-155,共4页
为探索人α-防御素-3(HNP-3)基因在兔乳腺中特异性表达的可行性,将HNP-3基因与大鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5′端调控区序列融合,定向克隆到PEGFP-1表达载体EGFP基因上游,在EGFP基因3′端加上His标签蛋白基因序列,构建了HNP-3基因乳腺定位... 为探索人α-防御素-3(HNP-3)基因在兔乳腺中特异性表达的可行性,将HNP-3基因与大鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5′端调控区序列融合,定向克隆到PEGFP-1表达载体EGFP基因上游,在EGFP基因3′端加上His标签蛋白基因序列,构建了HNP-3基因乳腺定位表达载体pEGFP-WAP-HNP-S,将pEGFP-WAP-HNP-S与脂质体包裹后通过乳腺导管注射法转入妊娠母兔乳腺中,Westernblot和ELISA检测HNP-3融合基因在乳腺中表达和融合蛋白的表达水平,并用Ni亲和层析柱进行纯化。结果表明:分娩后初乳中即有分子质量为40kD的HNP-3融合蛋白表达,分娩后第4d达到高峰,表达量为265ng/mL。实验证明HNP-3融合基因在乳腺组织中能够特异性的表达。 展开更多
关键词 人α-防御素-3 WAP启动子 Ni亲和层析柱纯化
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一种新型疏水改性的两亲性壳聚糖衍生物的表面活性研究 被引量:19
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作者 隋卫平 陈国华 +2 位作者 高先池 尚春庆 孙明昆 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第1期133-135,共3页
A new type of amphiphilic derivative of carboxymethylchitosan(CMCHS) was prepared by reaction of CMCHS with p-nonylphenyl glycidyl ether. The structure of the resulting derivatives, i.e., (2-hydroxyl-3-p-nonylphenoxy)... A new type of amphiphilic derivative of carboxymethylchitosan(CMCHS) was prepared by reaction of CMCHS with p-nonylphenyl glycidyl ether. The structure of the resulting derivatives, i.e., (2-hydroxyl-3-p-nonylphenoxy) propyl-carboxy-methylchitosan(HNP-CMCHS) had been identified by UV and IR spectroscopy. They are water-soluble and have surface activity, which is related to the degree of substitution and the added electrolyte in the solution. In the presence of NaCl, two transitions appeared on the surface tension-concentration plots, that means the possibility of the formation of intramolecular micelle. It was also found that it need a long time for the surface tension of the derivative solutions to get a equilibrium value and the time is related to the derivative concentration, degree of substitution and added electrolyte of the solution. 展开更多
关键词 2-羟基-3-(对壬基苯氧基)丙基-羧甲基壳聚糖 壳聚糖衍生物 两亲物质 表面活性 分子内胶束
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减毒沙门菌介导防御素-3乳腺表达及对乳腺炎主要病原菌的抗菌效果 被引量:3
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作者 陈慧敏 李银聚 +5 位作者 张鹏 程相朝 张春杰 余宁 杨惠 王晓利 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1169-1175,共7页
探讨减毒沙门菌介导的人HNP-3原前肽和前肽基因乳腺表达及其表达产物对牛乳腺炎主要病原菌的抗菌效果。构建人HNP-3原前肽和前肽基因的乳腺表达载体pEGFP-WAP-prepro-HNP-3和pEGFP-WAP-pro-HNP-3,电转化导入减毒沙门菌ΔcrpC78-1,构建... 探讨减毒沙门菌介导的人HNP-3原前肽和前肽基因乳腺表达及其表达产物对牛乳腺炎主要病原菌的抗菌效果。构建人HNP-3原前肽和前肽基因的乳腺表达载体pEGFP-WAP-prepro-HNP-3和pEGFP-WAP-pro-HNP-3,电转化导入减毒沙门菌ΔcrpC78-1,构建重组菌ΔcrpC78-1(pEGFP-WAP-prepro-HNP-3)和ΔcrpC78-1(pEGFPWAP-pro-HNP-3),重组菌分点注射到怀孕后20~22d母兔腹部乳腺分布区,收集兔分娩后不同时间的泌乳,Western-blot和荧光检测乳中HNP-3融合蛋白表达情况,ELISA检测乳中HNP-3融合蛋白的表达水平,常规方法分离乳腺炎主要病原菌,活菌计数法检测泌乳中HNP-3融合蛋白抑菌效果。结果显示,乳汁中分别在40 000和35 000处有prepro-HNP-3和pro-HNP-3融合蛋白阳性杂交信号,且在488nm处有黄绿色荧光;母兔在分娩后第5dHNP-3融合蛋白表达量最高,分别可达584μg/L和470μg/L,及至第25天表达量仍可达到277μg/L和213μg/L。活菌计数法结果表明分娩后第5d含prepro-HNP-3融合蛋白兔乳对牛乳腺炎主要病原菌大肠埃希菌、溶血巴氏杆菌、无乳链球菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌率分别为92.0%、54.8%、46.4%、48.8%、86.9%和74.9%;含pro-HNP-3融合蛋白乳的抑菌率分别为84.9%、46.5%、40.6%、40.4%、71.1%和58.4%。结果表明,减毒沙门菌能够介导人HNP-3融合蛋白基因在乳腺上皮细胞中定位表达,表达的preproHNP-3和pro-HNP-3具有较强的生物学活性,对牛乳腺炎主要病原菌具有明显的抑制作用,为乳腺炎的生物防控及生物源性抗菌肽的研究提供了参考。 展开更多
关键词 减毒猪霍乱沙门菌 乳腺表达 α-防御素-3 乳腺炎 抗菌活性测定
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