HPLC-MS-MS法测定人血清中氟西汀、文拉法辛及其代谢产物与应用

建立可同时快速测定人血清中氟西汀(Fluoxetine, FXT)、文拉法辛(Venlafaxine, VEN)及其活性代谢产物N-去甲氟西汀(Norfluoxetine,N-FXT)、O-去甲文拉法辛(O-Desmethylvenlafaxine,O-VEN)浓度的方法,并应用于临床,监测相关药物在人体中的代谢情况。临床样本,以甲醇-甲酸混合溶剂作蛋白沉淀剂,处理后,离心后取上清,进样高效液相色谱-串联质谱系统(HPLC-MS/MS),使用Phenomenex Kinetex Biphenyl色谱柱(2.1 mm×50 mm, 2.6μm),流动相为含0.1%甲酸和1 mmol/L甲酸铵的水和甲醇,流速0.4 mL·min^(-1),柱温45℃,进样量5μL,采用电喷雾正离子多反应监测模式检测。检测方法特异性和选择性较好,血药质量浓度分别在10~1 000,32~3 200,18~1 800,18~1 800 ng/mL范围内线性良好,回收率在85%~115%之间,批内批间精密度RSD均小于15%,临床样本在室温放置24 h、反复冻融、长期冻存保存下,检测准确度在85%~115%之间,相对基质效应均在20%以内,临床检测患者血药浓度,VEN加O-VEN,结果平均(263.89±176.67) ng/mL;FXT加N-FXT结果平均(139.12±121.3) ng/mL。方法样品用量少,处理简便,准确度高,特异性强,稳定性好,适用于同时快速测定人血清中FXT、VEN及其活性代谢产物的浓度,为精准个性化用药提供可靠的方法学支持。

用HPLC-MS-MS快速分析和鉴定三尖杉植物内生真菌发酵液中的Brefeldin A

采用HPLC -MS -MS联用技术 ,分析了C56和C65两株具有抗肿瘤活性的三尖杉植物内生真菌发酵液抽提物 ,首次报道了这两株真菌都能产生BrefeldinA(BFA)。采用ESI-MS总离子流跟踪分析HPLC的洗脱液 ,并用低能量的CID -MS -MS(碰撞诱导裂解方式 )进一步确定目标离子峰为BFA分子离子峰 。

基质固相分散萃取-高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS-MS)同时测定茶叶中11种农药的残留量

建立了茶叶中3类11种农药的分散固相萃取-高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS-MS）的检测方法。茶叶样品以乙腈-乙酸（体积比99∶1）提取,以PSA为净化剂基质固相分散萃取,然后通过C18色谱柱,以甲醇/水（含甲酸铵）溶液进行梯度洗脱,采用电离喷雾电离方式（ESI＋）,通过多反应监测（MRM）定量。结果表明：11种农药的分析时间约为20 min,在0～500 ng·mL-1范围内线性相关,相关系数大于0.9995,方法检测限为0.1～1.7μg·kg-1。测定了茶叶样品中11种农药的残留量,加标回收率为62.4%～114.8%（添加水平分别为10～400μg·kg-1）,相对标准偏差（RSD）为3.28%～19.34%。选取了5个不同类型的茶叶样品,检测其中11种农药的残留量,检出结果差异较大。其中绿茶中11种农药的检出量为1.7～339.4μg·kg-1,加标回收率为86.1%～104.1%,相对标准偏差（RSD）均小于20%（n=6）。本方法准确、灵敏、简单、快速、安全,能满足茶叶样品中多种农药残留分析的要求。

HPLC-MS-MS测定人尿液中黄芪甲苷浓度及其尿液药动学研究

目的 建立HPLC—MS—MS测定人尿液中黄芪甲苷的浓度。方法 使用C18（4．6mm×100mm，5μm）色谱分析枉，以98％CH3OH为流动相，流速0．3mL·min^-1尿液样品经甲醇沉淀后进样，选择黄芪甲苷离子对（807．3／627．3m／z）为选择性检测离子，按外标法定量。结果 尿液中黄芪甲苷线性范围为0．0125～2．0mg·L^-1，日内和日间RSD均小于6％，方法回收率在97．5％-104．2％，最低定量质量浓度为0．0125mg·L^-1。结论 本方法简便、快速、特异，适用于黄芪甲苷人体药动学研究。

HPLC-MS-MS法测定人血浆中苯磺酸氨氯地平的浓度及其药动学

目的：建立人血浆中苯磺酸氨氯地平高效液相色谱-质谱联用测定法（HPLC-MS-MS），并研究苯磺酸氨氯地平在健康人体内的药动学行为，评价两片剂的生物等效性．方法：采用双交叉试验设计，血样用乙醚-二氯甲烷（2：1）混合液提取，HPLC-MS-MS分离测定，根据血药浓度．时间数据估算主要药动学参数和相对生物利用度，评价生物等效性．结果：苯磺酸氨氯地平的线性范围为0．1986～15．8880ng/mL．苯磺酸氨氯地平受试片和参比片的主要药动学参数分别是：Cmax为（5．9511±2．3623）和（5．5517±1．9781）ng/mL，Tmax分别为（5．89±2．25）和（5．83±1．54）h，AUC（04）分别为（195．6±79．4）和（212．7±72．1）ng/mL·h，AUC（0-∞）分别为（226．1±91．2）和（240．3±82．3）ng/mL·h．结论：本法简便、灵敏、准确，统计分析结果表明两片剂具有生物等效性．

响应曲面法在类固醇雌激素HPLC-MS-MS定量分析中的应用

雌酮(E1)、17β雌二醇(E2)和17α乙炔基雌二醇(EE2)是雌情活力最强的3种类固醇雌激素。通过响应曲面法(RSM)优化了3种雌激素在高效液相色谱串联质谱联用(HPLC-MS-MS)检测方法中的多离子监测反应(MRM)条件,获得E1、E2和EE2的最优碎片电压分别为205.0、196.0和182.0V,最优碰撞能分别为43.0、51.0和54.0V。配合固相萃取(SPE)预处理技术,采用HPLC-MS-MS内标检测方法检测了重庆主城区嘉陵江水样中E1、E2和EE2的浓度。3者在该方法中的定量检测限分别为0.5、0.4和0.1ng/L。

HPLC-MS-MS测定人血浆中的甘草次酸及生物利用度

目的 建立人血浆中的甘草次酸的HPLC-MSMS测定法，研究复方甘草甜素制剂的相对生物利用度。方法 以雷尼替丁为内标，血浆样品液液萃取后，经BDS Hypersil C18柱分离，采用质谱检测器检测。18名健康男性志愿者采用随机交叉方式分别单次口服复方甘草甜素制剂A、B或C各75mg，在不同时间点取血，样品以新建立的HPLC-MS-MS法测定，研究比较3种制剂的药动学及相对生物利用度。结果 甘草次酸在浓度2．0～200．0μg·L^-1与峰面积比线性良好，最低定量浓度为2．0μg·L^-1。方法回收率为97．2％～108．0%，日内精密度（RSD）〈4．2％，日间精密度（RSD）〈8．9%.单剂量口服复方甘草甜素片A、B或胶囊C75mg后3种制剂的Cmax分别为（130．4±40．3）、（132．1±43．6）、（128．6±44．7）μg·L^-1；tmax分别为（3．5±0．5）、（3．3±0．5）、（3．4±0．5）h；AUC0-48分别为（2097．6±744．8）、（2037．0±894．9）、（2075．0±734．0）μg·h·L^-1；t1／2分别为（6．0±2．1）、（5．9±1．5）、（5．7±2．1）h。结论 该方法选择性好，灵敏度高，可用于甘草次酸的体内过程研究。药动学参数经方差分析表明A、B和C中甘草次酸的主要药动学参数之间均无显著差异，双单侧t检验结果表明3制剂为生物等效制剂。

HPLC-MS-MS法定量测定人血浆中多潘立酮的浓度

目的:建立HPLC-MS-MS方法定量测定人血浆中多潘立酮浓度。方法:以地西泮为内标,采用甲醇:0.5%乙酸=80:20为流动相,以Inerstil C18(2.1mm×100mm,3.0μm)色谱柱为分析柱,通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行检测。多潘立酮和地西泮用于定量分析的离子对分别为[M+H]+m/z426.2→m/z175.2和[M+H]+m/z285.0→m/z193.0。结果:多潘立酮线性范围为1～80μg·L-1,定量下限为1μg·L-1(n=6)。日内、日间的RSD均<15%,平均回收率>75%。结论:本方法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于多潘立酮临床药动学研究。

QuEChERS结合HPLC-MS-MS测定鲮体内孔雀石绿及其代谢物残留及消除规律

通过对干燥剂、分散吸附剂的种类及质量进行对比及优化,对鲮体内孔雀石绿（MG）及其代谢物的分散固相萃取/高效液相色谱-串联质谱（Qu ECh ERS-HPLC-MS/MS）联用方法进行了优化。方法以乙腈为萃取溶剂,无水硫酸镁为干燥剂,乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）与石墨化炭黑（GCB）为分散吸附剂,电喷雾正离子模式（ESI＋）,多反应监测模式,内标法定量。结果显示,无水硫酸镁对样品中水分干燥效果良好,50 mg PSA＋10 mg GCB可达到净化效果。在优化条件下,MG和无色孔雀石绿（LMG）在1-50 ng/m L范围内呈现良好的线性相关,相关系数r分别为0.999 21和0.999 37;方法检测限（LOD,S/N=3）为0.5μg/kg。采用该方法对鲮空白样品进行检测及加标回收率的测定,在2.0、10、25μg/kg 3个浓度水平下,MG的加标回收率为82.5%-92.6%,LMG的加标回收率为84.6%-95.1%。将该方法用于鲮体内MG及LMG残留消除规律研究,得到MG和LMG的消除半衰期分别为13.6、178.3 h,表明MG在鲮体内消除相对较快,但是其主要代谢产物LMG消除缓慢,直到40 d后低于检测限。本研究可为鲮等水产品中MG和LMG的检测提供支持技术,为水产品质量安全监管提供参考数据。

西兰花籽中完形硫代葡萄糖苷的HPLC-MS-MS鉴定

[目的]建立一种简单、快速、经济的鉴定蔬菜中硫代葡萄糖苷的方法。[方法]用70%甲醇从西兰花籽中提取硫代葡萄糖苷,以甲酸作为离子调节剂,采用梯度洗脱的方法对提取物进行分离,并采用液相色谱-质谱-质谱联用技术对提取物成分进行鉴定。[结果]从西兰花籽中成功鉴定出8种硫代葡萄糖苷,其保留时间分别为5.9、7.7、8.8、9.5、13.6、16.0、19.3、28.6min,分子量分别为422、468、438、436、372、406、420、402;该鉴定方法所测样品不需经过脱硫等预处理,大大节省了试验时间,且样品需要量较少,试验效率较高。[结论]该研究建立了一种鉴定蔬菜中硫代葡萄糖苷的新方法。

HPLC-MS-MS法测定人血浆中坎地沙坦的浓度

目的建立高效液相色谱电喷雾离子化质谱联用法测定人血浆中坎地沙坦的浓度。方法样品用有机溶剂（二氯甲烷乙醚-1：4）萃取后．有机层用氮气吹干，100μL流动相定容后进样。流动相为0．1％甲酸水溶液-甲醇-乙腈（15：5：80，v／v／v），内标为非那雄胺。采用二级质谱选择性离子检测坎地沙坦（441／263）和非那雄胺Fin—asteride（373．4／305．3）。结果坎地沙坦的线性范围0．78～200μg·L^-1（r^2=0．9945），平均相对回收率在94．07％～102．86％，批内和批间RSD均〈10％。坎地沙坦的最低定量限为0．78μg·L^-1，提取回收率〉88％。结论该方法准确、灵敏，可用于坎地沙坦的人体药动学研究。

HPLC同时测定甜高粱中10种黄酮类化合物含量及抗氧化活性对比研究

试验旨在建立同时测定甜高粱不同部位中10种黄酮类化合物含量的高效液相色谱(HPLC)检测方法,并对总黄酮提取物抗氧化能力进行评价。试验以甜高粱陇甜粱2号成熟期籽粒、茎秆及全株为研究对象制备总黄酮提取物,利用HPLC同时测定不同部位总黄酮提取物中的儿茶素、氯化芹菜定、花旗松素、芦丁、槲皮素、木犀草素、柚皮素、高北美圣草素、芹菜素及麦黄酮含量。结果显示,10种黄酮类化合物分别在各自线性范围内与色谱峰峰面积线性关系良好,R^(2)为0.9984~0.9999,平均加样回收率为95.0%~105.8%,RSD为1.03%~2.86%。抗氧化性测定结果表明,甜高粱不同部位总黄酮提取物对羟基自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS^(+))自由基均具有一定的清除能力,不同浓度下清除率均表现为籽粒>全株>茎秆;籽粒总黄酮提取物浓度为1.00 g/L时,籽粒总黄酮提取物对DPPH自由基的清除率高于VC和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)。相关性分析结果表明,不同部位总黄酮提取物含量与不同自由基清除率及总还原能力(FRAP)均呈正相关。研究表明,该试验方法简便,结果准确性较高,可用于甜高粱中黄酮类化合物含量的测定;甜高粱不同部位总黄酮提取物具有抗氧化活性。

HPLC测定吗替麦考酚酯口服混悬剂(骁悉)中尼泊金甲酯含量

建立了一种测定吗替麦考酚酯口服混悬剂中尼泊金甲酯含量的方法。采用高效液相色谱法,色谱柱:YMC-Pack Pro C18(150 mm×4.6 nm,5μm);流动相:甲醇-1%乙酸水(60∶40);检测波长:254 nm;流速:0.7 mL·min^(-1);柱温:30℃;进样量:10μL。采用该法测定,专属性强,精密度好(RSD=1.16%,n=12),准确度高(平均加样回收率为99.35%,回收率RSD<2%),操作简单,适用吗替麦考酚酯混悬剂生产中尼泊金甲酯含量检测。该法测得的吗替麦考酚酯混悬液中尼泊金甲酯含量为3.18 mg·mL^(-1),占混悬剂质量的0.50%。

HPLC-MS-MS法测定人血浆中多潘立酮浓度的不确定度分析

目的建立HPLC-MS-MS法测定血浆中多潘立酮含量的不确定度分析方法。方法建立计算人血浆中多潘立酮含量不确定度的数学模型,找出影响不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估。结果计算各变量的不确定度,最终给出测量结果的扩展不确定度和置信水平。结论采用本方法评估测量不确定度,方法合理。

HPLC法同时测定驻春胶囊中4个成分的含量

目的:建立以高效液相色谱法(HPLC)同时测定驻春胶囊中异补骨脂素、补骨脂素、淫羊藿苷、蛇床子素含量的方法。方法:采用HPLC法,以异补骨脂素、补骨脂素、淫羊藿苷和蛇床子素作为指标成分,采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-水,梯度洗脱,体积流量为1.0 m·min^(-1);柱温为30℃,检测波长为254 nm,进样量为5μL。结果:异补骨脂素、补骨脂素、淫羊藿苷和蛇床子素质量浓度分别在0.0059~0.1770 mg/mL、0.0049~0.1470 mg/mL、0.0031~0.093 mg/mL和0.0048~0.1440 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,其相关系数分别为0.9996、0.9995、0.9997和0.9995,平均加样回收率分别为101.45%、100.95%、100.46%和101.17%;RSD分别为2.19%、1.83%、1.71%和2.01%。结论:该分析方法适用于驻春胶囊中异补骨脂素、补骨脂素、淫羊藿苷和蛇床子素的含量测定。

HPLC-MS-MS法测定人血浆中芬太尼浓度及其生物等效性研究

目的:建立液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS)测定人血浆中芬太尼的浓度。方法:以D5-芬太尼为内标,采用正己烷处理血浆样品。色谱柱为Thermo Hypurity C18(150mm×2.1mm,5μm),流动相为甲醇∶水(含0.1%甲酸)=(85∶15,V/V),流速为0.3mL/min,柱温40℃;质谱条件为电喷雾电离源(ESI),检测方式为正离子方式、多离子反应监测(MRM),用于定量分析的离子为芬太尼m/z 337.1→188.1,D5-芬太尼m/z 341.9→187.9。结果:芬太尼血药浓度在19.53～5000pg/mL范围内线性关系良好,定量下限为19.53pg/mL,日内和日间变异均小于5.16%,提取回收率均在90%以上;应用此方法研究了24名健康男性受试者使用两种芬太尼透皮贴剂的药代动力学特点,受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为(94.0±19.5)%。结论:本法具有快速、简便、灵敏、准确等特点,适合人血浆中芬太尼浓度测定。两种制剂生物等效。

HPLC-MS-MS法测定人血浆中石杉碱甲的浓度及人体相对生物利用度研究

目的建立人血浆中石杉碱甲浓度的HPLGM9MS测定法，研究2种石杉碱甲片在正常人体的相对生物利用度。方法以盐酸伪麻黄碱为内标，血浆样品经乙酸乙酯萃取，汉邦C18柱（4．6mm×150mm，5μm）分离后，采用HPLC-MS-MS联用法检测，18名健康男性志愿者采用双周期随机交叉试验设计，分别单剂量口服石杉碱甲片（T或R）0．2mg后测定两者的相对生物利用度。结果石杉碱甲与内标分离度好，内源性杂质不干扰测定，在0．0508～5．080μg·L^-1（r=0．9998）石杉碱甲浓度与峰面积比的线性关系良好，定量限为0．0508μg·L^-1，回收率为101．8％～109．8％（n=5），日内RSD为1．8％～3．9％（n=5）；日间RSD为2．3％～8．7％（n=15）。单次服用0．2mg石杉碱甲片后T与R的AUC0～24分别为（16．35±3．42）μg·h·L^-1和（16．38±3．61）μg·h·L^-1；AUC0-∞分别为（17．53±3．80）μg·h·L^-1和（17．70±3．97）μg·h·L^-1；Gmax分别为（2．47±0．49）μg·L^-1和（2．514-_0．51）μg·L^-1；tmax分别为（1．3±0．4）h和（1．2±0．3）h；t1／2分别为（5．9±0．8）h和（6．2±0．7）h。与R相比，T的相对生物利用度为100．5％±10．1％。结论该方法准确度高，灵敏度好，可用于石杉碱甲人体内过程研究。方差分析结果表明2种制剂的主要药动学参数之间无明显差异，双单侧t检验结果表明2种制剂为生物等效制剂。

HPLC法同时测定益肾泄浊合剂中5种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定益肾泄浊合剂中没食子酸、莫诺苷、马钱苷、毛蕊异黄酮苷、大黄酸的含量。方法分析采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm。结果5种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9996),平均加样回收率97.28%~101.93%,RSD 2.56%~2.84%。结论该方法准确可靠,可用于益肾泄浊合剂的质量控制。

HPLC-MS-MS测定盐酸西替利嗪血药浓度及药动学研究

目的:研究国产盐酸西替利嗪咀嚼片的人体药动学。方法:选择20名男性健康志愿者,采用HPLC-MS-MS测定单剂量(20mg)口服国产盐酸西替利嗪咀嚼片后,西替利嗪在人体内的浓度。结果:盐酸西替利嗪的体内动态过程呈一级吸收的二房室开放模型,Cmax,、Tmax、T1/2、AUC0-36、AUC0-∞分别为209.97±28.26μg·h·L-1,1.6±0.3h,9.18±3.44h,1545.5±441.5μg·h·L-1,1633.4±479.0μg·h·L-1。结论:国产盐酸西替利嗪片与进口片具有生物等效性。

HPLC及LC-MS测定榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留

本文采用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱法(LC-MS)对干果榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留量进行含量测定.HPLC和LC-MS均使用C18色谱柱,含量测定采取等度洗脱,流动相:甲醇-水(55∶45,体积比);体积流量:1.0 mL·min-1;测定波长:260 nm;柱温:30℃.LC-MS采取电喷雾离子源,梯度洗脱,体积流量:0.6 mL·min-1,柱温:30℃.结果表明,榛子中氯吡苯脲与多菌灵存在残留,氯吡苯脲质量浓度在1.00~10.00μg·mL-1范围内线性关系良好,加样回收率在95.58%~100.58%;多菌灵质量浓度在1.005~15.075μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,加样回收率在95.61%~104.39%.实验证明,HPLC与LC-MS相结合的方法具有操作简便、灵敏度高、检出限低等优点,能有效地检测到榛子样品中膨大剂氯吡苯脲及杀菌剂多菌灵的残留,并确定其残留量,线性关系和回收率结果均令人满意.根据被检测的8批样品中氯吡苯脲和多菌灵两项农药残留量推断,作为一般干果食用榛子是安全的.