HPGFC双柱串联检测右旋糖酐蔗糖酶催化产物及右旋糖酐聚合过程

建立一种能够精密检测产物右旋糖酐分子质量变化及定量跟踪检测蔗糖、葡萄糖及果糖浓度的方法。通过对比高效凝胶过滤色谱单柱和双柱串联对右旋糖酐标准品及催化产物的检测效果,探寻得到右旋糖酐分子质量检测的有效方法。同时,通过构建右旋糖酐蔗糖酶耦合两级膜探索得到右旋糖酐的合成机理是葡萄糖基在右旋糖酐蔗糖酶活性位点上,不断聚合,直至达到一定的分子质量(m_w>10~6 Da)才脱落,而不是一个从小到大、慢慢聚合、不断脱落的过程。

HPGFC法检测抗乙肝胎盘转移因子高分子量物质的研究

目的测定抗乙型肝炎胎盘转移因子(anti-HBV placenta transfer factor,PSTF)的高分子物质组成和分子量。方法利用柱色谱法将PSTF中高分子量的组份分离,再采用高效凝胶过滤色谱法(high performance gel filtration chromatography,HPGFC)测定PSTF组份中高分子量物质的分子量。结果通过对分离到的PSTF中高分子量成份的检测,其分子量为9485.9Da。结论 PSTF应是多肽和核苷酸的复合物。

瑶山甜茶可溶性糖的测定

为探明瑶山甜茶中可溶性糖的含量和种类,采用蒽酮—硫酸比色法测定其可溶性总糖含量,运用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定多糖分子量分布范围,并利用高效液相色谱—蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法在两种流动相体系中测定和分析其低分子寡糖和单糖的种类与含量。结果表明,瑶山甜茶中可溶性总糖含量为15.20%,相对标准偏差(RSD)为0.996%;多糖分子量Mw范围为51551～55628,RSD为0.64%～1.23%;单糖种类主要为木糖、果糖和葡萄糖,相对含量分别是0.54%、52.18%和42.76%。

凤凰木种子毒蛋白的高效凝胶过滤色谱分析

介绍用ＨＰＧＦＣ（高效凝胶过滤色谱）对凤凰木种子中提取的３种毒蛋白分别进行色谱分析。并对分离的蛋白峰进行紫外光谱扫描来确认蛋白的纯度。根椐标准相对分子质量曲线，分别得到它们的相对分子质量并与ＳＤＳ－ＰＡＧＦ（十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳）所得结果进行比较，用柱后衍生法测定了３个蛋白各自的氨基酸组成。

高效凝胶过滤色谱法测定啤酒中混浊活性蛋白质的研究及应用

建立了啤酒中混浊活性蛋白质的提取制备方法和基于高效凝胶过滤色谱的蛋白质分析方法,对混浊活性蛋白进行了系统的分子量分布特点及定量分析,并将其应用在了啤酒非生物稳定性及啤酒样品分析领域高效凝胶过滤色谱法解决了混浊活性蛋白分子量及含量难以测定的问题,对啤酒生产蛋白质分子量的控制也具有重要的指导意义结果表明混浊活性蛋白的分布区间为23.4-150.0 kDa、5.7-23.4 kDa、1.0-5.7 kDa和05-1.0kDa啤酒样品中蛋白质含量最高的分子量包括4.8 kDa,2.4 kDa,3.9 kDa和128.8 kDa方法相对标准偏差为0 3％-2.0％,不需混浊活性蛋白提取制备过程中的透析除盐处理,大大简化了操作流程方法简便快速,准确度高,重复性好最后应用该方法对啤酒稳定剂硅胶、酿造单宁和脯氨酸蛋白酶的作用效果进行了分析研究.结果显示硅胶主要去除0.5-1.0 kDa,酿造单宁去除32.0-55.0kDa,而脯氨酸蛋白酶主要去除51.6-150 0kDa部分蛋白质.

梅花鹿鹿筋胶原蛋白提取工艺条件优化

为应用胃蛋白酶酶解法从鹿筋中提取制备胶原蛋白。采用单因素试验和正交试验筛选出鹿筋胶原蛋白提取的最佳条件为醋酸体积分数5.5%、料液比1:7(mL/g)、浸提时间14h,胃蛋白酶与底物比1:1000(g/g)、酶解时间24h。验证实验结果表明,采用本方法提取的鹿筋胶原蛋白收率为74.56%,蛋白含量为65.54%。本实验优选所得梅花鹿鹿筋胶原蛋白提取工艺,方法简便,提取率高。

鲜人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱研究

目的:针对不同产地、不同生长年限的人参,建立人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱,为人参的质量评价提供依据。方法:以中性缓冲液抽提获得人参水提物,以相对分子质量标准蛋白为标准品,以人参主要蛋白(GMP)为对照,OHpak SB-803 HQ(8 mm×300 mm)凝胶排阻液相色谱柱(排阻极限10万),流动相:10 mmol·L^(-1)Tris·HCl(含10 mmol·L^(-1)NaCl,pH 7.4),流速:1.0 mL·min^(-1),柱温:25℃,应用紫外检测器检测,检测波长为280 nm。谱图通过相似度评价系统软件进行分析。结果:人参药材水提物的高效凝胶过滤色谱有6个特征峰,人参药材的相似度在0.9～1.0之间,稳定性、重复性和精密度良好。结论:该色谱图可作为人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱,用于鲜参药材水提取物的质量评价。

不同云芝菌株获得云芝胞内多糖比较

将不同产地的6个云芝菌株进行液体培养,通过多糖产量、多糖质量和蛋白质质量等指标,从中选出了3个优良菌株.采用高效液相凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定这3个菌株提取物云芝胞内多糖的相对分子质量,并加以比较.根据实验的结果,确认菌株LS为液体发酵的首选菌株.

注射用乌司他丁与2种常用溶剂在输液泵中的配伍稳定性考察

目的:考察注射用乌司他丁与2种常用溶剂在输液泵中的配伍稳定性。方法:将注射用乌司他丁500 000单位分别与0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液各50 m L配伍后,分别在25℃和37℃下于0、1、2、4、8、12、24 h时观察配伍液的外观变化,测定其pH值和不溶性微粒数,采用高效液相凝胶过滤色谱法测定配伍液中乌司他丁的相对百分含量。结果:在上述条件下,配伍液在24 h内外观和p H值均无明显变化;≥10μm的微粒数<25粒/m L,≥25μm的微粒数<3粒/m L,均符合药典标准;乌司他丁在24 h内各时间点的相对百分含量为99.45%~102.55%。结论:注射用乌司他丁与0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液配伍后,在25℃和37℃条件下,24 h内保持稳定,可在输液泵中持续给药。

陶瓷膜超滤纯化香菇多糖及其相对分子质量的测定

采用截留分子量为104u的陶瓷超滤膜纯化香菇多糖溶液,考察运行时间、跨膜压差(TMP)、稀释倍数和操作温度对膜通量的影响,分析各条件下稳定通量的变化规律。结果表明:实验设备运行1 h后膜管通量开始稳定,当跨膜压差为0.08 MPa、料液稀释倍数为3倍、操作温度50℃时,稳定通量维持在75 L/(h·m2)。通过超滤纯化制得的香菇多糖的纯度为89.7%,高效凝胶渗透色谱法测得平均相对分子量为2.27×106u,并对所得香菇多糖的光谱学性质进行了研究。

胸腺肽注射液分子量测定

目的 :考核胸腺肽注射液产品质量。方法 :用高效凝胶过滤色谱法测定胸腺肽注射液的分子量及其分布。结果 :胸腺肽注射液由 5～ 6个肽组成 ,分子量为 0 .70～ 5 .6 90kD ,其中 3.0 0 0～ 4.0 0 0kD的组分占 6 2 %以上。结论 :经数批样品的分别测定 ,分子量均未超过 10kD的规定限度。

胸腺肽高分子量物质检测方法的优化

目的优化现行胸腺肽质量标准中控制高分子量(Mw)物质的检测方法,解决该方法存在的对照品Mw大小与洗脱时间矛盾的问题。方法采用高效液相凝胶过滤色谱法(HPGFC),改变流动相的组成,建立高Mw物质的分析方法,并进行方法学验证。结果确定三氟乙酸-乙腈-水(0.05∶45∶55)作为流动相的HPGFC分析方法,在该洗脱条件下,对照品的洗脱顺序符合Mw变化的规律,经过方法学验证,改进后的方法更适于检测高Mw物质的含量。结论优化后的高Mw物质检测方法可用于胸腺肽制剂的质量控制,并为其他生化制剂高Mw蛋白检测提供了方法学参考。

陶瓷膜超滤纯化褐藻酸钠及其分子量测定

采用截留分子量为10000u的陶瓷超滤膜纯化褐藻酸钠溶液,考察运行时间、跨膜压差(TMP)、料液稀释倍数和操作温度对膜通量的影响,分析各条件下稳定通量的变化规律。研究表明:实验设备运行1h后膜管通量开始稳定,当跨膜压差为0.08MPa、料液稀释倍数为3倍、操作温度50℃时,稳定通量维持在75L/(h·m2)。通过超滤纯化制得的褐藻酸钠的纯度为96.25%,圆二色谱法测得β-D-甘露糖醛酸和α-L-古罗糖醛酸量的比值为1.4845,高效凝胶渗透色谱法测得平均相对分子量分别为2.13×106u,并对所得褐藻酸钠的光谱学性质进行了研究。

啤酒和麦汁中的蛋白组分对泡沫稳定性影响的探讨

使用蛋白质分离检测仪和高效凝胶过滤色谱法（HPGFC）对啤酒中蛋白组分进行检测分析,同时测定啤酒中其他理化指标如泡持、异α-酸和pH等利用SPSS软件进行相关性分析,结果表明,蛋白组分42KDa和9.5KDa与NIBEM法所测泡持具有较好的正相关性,而pH（4.0-4.6）对泡持呈现较显著的负相关性分析不同麦芽所制备协定麦汁及其煮沸30mnin后的泡沫蛋白,结果发现煮沸30min后麦汁中45KDa以上的蛋白质明显减少,麦芽协定麦汁中泡沫活性蛋白含量较高的是甘啤4号、Metcalfe和Baudin,经过煮沸后麦汁中泡沫活性蛋白含量较高的是甘啤4号、Metcalfe 和Scarlett值得注意的是Metcalfe煮沸前后蛋白变化量最小,Gairdner变化量最大.

菊糖分子量的高效凝胶过滤色谱检测方法及其在贮藏过程中的变化研究

菊芋是一种耐盐抗旱植物,可用于生产菊糖.菊糖具有良好的生物活性,其活性受到聚合度的影响.本研究对比了各项条件,总结得到了一套可以用于测定菊糖相对分子量的高效凝胶过滤色谱(HPGFC)方法:纯水为流动相,0.8 m L/min洗脱,Shodex OHpak SB-804HQ色谱柱检测,柱温控制在30℃,样品进样量为每次20μL,检测器为示差折光检测器(RID),采用Sigma公司生产的右旋糖酐标准品,绘制二次方的标准曲线,检测菊糖的相对分子质量.同时利用确定的凝胶过滤色谱(GFC)方法,观察了种植于海岸带盐碱地的菊芋块茎采收后在贮藏过程中的菊糖分子量的变化,发现在?20℃的贮藏条件下,菊芋中的菊糖不会发生剧烈降解,可长期保存提取分子量相近的菊糖.本研究对分析菊糖的分子性质提供了方法基础,对菊芋的采收贮藏有指导意义.

胰蛋白酶水解梅花鹿鹿筋胶原工艺条件的研究

采用胰蛋白酶酶解的方法从鹿筋中提取胶原蛋白。采用单因素实验筛选出鹿筋胶原蛋白提取的最佳条件为,盐酸浓度为0.2%(Φ),料液比为1∶12(g/mL),浸提时间为48 h,胰蛋白酶与底物比为1∶8000(w),酶解时间为3 h。验证实验结果表明,采用本方法提取的鹿筋胶原蛋白收率为82.12%;蛋白含量为72.25%。

铁皮石斛花多糖相对分子质量及其单糖组成的研究

为了明确铁皮石斛花中多糖相对分子质量分布及其单糖组成,该研究采用高效凝胶色谱和柱前衍生UPLC对11个铁皮石斛花样品的多糖进行了相对分子质量及其单糖组成分析,并利用SPSS 19.0软件根据组成的单糖峰面积进行聚类分析,结果表明11个杂交家系铁皮石斛花的粗多糖均分离为三部分(DOP-1,DOP-2和DOP-3),其平均相对分子质量分别为5.53×10~5,3.49×10~5和2.12×10~5。铁皮石斛花多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖5种单糖组成,其中甘露糖组成比例最高,其与葡萄糖比值为0.302~3.335;不同家系样品多糖中各单糖的相对含量存在一定差异,11个家系按单糖组成及相对含量划分为4类,该研究基本明确了铁皮石斛花中多糖相对分子质量分布及单糖构成,为其资源利用打下基础。