基于HPLC-HRMS/MS^n/QqQ技术的人参皂苷Rb_1化学转化产物的结构与途径分析

利用液相色谱-质谱联用技术分析了Keggin型12-磷钨酸化学转化人参皂苷Rb1产物的结构与转化途径.基于高效液相色谱对转化产物的快速分离,利用Q Exactive高分辨质谱的Full MS-AIF模式快速鉴定了产物结构,并利用多级串联质谱进行结构验证.进一步结合人参皂苷异构体在反向C18色谱柱上的相对保留时间,快速分析鉴定出Rb1的10种转化产物为20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,20(S)-25-OH-Rg3,20(R)-25-OH-Rg3,25-OH-Rk1,25-OH-Rg5,Rg5,Rk1,(20S,25)-环氧-Rg3和(20R,25)-环氧-Rg3.根据转化产物的结构初步推断了人参皂苷的转化途径:在12-磷钨酸产生的酸性环境中,Rb1主要通过C20位去糖基化、差向异构化和烯烃链的水合、消除及环合反应转化为稀有皂苷.采用三重四极杆质谱的选择反应监测模式准确定量分析了Rb1的转化效率和稀有皂苷20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,Rk1和Rg5的产率.定量分析结果显示,与生物转化相比,12-磷钨酸对Rb1有更高的转化效率,反应40 min后转化率达到100%.本文结果表明,HPLC-HRMS/MSn/Qq Q技术是人参皂苷等天然产物结构解析与定量分析的有效方法.

利用RRLC-QqQ-MS^n方法分析比较青皮、陈皮提取物在大鼠尿液及粪便中代谢及排泄过程

考察青皮、陈皮醇提物经灌胃给药后,黄酮及香豆素等特征性多酚类成分在大鼠尿液及粪便中的代谢及排泄过程。分别对大鼠灌胃给予青皮及陈皮70%乙醇提取物,收集尿液和粪便。利用RRLC-QqQ-MS^n技术,比较多酚类成分在醇提物、大鼠尿液及粪便中的含量。通过与对照品比较,从青皮、陈皮醇提物中共鉴定了30个多酚类成分,包括黄酮及其苷类、二氢黄酮及其苷类、黄酮醇及其苷类、多甲氧基黄酮类、柠檬苦素类及香豆素类等。各种不同类型化合物,入血后经体循环代谢及肾脏排泄在尿中的检测,较经肠道代谢及排泄在粪便中的检测存在差异。分析结果表明,多甲氧基黄酮类和二氢黄酮苷元类化合物主要经过尿液排出体外,二氢黄酮苷类和柠檬苦素类化合物主要经过粪便排出体外,香豆素类化合物可能经体内代谢转化,在粪便和尿液中几乎均未检测到。

基于拟靶标代谢组学考察不同煎煮方式对大黄功效组分煎出的影响

目的采用拟靶标代谢组学的研究方法揭示不同煎煮时间和不同煎煮温度对大黄煎出的蒽醌类、蒽酮类及鞣质类等化学成分的影响,为大黄临床用药提供依据。方法利用线性离子阱-静电场轨道阱质谱(LTQ-Orbitrap MS^n)准确挖掘大黄各类化学成分的特征离子,通过特征离子确定尽量多的化学成分离子对,利用三重四级杆-质谱(QQQ-MS)的多反应监测(MRM)模式获取各种成分的峰面积,采用多元统计分析结合配对t检验比较不同煎煮方式对大黄煎出化学成分的影响。结果煎煮时间和煎煮温度对大黄煎出化学成分均有影响,短时间煎煮(15 min)有利于双蒽酮苷类和蒽醌苷类成分煎出,长时间煎煮(60 min)则利于鞣质类成分煎出;与沸水浸泡相比,沸水煎煮有利于蒽醌类、鞣质类成分煎出。结论采用拟靶标代谢组学的方法,明确指出了短时间煎煮或浸泡利于大黄泻下功效的发挥,长时间沸水煎煮利于清热解毒功效的发挥,为大黄的临床应用提供了参考。