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德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备
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作者 胡乐玉 胡欣瑶 +6 位作者 李颖 赵盛淼 沈凤臻 王长法 李亮亮 王彤彤 任慧英 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1499-1510,共12页
【目的】克隆德州驴血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因,对其进行原核表达及多克隆抗体制备,同时检测HO-1基因在德州驴不同组织中的表达情况,为后期研究HO-1基因功能提供支撑材料。【方法】参考GenBank中公布的马HO-1基因序列(... 【目的】克隆德州驴血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因,对其进行原核表达及多克隆抗体制备,同时检测HO-1基因在德州驴不同组织中的表达情况,为后期研究HO-1基因功能提供支撑材料。【方法】参考GenBank中公布的马HO-1基因序列(登录号:XM_023631135.1)设计特异性引物,从驴原代肺泡巨噬细胞(donkey primary alveolar macrophages,DPAMs)中提取RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增HO-1基因编码区(coding sequences,CDS),对测序所获序列与其他物种进行相似性比对并构建系统进化树;应用多种在线软件对HO-1基因编码蛋白进行生物信息学分析。将HO-1基因序列克隆至pCold-SUMO载体进行原核表达,经镍柱亲和层析纯化后,以重组的HO-1蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,利用ELISA和Western blotting检测多克隆抗体特异性及与抗原结合的最大稀释度。利用免疫组化试验检测德州驴4种组织中HO-1蛋白的表达水平。【结果】德州驴HO-1基因CDS区全长873 bp,编码290个氨基酸,其氨基酸序列与马的相似性最高,亲缘关系最近,与鸡的相似性最低,亲缘关系最远。德州驴HO-1蛋白是一种不稳定的亲水性蛋白,分子质量为33.04 ku,无信号肽,存在1个跨膜区,二级结构以α-螺旋为主。ELISA、Western blotting结果显示,针对HO-1制备的多克隆抗体与HO-1结合最大的稀释度为1∶102400,宿主HO-1蛋白可被制备的多克隆抗体识别。免疫组化结果显示,德州驴4种组织中均有效表达HO-1蛋白。【结论】本研究成功获得德州驴HO-1重组蛋白,并制备特异性多克隆抗体,为后续深入探究HO-1基因在马属动物感染病原过程中的作用提供参考依据。 展开更多
关键词 德州驴 ho-1基因 原核表达 多克隆抗体 组织表达
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TNF-αⅠ型受体对小鼠脑血管内皮细胞iNOS和HO-1基因表达的影响 被引量:3
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作者 张洁 邱劲 +4 位作者 娄晋宁 王小明 斯琴 吴其夏 郭恒怡 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第6期507-511,共5页
目的探讨TNFαⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞iNOS、HO1基因表达水平的影响。方法体外培养TNFR1基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞(BVECTNFR1)和野生型小鼠脑血管内皮细胞(BVEC),分别给予5ngmLTNFα刺激24h后,用实时荧光定量PCR技术及... 目的探讨TNFαⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞iNOS、HO1基因表达水平的影响。方法体外培养TNFR1基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞(BVECTNFR1)和野生型小鼠脑血管内皮细胞(BVEC),分别给予5ngmLTNFα刺激24h后,用实时荧光定量PCR技术及Westernblot方法检测两种细胞iNOS基因和HO1mRNA和蛋白表达量。结果给予TNFα刺激后,iNOSmRNA和蛋白表达仅在野生型脑血管内皮细胞内明显增高,而在受体敲除脑血管内皮细胞无明显变化。HO1mRNA和蛋白表达量在野生型小鼠脑血管内皮细胞和受体敲除小鼠脑血管内皮细胞均明显增高。结论TNFα可能作用于脑血管内皮细胞TNFR1,增加iNOS表达,HO1表达增高并非由TNFR1介导,而由TNFα的其他受体介导。 展开更多
关键词 脑血管内皮细胞 TNF-Α ho-1 Ⅰ型受体 小鼠 实时荧光定量PCR技术 TNFR1 基因表达水平 WESTEM INOS基因 mRNA iNOS表达 野生型 基因敲除 体外培养 blot 蛋白表达 受体介导 表达量 24h 种细胞 增高 细胞内
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慢性阻塞性肺疾病患者HO-1基因启动子微卫星多态性与凋亡的关系研究 被引量:2
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作者 马志明 张珍祥 +1 位作者 韩泽民 徐永建 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1289-1292,共4页
目的探讨HO-1基因启动子微卫星多态性与COPD易感性的关系。方法利用PCR基因扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色及原位缺口末端DNA碎片标记技术分析50例COPD患者和30例未合并COPD组肺组织(对照组)HO-1基因启动子5'端(GT)n重复序列... 目的探讨HO-1基因启动子微卫星多态性与COPD易感性的关系。方法利用PCR基因扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色及原位缺口末端DNA碎片标记技术分析50例COPD患者和30例未合并COPD组肺组织(对照组)HO-1基因启动子5'端(GT)n重复序列不同基因型与肺组织不同细胞凋亡的关系。结果(1)COPD组肺组织细胞凋亡指数显著高于对照组(包括吸烟的对照组和不吸烟的对照组,P<0.05,P<0.01)。吸烟的对照组肺组织细胞凋亡指数亦高于不吸烟的对照组(P<0.01)。(2)COPD组L型等位基因频率显著高于对照组(P<0.05)。(3)含有L型等位基因的基因型的样本其肺组织细胞凋亡指数显著高于不含L型等位基因的基因型的样本(均P<0.01)。结论(1)吸烟可能是引起细胞凋亡的重要因素。(2)HO-1基因启动子5'端大量(GT)n重复序列的个体可能抑制吸烟引起的氧化应激对HO-1基因的诱导性表达,使其肺组织凋亡细胞数目增加,导致肺组织破坏而与COPD的易感性相关。 展开更多
关键词 血红素加氧酶 微卫星多态性 凋亡 慢性阻塞性肺疾病
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HO-1基因启动子微卫星多态性与COPD易感性的研究 被引量:3
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作者 马志明 张珍祥 +1 位作者 韩泽民 徐永建 《西安外事学院学报》 2007年第1期97-101,共5页
目的:探讨HO-1启动子微卫星多态性与COPD易感性的关系。方法:应用PCR技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色,根据年龄组及吸烟史对57例COPD患者和44例非COPD人群血红素加氧酶-1(HO-1)启动子微卫星多态性进行分析。结果:COPD组HO-1基... 目的:探讨HO-1启动子微卫星多态性与COPD易感性的关系。方法:应用PCR技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色,根据年龄组及吸烟史对57例COPD患者和44例非COPD人群血红素加氧酶-1(HO-1)启动子微卫星多态性进行分析。结果:COPD组HO-1基因启动子(GT)n大量重复序列(n】30)(L型等位基因)的频率(0.2105)显著高于对照组(0.0909)(P【0.05)而(GT)n小量重复序列(n【25)(S型等位基因)的频率(0.3158)显著低于对照组(0.4545)(P【0.05)。不同年龄组以及在吸烟指数【31PY时,两组人群HO-1启动子微卫星多态性分布未发现显著性差异(P】0.05),但当吸烟指数≥31PY时,COPD组L型等位基因频率显著高于对照组(P【0.05)。结论:①HO-1启动子(GT)n大量重复序列可能与大量吸烟人群的COPD易感性有关,可能在一定程度上参与了COPD的发病机制。②HO-1基因启动子微卫星多态性可作为一种遗传标记用于早期发现对COPD易感的高风险吸烟人群,对于预防COPD的发展具有重要意义。 展开更多
关键词 ho-1基因 微卫星多态性 COPD 易感性
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清肝降脂方对脂肪变性LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 何佳 卢秉久 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第6期1583-1586,I0034,共5页
目的:通过建立游离脂肪酸体外诱导的LO2细胞非酒精脂肪肝模型,探讨不同剂量的清肝降脂方对肝脏脂肪变LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达水平的影响。方法:建立游离脂肪酸诱导脂肪变性LO2肝细胞体外模型。人肝LO2细胞采用含10%胎牛血清的... 目的:通过建立游离脂肪酸体外诱导的LO2细胞非酒精脂肪肝模型,探讨不同剂量的清肝降脂方对肝脏脂肪变LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达水平的影响。方法:建立游离脂肪酸诱导脂肪变性LO2肝细胞体外模型。人肝LO2细胞采用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养,待细胞均匀分布,随机分为6组:正常对照组、模型组、清肝降脂方高剂量组、中剂量组、低剂量组、水林佳对照组,每组6瓶。除正常对照组外,其余5组细胞均以0.5 mmol/L的游离脂肪酸诱导LO2非酒精脂肪肝细胞模型,诱导24 h后,各组随机抽取1瓶进行油红O染色,观察LO2细胞的脂肪化程度。确定模型诱导成功后,正常对照组和模型组分别加入10%正常大鼠血清,低、中、高剂量清肝降脂方药物血清组及水林佳药物血清组添加10%含相对应药物的大鼠血清,培养24h后,收集细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测血红素氧化酶-1(HO-1)、早期生长反应因子-1(Egr-1)的基因及蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组LO2细胞HO-1、Egr-1 mRNA和蛋白表达有所增加;与模型对照组比较,自拟清肝降脂方三剂量组和对照药物组HO-1 mRNA及蛋白表达有所增高,Egr-1mRNA和蛋白表达明显降低;与对照药物组比较,清肝降脂方高剂量组HO-1 mRNA表达有所增高,Egr-1 mRNA表达有所降低。结论:Egr-1高表达可能会导致肝损伤机制之一;HO-1高表达可能是保护肝损伤机制之一;两者可能都是通过调节TNF-α表达来调节NAFLD细胞的损伤进展。清肝降脂方可明显改善LO2细胞Egr-1、HO-1 mRNA及蛋白的表达,可能为其治疗机制、临床诊断和判断进展参考指标。 展开更多
关键词 清肝降脂方 脂肪变性LO2细胞 ho-1 Egr-1 基因及蛋白表达
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70周龄长顺绿壳蛋鸡HO-1基因在不同组织中表达差异研究 被引量:3
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作者 卜小雁 李辉 +3 位作者 施晓丽 师新彩 赵忠海 陈林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1762-1768,共7页
为研究HO-1基因在70周龄长顺绿壳蛋鸡不同组织中的表达差异,选取70周龄长顺绿壳蛋鸡9只(每种基因型3只),采集每只鸡的大脑、肝脏、肾脏、卵巢、输卵管和子宫组织,提取其总RNA进行反转录,利用实时荧光定量PCR方法检测样品中HO-1基因的表... 为研究HO-1基因在70周龄长顺绿壳蛋鸡不同组织中的表达差异,选取70周龄长顺绿壳蛋鸡9只(每种基因型3只),采集每只鸡的大脑、肝脏、肾脏、卵巢、输卵管和子宫组织,提取其总RNA进行反转录,利用实时荧光定量PCR方法检测样品中HO-1基因的表达水平,比较同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO1基因mRNA的表达差异。结果表明,在同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO-1基因的表达存在差异;其中HO-1基因在肝脏中表达量最高,且3种基因型间肝脏表达量存在极显著差异(P<0.01);白壳蛋鸡子宫中HO-1基因表达量极显著高于其他两种(P<0.01),纯合绿壳蛋鸡与杂合绿壳蛋鸡无显著差异(P>0.05)。 展开更多
关键词 长顺绿壳蛋鸡 ho-1基因 表达 实时荧光定量PCR
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腺病毒介导HO-1基因转染肾小管上皮细胞及对PBMC增殖影响的实验研究 被引量:1
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作者 戴卫华 吴雄飞 金锡御 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期1756-1758,共3页
目的观察Ad-HO-1感染对HK-2细胞存活率的影响,探讨表达目的蛋白血红素氧化酶-1(HO-1)的HK-2细胞能否有效降低外周血单个核细胞(peripheral blood monoeuclear cell,PBMC)增殖反应活性。方法 Ad-HO-1按感染强度(multiplicity of infectio... 目的观察Ad-HO-1感染对HK-2细胞存活率的影响,探讨表达目的蛋白血红素氧化酶-1(HO-1)的HK-2细胞能否有效降低外周血单个核细胞(peripheral blood monoeuclear cell,PBMC)增殖反应活性。方法 Ad-HO-1按感染强度(multiplicity of infection,MOI)100、200和400分别转染人肾小管上皮细胞株(HK-2)3 h,转染2 d后观察绿色荧光蛋白的表达,转染2、4 d后进行活细胞计数(台盼蓝染色法)。激光共聚焦法检测HO-1和GFP蛋白在HK-2中的表达,WesternBlot检测HK-2细胞HO-1蛋白表达,3H-TdR法检测HK-2转染后抑制PBMC增殖能力。结果重组腺病毒Ad-HO-1(MOI200)感染HK-2细胞2 d后90%的细胞表达绿色荧光,2、4 d时活细胞百分率与对照组无显著差异。激光共聚焦检测表达GFP的细胞均表达HO-1蛋白,位置分布基本一致。Western blot检测显示HK-2感染Ad-HO-1后有能与HO-1单抗特异性结合的蛋白免疫印迹条带,对PBMC增殖能力有显著抑制作用。结论 Ad-HO-1能介导HO-1目的蛋白的表达,具有抑制PBMC增殖的生物学活性。 展开更多
关键词 血红素氧化酶-1 基因转染
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HO-1 siRNA表达载体的构建及其稳定转染SGC7901细胞系的建立 被引量:1
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作者 张涛 白芳云 白飞虎 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2012年第5期542-545,共4页
目的:构建携带绿色荧光蛋白的HO-1基因siRNA表达载体,通过将载体转染入胃癌细胞株SGC7901筛选稳定转染细胞株。方法:参照前期工作,构建可用于筛选阳性克隆并带有绿色荧光的HO-1基因siRNA表达载体,采用脂质体转染法将载体转入SGC7901细胞... 目的:构建携带绿色荧光蛋白的HO-1基因siRNA表达载体,通过将载体转染入胃癌细胞株SGC7901筛选稳定转染细胞株。方法:参照前期工作,构建可用于筛选阳性克隆并带有绿色荧光的HO-1基因siRNA表达载体,采用脂质体转染法将载体转入SGC7901细胞中,并用G418进行阳性克隆筛选,获得稳定转染细胞系。结果:经酶切和测序验证,证实表达载体构建成功,将HO-1 siRNA表达载体转入SGC7901后,通过G418筛选获得稳定转染细胞系,经检测HO-1的表达水平明显低于为未转染的细胞。结论:本实验成功地构建了HO-1基因siRNA表达载体,筛选出HO-1基因沉默的稳定转染胃癌细胞系,为今后研究HO-1基因的作用机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 胃癌 ho-1基因 SIRNA
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搜风祛痰法对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块HO-1和TLR4表达的影响 被引量:5
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作者 魏伟超 宫丽鸿 安毅 《中国中医急症》 2014年第7期1218-1221,共4页
目的观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块动物模型的影响。方法 6~8周龄ApoE基因敲除小鼠制备AS不稳定斑块模型,分别给予阿托伐他汀以及不同剂量稳斑汤干预1个月,正常组采用生理盐水灌胃1个月。... 目的观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块动物模型的影响。方法 6~8周龄ApoE基因敲除小鼠制备AS不稳定斑块模型,分别给予阿托伐他汀以及不同剂量稳斑汤干预1个月,正常组采用生理盐水灌胃1个月。取小鼠主动脉组织HE染色进行病理学观察,并采用免疫组化和RT-PCR技术检测HO-1和TLR4的表达水平。结果各组小鼠腹主动脉组织中HO-1的表达水平治疗组明显高于对照组(P<0.01),各组小鼠腹主动脉组织中TLR4的表达水平治疗组明显低于对照组(P<0.01)。结论 Apo E基因敲除小鼠AS不稳定斑块的形成与炎症因子密切相关,搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过调节HO-1和TLR4的表达而干预AS斑块形成及破裂。 展开更多
关键词 痰风理论论治 APOE基因敲除小鼠 AS 不稳定斑块 ho-1 TLR4
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搜风祛痰中药复方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块HO-1和PPARγ表达的影响 被引量:4
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作者 迟映雪 宫丽鸿 《中国中医急症》 2015年第1期4-6,55,共4页
目的观察搜风祛痰中药复方对Aop E基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块血红素氧化酶(HO-1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的影响。方法将造模成功的Apo E基因敲除小鼠,分别给予阿托伐他汀以及低剂量、中剂量、高剂量稳斑... 目的观察搜风祛痰中药复方对Aop E基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块血红素氧化酶(HO-1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的影响。方法将造模成功的Apo E基因敲除小鼠,分别给予阿托伐他汀以及低剂量、中剂量、高剂量稳斑汤干预,模型对照组采用生理盐水灌胃。给药13周后,取腹主动脉脉,取小鼠主动脉组织HE染色进行病理学观察,并采用免疫组化和RT-PCR技术检测HO-1和PPARγ的表达水平。结果各组小鼠腹主动脉组织中HO-1和PPARγ的表达水平治疗组明显高于模型对照组(P<0.01)。结论搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过影响HO-1和PPARγ的表达而干预AS斑块形成及破裂。 展开更多
关键词 搜风祛痰中药复方 APOE基因敲除小鼠 AS 不稳定斑块 ho-1 PPARΓ
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亚低温对脓毒症小鼠肺损伤及Nrf2/HO-1通路的影响 被引量:1
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作者 林冬梅 蒋良艳 +3 位作者 赖洁 黄晓 胡军涛 汤展宏 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第12期1918-1923,共6页
目的:探究亚低温对脓毒症小鼠肺损伤及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路的影响。方法:野生型(WT)和Nrf2基因敲除(Nrf2-KO)C57/BL6小鼠各20只,分别随机分为假手术常温组(S组)、假手术亚低温组(SH组)、脓毒症常温组(N组)... 目的:探究亚低温对脓毒症小鼠肺损伤及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路的影响。方法:野生型(WT)和Nrf2基因敲除(Nrf2-KO)C57/BL6小鼠各20只,分别随机分为假手术常温组(S组)、假手术亚低温组(SH组)、脓毒症常温组(N组)和脓毒症亚低温组(H组),每组5只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。采用苏木精—伊红(HE)染色观察肺组织损伤情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平,试剂盒检测肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。分别采用western blotting和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肺组织中Nrf2和HO-1基因及蛋白表达。结果:与S组相比,WT和Nrf2-KO小鼠N组TNF-α、IL-1β和MDA含量升高,HO-1 mRNA及蛋白表达量升高,SOD活性降低(均P<0.05),肺组织损伤严重。WT小鼠N组Nrf2 mRNA及蛋白表达量较S组升高(P<0.05),而Nrf2-KO小鼠各组Nrf2均无表达。与N组相比,WT小鼠H组TNF-α、IL-1β和MDA含量降低,SOD活性升高,Nrf2和HO-1 mRNA及蛋白表达量升高(均P<0.05),肺组织损伤减轻;而Nrf2-KO小鼠H组与N组上述各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:亚低温可以减轻脓毒症小鼠肺损伤,其机制可能与激活肺组织Nrf2/HO-1通路,增强抗氧化应激能力,以及减少炎症因子的生成有关。 展开更多
关键词 亚低温 脓毒症 肺损伤 Nrf2/ho-1通路 Nrf2基因敲除
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搜风祛痰中药复方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块HO-1和HSP70表达的影响
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作者 周凌云 宫丽鸿 +2 位作者 张湜 白光彪 倪小鸥 《中国中医急症》 2015年第3期387-389,430,共4页
目的观察搜风祛痰中药复方对Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块HO-1和HSP70的影响。方法将造模成功的Apo E基因敲除小鼠,分别给予阿托伐他汀钙以及低剂量、中剂量、高剂量稳斑汤干预,模型组和空白对照组采用生理盐水灌胃。给... 目的观察搜风祛痰中药复方对Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块HO-1和HSP70的影响。方法将造模成功的Apo E基因敲除小鼠,分别给予阿托伐他汀钙以及低剂量、中剂量、高剂量稳斑汤干预,模型组和空白对照组采用生理盐水灌胃。给药13周后,采用免疫组化和RT-PCR技术检测HO-1和HSP70的表达水平。结果与空白对照组相比,模型组HO-1和HSP70阳性表达量明显减小(P<0.01);与模型组相比,西药组及稳斑汤各剂量组均能增加HO-1和HSP70阳性表达量(P<0.05或P<0.01);与西药组相比,中药高剂量组增加HO-1和HSP70阳性表达量无差异(P>0.05)。结论搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过影响HO-1和HSP70的表达而干预AS斑块形成及破裂。 展开更多
关键词 搜风祛痰中药复方 APOE基因敲除小鼠 AS 不稳定斑块 ho-1 HSP70
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携带人血红素氧合酶-1基因重组腺病毒的构建及鉴定
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作者 姜大春 何国祥 +3 位作者 刘建平 张倩 唐兵 李德 《西南国防医药》 CAS 2009年第6期570-572,共3页
目的:构建人血红素氧合酶-1(hHO-1)重组腺病毒,为基因治疗心肌细胞缺氧性损伤提供可能。方法:将hHO-1 cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pSGCMV,得到重组质粒pSGCMV-hHO-1。采用位点特异性重组系统(Cre/Loxp)将pSGCMV-hHO-1与腺病毒骨架载体pBHG... 目的:构建人血红素氧合酶-1(hHO-1)重组腺病毒,为基因治疗心肌细胞缺氧性损伤提供可能。方法:将hHO-1 cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pSGCMV,得到重组质粒pSGCMV-hHO-1。采用位点特异性重组系统(Cre/Loxp)将pSGCMV-hHO-1与腺病毒骨架载体pBHGloxP△ E3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,生成带有hHO-1基因的重组腺病毒载体Ad-hHO-1。重组腺病毒质粒在293细胞中扩增,氯化铯梯度离心纯化。结果:经酶切鉴定和测序证实载体构建的正确性,病毒滴度为2.0×1010pfu/ml。结论:成功构建带有hHO-1 cDNA的重组腺病毒,可用于对心肌细胞缺氧性损伤的基因治疗研究。 展开更多
关键词 重组腺病毒 载体 血红素氧合酶-1 基因 构建 鉴定
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转染血红素氧化酶-1基因大鼠肝细胞系BRL体外抗凋亡作用
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作者 陈国勇 曲青山 +1 位作者 孙建军 钱建民 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第4期713-715,共3页
目的:探讨血红素氧化酶1(hemeoxygenase,HO1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用。方法:体外培养的BRL细胞转染HO1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RTPCR检测肝细胞系BRL中HO1基因的表达。用肿瘤坏死因子α(TNFα... 目的:探讨血红素氧化酶1(hemeoxygenase,HO1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用。方法:体外培养的BRL细胞转染HO1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RTPCR检测肝细胞系BRL中HO1基因的表达。用肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激细胞,采用流式细胞仪(FACS)进行细胞计数,TUNEL染色等方法检测细胞的凋亡情况。结果:转染的肝细胞系BRL中均有HO1mRNA表达。转染HO1的BRL细胞经TNFα诱导凋亡后,细胞凋亡率(55.42%±3.12%)明显低于同等刺激下转染pcDNA3的BRL细胞(81.29%±3.08%)(P<0.05)。结论:BRL肝细胞系中HO1表现出较强的抗凋亡能力,为以细胞凋亡为主要病理表现的肝脏缺血再灌注损伤的临床治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 血红素氧化酶-1基因 凋亡 肿瘤坏死因子 转染 大鼠
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合成血红素加氧酶-1-shRNA载体的实验研究
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作者 宋远见 刘红芝 +5 位作者 杨冬芝 张璞 刘志安 裴冬生 宗志敏 魏贤勇 《广东化工》 CAS 2011年第7期21-21,27,共2页
根据Genebank提供的大鼠HO-1(Hmoxl,血红素加氧酶-1)基因序列,参照RNA干扰序列设计原则,设计针对HO-1的4个RNA干扰序列,定向克隆至表达载体pGPU6-GFP-Neo中,最后采用BamH I和Pst I酶切凝胶电泳鉴定。鉴定结果显示成功合成了荷载HO-1-sh... 根据Genebank提供的大鼠HO-1(Hmoxl,血红素加氧酶-1)基因序列,参照RNA干扰序列设计原则,设计针对HO-1的4个RNA干扰序列,定向克隆至表达载体pGPU6-GFP-Neo中,最后采用BamH I和Pst I酶切凝胶电泳鉴定。鉴定结果显示成功合成了荷载HO-1-shRNA的表达载体。 展开更多
关键词 合成 ho-1基因 SHRNA表达质粒
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血红素加氧酶-1基因在三氧化二砷诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达 被引量:5
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作者 马会敏 金国平 +1 位作者 王献伟 单杰 《河南医学研究》 CAS 2007年第2期118-120,共3页
目的:检测三氧化二砷(As2O3)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,探讨HO-1的表达与化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的内在联系。方法:以食管癌EC9706细胞系作为研究模型,3μmol/L AS2O3作用于EC9706细胞,镜下观察... 目的:检测三氧化二砷(As2O3)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,探讨HO-1的表达与化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的内在联系。方法:以食管癌EC9706细胞系作为研究模型,3μmol/L AS2O3作用于EC9706细胞,镜下观察细胞形态变化;MTT法绘制细胞生长曲线;以RT-PCR方法检测HO-1mRNA的表达。结果:As2O3作用于EC9706细胞4 h即可检测到HO-1基因表达升高,12 h表达水平升至最高,24 h回落到正常水平。结论:As203诱导EC9706细胞凋亡过程中,HO-1基因表达升高,呈时间依赖性变化,可能起到短暂的对抗氧化应激作用。 展开更多
关键词 食管癌EC9706细胞 血红素加氧酶-1 基因表达 三氧化二砷诱导凋亡
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血红素加氧酶1基因表达调控序列的克隆及应用研究
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作者 殷菲 林兵 +1 位作者 李文利 刘建辉 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期167-172,共6页
为了获得京尼平苷调节HO-1基因表达的直接证据,克隆了ho-1基因的表达调控序列,并将其构建到以荧光素酶为报告基因的p-GL-3质粒上,通过转染HEK293细胞,对京尼平苷调控报告基因的表达进行了分析,结果证实:京尼平苷能够剂量依赖的提高报告... 为了获得京尼平苷调节HO-1基因表达的直接证据,克隆了ho-1基因的表达调控序列,并将其构建到以荧光素酶为报告基因的p-GL-3质粒上,通过转染HEK293细胞,对京尼平苷调控报告基因的表达进行了分析,结果证实:京尼平苷能够剂量依赖的提高报告基因的表达水平,提示京尼平苷诱导HO-1水平上调与增强其转录有关. 展开更多
关键词 京尼平苷 报告基因 血红素加氧酶1(ho-1) 胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)
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血红素加氧酶-1基因多态性对新生儿高胆红素血症的影响 被引量:3
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作者 王瑞 方小燕 刘杰波 《中外医疗》 2018年第4期196-198,共3页
目的血红素加氧酶(heme oxygenase,HO),其HO-1是分解亚铁血红素的重要限速酶,HO-1基因5’端(GT)n二核苷酸长度多态性对HO-1基因转录具有调控作用,对胆红素生成有重要作用,也是导致新生儿高胆红素血症的重要因素。但在不同人群中,HO-1启... 目的血红素加氧酶(heme oxygenase,HO),其HO-1是分解亚铁血红素的重要限速酶,HO-1基因5’端(GT)n二核苷酸长度多态性对HO-1基因转录具有调控作用,对胆红素生成有重要作用,也是导致新生儿高胆红素血症的重要因素。但在不同人群中,HO-1启动子基因型多态性对高胆红素血症的影响,结果却不尽相同。 展开更多
关键词 血红素加氧酶-1 新生儿高胆红素血症 (GT)n重复序列 ho-1基因启动子
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MC-LR对草鱼组织显微结构及HO-1、IL-10R1基因表达的影响
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作者 覃江凤 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第8期1161-1172,共12页
该项目主要研究微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对草鱼机体的毒害作用。草鱼经腹腔注射微囊藻毒素-LR的剂量为100μg/kg,0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h后对草鱼组织和血液采样,然后进行组织显微结构和基因HO-1和IL-10R1的表达... 该项目主要研究微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对草鱼机体的毒害作用。草鱼经腹腔注射微囊藻毒素-LR的剂量为100μg/kg,0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h后对草鱼组织和血液采样,然后进行组织显微结构和基因HO-1和IL-10R1的表达分析。(1)通过光学显微镜观察,肠道组织病理变化表现为肠绒毛上皮细胞脱落,杯状细胞增多,上皮细胞的细胞核变形;6 h实验组出现肠道充血;12 h实验组和24 h实验组肠绒毛黏膜固有层分离,且有时间效应。(2)采用荧光定量PCR技术对HO-1和IL-10R1基因进行检测,结果显示草鱼鳃、肝脏、肠道、脾脏和心脏组织各实验组较对照组的HO-1基因表达量显著降低(P<0.05),同时草鱼脑、肝脏、肠道、脾脏组织和血液各实验组较对照组的IL-10R1基因表达量显著降低(P<0.05)。微囊藻毒素-LR导致草鱼肠道、肝脏和鱼鳃等器官的病理损伤和HO-1和IL-10R1基因表达量显著降低,可为MC-LR刺激草鱼的炎症反应与免疫反应提供相关理论依据。 展开更多
关键词 微囊藻毒素-LR 草鱼 显微结构 ho-1 IL-10R1 基因表达
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腺病毒介导VEGF和HO-1联合治疗缺血随意皮瓣的实验研究 被引量:1
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作者 楼晓莉 陈江萍, 宋建星 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2011年第6期381-384,共4页
目的探讨复制缺陷型腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGFl65)和血红素氧化酶(HO—1)联合应用,对提高大鼠超长随意皮瓣成活面积的影响和作用机制。方法将25只健康纯种成年雌性SD大鼠的背部两侧各设计-6cmx1cm大小随意皮瓣。皮瓣远... 目的探讨复制缺陷型腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGFl65)和血红素氧化酶(HO—1)联合应用,对提高大鼠超长随意皮瓣成活面积的影响和作用机制。方法将25只健康纯种成年雌性SD大鼠的背部两侧各设计-6cmx1cm大小随意皮瓣。皮瓣远端皮下分别注射日的基因联合应用组(Ad—VEGFl65+Ad—HO-1)、基因对照组(Ad—VEGFl65)、基因对照组(Ad—HO—1)、绿色荧光蛋白基因对照组(Ad-11B—GFP)、病毒保存液(Ad—buffer)为空白对照组,共5组。术后7d,分别测量皮瓣的成活面积、HE染色及目的蛋白和CD31免疫组化表达情况及皮瓣新生傲血管密度(MVD)检测等。结果目的基因联合应用组皮瓣成活面积、目的蛋白表达及MVD与其他4组比较,其差异有显著统计学意义(P〈0.01)。结论以复制缺陷型腺病毒为载体,联合应用VEGF和HO-1基因治疗能显著增加大鼠随意皮瓣的成活面积,促进皮瓣存活。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 血红素氧合酶 复制缺陷型腺病毒 基因转染 血管生成
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