HOXA4基因抑制对胶质瘤细胞U251的影响

目的探讨HOXA4在人胶质瘤中的表达水平以及对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过生物信息学分析HOXA4在人胶质瘤中表达情况。选取胶质瘤细胞U251转染HOXA4 siR NA作为si-HOXA4组,抑制HOXA4基因的表达,同时转染阴性对照慢病毒载体作为si-NC组。q RT-PCR和Western blot检测转染后HOXA4基因和蛋白的表达水平。MTT实验、细胞克隆实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测抑制HOXA4基因表达对细胞增殖、侵袭、周期和凋亡的影响。Western blot分析HOXA4下游凋亡蛋白P53、Bcl-2、Cytochrome C、Caspase-3的表达。结果与正常脑组织比较,人胶质瘤中HOXA4表达水平明显升高(P<0.001)。与si-NC组比较,si-HOXA4组U251细胞的OD值从转染后第4天明显下降(P<0.01),第7天下降更为显著(P<0.001)。si-HOXA4组U251细胞较si-NC组侵袭细胞数明显减少(P<0.01),G0/G1期比例显著升高(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),凋亡蛋白P53、Cytochrome C、Caspase-3表达明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05)。结论HOXA4基因在人胶质瘤中高表达,可能通过影响细胞增殖、侵袭、凋亡等生物功能对胶质瘤的发生发展起重要作用。

藏系绵羊MSX2和HOXA4基因的克隆与序列分析

对藏系绵羊的同源异型基因家族的两个成员(MSX2和HOXA4基因)进行克隆测序,为其功能分析奠定基础。从藏系绵羊皮肤中提取总RNA,采用常规的基因克隆方法,获得了MSX2和HOXA4基因编码区序列,长度分别为804 bp和552 bp。序列比对显示,MSX2基因与预测的绵羊序列存在多个碱基差异;藏系绵羊HOXA4基因与预测的山羊序列间只有1个碱基差异,但与绵羊的预测序列差异大。

长毛兔Hoxa4基因多态性及其与产毛量关联性分析

【目的】分析苍溪长毛兔Hoxa4基因第2外显子遗传多态性及其与产毛量的相关性,发现与产毛量相关的分子标记,为加快毛兔选育提供参考。【方法】采用PCR产物直接测序法对208只苍溪长毛兔Hoxa4基因第2外显子进行遗传变异检测,并运用SAS 8.1软件对苍溪长毛兔Hoxa4基因遗传变异与产毛量进行关联性分析。【结果】苍溪长毛兔Hoxa4基因第2外显子存在1个SNP位点(c.294T>C),该突变导致氨基酸由Ser-Pro(TCC-CCC)转变,共检测到TT、TC、CC三种基因型。其中TC基因型为优势基因(0.596 2),T为优势等位基因(0.562 9)。对突变位点的群体遗传参数分析发现:杂合度为0.494 4,有效等位基因数为1.977 9,多态信息含量(0.372 2)处于中度多态,说明Hoxa4基因在苍溪长毛兔中具有较高遗传变异能力,有持续选育的潜力实现兔群遗传改良。关联性分析发现携带CC基因型的个体73日龄产毛量显著高于TC型(P<0.05),且146日龄阶段产毛量显著高于TT型(P<0.05),极显著高于TC型(P<0.01)。【结论】Hoxa4基因第2外显子突变可作为评定苍溪长毛兔产毛量的遗传标记。

慢病毒重组同源盒基因HOXA4表达载体的构建及其感染人脐带间充质干细胞的实验性研究

目的 构建携带同源基因HOXA4的慢病毒表达载体,并测定其对人脐带间充质干细胞的感染效率.方法 使用酶切及PCR技术从含有HOXA4基因的质粒克隆模版HOXA4-MSCV逆转录载体中获取目的 基因HOXA4,并将HOXA4基因重组到慢病毒载体表达质粒上Lenti-GFP-CTB,通过酶切、测序验证HOXA4基因后,将Lenti-GFP-HOXA4质粒、和辅助包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、PMD2G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带HOXA4基因的重组慢病毒Lentiviral-HOXA4;然后感染人脐带间充质干细胞,通过荧光显微镜及流式细胞术检测其感染效率.结果 成功构建携带HOXA4基因的慢病毒表达载体Lentiviral-HOXA4,并获得高纯度的慢病毒浓缩液.经检测病毒滴度达2.11×108 TU/ml.成功转染HOXA4基因的脐带间充质干细胞表达绿色荧光蛋白,当病毒感染复数（MOI）值为60时转染效率最高,达（95.4±4.3）%.结论 成功构建携带人HOXA4基因的慢病毒,并可以在体外有效转染人脐带间充质干细胞.

乳腺癌HOXA4基因甲基化的检测及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者HOXA4基因启动子甲基化的情况及其与临床病理特征的相关性。方法运用 NEBNext Ultra TM RNA Library Prep Kit for Illumina 进行基因表达芯片测序,运用随机数字表法选择2014年深圳市宝安区妇幼保健院收治的9例乳腺癌患者,分析癌组织与相应癌旁组织异常差异表达的基因。运用Illumina Infinium HD Methylation 450K Assay进行DNA甲基化测序,分析乳腺癌甲基化差异基因。基于肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库信息,分析乳腺癌的差异表达基因和差异甲基化基因。挑选显著高甲基化与低表达的基因,结合生物信息学,确定HOXA4为候选基因。运用随机数字表法收集2014—2017年深圳市宝安区妇幼保健院收治的另外86例乳腺癌患者,采用焦磷酸测序法和RT-PCR,检测乳腺癌组织及其癌旁乳腺组织中HOXA4基因甲基化率和mRNA表达,用Fisher确切概率法分析甲基化率与患者临床病理特征的关系。用 Cox 比例风险模型进行风险因素的单因素和多因素分析。分别用0、0.5、1、5、10、20 μmol/L的甲基化抑制剂RG108处理乳腺癌MCF-7细胞 5 d后,检测HOXA4 mRNA的表达。结果基因表达数据芯片分析发现在乳腺癌组织中有1 680个显著上调的基因和1 249个下调基因,整体水平上在不同区域乳腺癌患者甲基化水平较癌旁组织高( P 均< 0.001)。86例乳腺癌组织中HOXA4基因的甲基化率为94%(81/86),其中,30例高甲基化, 52例低甲基化;而在对应癌旁组织中,HOXA4基因甲基化率为57%(49/86),其中49例低甲基化,无高甲基化( P <0.001)。有HOXA4甲基化组的癌组织样本中HOXA4 mRNA表达低于无HOXA4甲基化组的癌组织样本( P =0.003)。HOXA4基因甲基化水平与乳腺癌淋巴结转移、ER表达有关( P = 0.039、0.017)。单因素分析结果显示患者的TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及HOXA4甲基化是DFS的危险因素( RR =4.008,95% CI =1.296~12.393, P =0.016;RR =10.111,95% CI =2.607~39.217, P =0.001;RR =4.588,95% CI =1.201~17.523, P =0.026;RR =1.051,95% CI =1.007~1.098, P =0.024)。多因素分析显示组织学分级是乳腺癌患者DFS的独立预后因素( RR =14.461,95% CI =2.429~ 86.100, P =0.003)。采用不同浓度的RG108来处理MCF-7细胞后,各组HOXA4 mRNA表达比较,差异有统计学意义(χ^2=4.472, P =0.029)。结论HOXA4基因启动子甲基化在乳腺癌的发生、发展中起着重要作用,有潜力作为新的分子生物学指标,用于乳腺癌临床诊断。

同源盒基因与血管重构的相关研究进展

血管重构是血管壁结构的生理及病理性改变,主要涉及血管内皮细胞、血管平滑肌细胞等的增殖、迁移、凋亡,以及细胞外基质的合成、降解等过程。同源盒基因与胚胎心血管系统形成、成年人血管重构的过程以及血管内皮细胞、血管平滑肌细胞功能失调有关。本文就血管重构及其相关疾病与同源盒基因家族成员的相关研究进展予以综述。