基于HPLC的低压台区三相不平衡优化调整方法

针对低压台区三相不平衡的问题,提出了一种基于HPLC的低压台区三相不平衡优化调整方法。该方法首先基于HPLC模块构建台区相位拓扑图;根据获取的变压器侧、各主干线、各支路、各计量点的用电负荷数据,计算各节点及用户终端三相不平衡度;最后采用模型预测控制方法,获取兼顾三相不平衡度和换相操作次数最小化的换相调整策略。试点应用表明,所提方法能在保证换相操作次数较少的情况下,实现三相负荷相对平衡,使试点台区线损率由3.56%下降至2.75%。

枸杞叶HPLC特征图谱的研究

目的:采用HPLC法研究枸杞叶的特征图谱。方法:采用HPLC法,以槲皮素为参照物,色谱柱为Agilent 5TC-C _(18)(2)5μm,250 mm×4.6 mm,以甲醇-0.4%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为360 nm,柱温为35℃。流速为1.0 mL/min。利用《中药指纹图谱相似度评价系统(2012年版)》对数据进行整理分析。结果:建立了枸杞叶的HPLC特征图谱,共确定7个特征峰,以槲皮素峰为参照(S),10批枸杞叶样品的相似度均>0.900。结论:该方法操作简便,专属性好,可为枸杞叶的质量标准研究和质量评价提供参考依据。

应用胰蛋白酶裂解反相HPLC法分析rHuEPO肽图

胰蛋白酶降解rHuEPO后，用反相HPLC方法分析EPO降解后的产物（EPO肽图），HPLC色谱图显示了23个肽峰。发现同一单位研制的不同批制品肽图非常一致，并与美国Amgen公司的rHuEPO的肽图无论在峰数、峰型及保留时间上基本一致。该法具有重复性和重现性好，灵敏度高等特点，适用于rHuEPO肽图分析。

山茱萸药材HPLC特征图谱研究

目的建立山茱萸药材的HPLC特征图谱。方法流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;色谱柱:Agilent HC-C18柱;检测波长:240nm;柱温:30℃;流速:1.0mL.min-1,分析时间:90min。结果测试样品16批,选择马钱苷峰作为参照,确立4个共有峰作为山茱萸药材特征峰。精密度和重复性试验的RSD均小于2.0%。结论山茱萸特征图谱专属性强,可用于山茱萸药材的鉴定及质量控制。

应用RP-HPLC分析基因工程人表皮生长因子肽谱

用DTT还原rhEGF中的二硫键，并用碘乙酰胺封闭巯基，用TPCK处理的胰蛋白酶消化rhEGF，经RP－HPLC分析，发现不同工程菌生产的rhEGF存在结构的细微差别。该法具有灵敏度高、重现性好等优点，适用于基因工程产品肽谱的常规检定。

重组人胰岛素类似物的HPLC分析

目的 :探讨HPLC分析在重组人胰岛素类似物鉴别和杂质检测中的适用性。方法 :采用反相色谱柱(C18) ,以硫酸钠 -磷酸缓冲液 (0 2mol·L-1,pH 2 3)和乙腈为流动相 ,流速 0 8或 1 0mL·min-1,柱温40℃ ,检测波长 2 14nm ;用分子筛柱 (ZorbaxGF2 5 0 )以磷酸铵缓冲液 (0 1mol·L-1,pH 7 5 )和乙腈为流动相 ,流速 0 5mL·min-1,检测波长 2 14nm ;检测重组人胰岛素类似物及其酶解片段。结果 :获得胰岛素及其类似物的RP -HPLC图谱 ,肽图谱和高效体积排阻色谱 (HPSEC)图。结论 :本文方法能够有效地区别和检测胰岛素类似物及有关物质 ,为该类药物的质控提供了科学依据。

HPLC用于重组L-天门冬酰胺酶Ⅱ的纯度分析与肽图谱测定

目的：为了对重组Ｌ－天门冬酰胺酶Ⅱ进行肽图谱测定，以比较不同来源产品间一级结构的一致性。方法：运用梯度洗脱／反相高效液相色谱法对样品进行纯度检查和肽图谱测定，并提出了简单的三氯乙酸变性方法，以解除蛋白质抗胰蛋白酶水解的能力。结果：建立了重组Ｌ－天门冬酰胺酶Ⅱ的三氯乙酸变性／胰蛋白酶水解测定肽图谱的ＨＰＬＣ方法，肽图谱的比较反映出不同样品间的一级结构间存在差异。结论：建立的肽图谱测定方法，过程简便，便于常规测定，样品间的结构差异值得进一步研究。

HPLC和MALDI-TOF-MS法分析重组人钙调磷酸酶B亚基的纯度和肽图谱

用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结果表明 ,运用梯度洗脱RP HPLC法能对样品进行纯度检查和肽图谱分析 ,测得 3批样品纯度均达到 98%以上 ,肽图谱能达到批间一致 .同时用MALDI TOF MS法测定 ,纯度结果二者相符 ,质谱肽图经计算机辅助分析 ,确证rhCNB一级结构与天然CNB一致 .证明该方法灵敏、准确、可靠 .

重组人促红细胞生成素的HPLC/ESI/MS肽图谱分析

重组人促红细胞生成素（rHuEPO）是一种复杂的糖蛋白药物，含有三个氮连接和一个氧连接的糖基化位点。肽图谱分析是糖蛋白分析的有效手段，可是由于糖基化的影响，不是所有理论酶解位点都酶解了，需要实验验证。本文采用谷氨酸内切酶(Glu-C)将rHuEPO所有糖基化位点酶解成含糖肽段，HPLC/ESI/MS肽图谱分析，并通过源内碰撞诱导解离（In-source CID）分析了氨基酸序列。理论肽段有7段，检出了6段，只有一个三肽未检出。实验得到了含双硫键的肽段，通过CID分析确证了小分子肽段的氨基酸序列。

牡丹皮HPLC特征图谱研究

目的建立牡丹皮药材的HPLC特征图谱。方法供试液制备:稀乙醇回流1 h;流动相:乙腈-0.02%磷酸水溶液,梯度洗脱;色谱柱:AgilentHC-C18柱;检测波长:230 nm;柱温:30℃;流速1.0 m l·m in-1,分析时间60 m in。结果测试样品10批,选择丹皮酚峰作为参照,确立5个共有峰作为牡丹皮药材特征峰。精密度和重复性实验的RSD均小于1%。结论牡丹皮特征图谱专属性强,可用于牡丹皮药材的鉴定及质量控制。

RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)肽图谱

目的:建立重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]胰蛋白酶或V_8蛋白酶肽图分析方法。方法:酶解缓冲液分别为1%碳酸氢铵缓冲液(pH7.8)和磷酸盐缓冲液(pH7.8),酶与底物的比例为1∶10,酶解时间分别为3h和6h。采用ODS柱(250mm×4.6 mm,5μm),以三氟醋酸-水(0.1∶100)为流动相A,三氟醋酸-水-乙腈(0.1∶5∶95)为流动相B。胰蛋白酶洗脱梯度:0-30min,流动相A与B的比例为80:20→55:45。V_8蛋白酶洗脱梯度:0-8min,流动相A与B的比例为99:1→95:5;8-55 min,比例为95:5→48:52。流速:1.0mL·min^(-1),检测波长214nm,柱温:37℃。结果:无论用胰蛋白酶或V_8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36),控制好酶与底物的比例及酶解的时间,都可以得到重现性好的稳定的肽图。结论:本方法可用于重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)胰蛋白酶和V_8蛋白酶肽图分析,简便,可行。

重组人促红细胞生成素的HPLC与UPLC肽图谱分析

目的分析rHuEPO供试品及其对照品经胰酶酶解后分别在HPLC与UPLC上的肽图谱表现。方法rHuEPO供试品及对照品经透析、冻干、重新溶解和胰酶酶切后,以三氟醋酸/水,三氟醋酸/乙腈/水作为流动相梯度洗脱,分别以HPLC及UPLC连接反相色谱柱分析酶切后的肽段。结果rHuEPO供试品及其对照品经胰酶酶切后的肽段在HPLC上肽图谱表现一致,在UPLC上肽图谱也完全一致。UPLC分析rHuEPO肽图需要的进样量更少,且较传统HPLC的分析时间大为缩短,同时不损失分离度及灵敏度。结论UPLC与HPLC均能验证rHuEPO供试品及对照品肽图的一致性,相比于HPLC、UPLC分析肽图谱更方便快捷,更节省样品,更适合分析rHuEPO肽图。

青翘HPLC指纹图谱研究

目的建立青翘的HPLC指纹图谱。方法色谱柱:Thermo C18Column(4.6mm×250mm,5μm);柱温:30℃;流动相:乙腈-水,梯度洗脱;流速:1.0mL/min,检测波长:203nm。结果建立了青翘的HPLC指纹图谱,并标定了21个共有峰,指认了其中的3个共有峰。结论此法简便、准确、快速,为全面科学评价青翘质量提供了可靠的分析方法。

基于HPLC法和多元统计分析的不同产地香附挥发油中4种成分含量的比较研究

目的:建立同时测定香附挥发油中香附烯酮、圆柚酮、α-香附酮、马兜铃酮含量的方法,并比较不同产地香附样品中4种成分的含量差异,为该药材的种质筛选和开发利用提供参考。方法:以12个产地共46批香附为样品,提取挥发油后,采用高效液相色谱法(HPLC)测定挥发油中香附烯酮、圆柚酮、α-香附酮、马兜铃酮含量。色谱柱为Kromasil C18,流动相为甲醇-水(68∶32,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为242 nm,进样量为20μL。以上述4个成分的含量为评价指标,通过雷达图分析、聚类热图分析和主成分分析等多元统计分析,比较不同产地香附样品的质量。结果:含量测定方法学考察结果均符合相关要求;不同产地香附挥发油中4种成分的总含量范围为136.9864~538.8321 mg/g,其中以云南产样品的总含量最高(平均值为476.0592 mg/g)。雷达图分析结果显示,广东、江西、广西、云南4个产地样品的整体轮廓较大、分布平衡度较好,其中以云南产样品的整体轮廓最大、分布平衡度最好;聚类热图分析结果显示,12个产地样品可聚成两大类,即产地为湖北、江西、云南、四川、广东、山东、河南、陕西的样品聚为第Ⅰ类,产地为广西、山西、安徽、海南的样品聚为第Ⅱ类,且第Ⅰ类产地样品的质量优于第Ⅱ类;主成分分析结果显示,前3个主成分的累计贡献率为96.1%,12个产地样品主要聚为两大类,与聚类热图分析结果一致。结论:本研究所建HPLC法可用于香附挥发油中香附烯酮、圆柚酮、α-香附酮和马兜铃酮含量的同时测定;12个产地样品中以云南产香附的质量更优。

抗CD52单克隆抗体HPLC-肽图分析方法的建立

建立高效液相色谱(HPLC)-肽图分析方法,用于抗人CD52单克隆抗体的专属性鉴别。抗CD52单抗样品经盐酸胍变性、DTT还原,释放出的游离半胱氨酸残基进行烷基化。超滤置换酶切缓冲液后进行胰蛋白酶酶切并终止。色谱条件:采用Eclipse XDB-C18 4.6×250 mm 5μm(Aglient)色谱柱,0.1%TFA水溶液与0.1%TFA乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为214 nm,柱温为30℃;质谱条件:分析时长135 min;检测方式正离子,TOF;MS+扫描范围350-1 500 Da;Product Ion+扫描范围100-1 500 Da;质谱分辨率40 000;Exceeds,150 Cps。CD52单抗重链CDR1、CDR3、轻链CDR1对应肽段由质谱鉴定出。HPLC-肽图方法专属性验证显示辅料制剂及异种抗体对检测结果无干扰;精密度验证结果显示目标峰的峰面积RSD%均在1.7%-7.6%之间。且目标峰的保留时间RSD%均在0.1%-0.2%之间,小于5%的可接受标准;耐用性结果显示,3μg胰蛋白酶、37℃和18 h的酶切条件是最合适的样品处理条件。基于CDR相关肽段鉴别的HPLC-肽图分析方法可定性鉴定出抗CD52单抗,方法学验证结果显示该方法适用于抗人CD52单抗的专属性鉴别并可用于质量控制及批检验放行。

大豆黄卷及其炮制品制大豆黄卷HPLC指纹图谱研究

目的:建立大豆黄卷药材和其炮制品制大豆黄卷饮片HPLC指纹图谱。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C 184.6×250 mm,5μm,流动相为乙腈:0.12%甲酸水溶液进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长选择260 nm,柱温:30℃。结果:建立了大豆黄卷及其炮制品制大豆黄卷的指纹图谱,大豆黄卷共标定了12个共有峰,制大豆黄卷标定了13个共有峰,经过对照品比对,指认了6个成分,分别为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素。结论:建立的方法重复性良好,特征性强,稳定性强,为大豆黄卷及制大豆黄卷指纹图谱鉴别提供方法学依据。

藏药婆婆纳HPLC特征图谱的建立与主成分含量测定

建立10批不同产地婆婆纳的特征图谱,对婆婆纳中主要化学成分进行定量研究。采用HPLC建立不同产地婆婆纳的特征图谱,选用Agilent SB色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以乙腈∶四氢呋喃(20∶7)-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长275 nm,进样量10μL。通过相似度评价、灰色关联度分析、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别式分析(OPLS-DA)对10批婆婆纳的特征图谱进行分析,并通过测定标志性成分含量综合分析婆婆纳药材质量。结果表明,10批婆婆纳HPLC特征图谱具有16个共有峰,共指认出胡黄连苷Ⅱ、木犀草素2个共有峰,其中胡黄连苷Ⅱ的含量范围为0.35%~2.60%。建立的HPLC特征图谱及含量测定方法可科学、有效地对不同产地婆婆纳药材质量进行探究,为婆婆纳药材质量控制方法的建立提供科学支撑。

基于HPLC特征图谱和含量测定的仙鹤草药材质量控制研究

目的采用高效液相色谱法,建立仙鹤草药材的特征图谱和含量测定方法,为仙鹤草药材的质量控制提供参考。方法特征图谱采用XSelect HSS T3(4.6×250mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为320nm,柱温为30℃,并进行相似度评价、聚类分析及主成分分析。采用XSelect HSS T3(4.6×250mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,等度洗脱,检测波长为254nm,柱温30℃,测定仙鹤草药材中槲皮苷的含量。结果仙鹤草药材特征图谱有7个特征峰,除样品S20(河南产区)之外,不同产区的仙鹤草药材相似度均大于0.95;聚类分析将不同产地的仙鹤草药材分为3类,主成分分析显示,特征峰1、3、4和6是造成批次间差异的关键色谱峰;不同产地仙鹤草药材中槲皮苷含量范围为0.09%~0.22%,产地差异性较小。结论所建立的HPLC特征图谱和含量测定方法可用于仙鹤草药材的质量控制。

香蕉果实MAPs测定方法的建立及其含量变化规律研究

【目的】建立一种准确、快速测定香蕉果实单胺类及其前体物质(Monoamines and their precursors,MAPs)的方法,明确香蕉果实发育过程中MAPs各组分的含量变化规律,为下一步解析其合成代谢机理提供参考依据。【方法】以巴西香蕉、粉杂1号粉蕉和东莞大蕉3个香蕉品种的果实为试验材料,采用反相高效液相色谱—紫外检测(RPHPLC-UV)方法测定断蕾后15~75 d的果肉和果皮中MAPs含量,研究其在香蕉果实发育过程中的变化规律。【结果】RP-HPLC-UV色谱条件:采用C_(18)色谱柱(4.6×250 mm,5μm),甲醇为流动相A、0.1%三氟乙酸水溶液为流动相B,定量检测到去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、左旋多巴(L-dopa)、酪胺(TYRA)、酪氨酸(Tyr)、血清素(SERO)、色胺(TRM)和色氨酸(Trp)等8种MAPs含量。其加标回收率为95.3%~106.1%;日内精密度范围为0.37%~0.82%,日间精密度范围为0.35%~0.83%;检测限为0.0012~0.0016 mg/100 g,定量限为0.0040~0.0053 mg/100 g;一个样品在14 min内可以完成检测。3个香蕉品种果实发育过程中,果皮TRM、TYRA、L-dopa、NE和DA含量均高于果肉。东莞大蕉和粉杂1号粉蕉果皮中SERO、Trp和Tyr含量高于果肉,而巴西香蕉果皮中Trp和Tyr含量低于果肉。在果实发育前期,巴西香蕉果肉中大部分MAPs物质的含量有一个快速升高的过程,在断蕾后30 d达峰值,NE、DA、TYRA、Tyr、Trp和TRM含量分别为22.14、239.81、118.29、43.74、46.41和5.33 mg/100 g,之后含量持续下降,NE、DA、TYRA和TRM在果实成熟时达最低值,含量分别为3.17、7.08、12.58和1.04 mg/100 g,而Tyr和Trp含量最低值出现在断蕾后45 d。东莞大蕉和粉杂1号粉蕉中TYRA和SERO含量在果实发育过程中呈下降趋势。【结论】建立的RP-HPLC-UV方法准确、灵敏、快速,可用于香蕉果实中MAPs的定量检测;3个香蕉品种不同发育阶段的果肉和果皮中均可检测到NE、DA、L-dopa、TYRA、Tyr、SERO、TRM和Trp等8种MAPs物质,且其含量在巴西香蕉果实中表现出区别于东莞大蕉和粉杂1号粉蕉的变化规律。

重组艾塞那肽RP-HPLC法肽图分析

目的建立并验证胰蛋白酶裂解-反向高效液相色谱法进行重组艾塞那肽肽图分析研究。方法将重组艾塞那肽样品用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过反相高效液相色谱法进行分析,采用C_8色谱柱,以0.1%三氟乙酸(TFA)的水溶液为流动相A,以0.1%TFA的乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱70min,得到重组艾塞那肽肽图,以此进行方法的专属性、重现性、定量限、批间同一性研究。结果本实验室制备的重组艾塞那肽可以通过胰蛋白酶裂解-RP-HPLC法进行肽图分析,专属性、重现性均满足要求,定量限为0.125mg/m L,三个批次间的肽图谱也完全一致。结论表明此方法简便可靠、准确度高、重复性好,验证研究可行,可用于重组艾塞那肽的质量控制。