1例HPGD基因新缺失突变致儿童原发性肥大性骨关节病报道

目的通过对1例临床疑似原发性肥大骨关节病的患者进行HPGD基因分析并确诊,提高对该疾病的认识。方法根据患儿症状,体征及骨骼系统放射学检查进行临床诊断,提取患儿及其父亲外周血DNA,PCR扩增HPGD基因编码氨基酸的7个外显子片段,测序检测突变。结果患儿女性,5岁,具有手指及足趾末端指节肥大,手足多汗,前额皮肤增厚等典型临床表现。PCR扩增片段直接测序示患儿HPGD外显子3发生c.308_309delCT(p.Thr103Thrfs4X)纯合改变。结论原发性肥大骨关节病为一种少见的常染色体隐性遗传疾病,典型的临床及影像学表现有助于诊断,HPGD基因突变分析是确诊的主要方法。

西洋参对卵巢早衰大鼠卵巢HPGDS PLA_2G_4A、PTGS_1基因表达的影响

目的:观察西洋参对卵巢早衰(POF)大鼠基因表达的影响。方法:成年雌性SD大鼠连续14 d腹腔注射4-乙烯基环己烯双环氧化物(VCD)80 mg/kg建立POF模型。模型复制成功后随机分为2组,西洋参组灌服西洋参2.25 g/kg;模型组灌服等容量生理盐水,每d 1次共30 d;正常对照组不做任何干预。对各组大鼠进行一般状况观察,采用电化学法检测血清E_2、FSH及LH水平,采用实时定量PCR(QRT-PCR)方法,检测各组大鼠卵巢组织HPGDS、PLA_2G_4A及PTGS_1的表达。结果:西洋参组大鼠较POF模型组体毛柔顺而整洁,活动敏捷;西洋参组大鼠血清激素水平更趋近于正常对照组;QRT-PCR实验结果显示,与POF模型组比较,西洋参组卵巢HPGDS、PLA_2G_4A及PTGS_1表达显著下调。结论:西洋参能够缓解卵巢的衰竭、降低VCD对卵巢的损伤。

木犀草素调控HPGD表达抑制子宫内膜间质细胞侵袭和迁移

目的研究木犀草素对子宫内膜间质细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其机制是否与调控15-羟基前列腺素脱氢酶(HPGD)表达有关。方法将子宫内膜间质细胞hEM15A细胞分为对照组(正常培养细胞)、木犀草素组(采用不同浓度木犀草素处理细胞)、si-HPGD组(si-HPGD转染细胞)、si-NC组(si-NC转染细胞)、木犀草素+si-HPGD组(采用20μmol/L木犀草素处理si-HPGD转染细胞)、木犀草素+si-NC组(采用20μmol/L木犀草素处理si-NC转染细胞)。实时定量PCR检测HPGD的mRNA表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖,Transwell和划痕实验检测细胞侵袭与迁移,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、HPGD的蛋白表达,ELISA试剂盒检测前列腺素E2(PGE2)水平。结果与0μmol/L木犀草素比较,20、50、100μmol/L的木犀草素显著抑制hEM15A细胞的增殖,减少PCNA表达(均P<0.05)。与对照组比较,20μmol/L木犀草素显著抑制细胞侵袭和迁移(P<0.05),减少MMP-2、MMP-9的表达(P<0.05),上调HPGD mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞PGE2水平(P<0.05)。与木犀草素组比较,木犀草素+si-HPGD组细胞侵袭和迁移均增加(P<0.05),MMP-2和MMP-9的表达也增加(P<0.05)。结论木犀草素调控HPGD/PGE2信号以抑制子宫内膜间质细胞的侵袭和迁移。

HPGD突变导致罕见的以杵状指趾为主要表现的原发性肥厚性骨关节病家系研究

目的调查2例以不明原因杵状指趾为主要表现的儿童患者的临床特点,并对患者及其家系进行致病基因突变研究。方法纳入2例以杵状指趾为主要表现的女性患儿,详细询问病史,评估患者骨骼影像学特点,测量骨代谢生化指标及骨密度,筛查杵状指趾相关的继发原因,采用Sanger直接测序法检测HPGD基因突变。结果先证者及其妹妹均在出生6个月后逐渐出现杵状指趾及掌跖多汗,先证者有先天性动脉导管未闭病史。两例患者均无面部皮肤增厚及关节肿胀,X线片未见骨膜增厚等异常表现。2例患者骨吸收指标和骨密度在性别、年龄匹配的正常范围,临床未检出导致杵状指趾的其他疾病。基因检测提示两患者存在HPGD基因第3外显子c.310_311del CT和第3内含子c.324+5G>A的复合杂合突变,其父母亲分别为上述突变的携带者,提示患儿罹患原发性肥厚性骨关节病(primary hypertrophic osteoarthropathy,PHO)。结论PHO为罕见的遗传性疾病,常呈常染色体隐性遗传,女性患者可能表现不典型,疾病早期可仅有杵状指趾的表现,容易漏诊。检测HPGD等PHO致病基因突变,有助于提高PHO的诊断水平。

三个原发性肥大性骨关节病家系HPGD基因突变的鉴定

目的应用DNA测序和高分辨熔解曲线（high-resolution melting，HRM）分析技术对3个原发性肥大性骨关节病（primaryhypertrophicosteoarthropathy，PH0）家系进行HPGD基因的突变分析，了解中国PHO患者可能的热点突变。方法PCR扩增HPGD基因的全部外显子及外显子／内含子衔接区，并对PCR产物进行测序；针对先证者候选突变位点，通过HRM完成家系验证，并进一步通过基因测序技术对HRM方法的准确性进行鉴定。结果3例PHO先证者均存在HPGD基因第3外显子c．310_31ldelCT（P．L104Afs＊3）突变，其中2例为纯合子，1例为杂合子。对先证者和家系成员及正常对照样本的HRM分析结果显示3种不同的曲线型，经测序验证表明3种曲线分别为野生型与突变C．310-311delCT的杂合子和纯合子。结论L310-311del CT（P．L104Afs＊3）很可能是中国PHO患者的基因突变热点，HRM分析检测HPGD基因突变具有方便快捷、灵敏特异的优点，可作为PH0患者及携带者突变筛查HPGD基因突变的优选方法。

HPGD基因缺失突变致厚皮性骨膜病一例

目的通过基因测序，在分子水平确诊厚皮性骨膜病1例。方法收集1例26岁男性厚皮性骨膜病患者及其父母外周血DNA，PCR扩增HPGD及SLCO2A1基因外显子片段，通过基因测序查找有无突变。根据测序结果进行蛋白质空间结构的同源性分析。结果基因测序结果显示，患者HPGD基因第3外显子存在移码突变c．310_311delCT（p．L104AfsX3），为纯合子，其母为该突变的杂合子携带者，其父正常。蛋白空间结构预测显示，上述基因突变可使编码蛋白缩短60％。结论厚皮性骨膜病的典型临床表现及影像学表现有助于诊断，HPGD、SLC02A1基因突变测定则是确诊的主要方法。

造血前列腺素D合酶功能及其在过敏性疾病中的作用

造血前列腺素D合酶(hematopoietic prostaglandin D synthase,HPGDS)是一种谷胱甘肽转移酶,依赖于谷胱甘肽发挥活性作用,在巨核细胞系和多种免疫细胞中多有分布,广泛存在于多种组织,在过敏性疾病中发挥重要生物学功能。研究发现,HPGDS参与机体过敏反应的调控。HPGDS能够催化前列腺素H2(prostaglandin H2,PGH2)转化为前列腺素D2(prostaglandin D2,PGD2),PGD2和DP2受体结合,促进炎症因子的释放和过敏反应的发生。近年的研究发现,HPGDS在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)、食物过敏(food allergy)、过敏性鼻炎(allergic rhinitis)、过敏性哮喘(allelgic asthma)、嗜酸性食管炎(eosinophilic esophagitis,EoE)的发病中发挥重要作用,促进过敏反应和炎症性疾病的发生。HPGDS在不同疾病中发挥关键作用的细胞有所不同,HPGDS在特应性皮炎中的Th2细胞、过敏性哮喘中的肥大细胞、过敏性鼻炎和嗜酸性食管炎中的嗜酸性粒细胞中高表达,并在疾病的发生发展中发挥重要功能。值得注意的是,HPGDS可以作为治疗相关疾病的重要靶点,靶向HPGDS的药物,例如HQL-79、TAS-204、TAS-205、TFC-007等能够有效缓解存在HPGDS升高现象的多种过敏性疾病的症状。本文阐述了HPGDS的生物学功能,并综述了HPGDS在过敏性疾病中的重要作用和研究进展,以及HPGDS相关靶向药物研究,指出HPGDS在过敏性疾病发病中的重要性,为研发治疗过敏性疾病的药物提供新的思路。

幽门螺旋杆菌相关胃病脾胃湿热证及脾气虚证NLRP3/IL-1β的表达差异性研究

【目的】比较幽门螺旋杆菌(Hp)相关胃病(HPGD)不同证型、不同病种胃黏膜中炎症关键因子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和白细胞介素1β(IL-1β)的表达情况,分析其与Hp感染的相关性,探讨HPGD脾胃湿热证的发病实质。【方法】采用实时荧光定量多聚酶链式反应(q RT-PCR)法检测95例HPGD患者(病例组,其中慢性浅表性胃炎43例、慢性萎缩性胃炎40例、胃癌12例;脾胃湿热证62例、脾气虚证33例)和9例正常受试者(正常对照组)胃黏膜中NLRP3和IL-1βmRNA的表达情况,同时采用快速尿素酶试验及胃黏膜病理切片美蓝染色法检测Hp感染。【结果】(1)HPGD脾胃湿热证和脾气虚证患者的Hp感染率分别为82.26%(51/62)、75.76%(25/33),脾胃湿热证患者的Hp感染率有高于脾气虚证患者的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)HPGD病例组患者胃黏膜NLRP3和IL-1βm RNA的表达水平均高于正常对照组(P<0.05),并表现出胃癌患者表达水平高于慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎、脾胃湿热证患者表达水平高于脾气虚证的趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05);Hp阳性受试者胃黏膜中NLRP3和IL-1βm RNA的表达水平高于Hp阴性受试者(P<0.05);胃癌患者癌组织中NLRP3 mRNA的表达水平高于远癌组织(P<0.05),而IL-1βm RNA的表达水平有高于远癌组织趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】Hp通过诱发NLRP3和IL-1β高表达引起炎症反应,脾胃湿热证可能是Hp感染后的内在病理因素之一,与Hp感染协同参与HPGD由良性到恶性的变化过程。

原发性肥大性骨关节病1例患儿的遗传学分析

目的探讨1例原发性肥大性骨关节(PHO)病患儿的遗传学病因。方法选取2021年7月27日于武汉大学中南医院就诊的1例患儿为研究对象。采集患儿及其父母的外周血样,提取基因组DNA,进行全外显子组测序,对疑似的剪接变异进行Sanger测序家系验证,并通过minigene实验进行体外功能验证;采用长片段PCR对疑似的外显子缺失变异进行验证。本研究通过武汉大学中南医院医学伦理委员会的审查(伦理号:[2021]伦审字62号)。结果WES结果显示患儿携带HPGD基因复合杂合变异,包括父源性杂合缺失变异(Exon 3 del)和母源性杂合剪接变异(c.421+1G>T)。长片段PCR验证了患儿及其父亲存在包含第3外显子在内的7565 bp片段的杂合缺失(c.218-1304_324+6156del),minigene实验结果显示母源性的剪接变异导致了第4外显子的跳跃剪接。结论HPGD基因c.218-1304_324+6156del杂合缺失变异和c.421+1G>T杂合剪接变异可能是该患儿的致病原因,上述结果丰富了HPGD基因的变异谱,为受累家庭的遗传咨询和产前诊断提供了依据。

儿童原发性肥厚性骨关节病1例

患儿女,3岁10个月,手指、足趾进行性变粗3年余。辅助检查:尿前列腺素E2正常,胸部X线检查、胸部CT及心脏彩超未见异常;双手X线正位片提示双手部分远节指骨远端形态欠佳,双手远节指骨周围软组织增厚,双足X线正位片提示双足骨质未见明显异常。全外显子组高通量测序结果显示患儿HPGD c.310_311delCT纯合移码突变,诊断原发性肥厚性骨关节病。本例患儿目前无自觉症状,无骨质受累情况,暂不需治疗,但是,需要长期随访监测有无骨质损害等异常情况。

皮肤骨膜增厚症家系遗传学研究

目的通过对一皮肤骨膜增厚症家系遗传学研究，结合国内外相关文献资料，进一步阐述其临床特点及遗传学发病机制。方法总结、分析一中国汉族皮肤骨膜增厚症家系的临床资料，抽取先证者及部分亲属的外周血，提取基因组DNA，PCR扩增后，采用Sanger法对HPGD基因全外显子测序，将测序结果与美国国立生物技术信息中心（NCBI）的参考序列进行比较寻找突变位点并进行遗传学分析。结果（1）先证者为儿童时期发病，主要临床表现为杵状指、多汗、皮脂溢、关节肿胀等，X线可发现管状骨骨膜增厚及骨质增生；（2）先证者为HPGD基因3号外显子上c.310_311delCT纯合突变，其父母均为该位点杂合突变携带者，其姐姐未发现突变；（3）蛋白空间结构预测显示突变蛋白与野生型蛋白相比，肽链改变约60%，缺失大量与辅酶、前列腺素E2（PGE2）结合区域以及酶活性位点。结论皮肤骨膜增厚症的临床表现及X线检查有助于诊断，基因检测可以确诊该病。HPGD基因突变引起15-羟基前列腺素脱氢酶结构及功能发生改变，导致皮肤骨膜增厚症发生。

一个中国汉族原发性肥大性骨关节病家系的基因诊断

目的确定一个原发性肥大性骨关节病家系的分子病因。方法采集家系中先证者和7名健康家系成员外周血提取DNA，应用聚合酶链反应扩增先证者HPGD基因和SLC02A1基因的全部外显子及外显子与内含子接头，测序获取突变位点后对健康家系成员该位点测序，并采用酶联免疫法测定家系成员尿前列腺索含量。结果先证者HPGD基因存在c.310-311delCT纯合突变（p．L104AfsX3），健康家系成员有5例为杂合突变。先证者尿液前列腺素E2含量高于健康家系成员（P〈0．01），前列腺素E代谢物含量低于健康家系成员（P〈0．01）。结论HPGD基因c.310_311delCT突变是导致这个家系发生原发性肥大性骨关节病的病因。

原发性厚皮性骨膜病的遗传学研究进展

原发性厚皮性骨膜病是一种较为罕见的遗传疾病，其主要临床表现为杵状指、骨膜增生、回状头皮和皮肤肥厚，有的患者还伴随有肢端骨质溶解症、多汗症等症状。目前已定位的相关基因有HPGD和SLC02A1，其表达产物均参与前列腺素E2的运输和代谢，二者的异常是导致原发性厚皮性骨膜病的主要原因。本文对原发性厚皮性骨膜病的遗传基础及其与临床表型的相关性进行综述，为原发性厚皮性骨膜病的基础研究和临床诊断提供参考。