HOE642对心肌缺血再灌注损伤及细胞凋亡的影响

目的 :探讨HOE6 42对缺血再灌注心肌的保护作用 ,其作用与给药时间的关系及其对缺血再灌注导致的细胞凋亡的影响。方法 :以离体大鼠心脏缺血再灌注为模型 ,随机分成A、B两组 ,A组分缺血 /复灌 (I/R)、缺血前给药 (HOE -Pr+I/R)、缺血期间给药 (HOE -Is+I/R)、复灌期给药 (HOE -Re+I/R)组 ,测定左室发展压、左室舒张末压、心律失常、心率、冠脉流量和心肌酶。B组分对照、I/R和HOE6 42 +I/R组 ,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 :HOE -Pr+I/R组在缺血复灌期间左室发展压明显高于I/R组 ,左室舒张末压、各时段心律失常评分低于I/R组 ,冠脉流出液心肌酶的含量也低于I/R组。HOE -Is+I/R组左室舒张末压、心律失常评分、冠脉流出液心肌酶的水平低于I/R组 ,左室发展压与I/R组比无明显差异。HOE6 42 +I/R组的TUNEL阳性细胞数量显著低于I/R对照组 (11 5± 5 7vs 5 1 8± 15 2 )。结论 :HOE6 42对缺血再灌注心肌有保护作用 ,保护作用与给药时间有关 ,缺血前给药能充分发挥其心肌保护作用 ,抑制心肌细胞凋亡可能是其心肌保护作用机制之一。

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在阻滞剂HOE642对肺缺血再灌注保护中的作用

目的:探讨钠氢通道阻断剂HOE642对肺缺血再灌注损伤的保护作用,以及其保护作用与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)通路的关系。方法:选取野生小鼠36只,随机分为假手术组(SHAM组)、肺缺血再灌注组(I/R组)和肺缺血再灌注+HOE642组(HOE组),建立肺缺血再灌注损伤模型。测定肺组织含水量;光镜下观察肺组织病理学变化;ELISA检测炎症反应水平(IL-6,TNF-α);测定肺组织细胞内钙离子荧光强度;测定肺组织p38MAPK的蛋白表达。结果:HOE组肺组织含水量低于I/R组,但高于SHAM组(均P<0.05);HOE组肺组织间质水肿、出血、炎症细胞浸润的情况比I/R组明显减轻,但比SHAM组严重(均P<0.05);HOE组肺组织IL-6和TNF-α水平低于I/R组,但高于SHAM组(均P<0.05);HOE组细胞内钙离子荧光强度低于I/R组,但高于SHAM组(均P<0.05);HOE组肺组织p38MAPK的蛋白表达量低于I/R组,但高于SHAM组(均P<0.05)。结论:HOE642可能通过调节p38MAPK信号通路,降低细胞内的钙离子浓度和钙超载,减轻炎症反应而发挥肺保护作用。

HOE642对减轻缺氧/复氧致未成熟兔心肌细胞内钙超载的作用

目的 :观察Na+ H+ 交换抑制剂HOE642 (Cariporide)对缺氧 /再复氧前后未成熟兔心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2 + ]i)的影响 ,探讨HOE642对未成熟心肌保护机制。方法 :6枚新西兰幼兔心脏 ,用酶解法分离成单个未成熟兔心肌细胞悬液 ,每份细胞悬液均随机分为基础组、对照组和实验组 ,基础组未经缺氧直接测量细胞内Ca2 + 及心肌酶含量 (CK、LDH) ,而后两组均经受缺氧 60min ,再复氧 30min后测量 ,其中实验组于缺氧时加入HOE642 (1μmol/L)。用Flou 3/AM标记 ,激光扫描共聚焦显微镜测定单个未成熟免心肌细胞内游离钙浓度。另测定三组心肌细胞悬液中心肌酶含量 (CK、LDH)。结果 :缺氧 /再复氧后对照组未成熟兔心肌细胞内 [Ca2 + ]i(2 814± 2 36 1375± 10 2 )及心肌酶漏出量明显高于缺氧前基础值 (P <0 .0 1) ;再复氧后HOE642处理组心肌细胞内 [Ca2 + ]i较缺氧前基础值增加不显著 (144 6± 12 8 1375± 10 2 ,P >0 .0 5 ) ;而较未用药对照组明显减少 (144 6± 12 8/2 814± 2 36,P <0 .0 1)。而HOE642处理组细胞悬液心肌酶漏出量较基础值有所增加 ,但其相差不显著 ,而较对照组有心肌酶漏出量明显减少 ,两者相差非常显著 (P <0 .0 1)。说明HOE642对缺氧

选择性钠-氢交换抑制剂HOE642抑制血管平滑肌细胞增殖

采用家兔主动脉贴块培养法培养血管平滑肌细胞 (VSMC) .用 15 %小牛血清刺激VSMC增殖 .运用双盲法细胞计数和 [3H]TdR参入法检测平滑肌细胞的增殖 ,观察选择性钠 氢交换蛋白 (NHE 1)抑制剂HOE 6 4 2 (3 甲磺酰基苯甲酰胍 4 甲磺酸异丙酯 )对VSMC增殖作用的影响 .结果显示 ,选择性钠 氢交换抑制剂HOE 6 4 2能显著抑制 15 %小牛血清刺激的VSMC的增殖 ,2 0 μmol·L- 1HOE 6 4 2抑制VSMC增殖程度达 6 0 % .

HOE642对大鼠停跳心脏供体心肌细胞凋亡的影响

目的研究HOE642对热缺血死亡大鼠颈部异位停跳心脏供体心肌细胞凋亡的作用。方法取清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠112只,随机分成7组,每组16只,各有8只分别作为移植受体和供体。具体如下：C组为正常心脏对照组;S10、S30、S45组分别为心脏停搏后10、30、45 min取心组;SH10、SH30、SH45组分别为心脏停搏后10、30、45 min取心并用HOE642灌注组。对6组实验组大鼠进行热缺血死亡处理,取得供体后,用STH-1液对S10、S30、S45组供体灌注30 min,加20μmol/L的HOE642对SH10、SH30、SH45组供体灌注30 min,再用颈部Cuff法进行异位心脏移植。S10、SH10、S30、SH30组于移植后48 h取供心,S45、SH45组于移植术后取供心。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法检测供体心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果大鼠腹主动脉横断放血后9-11 min,平均（10.11±0.59）min死亡。S10、S30组的凋亡心肌细胞数显著高于SH10、SH30组（P〈0.05）;S10、S30组的Bcl-2表达水平显著低于SH10、SH30组（P〈0.05）,而Bax、Caspase-3表达水平显著高于SH10、SH30组（P〈0.05）。结论热缺血死亡大鼠颈部异位心脏移植模型是进行停跳心脏供体的心肌保护研究的理想模型;HOE642能抑制热缺血死亡后（30 min内）大鼠心脏心肌细胞凋亡的发生。

HOE642对缺血再灌注心肌的保护作用

目的 :探讨 HOE6 42对缺血再灌注心肌的保护作用。方法 :以离体灌注的 SD大鼠心脏为模型 ,4 0只大鼠随机分成 4组 :缺血再灌注对照组 (Control)、缺血前给药组 (HOE- Pr)、缺血期间给药组 (HOE- Is)、复灌期给药组 (HOE- Re) ,测定左室发展压、左室舒张末压、心律、心率、冠脉流量和心肌酶。结果 :与 Control组相比 ,HOE- Pr组在随后的缺血 /复灌期间左室发展压显著增加 ,左室舒张末压减少 ,心律失常评分减少 ,冠脉流出液中的心肌酶含量降低 ,复灌早期的冠脉流量增加 ,但心率无明显差异 ;HOE- Is组左室舒张末压减少 ,心律失常评分减少 ,冠脉流出液中的心肌酶含量降低 ,但左室发展压及心率较 Control组无明显差异 ;HOE- Re组心脏各项指标与 Control组相比无统计学差异。结论 :HOE6 42对缺血再灌注心肌有保护作用 ,缺血前给药能充分发挥其心肌保护作用。

HOE642对热缺血死亡大鼠尸体心脏移植的心肌保护作用研究

目的在建立热缺血死亡大鼠颈部异位心脏移植模型的基础上,通过对热缺血死亡后不同时段的大鼠心脏添加HOE642(浓度为20μmol/L)灌注,检测供体心肌ATP、SOD和MDA,以观察HOE642对热缺血死亡大鼠尸体心脏心肌的保护作用。方法取清洁级SD雄性大鼠共112只,随机分成7组:每组8只,具体如下:C、正常心脏对照组;S10、S30、S45心脏停搏后10、30及45min取心组;SH10、SH30、SH45心脏停搏后10、30及45min取心并用HOE642灌注组;对实验组大鼠均采用热缺血死亡处理,取得供体后S10、S30、S45组用STH-1液灌注30min,SH10、SH30、SH45组用STH-1液+HOE642(浓度为20μmol/L)灌注30min,再用颈部Cuff法进行异位心脏移植。S10、SH10、S30、SH30于移植后48h取供心标本,S45、SH45组于移植术后取供心标本。然后对标本进行ATP、SOD、MDA的检测。所有数据用SPSS13.0统计软件自动分析。结果大鼠腹主动脉横断放血后9～11(10.11±0.59)min死亡;S10、S30组的ATP含量比SH10、SH30组低,差异有显著性;S45组与SH45组的ATP含量差异无显著性;实验组的SOD含量均比C组低,而MDA含量均比C组高;其中S10、S30组的SOD含量比SH10、SH30组低,而MDA含量则高,差异有显著性。结论热缺血死亡大鼠颈部异位心脏移植模型是进行NHBD的心肌保护研究的理想模型;HOE642能促进热缺血死亡后(30min内)大鼠心脏能量物质ATP合成增加,改善心脏的能量代谢,提高清除氧自由基的能力,同时能减轻脂质过氧化损伤。

选择性钠氢通道拮抗剂HOE642对未成熟心肌的保护作用

目的比较选择性钠氢通道（NHE1）拮抗剂HOE642在缺血／再灌注不同阶段（缺血前、缺血中、再灌注期）对未成熟心肌的保护作用。方法建立Langendorff离体心脏灌注模型，32只新西兰幼兔随机分为对照组（组Ⅰ，n=8）和HOE642治疗组（n=24），根据给药时间不同，HOE642治疗组又分为：组Ⅱ（n=8）、组Ⅲ（n=8）和组Ⅳ（n=8）。所有心脏均37℃全心缺血60min。再灌注60min。组Ⅱ心脏停跳前采用HOE642预处理15min；组Ⅲ在St，Thomas停跳液中加入HOE642；组Ⅳ于再灌注最初15min内的KH缓冲液中加入HOE642。测定再灌注期左室发展压（LVDP）、最大收缩变化率（＋dp／dtmax）、最大舒张变化率（～dp／dtmax）及冠脉流量（CAF）；测定心肌细胞内三磷酸腺苷（ATP）、丙二醛（MDA）及心肌含水量（WC）；并用透射电镜观察心肌细胞超微结构改变。结果HOE642各治疗组LVDP、＋dp／dtmax／dp／dtmax、CAF恢复率及ATP含量明显高于对照组（P〈0．05），MDA、心肌含水量明显低于对照组（P〈0.05）。HOE642治疗组之间，组Ⅳ再灌注前15min时＋dp／dtmax、-dp／dt。恢复率低于组Ⅱ和组Ⅲ（P〈0.05），而60min时CAF恢复率高于组Ⅱ和组Ⅲ（P〈0.05）；组ⅡATP高于组Ⅲ和组Ⅳ（P〈0.05），其余指标差异无统计学意义（P〉0．05）。超微结构显示，HOE642治疗能减轻心肌细胞损伤；而HOE642治疗组间，组Ⅳ损伤程度重于组Ⅱ和组Ⅲ。结论缺血／再灌注不同阶段使用HOE642都能减轻未成熟心肌缺血再灌注损伤，而缺血前使用更利于心脏功能恢复、减少心肌损伤。

含HOE642的新型器官保存液对离体兔肺移植供肺细胞凋亡的影响

目的探索含Ⅰ型钠氢通道拮抗剂HOE642的新型器官保存液对离体兔肺移植供肺细胞凋亡的影响。方法 24只雄性成年新西兰大白兔分2组[低钾葡聚糖(LPD)组和HOE组],分别用LPD液及新型器官保存液灌洗供肺,建立兔改良离体单肺移植模型并再灌注2h。测定供肺细胞凋亡指数、caspase-3、Fas/FasL及Bax/Bcl-2表达水平。结果与LPD组比较,HOE组供肺细胞凋亡指数和caspase-3的阳性细胞计数明显下降(P<0.05),Fas、Fas-L、Bax表达水平明显降低,Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论含HOE642的新型器官保存液可通过抑制细胞内外源性凋亡途径抑制细胞凋亡。

心包、心脏

胺碘酮在治疗冠状动脉架桥术后围术期新发快速房颤中的应用;自体心包同时扩大肺动脉瓣环与瓣膜技术重建右室流出道的临床研究;内皮祖细胞和去细胞猪主动脉瓣构建组织工程瓣膜的研究;蛋白激酶C和线粒体ATP敏感性钾通道在未成熟心肌预处理中的作用;