基于HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS技术快速分析肺形草中的化学成分

目的 建立高效、稳定的高效液相色谱-线性离子阱串联质谱联用技术(HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS)方法,对肺形草全草的化学成分快速识别和鉴定。方法 采用HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS对肺形草中的化学成分进行快速分析。通过HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS扫描得到的化合物相对分子质量,对照品和多级碎片离子信息,并结合相关文献以及裂解规律,从而实现对肺形草的准确定性分析。结果 共鉴定出92种化学成分,包括黄酮类、萜类、有机酸类、蒽醌类、糖类、酯类等,其中化合物3,4-di-O-caffeoylquinic acid、(2S,3S,4S,5R,6S)-6-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-4-oxochromen-7-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid、(1S,4aS,7S,7aS)-1-[(2S,3R,4S,5S,6R)-6-[[(E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoyl]oxymethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-7-hydroxy-7-methyl-4a, 5,6,7a-tetrahydro-1H-cyclopenta[c]pyran-4-carboxylic acid和Glc-Glc-octadecatrienoyl-sn-glycerol经全球天然产物社会分子网络系统(GNPS)数据库比对,为首次在该植物中鉴别得到。结论 建立了对肺形草中化学成分的快速定性分析的方法,为肺形草化学成分的提取分离及其药效物质基础提供科学依据,并为其质量评价和应用开发提供了一定的参考。

HPLC-LTQ-Orbitrap-MS^n快速鉴别党参药材中化学成分

目的:建立党参药材中化学成分HPLC-LTQ-Orbitrap-MSn定性分析快速鉴定方法,对党参中的主要化学成分的质谱信息进行初步探讨。方法:采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相乙腈-0.01%甲酸水溶液、梯度洗脱,采用ESI-LTQ-Orbitrap质谱负离子模式采集,傅里叶变换回旋共振检测高分辨质谱数据,一级全扫描离子在离子阱内进行碰撞诱导解离(CID)测定二级质谱。结果:HPLC对党参药材中的化学成分实现有效分离,从党参中分离得到19个化学成分峰,根据精确相对分子量信息和二级质谱碎片信息,结合对照品质谱行为快速分析鉴定了其化学成分结构,主要为苯丙苷类、炔苷类、生物碱类、己醇苷及己烯醇苷类等成分。结论:该方法具有高效分离及高灵敏检测优势,可同时实现对熟党参中不同类型化合物快速鉴别分析,为进一步阐明党参药效物质基础及质量标准研究提供科学依据。

液质联用技术鉴定至宝三鞭丸化学成分

目的建立HPLC-LTQ-Orbitrap MS和HPLC-QQQ MS/MS法分析至宝三鞭丸化学成分。方法采用分段供试品制备的前处理方式、高分辨质谱数据依赖的采集模式、HPLC-MS/MS靶向成分采集等综合研究策略鉴定成分。分析采用Waters BEH HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI);正负离子扫描。结果共鉴定出82个化合物,包括有机酸类18个、黄酮类17个、萜类及皂苷类11个、色原酮类8个、苯乙醇苷类4个、生物碱类3个、香豆素类3个、木脂素类2个、蒽醌类2个,其中30个通过与对照品保留时间及碎片离子信息比对而确认。结论本研究初步鉴定了至宝三鞭丸化学成分,为该制剂质量控制、作用机制研究提供了有力的支撑。

高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱法快速筛查和确证纺织品中禁用的偶氮染料

建立了高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-LTQ/Orbitrap MS)快速筛查确证纺织品中禁用的偶氮染料的方法。样品在柠檬酸缓冲液中由连二亚硫酸钠还原成芳香胺,经硅藻土提取柱净化后,用Acquity UPLC BEH C18柱(50mm×2.1mm,1.7μm)分离,以甲醇和0.1%(v/v)甲酸作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,高分辨质谱一级全扫描用于筛选分析,数据依赖扫描模式的二级碰撞诱导解离(CID)谱图用于确证,对纺织品样品中的偶氮染料进行定性鉴别。在0.05～2.00mg/L范围内,21种致癌芳香胺的线性相关系数均大于0.99。通过实际样品的加标回收测定,回收率范围为65.5%～111.5%,相对标准偏差(n=6)为0.87%～2.49%。该方法的定量限可以达到0.08mg/kg,可用于纺织品中禁用偶氮染料的实际检验工作。

高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱质谱快速筛查确证生态纺织品中22种致敏性分散染料

建立了基于高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱（HPLC-LTQ/Orbitrap MS）快速筛查确证生态纺织品中22种禁用分散染料的分析方法。样品在95℃水浴条件下经吡啶/水（1∶1,v/v）振荡提取后,以CAPCELL PAK C18色谱柱分离,以乙腈和5 mmol/L乙酸铵（含体积分数为0.01%的甲酸）作为色谱流动相进行梯度洗脱,采用正、负电喷雾（ESI）离子化模式,利用一级母离子的精确质量数和保留时间对22种分散染料进行快速筛查,利用碰撞诱导解离（CID）下得到的二级碎片离子进行确证。22种分散染料在各自浓度范围内线性关系良好（r2〉0.99）,方法的定量限（LOQ）为0.125~2.5 mg/kg。除分散黄49外,绝大多数染料在涤纶布、棉涤混纺布两种纺织品基质中的加标回收率在65%~120%之间,相对标准偏差小于15%。应用本方法对涉及多种纤维类型的40余件纺织品样品进行了筛查,其中一个样品检出分散橙37/76。该方法简便、快速,其选择性高,抗干扰性能好,结果准确可靠,可用于纺织品中分散染料的检测。

高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱筛查和确证纺织品中的致癌染料

建立了高效液相色谱-线性离子阱／静电场轨道阱高分辨质谱（HPLC-LTQ／Orbitrap MS）筛查和确证生态纺织品中致癌染料的方法.样品在水浴（95℃）中用吡啶／水（1／1，v／v）振荡（150r／min）提取．上清液过聚四氟乙烯（PTFE）滤膜后，CAPCELL PAK C18色谱柱（100mm×2．0mm，5μm）分离，以乙腈和5mmol／L乙酸铵水溶液（含0．01％甲酸）、乙腈和5mmol／L乙酸铵水溶液分别作为正、负电喷雾离子化（ESI）模式的色谱流动相梯度洗脱。m／z200～800范围内进行一级质谱全扫描。以准分子离子峰的精确质量数和提取的色谱图峰面积进行筛查分析和定量．以保留时间和数据依赖扫描（data—dependent scan）模式获得的子离子质谱图进行定性确证。9种染料的质量准确度小于5×10^-6（5ppm），线性良好，相关系数大于0．99，方法检出限为0．125～25mg／kg。3个添加水平的回收率范围为62．13％～116．28％，相对标准偏差小于15％.应用该方法检测了棉、涤纶及混纺纤维等20余件纺织品样品中的致癌染料残留。该方法准确、可靠．

黄连水提液中木兰花碱和木兰花碱单体代谢动力学差异

目的:探讨黄连水提液中木兰花碱和木兰花碱单体代谢动力学差异。方法:采用大鼠体外肠渗透液-肝微粒体温孵联动模型,考察木兰花碱体外肝微粒体代谢动力学特性,并采用高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱法(HPLC-LTQ/Orbitrap MS)对木兰花碱代谢产物进行定性鉴别,分析木兰花碱代谢途径,考察木兰花碱与黄连中其他成分代谢性相互作用。结果:黄连水提液中木兰花碱的米氏常数[K_(m),(0.53±0.16)μmol·L^(-1)]低于木兰花碱单体[(0.85±0.12)μmol·L^(-1),P<0.05],表明黄连水提液中木兰花碱对大鼠肝微粒体的亲和性大于木兰花碱单体;黄连水提液组最大反应速度(V_(max))、肝固有清除率(CL_(int))及肝清除率(CL)均低于木兰花碱单体组(P<0.05),黄连水提液组半衰期(T_(1/2),44.22 min)较木兰花碱组(37.35 min)延长(P<0.01),表明黄连水提液中木兰花碱在大鼠肝微粒中代谢和消除速率变慢,T_(1/2)更长。木兰花碱与黄连水取液中木兰花碱的代谢产物存在差别。木兰花碱检出代谢产物5个,黄连水提液中检出木兰花碱的代谢产物8个。木兰花碱代谢途径主要为羟基化、去甲基化、脱氢、酮基化、葡萄糖化和葡萄糖醛酸化。黄连水提液中木兰花碱一羟基化代谢产物及一脱甲基化代谢产物在肝微粒体中可进一步发生羟基化代谢。结论:木兰花碱在肠道和肝微粒体中均可产生代谢。黄连中其他成分可降低木兰花碱在大鼠肝微粒体中的代谢速率,增加其代谢产物的数量。

基于HPLC-LTQ-Orbitraps-MS^(n)分析比较酸枣仁-五味子药对单煎液和合煎液化学成分

目的:对酸枣仁-五味子药对单煎液、合煎液(2∶1)化学成分进行分析,探究该药对配伍合煎后化学成分的变化。方法:采用高效液相色谱-线性离子阱串联静电场轨道阱质谱法(HPLC-LTQ-Orbitraps-MS^(n)),在电喷雾离子源(ESI)的正、负离子模式下,采用傅里叶变换高分辨全扫方式(TF,Full scan,Resolution 30000)数据依赖性(data-dependent acquisistion)ddMS2和ddMS3方法分别对酸枣仁-五味子药对单煎液、合煎液(2∶1)采集数据。根据保留时间、高分辨质谱精确相对分子质量和多级碎片信息进行分析。结果:对酸枣仁单煎液中共50个色谱信号进行化学成分鉴定,指认出10个(黄酮类6个、生物碱类2个、皂苷类2个)近10年报道过指纹图谱分析或含量测定的化合物;对五味子单煎液中共32个色谱信号进行化学成分鉴定,指认出10个(均为木脂素类)近10年报道过指纹图谱分析或含量测定的成分;对酸枣仁-五味子药对(2∶1)合煎液中共50个色谱信号进行化学成分鉴定,指认出19个(黄酮类5个、生物碱类1个、皂苷类1个、木脂素类12个)近10年报道过指纹图谱分析或含量测定的成分,这些成分在各自单煎液中均已被指认。合煎液中未检出酸枣仁单煎液中检出的酸枣仁皂苷B,但检测到1个五味子单煎液中缺少的离子峰,系来自五味子药材的木脂素类同分异构体。结论:通过HPLC-LTQ-Orbitraps-MS^(n),初步发现酸枣仁-五味子药对(2∶1)配伍前后化学成分的变化,为进一步研究两者的配伍作用机制提供参考。

天麻提取物灌胃给予大鼠后入血成分研究

目的确证天麻入血成分信息。方法大鼠禁食12 h,灌胃给药,给药量为2 m L/100 g,固相萃取(SPE)法进行血浆处理,运用HPLC-LTQ-Orbitrap MS法对进入大鼠血液的天麻化学成分进行检测。结果共检测到10种入血成分。结论除了天麻苷,天麻中还有对羟基苯甲醛、3,4-二羟基苯甲醛、p-ethoxymethylphenyl-1-O-β-glucopyranoside、羟基苄基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖、邻苯二甲酸二甲酯、4,4'-二羟基二苄基醚、4,4'-二羟基二苯基甲烷、天麻醚苷、2-乙氧基-4-甲基苯酚进入血液,均为酚性化合物及其苷类。

玫瑰花 玫瑰茄 枸杞子复合发酵液化学成分的HPLC-HRMS分析

目的:研究玫瑰花、玫瑰茄及枸杞子3者复合物提取液经肠膜明串株菌肠膜亚种发酵前后化学成分的差异。方法:采用高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱(HPLC-LTQ-Orbitrap MS)技术对其复合物提取液及发酵液中化学成分进行筛选及鉴定。结果:根据所获得的精确相对分子质量,同时结合色谱保留行为、质谱裂解规律、特征碎片离子、对照品比对以及相关文献报道,共筛选鉴定了48个化学成分,包括39个有机酸、6个黄酮及3个花青素类成分。结论:玫瑰花、玫瑰茄及枸杞子3者复合物提取液发酵前后化学成分的种类和含量均发生不同程度的变化,其中苷类成分可以转化为更利于人体吸收利用的苷元类成分,可为其他发酵中药的现代研究提供借鉴思路。

金莲花中8种黄酮类成分的肝微粒体生物转化研究

目的:建立大鼠肝微粒体转化模型,研究金莲花黄酮类化学成分在肝微粒体中的代谢特征。方法:采用大鼠肝微粒体转化模型分别对金莲花中牡荆素、荭草素、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、异当药黄素、日本异当药素、2″-O-(2 -甲基丁酰基)异当药黄素、金莲花碳苷Ⅰ和异槲皮素8种黄酮类化合物的肝代谢过程进行模拟研究,高效液相色谱-质谱联用(HPLC-LTQ-Orbitrap MS)法对代谢成分进行检测和分析。结果:8种黄酮类化学成分在肝微粒体酶作用下可以发生代谢转化,共鉴定了15个代谢产物的分子式,确定其中8个产物的结构式。结论:金莲花黄酮类化合物在肝微粒体中主要发生羟基化、乙酰化、糖基化以及脱甲基化反应,为金莲花成分的体内代谢特征研究和活性成分的确定提供了依据。

基于HPLC-LTQ/Orbitrap MS法的四味脾胃舒颗粒化学成分研究

[目的]应用高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-LTQ/Orbitrap MS)技术鉴定四味脾胃舒颗粒中的化学成分,为四味脾胃舒颗粒的深入研究开发提供更多科学依据。[方法]通过查阅文献,收集整理四味脾胃舒颗粒处方中各味药材(茯苓、鸡屎藤、山楂、陈皮)及其同科属植物各类化学成分数据。采用HPLC-LTQ/Or-bitrap MS法采集数据后,对各色谱峰的质谱图高分辨一级和二级质谱数据进行解析,与文献数据进行对比,对各色谱峰进行结构推测和确认。[结果]从四味脾胃舒颗粒样品中共分析出30个成分,鉴定了26个化合物,分别为黄酮类成分(橙皮素、柚皮素、刺芒柄花素)、苷类成分(Cyanidin 3-galactoside、野樱苷、芹菜苷)、酸类成分(去氢土莫酸、没食子酸)、生物碱类成分(刺桐碱、3-formylindole)。[结论]实验所建立的HPLC-LTQ/Orbitrap MS法适合于鉴定中药复方制剂四味脾胃舒颗粒主要化学成分,在一定程度上揭示了四味脾胃舒颗粒的药效物质物质基础。

高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱测定杨树胶的指标性成分水杨苷

建立了液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱（LC-LTQ-Orbitrap）快速测定蜂胶中杨树胶指标性成分水杨苷含量的方法,并根据精确的母离子和子离子质荷比进行定性和确证,以判断蜂胶中是否掺杂杨树胶。样品经无水乙醇提取,Waters xselect HSS T3色谱柱（3.0 mm×100 mm,3.5μm）分离,以乙腈-0.1%乙酸溶液为流动相,正离子扫描模式进行高分辨质谱检测,外标法定量。结果表明,该方法的线性范围为0.5-25.0μg/m L,相关系数（r）大于0.99。在25.0,150.0,300.0 mg/kg 3个加标水平下的平均回收率为81.6%-91.0%,相对标准偏差为9.0%-11.6%。

基于网络药理学探讨消瘤藤治疗子宫肌瘤的作用机制

目的:应用网络药理学方法搜索消瘤藤治疗子宫肌瘤的活性成分、靶基因及信号通路,探讨消瘤藤抗子宫肌瘤的作用机制。方法:采用95%乙醇加热回流提取消瘤藤药材,利用HPLC-LTQ/Orbitrap MS技术对消瘤藤提取物进行检测。通过对照品、分子量和质谱裂解规律对消瘤藤化学成分进行鉴定。运用Swiss Target Prediction、GeneCards在线预测消瘤藤化学成分与“散瘀、消肿”相关的潜在靶点,在DAVID 6.8平台进行基因功能富集和KEGG通路富集分析,Cytoscape 3.6.0软件构建“成分-靶点-通路”网络,Autodock软件对核心成分与关键蛋白进行分子对接验证。结果:从消瘤藤中鉴定了14个化学成分,通过网络药理学预测出14种成分与“血瘀”“子宫肌瘤”相关潜在靶点23个,重要通路7条。结论:消瘤藤的活性成分在蛋白多糖、黏附斑激酶、Rap1及Ras通路具有关键作用,可能通过调节胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)、表皮生长因子受体(EGFR)等靶点,通过多通路的方式共同作用起到“散瘀、消肿”作用。

猪胆粉主要胆酸类成分的定性定量分析

建立基于UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术快速鉴别猪胆粉中胆酸类成分的定性方法,建立HPLC-ELSD内标法测定猪胆粉中2种甘氨结合型胆酸的定量方法。定性分析采用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS,Waters Acquity UPLC HSS T_3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.2%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱,负离子模式扫描。定量分析采用HPLC-ELSD,Diamonsil-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃,流动相为0.2%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),柱温30℃;ELSD漂移管温度60℃,氮气流量1.4 L·min^(-1),增益为1。经过质谱精确质量数,二级、三级碎片,色谱保留行为及对照品比对,准确鉴定猪胆粉中的14种胆酸类成分。建立的HPLC-ELSD测2种主要甘氨结合型胆酸中,甘氨猪去氧胆酸在26.52～265.20 mg·L^(-1)线性关系良好(r=0.999 8),平均加样回收率为104.1%,RSD 2.0%(n=6)。甘氨鹅去氧胆酸在19.84～198.40 mg·L^(-1)线性关系良好(r=0.999 1),平均加样回收率为103.1%,RSD 2.4%(n=6)。通过UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS联用技术,为鉴定猪胆粉中胆酸类成分提供了一种快速、高效的定性分析方法;建立的HPLC-ELSD内标法测定猪胆粉中2种甘氨结合型胆酸的定量分析方法准确、可靠,对猪胆粉质量标准提升具有参考价值。

两面针果壳的化学成分分析及活性

目的:利用高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-LTQ/Orbitrap-MS)技术对两面针非药用部位果壳中的生物碱类成分进行分析和鉴定,并对其抗氧化活性进行研究,为两面针植物更深入地研究开发提供科学依据。方法:采用HPLC-LTQ/Orbitrap-MS采集数据后,对各色谱峰的质谱图高分辨一级和二级质谱数据进行解析,与文献数据库进行对比,对各色谱峰进行结构推测和确认。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除自由基能力法及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除能力对两面针果壳样品抗氧化活性进行研究。结果:从两面针果壳中共鉴定了25个生物碱类化合物,主要化学成分为异喹啉类生物碱(两面针碱、鹅楸掌碱、木兰箭毒碱),吡咯类生物碱(别隐品碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱),喹啉类生物碱(木兰花碱、氯化两面针碱),有机胺类生物碱(γ-山椒素)。DPPH清除自由基能力法及ABTS自由基清除能力对其抗氧化活性进行了研究,结果显示在测定的浓度范围内,抗氧化活性均随着试样浓度的增加而逐渐增强,呈现良好的剂量依赖性。结论:该文对两面针果壳进行了化学成分及活性的研究,研究证明其具有多种生物碱类成分,并具有较好的抗氧化活性,为两面针植物更深入地研究开发提供了参考。

质谱检测叶酸缺乏人胚肾细胞中低组蛋白H3赖氨酸79甲基化修饰

目的:探讨叶酸(Folic acid,FA)缺乏在培养的人胚肾细胞(HEK-293)中对细胞组蛋白修饰水平的影响。方法:人胚肾细胞分两组培养,一组正常培养,一组无叶酸培养。细胞提取组蛋白后通过高效液相色谱一线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-LTQ/Orbitrap Ms)检测组蛋白的修饰以比较叶酸缺乏对人胚肾细胞组蛋白修饰的影响。结果:用高分辨质谱方法成功检测到人胚肾细胞的五个组蛋白变体H1,H3,H4,H2a和H2b上的33个组蛋白修饰位点,其中23个修饰位点为uniprot数据库上已经报道的组蛋白修饰位点,而其余10个为未报道修饰位点。通过质谱比较正常和叶酸缺乏组人胚肾细胞修饰谱发现H3K79me1和H3K79me2在叶酸缺乏培养组中检出率较低。进一步用蛋白免疫印迹的方法也证明了在叶酸缺乏的人胚肾细胞中H3K79me1水平低于正常培养组。结论:细胞中叶酸缺乏影响组蛋白甲基化包括H3K79me2和H3K79me1修饰水平,提示细胞外营养因素叶酸水平可影响组蛋白修饰水平从而参与疾病如神经管畸形(Neural tube defect,NTD)的发生。

基于抗高尿酸血症活性的鸡矢藤物质基础研究

目的研究鸡矢藤提取物抗高尿酸作用的药效物质基础。方法次黄嘌呤复制高尿酸小鼠模型,观察鸡矢藤提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响;观察对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的NO水平的影响,对DPPH自由基的清除率。采用HPLC-LTQ/Orbitrap MS法快速鉴定鸡矢藤提取物的化学成分。结果鸡矢藤提取物可显著降低次黄嘌呤诱导的高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(P<0.05或P<0.01),可显著降低脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的NO水平(P<0.05或P<0.01),对DPPH自由基清除的IC50为1.4 mg·mL^-1。采用HPLC-LTQ/Orbitrap MS法从鸡矢藤提取物中分析鉴定出14个成分,其中包括京尼平龙胆二糖甙、鸡矢藤次苷甲酯、鸡矢藤苷、京尼平苷、7,8-Dihyroiridoid、鸡矢藤次苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷、芦丁、异槲皮素、紫云英苷、飞燕草素、大黄酚、大黄素、绿原酸。结论应用高尿酸小鼠模型及HPLC-LTQ/Orbitrap MS法快速筛选鸡矢藤提取物中可能的活性成分,可为鸡矢藤抗高尿酸药效物质基础研究提供一种快速、高效的方法学借鉴。