HPLC及LC-MS测定榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留

本文采用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱法(LC-MS)对干果榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留量进行含量测定.HPLC和LC-MS均使用C18色谱柱,含量测定采取等度洗脱,流动相:甲醇-水(55∶45,体积比);体积流量:1.0 mL·min-1;测定波长:260 nm;柱温:30℃.LC-MS采取电喷雾离子源,梯度洗脱,体积流量:0.6 mL·min-1,柱温:30℃.结果表明,榛子中氯吡苯脲与多菌灵存在残留,氯吡苯脲质量浓度在1.00~10.00μg·mL-1范围内线性关系良好,加样回收率在95.58%~100.58%;多菌灵质量浓度在1.005~15.075μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,加样回收率在95.61%~104.39%.实验证明,HPLC与LC-MS相结合的方法具有操作简便、灵敏度高、检出限低等优点,能有效地检测到榛子样品中膨大剂氯吡苯脲及杀菌剂多菌灵的残留,并确定其残留量,线性关系和回收率结果均令人满意.根据被检测的8批样品中氯吡苯脲和多菌灵两项农药残留量推断,作为一般干果食用榛子是安全的.

HPLC法测定1-氟萘中工艺杂质和遗传毒性杂质含量

建立了1-氟萘中的2种工艺杂质和1种遗传毒性杂质含量检测的HPLC方法。采用Phenomenex Gemini色谱柱(C18250×4.6mm,5µm);流动相为10mM碳酸氢钠+6mM三乙胺∶乙腈=55∶45,等度洗脱,采集时间为主峰的2倍保留时间;柱温为40℃;检测波长为220nm;流速为1.0mL/min;进样量为20μL。采用加校正因子的主成分自身对照法对各杂质进行计算,各杂质分离度良好,定量限为0.005~0.008μg/ml,线性关系良好,精密度和高中低三浓度准确度符合要求。实验结果表明该方法专属性强、灵敏度高、操作简便、重复性好、结果准确可靠,可用于1-氟萘中杂质控制。

HPLC测定蜈蚣配方颗粒中3,8-二羟基喹啉的含量

目的建立HPLC法测定蜈蚣配方颗粒中3,8-二羟基喹啉的含量。方法采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以10 mmol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇(68∶32)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为252 nm。结果HPLC色谱图中阴性对照无干扰;3,8-二羟基喹啉在0.01163~1.395 mg/ml(r=0.9997)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.4%(RSD=2.7%)。结论该方法准确、稳定、可行,本文建立的方法经方法学验证可用于评价蜈蚣配方颗粒的质量。

HPLC-PAD法测定盐酸大观霉素含量及有关物质

目的建立了一种新的HPLC-PAD法测定盐酸大观霉素含量及其有关物质的分析方法。方法采用ApolloC18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，以100mmol／L三氟乙酸为流动相，流速为1．0mL／min，柱温为30℃，柱后衍生氢氧化钠溶液浓度为21g／L，流速为0．5mL／min。脉冲安培检测器，工作电极为金电极（3mm），四电位工作模式。结果盐酸大观霉素在0．15～150μg／mL（r=0．9999）内线性关系良好，杂质A在0．05～50μg／mL（r=0．9999）内线性关系良好，杂质B在0．5～50μg／mL（r=1．0000）内线性关系良好，杂质C在0．5～50μg／mL（r=1．0000）内线性关系良好。大观霉素、杂质A、杂质B和杂质C的检测限分别为1．5、1．0、2．0和3．0ng。大观霉素、杂质A、杂质B和杂质C的精密度分别为1．5％、1．1％、1．6％和1．8％。大观霉素的回收率为96．7％～102．5％。结论该方法准确、灵敏，重复性和耐用性好，可用于盐酸大观霉素及其有关物质的实验室日常测定。

小儿豉翘清热颗粒HPLC-PAD指纹图谱的建立及有效成分含量测定

利用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PAD)分析检测技术,研究了提取条件(提取溶剂、提取时间)和色谱条件(洗脱溶剂、色谱柱、检测波长)的影响,最终建立了小儿豉翘清热颗粒的指纹图谱和有效成分栀子苷、连翘苷含量测定的方法.在Waters Symmtery-C18色谱柱温30℃、检测波长225nm处,以甲醇和0.1%(体积分数)的磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱建立的小儿豉翘清热颗粒HPLC-PAD的指纹图谱,30个色谱峰分离度良好,10批样品相似度较高(>0.98);栀子苷、连翘苷线性范围良好,相关系数(r)均大于0.999 9,相对标准偏差(Relative Standard Deviation,RSD)均小于3%,加样回收率均大于97%,RSD<3%(n=6).此方法特征性和专属性强,灵敏、准确,可作为小儿豉翘清热颗粒质量评价的方法.

果汁中9种酚酸类化合物的RP-HPLC-PAD分析

研究了同时测定5种果汁中没食子酸、儿茶酸、绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、表儿茶酸、阿魏酸、莽草酸和丁香酸等9种生物活性酚酸的反相高效液相色谱-光电二极管阵列检测新方法。采用ZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱(5μm,250mm×4.6mmi.d.),流动相为甲醇-0.5%乙酸,梯度洗脱,流速1.0mL/min,以保留时间和特征光谱对分离出的组分予以定性确证,用峰面积进行定量。9种组分的质量浓度与其峰面积在一定的范围内有良好的线性关系,相关系数为0.9987～0.9999。9种组分的平均回收率为86.5%～98.8%(相对标准偏差为3.1%～5.8%)。检测限为0.2～1.0mg/L。结果表明,该方法也适用于其他复杂体系中没食子酸等9种生物活性成分的分析。

HPLC-PAD同时测定玛咖中8种酰胺类化合物含量

为了建立同时测定玛咖中亚麻酰胺、亚油酰胺、十六烷酰胺、甲氧亚麻酰胺、甲氧亚油酰胺、甲氧十六烷酰胺、油酰胺和十八烷酰胺含量的HPLC-PAD方法,样品用正己烷超声波辅助提取,采用Waters Symmetry Shield色谱柱（C18,5μm,4.6 mm×250.0 mm）,以乙腈-水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为200 nm,外标法定量。结果显示,8种酰胺类化合物在0.05~10.00 mg/L具有良好的线性,相关系数≥0.999,检出限为0.08~0.22 mg/kg,定量限为0.26~0.76 mg/kg。20 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg添加水平的加标样回收率为77.0%~117.0%,相对标准偏差为1.58%~5.12%。表明该方法操作简单,重复性和稳定性好,适合玛咖中8种酰胺类化合物同时检测和定量分析。

HPLC-PAD外标法及UPLC-MS/MS内标法测定乳及乳制品中三聚氰胺的含量

分别建立高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-PAD)、超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中三聚氰胺含量的方法。利用HPLC-PAD外标法进行样品中三聚氰胺的初筛,利用UPLC-MS/MS法进行确证,以13C315N3-三聚氰胺为同位素内标定量。乳制品经乙腈、乙酸锌、盐酸溶液提取,质谱检测时,样品再经MCX固相萃取柱富集净化。HPLC-PAD法的定量限为4mg/kg,UPLC-MS/MS的定量限为0.05mg/kg;HPLC-PAD的添加回收率为95.7%～102.3%,UPLC-MS/MS的添加回收率为91.3%～95.7%(基质匹配曲线校正),两种方法的相对标准偏差(RSD)分别为1.98%～4.51%,1.60%～3.27%。

HPLC-PAD法测定齐墩果酸原料及片剂中的齐墩果酸含量

目的建立反相高效液相色谱法测定齐墩果酸原料及片剂中齐墩果酸含量的方法,同时利用二极管阵列检测器建立了齐墩果酸峰纯度的鉴定方法. 方法色谱柱为Nova-Pak C18,流动相为乙睛-水(65∶ 35),流速0.8 ml·min-1,检测波长210 nm,柱温25℃.结果齐墩果酸在3.48～17.40 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),检出限为0.3 mg·L-1 (3σ),平均回收率为99.5%. 结论该方法简便,准确,线性范围宽,重现性好,适于对含有该成分的药物进行质量评价.

知母-黄柏药对盐炙前后HPLC指纹图谱及多指标成分含量变化

目的建立知母-黄柏药对盐炙前后HPLC指纹图谱,对11种指标性成分进行定量分析,探索药对盐炙前后的质量差异。方法采用HPLC法建立知母-黄柏药对盐炙前后指纹图谱,通过化学计量学方法对知母-黄柏药对盐炙前后指纹图谱进行分析;并采用HPLC法测定知母-黄柏盐炙前后药对中新芒果苷、绿原酸、隐绿原酸、黄柏碱、芒果苷、木兰花碱、药根碱、小檗红碱、小檗碱、柠檬苦素、黄柏酮的含量。结果10批知母-黄柏药对盐炙前后HPLC指纹图谱组内相似度均>0.988,聚类分析、偏最小二乘法-判别分析可明显将生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏分为2类,小檗碱、新芒果苷、芒果苷、小檗红碱、黄柏碱等成分可能是引起两者质量差异的主要标志成分。定量分析显示,知母-黄柏药对盐炙后芒果苷、黄柏碱、药根碱、小檗红碱、小檗碱的含量增加,而新芒果苷、绿原酸、隐绿原酸的含量降低,柠檬苦素的含量亦有降低趋势,木兰花碱、黄柏酮的含量无明显变化。结论所建立的指纹图谱及多指标含量测定方法稳定可靠,从定性与定量评价了知母-黄柏药对盐炙前后的质量差异;为知母-黄柏药对药味炮制研究提供一定的依据。

HPLC-PAD法测定硫酸新霉素含量及其有关物质

建立反相高效液相色谱-脉冲安培检测法(RP-HPLC-PAD)测定硫酸新霉素含量及有关物质方法。采用Thermo Acclaim^(TM) AmG C_(18)(4.6 mm×150 mm,3μm)色谱柱,以2%三氟乙酸溶液[含0.01%五氟丙酸+0.6%氢氧化钠]为流动相,采用积分脉冲安培电化学检测器四电位波形做为检测波形进行检测。测得新霉素B和新霉素C及13个杂质分离良好,新霉素B和新霉素C的检出限均为1.75 ng,定量限均为3.5 ng,新霉素B在0.14～27.89μg/mL内线性关系良好(r=0.998 5),新霉素C在0.14～4.69μg/mL内线性关系良好(r=0.999 6)。该HPLC-PAD法专属性强、灵敏度高、线性范围宽,具有良好的应用前景,为硫酸新霉素标准制定和质量控制提供了依据。

HPLC-PAD法优化乌骨鸡活性肽分离纯化

乌骨鸡是一种具有药用价值的鸡种,乌骨鸡的鸡肉蛋白通过酶促水解后可获得多肽产物乌骨鸡活性肽,营养价值高,分离纯化活性肽是研究乌骨鸡应用价值的基础。利用装置C18反相色谱柱或TSKgel凝胶色谱柱的高效液相色谱仪进行乌骨鸡活性肽的分离优化,针对流动相、流速进行优化的同时,参考波长、进样量,以出峰数为主,结合分离度等考察分离效果。结果表明:C18柱的出峰数随甲醇含量及流速的降低而增加;三氟乙酸或磷酸盐作缓冲液时出峰数基本一致,但分离度不同;综合因素得pH 6.0磷酸盐/6%甲醇/水体系的流动相、0.2 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。TSKgel柱的乙腈分离效果优于甲醇,梯度洗脱效果较好;综合因素得出0.1%三氟乙酸/(10%~25%)乙腈/水体系的流动相、0.5 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。

HPLC联合化学计量学及EW-TOPSIS法评价不同产地马齿苋的质量

目的建立同时测定马齿苋中10个指标成分含量的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),用化学计量学和熵权-逼近理想解排序法(entropy weight-technique for order preference by similarity to an ideal solution,EW-TOPSIS)对马齿苋的质量进行综合分析和评价,为该产品质量控制和标准提升提供参考依据。方法用高效液相色谱法同时测定5省18批马齿苋样品中柠檬酸、琥珀酸、咖啡酸、染料木苷、木犀草素、槲皮素、东莨菪亭、6,7-二羟基香豆素、异茴香内酯和佛手柑内酯的含量,用化学计量学方法对含量测定结果进行综合分析,挖掘影响马齿苋质量的主要潜在标志物,联合熵权-逼近理想解排序法对不同产地来源的马齿苋进行质量评价。结果10种成分分别在各自线性范围内线性关系和准确度良好;化学计量学分析结果显示,18批马齿苋聚为3类,呈现一定的产区差异;木犀草素、槲皮素、琥珀酸和柠檬酸是影响马齿苋产品质量的主要潜在标志物;熵权-逼近理想解排序法分析结果显示四川和贵州地区所产马齿苋质量最优,其次为河南、辽宁和吉林。结论所建立的高效液相色谱法能同时测定马齿苋中10个指标成分的含量,化学计量学和熵权-逼近理想解排序法可用于马齿苋的综合质量评价。

HPLC-PAD-ELSD法同时测定牛黄降压丸中6个成分的含量

目的:建立高效液相色谱-二极管阵列检测-蒸发光散射检测(HPLC-PAD-ELSD)法同时测定牛黄降压丸中芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芩苷、胆酸、黄芪甲苷含量的方法。方法:以L9(34)正交试验优化提取条件。采用Waters Sunfire C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.2%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 ml·min^(-1)。芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芩苷检测波长为278 nm;胆酸、黄芪甲苷使用ELSD检测器,漂移管温度为100℃,氮气流速为3.0 L·min^(-1)。结果:芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芩苷、胆酸、黄芪甲苷进样浓度分别在6.14~98.21μg·ml-1(r=0.9994)、10.84~173.50μg·ml-1(r=0.9998)、1.13~18.06μg·ml-1(r=0.9996)、301.98~4831.73μg·ml-1(r=0.9997)、3.44~55.02μg·ml-1(r=0.9991)、2.38~38.02μg·ml-1(r=0.9999)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;平均加样回收率分别为103.0%,100.4%,101.5%,99.0%,102.4%,101.0%,RSD分别为0.6%,0.4%,1.0%,0.6%,0.7%,1.1%(n=9)。牛黄降压丸最佳提取方法为:采用50 ml 70%乙醇30℃超声提取30 min。结论:所建立的方法准确、灵敏度高、重复性好,可用于牛黄降压丸的质量控制。

HPLC-PAD法测定不同品种核桃分心木中没食子酸、柚皮素

目的：建立采用超声提取,反相高效液相色谱-二极管阵列检测法测定核桃分心木中没食子酸和柚皮素的含量的方法。方法：色谱柱：安捷伦HC-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）,梯度洗脱;检测波长：276 nm;柱温：30℃;流速：1.0 m L/min。结果：没食子酸和柚皮素分别在2.0~80μg/m L（r=0.9999）和1.0~60μg/m L（r=0.9999）浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.7%（RSD=1.84%,n=5）和101.2%（RSD=2.65%,n=5）。分心木中含有具有抗炎、抗病毒、抗菌的没食子酸和柚皮素,平均含量分别为268.3μg/g和102.2μg/g。结论：HPLC-PAD测定没食子酸和柚皮素的方法简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为分心木中没食子酸和柚皮素的定量分析方法。

基于HPLC-ECD研究牡荆叶抗氧化的谱-效关系

为研究牡荆叶指纹图谱与抗氧化活性的谱-效关系,该研究首先建立了18批牡荆叶的高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)指纹图谱,对不同来源牡荆叶药材进行聚类分析,鉴定主要酚类化合物且测定其含量,分析牡荆叶的总酚和总黄酮含量,并采用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法、氧自由基吸收能力法及铁离子还原能力法考察其体外抗氧化活性,通过皮尔逊相关分析、灰度关联分析及偏最小二乘回归分析法研究牡荆叶的谱-效关系。结果表明:(1)牡荆叶的指纹图谱标定21个共有峰,共指认出10个峰,其含量顺序为绿原酸>异荭草苷>木犀草苷>异牡荆素>异绿原酸A>异绿原酸C>原儿茶酸>荭草苷>异绿原酸B>新绿原酸;不同产地样品间相似性较高,相似度结果为0.816~0.983。(2)系统聚类分析显示,样品含量对分类有一定影响,不同来源样品被分为3类,其中南北方样品存在一定差异。(3)牡荆叶中总酚和总黄酮的含量分别为15.82~61.83 mg·g^(-1)和27.85~157.65 mg·g^(-1),样品均具不同程度的抗氧化活性。(4)谱-效关系表明,牡荆叶的抗氧化活性是多种化合物协同作用的结果,峰9(异荭草苷)、峰4和峰5(绿原酸)等化合物对牡荆叶药材抗氧化活性的贡献最大。综上表明,牡荆叶具有较好的抗氧化活性,其中主要的活性指标是异荭草苷和绿原酸。该研究结果可为牡荆叶抗氧化活性成分的筛选及其质量控制提供参考依据。

2-(乙酰氧基)苯甲酸的HPLC分析方法建立及优化中的几点思考

本文在建立2-(乙酰氧基)苯甲酸的HPLC分析方法过程中,对溶剂对样品的稳定性影响,梯度或等度洗脱的差异,以及特异性参数设置对纯度因子的影响进行了研究。结果表明,在溶剂和流动相中适量加入冰乙酸能有效抑制2-(乙酰氧基)苯甲酸分解为水杨酸;梯度洗脱尽管能产生比等度洗脱峰形更好、峰宽更窄的色谱峰,但梯度洗脱时,流动相中的乙酸会影响方法特异性。方法最终以甲醇和0.1%冰乙酸溶液为流动相,在276 nm的检测波长下,对99%2-(乙酰氧基)苯甲酸原药及30%2-(乙酰氧基)苯甲酸可溶粉剂进行分析。方法确证结果表明该方法满足制剂中2-(乙酰氧基)苯甲酸检测要求。

HPLC-PAD法测定西洋参类保健食品中10种皂苷的含量

目的建立同时测定西洋参类保健食品中人参皂苷Rg1、Rg2、Rg3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf含量的高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-PAD).方法采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min^-1;检测波长203 nm;柱温35℃.结果10种人参皂苷的浓度在其各自线性范围内,与峰面积呈良好的线性关系,r值均≥0.99.该方法平均回收率为93.0%~101.8%,RSD均小于4.0%(n=6).结论本法准确可靠、灵敏度高、重现性好,可作为西洋参类保健食品的质量控制方法.

HPLC-PAD法同时测定复方黄柏液涂剂中9种成分的含量

目的：建立同时测定复方黄柏液涂剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、盐酸黄柏碱、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸C、盐酸小檗碱和连翘苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent extend C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-0.5%磷酸为流动相（梯度洗脱）,流速为1.0 m L·min^-1;柱温为25℃;PAD检测器。结果：9种成分含量测定的线性关系良好,线性范围和相关系数分别为12.37-185.55（r=0.999 9）、38.80-582.06（r=1.000 0）、15.90-238.50（r=0.999 9）、1.52-22.86（r=0.999 8）、48.26-723.87（r=1.000 0）、5.90-88.56（r=0.999 3）、6.58-98.64（r=1.000 0）、9.79-119.58（r=0.999 9）、16.91-253.71μg·m L^-1（r=0.999 9）;平均加样回收率分别为98.63%、102.57%、101.31%、97.95%、102.59%、98.41%、97.59%、98.77%、101.31%;方法的精密度良好,RSD均小于2.0%（n=6）。结论：该方法准确,可靠,可用于复方黄柏液涂剂的质量控制。

HPLC-PAD法测定硫酸依替米星注射液有关物质及含量

目的:建立硫酸依替米星注射液有关物质及含量的反相高效液相色谱-脉冲安培电化学(HPLC-PAD)法。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mm×250 mm,5μm或效能相当的色谱柱),柱温35℃。以0.2 mol·L^-1三氟乙酸溶液(含0.05%五氟丙酸,1.5 g·L^-1无水硫酸钠,0.8%(V/V)的50%氢氧化钠溶液,用50%氢氧化钠溶液调节pH值至3.5)-乙腈(95∶5)为流动相,流速为每分钟1.0 mL。柱后加碱(50%氢氧化钠溶液1→25,流速每分钟0.5 mL)。用积分脉冲安培电化学检测器检测。结果:依替米星在0.075~50μg·mL^-1(r=0.9996)内线性关系良好;单个最大杂质的重复性试验的RSD(n=6)为1.4%,总杂质的重复性试验的RSD(n=6)为1.7%,含量测定的重复性试验的RSD(n=6)为0.8%;方法的检测限(S/N=3)为75 ng·mL^-1,定量限(S/N=10)为250 ng·mL^-1;供试品溶液在12 h内稳定性良好。9批样品用药典方法(反相高效液相色谱-蒸发光散射法)和HPLC-PAD法测定,HPLC-PAD法的总杂和杂质个数结果偏高,其中6批样品HPLC-PAD法的含量结果偏低。结论:经方法学验证,该方法可以用于硫酸依替米星注射液有关物质及含量的测定。