基于HPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学探讨温肾宣痹汤治疗膝骨关节炎的作用机制

目的:基于高效液相-四极杆串联飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)分析温肾宣痹汤有效成分,并运用网络药理学探究温肾宣痹汤治疗膝骨关节炎(KOA)的作用靶点及通路,探讨其治疗膝骨关节炎的作用机制。方法:采用HPLC-Q-TOF-MS/MS分析温肾宣痹汤中化学成分。检索TCMSP V2.0获得温肾宣痹汤的活性成分;运用TCMSP数据库筛选活性成分靶点,利用Uniprot数据库对靶点进行标准化命名;通过“GeneCards”等数据库,查询膝骨关节炎相关靶点;利用VennDiagram得到“中药化合物疾病”共同靶点。应用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用网络图。筛选核心作用靶点,进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:在温肾宣痹汤的正、负离子模式下采用液质联用综合分析,共鉴定出24种化合物,分别归属于狗脊、附子、天麻、山萸肉、细辛、白术、木香、甘草。筛选出温肾宣痹汤181个活性成分和134个相应蛋白靶点,与膝骨关节炎的2171个疾病相关靶点相交集的核心靶点为72个。GO富集分析共筛选得到76条生物过程(BP)富集结果、12条细胞组成(CC)富集结果及29条分子功能(MF)富集结果。KEGG富集分析共筛选得到相关通路共27条。结论:温肾宣痹汤可以通过抗炎、免疫调节、抗血管生成、抗氧化等作用,发挥治疗膝骨关节炎的功效。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术及网络药理学预测分析瓜蒌祛痰止咳的质量标志物

目的:基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术和网络药理学方法,分析预测瓜蒌祛痰止咳的质量标志物(Q-Marker)。方法:采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定瓜蒌水提液的入血原型成分,利用Swiss Target Prediction、SEA平台预测成分的作用靶点,并与CooLGeN数据库中止咳化痰药物靶点比对筛选,获得瓜蒌祛痰止咳的作用靶点。利用String数据库获得各蛋白之间的相互关系。使用DAVID数据库对瓜蒌祛痰止咳的作用靶点进行GO和KEGG通路富集分析。利用Cytoscape 3.6.0软件构建成分-靶点、蛋白-蛋白相互作用、成分-靶点-通路网络。结果:该研究共从大鼠血浆中鉴定出17个入血原型成分。经网络药理学分析,筛选得到15个与瓜蒌祛痰止咳相关的活性成分,涉及61个潜在作用靶点和23条作用通路。初步预测葫芦素D、葫芦素R、栝楼酯碱3个成分可作为瓜蒌潜在的Q-Marker。结论:该研究为瓜蒌质量标志物的筛选提供参考,同时也为瓜蒌祛痰止咳药效物质基础和作用机制研究提供参考。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS的分子网络技术快速分析夏天无生物碱

采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)技术结合分子网络快速分析夏天无中生物碱成分。选取Tnature C18色谱柱(4.6 mm×250 mm×5μm),以乙腈-0.5%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL/min,电喷雾离子源正离子模式下(ESI^(+))检测。将夏天无提取物的MS/MS数据在全球天然产物社会分子网络(Global Natural Products Social Molecular Networking)平台上进行数据转换,根据碎片离子的相似性建立簇,得到分子网络。结合色谱保留时间、精确分子质量、特征碎片离子、MS/MS裂解规律和文献报道等,在分子网络中识别出7个生物碱类型的粒子簇,包括普罗托品类、原小檗碱类、四氢小檗碱类、苯酞异喹啉类、简单异喹啉类、阿朴啡类和苄基异喹啉类生物碱,并分别鉴定了各化合物的化学结构。结果表明,在夏天无中共鉴定和推测出52个化合物,其中有21个潜在的新化合物,6个化合物为首次在夏天无中发现。该方法快捷、准确,可以为夏天无的药效物质基础研究提供科学依据。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术的蒲公英化学成分分析及其抗癌机制的网络药理学研究

为了探究蒲公英主要成分,分析其抗癌的可能机制及作用靶点,借助HPLC-Q-TOF-MS/MS技术对蒲公英提取物进行分析,利用SwissADME、Swiss Target Prediction和GeneCards数据库获取蒲公英主要活性成分和抗癌的作用靶点,通过String在线数据库构建靶蛋白相互作用网络,并利用DVIAD在线数据库对关键靶点进行GO和KEGG富集分析。最终从蒲公英提取物中共鉴定出29个化合物,主要包括有机酸类、黄酮类等化学成分,筛选到10个活性成分,成分-疾病的共同靶点84个。网络分析显示,主要活性成分为槲皮素、木犀草素、芹菜素等,关键靶点为AKT1、EGFR、SRC、ESR1、PTGS2、MMP9、KDR、MMP2、PIK3R1,并且涉及氧化-还原、负调控凋亡、蛋白质自磷酸化、ATP结合、蛋白激酶活性、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性、酶结合等过程,和癌症通路、癌症蛋白聚糖、PI3K-Akt信号通路等通路。综上,蒲公英是通过多成分、多靶点、多途径来发挥抗癌作用的。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术的蒙药安神补心六味丸化学成分辨识

目的:应用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)技术对蒙药安神补心六味丸的化学成分进行分析鉴定和分类归属。方法:采用Diamonsil^(ⓒ)C_(18)(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.05%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL/min,柱温40℃;采用电喷雾离子源,在正、负离子模式下进行数据采集,根据化合物的精确质荷比、二级质谱裂解碎片,结合对照品、文献数据的比对进行碎片裂解规律分析鉴定。结果:共鉴定出119个化合物,包括36个有机酸类、22个黄酮及其苷类、8个木脂素类、3个倍半萜内酯类、6个萜类、3个香豆素类、17个酚类、14个氨基酸类、4个醛类和6个其他类。结论:首次对蒙药安神补心六味丸的化学成分进行快速辨识,为其药效物质基础研究以及质量控制奠定了基础。

HPLC-Q-TOF-MS/MS法检测降压类中成药中非法添加的24种化学物质

目的：建立检测降压类中成药中非法添加的24种化学物质的方法。方法：采用高效液相色谱-飞行时间串联质谱法。色谱条件：色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18,流动相为0.05%甲酸溶液-甲醇（梯度洗脱）,流速为0.3 ml/min,柱温为30℃,进样量为5μl。质谱条件：离子源为电喷雾电离源,毛细管电压为4.0 k V,毛细管出口电压为135 V,锥孔电压为65 V,脱溶剂温度为350℃,干燥气流速为10 L/min,雾化器压力为40 psi,碰撞能量为8-45 V,扫描范围为m/z 100-1 700,检测方式为正离子模式（ESI＋）。结果：卡托普利、硝苯地平、氢氯噻嗪、盐酸可乐定、利血平检测质量浓度线性范围为2.0-32μg/L,苯磺酸氨氯地平、非洛地平、缬沙坦、拉西地平、坎地沙坦酯检测质量浓度线性范围为3.0-48μg/L,其余14种化学物质检测质量浓度线性范围为2.5-40μg/L（r≥0.995 9）;定量限≤2.944 1 ng,检测限≤0.988 5 ng;精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤5.1%;回收率为81.5%-115.5%（RSD=1.81%-4.86%,n=9）。结论：该方法专属性强、灵敏度高、简便快捷,适用于降压类中成药中非法添加化学物质的检测。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS和HPLC-DAD的青钱柳叶化学成分的鉴定分析

目的:基于HPLC-Q-TOF-MS/MS和HPLC-DAD鉴定青钱柳叶中的化学成分,并测定其中5种化学成分的含量。方法:色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm, 5μm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,柱温:30℃;Q-TOF-MS在负离子模式下采集数据,定量模式下检测波长为254 nm。结果:采用HPLC-Q-TOF-MS法鉴定了青钱柳叶中的18种化学成分,其中黄酮类9种、有机酸类7种、其他2种。针对异槲皮苷、金丝桃苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、阿福豆苷、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷5种化学成分建立的HPLC-DAD测定方法,各成分的线性关系良好(r>0.999 9),精密度、重复性和稳定性良好,回收率在92.93%-103.67%,RSD均小于3.0%(n=6)。29批青钱柳叶样品各成分含量具有一定差异,其中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在不同产地间的含量差异具有统计学意义(P<0.05),金丝桃苷在野生与栽培品中差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:本文建立的方法可用于青钱柳叶的质量评价,槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和金丝桃苷可作为成分指标进一步系统研究。

HPLC-Q-TOF-MS/MS分析地骨皮中苦柯胺类化学成分

目的:分析中药地骨皮中苦柯胺类化学成分。方法:利用微型固相萃取柱对中药地骨皮的提取物进行前处理,借助于HPLC-Q-TOF-MS/MS对样品进行液相色谱分离和质谱数据采集,根据碎片离子和中性丢失数据的相似性解析苦柯胺结构类似物。结果:在HPLC-Q-TOF-MS/MS中解析了苦柯胺A和B在负、正离子模式下的二级质谱图,得到裂解规律。通过提取特征离子方式,在负、正离子模式下得到了保留时间为14.0 min的新结构类似物离子峰m/z 693.3526[M-H]^(-)和695.3681[M+H]^(+),进一步通过二级质谱解析,推测了其化学结构,为苦柯胺A和B的结构类似物,命名为苦柯胺C。结论:该文报道了以HPLC-Q-TOF-MS/MS分析中药地骨皮中化学成分的方法,利用特征离子提取方法,发现了一个新结构苦柯胺类化合物。

HPLC-Q-TOF-MS/MS法分析防己茯苓汤的化学成分

目的运用高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对防己茯苓汤的化学成分进行快速分析与鉴定。方法采用Agilent Zorbax SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-甲醇为流动相,梯度洗脱,进样量5μL,流速1.0 mL·min^(-1),柱后分流检测,分流比10∶1,柱温30℃。采用电喷雾离子源,在正负两种模式下进行质谱检测与分析。结果通过分析目标化合物的分子离子峰和二级质谱特征碎片离子,并且结合对照品裂解规律以及相关文献资料,共鉴定了其中36个化合物,包括7个生物碱类,13个萜类化合物,11个黄酮类化合物等。结论运用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术可快速分析鉴定复方防己茯苓汤的主要化合物类型,对复方的质量控制及药效物质基础的进一步研究具有重要意义。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术的藏药熏倒牛化学成分分析

目的:利用高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)在负离子模式下对藏药熏倒牛中的化学成分进行分析和鉴定。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)柱(3.0 mm×150 mm,1.8μm);以0.1%甲酸的乙腈(A)和0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱;流速为0.250 mL·min^(-1);进样体积:2μL;柱温为35℃;以电喷雾(ESI)离子源,负离子模式下采集数据,通过分析质谱数据和元素组成,结合文献数据对照,分析推测所含化合物。结果:通过分子离子峰和二级高分辨质谱数据结合文献数据鉴定了熏倒牛全草中的25个化合物,包括1个脂环族有机酸类、2个香豆素类、2个多酚类、1个蒽醌类及19个黄酮类化合物。结论:UPLC-Q-TOF-MS/MS技术为鉴别藏药熏倒牛药材中的化学成分提供快捷、准确的方法,其主要化学成分为黄酮醇类、异黄酮类、蒽醌类,并从该植物中首次鉴定出了14个黄酮类成分,可为熏倒牛药材的药效物质基础研究和质量控制提供参考。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学的补肺丸入血成分、肺病治疗潜能及新型冠状病毒感染恢复期的应用机制研究

该研究基于血清化学、药物体内分布、网络药理学等方法探讨补肺丸在肺系疾病的应用功能,并挖掘潜在的药理学功能。大鼠灌胃给药补肺丸后,通过HPLC-Q-TOF-MS/MS研究补肺丸体内成分,比较复方提取物、给药后含药血清、组织样本及空白样本,从大鼠血清中发现入血成分共56个,其中首次发现neocyclomorusin、asterinin A、neoisostegane、goimisin R、frehmaglutoside H等成分可以经口服吸收入血,相关成分还可分布于心、肝、脾、肺、肾、脑脊液、胰腺不同脏器。经网络药理学分析,发现ALB、IL6、AKT1、TNF、EGFR、ESR1、JUN、HSP90AA1等81个核心靶点,参与PI3K-AKT、MAPK、VEGFA、AGE-RAGE等信号通路。补肺丸可能通过介导靶点通路的参与抑制炎症反应、氧化应激、影响代谢、调节免疫功能等机制,干预DO富集的慢性阻塞性肺病、肺纤维化、肺炎等主要的肺部疾病,以及慢性阻塞性肺病并发症,如糖尿病、抑郁等,及新型冠状病毒感染恢复期气短乏力、身体疼痛等表型,相关活性具有开发价值,有待进一步研究。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术的石见穿化学成分分析及其治疗胃癌的网络药理学探究

为了探究石见穿主要成分,分析其治疗胃癌的可能机制及作用靶点,借助HPLC-Q-TOF-MS/MS技术对石见穿水提物进行分析,并运用TCMSP平台筛选石见穿潜在活性成分,从石见穿水提物中共鉴定出48个化合物,主要包括酚酸类、黄酮类等化学成分,其中,具有较好体内活性作用的成分共计9个.通过搜索SwissTargetPrediction数据库得到活性成分的治疗靶点,并与DisGeNET数据库检索所得的胃癌靶点取交集,获得石见穿治疗胃癌的靶点共计18个.通过DAVID进行GO和KEGG富集分析,发现石见穿在胃癌治疗中共涉及到48个生物过程(BP),8个细胞组分(CC)、27个分子功能(MF)及8条通路.最后,运用STRING数据库及Cytoscape软件构建PPI网络,结果表明EGFR、CDH1、CTNNB1、PTGS2、EGF等在内的靶点蛋白在PPI网络中发挥着关键作用.由此,可得出结论,石见穿体内活性成分较为丰富,主要通过对药物反应、质膜、酶结合等,发挥抑制增殖、迁移,诱导凋亡,降低耐药等作用而治疗胃癌.

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS加味清络颗粒生物碱类化学成分分析及多指标含量测定

目的对加味清络颗粒中生物碱类成分进行定性鉴别分析,建立加味清络颗粒生物碱类多成分含量测定方法。方法采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术对加味清络颗粒进行正、负离子模式扫描,利用MassHunter软件计算化合物准确相对分子质量,结合质谱二级碎片信息及对照品比对,对加味清络颗粒中生物碱类成分进行定性鉴别,并总结化合物裂解规律;利用HPLC测定加味清络颗粒中6个生物碱成分的含量,检测条件:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈为流动相A,磷酸盐缓冲溶液(pH 5.8)为流动相B,梯度洗脱,柱温30℃,体积流量0.9 mL/min,进样量10μL,检测波长210 nm。结果加味清络颗粒中共鉴定出50个生物碱成分,分别来源于青风藤、苦参、延胡索、知母,其中喹诺里西啶类生物碱16个、苄基四氢异喹啉类生物碱31个、其他类型生物碱3个;建立了HPLC同时测定加味清络颗粒中苦参碱、槐果碱、青藤碱、原阿片碱、延胡索乙素、延胡索甲素的多指标含量测定方法,该方法中6个待测成分在检测质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9999),精密度、重复性、稳定性RSD均小于4%,样品中苦参碱、槐果碱、青藤碱、原阿片碱、延胡索乙素、延胡索甲素的平均加样回收率分别为94.32%、96.89%、97.83%、109.53%、99.32%、87.13%,RSD值分别为3.24%、4.99%、4.95%、4.85%、2.52%、5.95%。结论建立的方法可准确、灵敏地对加味清络颗粒中的生物碱类化学成分进行定性及定量分析,为加味清络颗粒后续物质基础研究、质量控制、制剂开发建立了基础。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术的半夏姜制前后成分分析

目的 采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对半夏及姜半夏的成分进行鉴定,并比较姜制前后化学成分差异。方法 采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术,对半夏和姜半夏的成分进行检测。将采集得到的样品数据导入质谱数据分析软件Agilent MassHunter Qualitative Analysis 10.0,对各个质谱峰进行提取。搜索自建的数据库,初步鉴定化学成分。再结合文献中化合物、对照品以及MassBank数据库中相关成分的碎片离子信息和保留时间,进行成分确定。此外,将半夏和姜半夏的质谱数据导入安捷伦Profinder 10.0软件,对数据进行峰提取、对齐、归一化等处理。利用Simca 14.1软件对数据进行主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)。结果 在半夏及姜半夏中共鉴定得到43个成分,其中生物碱类成分5个,脂肪酸甘油酯类成分7个,溶血磷脂胆碱类成分7个,醇胺类成分5个,氨基酸类成分7个,酰胺类成分5个,有机酸类1个,姜辣素类2个,其他类成分4个。PCA分析结果显示,半夏姜制前后化学成分具有较大差异。OPLS-DA结果表明,通过VIP值>1,|P(corr)|>0.5筛选得到腺苷、鸟苷、丝胶树碱等18个主要差异成分。结论 半夏炮制前后,部分生物碱类、酰胺类、姜辣素类等成分存在明显差异,这些差异性化合物可能导致了半夏姜制前后功效的侧重不同,为提升半夏及其姜制品的质量标准提供参考。

基于HPLC-Q-TOF-MS技术的柳叶鼠李化学成分分析

目的建立HPLC-Q-TOF-MS方法快速分析柳叶鼠李的化学成分。方法采用BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1)。扫描方式采用正、负离子Full-dd MS^(2)模式。通过在线mz Cloud及Chemspider数据库和自建标准库mz Vault进行分析,结合相关文献检索以及质谱裂解规律分析柳叶鼠李中的化学成分。结果共鉴定出138个化合物,主要是黄酮类和有机酸类。结论对柳叶鼠李中的化学成分进行了快速的分析,可为柳叶鼠李的质量控制和药效物质基础研究提供参考。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS、网络药理学及实验验证探讨西黄丸含药血清抗脑胶质瘤的潜在活性成分及作用机制

基于高效液相色谱−四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)技术对西黄丸的入血成分进行定性分析,采用网络药理学对入血成分抗脑胶质瘤的潜在作用机制进行探究,并通过分子对接和实验验证其具体机制。大鼠灌胃给予西黄丸后收集血清,根据色谱峰保留时间、精确分子质量、特征碎片离子,结合对照品及文献数据,鉴定西黄丸含药血清的化学成分;通过PharmMapper数据库和SwissTarget Prediction数据库获得成分靶点,通过GeneCards、OMIM、PharmGKB、TTD、DrugBank数据库获得脑胶质瘤疾病靶点,利用Cytoscape3.9.1软件构建“成分−靶点”网络关系图;以STRING数据库构建蛋白质互作(PPI)网络关系图并对靶点进行GO分析和KEGG分析;利用分子对接验证核心靶点与相对应的入血成分的结合能力;CCK-8、Western blot验证西黄丸含药血清中代表性成分11-羰基-β-乳香酸(KBA)抗脑胶质瘤的潜在作用机制。结果共鉴定出入血成分40个(原型成分28个,代谢产物12个)。网络药理学结果显示,β-榄香酮酸、3-乙酰基-β-乳香酸、KBA、α-乳香酸等9个成分可能是西黄丸含药血清抗脑胶质瘤的活性成分,其中谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GSR)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)、ATP柠檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACLY)、醛酮还原酶1成员B1(AKR1B1)、谷氧还蛋白(glutaredoxin,GLRX)为关键靶点,涉及谷胱甘肽代谢(glutathione metabolism)通路、磷酸戊糖途径(pentose phosphate pathway)等。进一步细胞实验结果表明,KBA显著抑制T98G细胞增殖(IC50为30.96μmol·L^(-1)),KBA(30μmol·L^(-1))显著下调T98G细胞中GSR蛋白表达水平。综上所述,西黄丸含药血清可能通过调控谷胱甘肽代谢通路相关靶点GSR和G6PD抗脑胶质瘤。研究结果可进一步为西黄丸抗脑胶质瘤的作用机制研究提供一个有价值的依据。动物福利和实验过程获得南京中医药大学实验动物伦理委员会标准(批准号:ACU221001)。

基于HPLC-Q-TOF-MS技术的姜半夏及其伪品姜水半夏的鉴别研究

目的基于高效液相色谱四极杆飞行时间质谱(high performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS)联用技术结合化学计量学建立姜半夏和姜水半夏的鉴定方法。方法采用Agilent Poroshell 120 SB-C_(18)(2.1×150 mm,2.7μm)色谱柱,以甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相,0.3 mL/min流速梯度洗脱。电喷雾离子化源、QTOF作为检测器,正离子模式检测。Profinder软件进行特征化合物提取。将Profinder软件导出的数据以PFA格式导入安捷伦代谢组学统计分析软件(mass profiler professional,MPP)。通过MPP软件的主成分分析,查找姜半夏和姜水半夏之间有显著性变化的化合物,以偏最小二乘法建立姜半夏真伪鉴别预测模型,预测样品的掺伪。结果筛选得到姜水半夏特有化合物237个,姜半夏特有化合物242个。建立了姜半夏真伪鉴别模型,在掺入一定比例姜水半夏时,模型能预测样品偏离,具有一定的预测性。结论该方法可为判别姜半夏的掺伪提供参考依据。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术咳喘宁颗粒化学成分分析及多指标定量测定

目的采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱技术(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对咳喘宁颗粒化学成分进行分析,并建立HPLC多成分含量测定方法。方法采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术,色谱柱Agilent ZORBAX C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,体积流量1.0 mL·min^(−1),进样量10μL,流动相A:0.1%甲酸,流动相B:乙腈,梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式扫描,结合对照品和文献数据鉴定咳喘宁颗粒中的化学成分,并建立HPLC法同时测定新绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、异绿原酸B、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、柚皮苷的含量。色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters AtlantisTM T3色谱柱,250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱:0~20 min,3%~15%甲醇;20~25 min,15%~18%甲醇;25~26 min,18%~23%甲醇;26~45 min,23%甲醇;45~46 min,23%~38%甲醇;46~60 min,38%甲醇;60~61 min,38%~42%甲醇;61~70 min,42%甲醇;70~80 min,42%~90%甲醇;体积流量1.0 mL·min^(−1),柱温30℃;进样量10μL,检测波长324、283 nm。结果共鉴定咳喘宁颗粒中86个化合物,20个来自生麻黄、15个来自白屈菜、30个来自金银花、22个来自枇杷叶、12个来自金沸草、14个来自化橘红,其中有26个化合物经与对照品比对确认,选择新绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、异绿原酸B、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和柚皮苷作为含量测定的质控指标,6种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9999),精密度、稳定性及重复性良好,加样回收率为99.48%~103.39%,RSD为1.29%~1.98%。对3批咳喘宁颗粒进行多成分含量测定,方法可行。结论在质谱成分解析的基础上,建立咳喘宁颗粒6种化学成分的含量测定方法,为咳喘宁颗粒的药效物质基础和质量标准研究提供参考。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS与网络药理学小儿佛芍和中颗粒成分解析及治疗功能性腹痛药效物质基础及机制预测

目的通过HPLC-Q-TOF-MS/MS分析小儿佛芍和中颗粒(XFHG)中的化学成分,依据解析的化学成分结合网络药理学预测其治疗功能性腹痛的药效物质基础,筛选出潜在功效成分,预测作用机制。方法采用HPLC-Q-TOF-MS/MS对XFHG进行化学成分分析,分别在正、负离子模式下扫描,结合对照品与中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、文献中的碎片离子信息、保留时间进行匹配,确认化学成分。筛选质谱解析得到的化学成分中口服生物利用度≥20%、类药性≥0.5的成分,同时纳入《中国药典》2020年版中规定的指标成分以及SwissADME数据库筛选得到的成分作为活性成分;通过TCMSP、Massbank、本草组鉴数据库、Genecards数据库及文献筛选,分别建立XFHG活性成分靶点数据库、功能性腹痛相关疾病的靶点数据库,筛选出共同靶点,导入网络可视化软件Cytoscape 3.9.1中,构建“XFHG-成分-功能性腹痛”靶点相互作用网络图,筛选出核心成分;共有靶点导入STRING11.5数据库中,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图,并将得到的数据导入Cytoscape 3.9.1中,筛选出核心作用的靶点;将核心靶点导入DAVID数据库进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路和基因本体(GO)富集分析。结果XFHG定性分析中共解析出96个化学成分,包括26个黄酮类、17个有机酸类、13个萜类、11个生物碱类、6个柠檬苦素类、8个苯丙素类、4个苯乙醇苷类及11个其他类;筛选出发挥治疗功能性腹痛作用的核心成分15个,来源于6味药材,包括小檗碱、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等;XFHG治疗功能性腹痛的核心靶点有TNF、AKT1、IL6、IL-1β、VEGFA、TP53、CASP3、PTGS2、CAT、MAPK3;KEGG通路分析共得到109条通路,免疫应答、炎症反应相关的信号通路排名靠前;GO富集分析得到生物过程(BP)条目145个、细胞组分(CC)条目10个、分子功能(MF)条目9个,富集值排名靠前的条目涉及脂多糖介导的信号通路、糖皮质激素反应、一氧化氮生物合成过程的正向调控等与炎症反应相关的生物过程。结论根据HPLC-Q-TOF-MS/MS解析的化学成分结合网络药理学预测了XFHG治疗功能性腹痛的潜在功效成分,预测其作用机制与免疫调节、抗炎相关。

基于“浊气归心,淫精于脉”理论运用HPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学探讨抵挡汤防治动脉粥样硬化和高脂血症的作用机制

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是由于脂质代谢障碍,使脂质沉积于内膜,引起血管纤维化和钙化后导致血管壁变硬引起的,而高脂血症(hyperlipidemia,HLP)是AS的重要危险因素之一。“浊气归心,淫精于脉”理论认为多余的淫精膏脂归心于脉中是AS关键致病因素,膏脂内蓄,淫精着脉日久,脉络瘀阻是导致HLP和AS发生发展的病机,“痰浊膏脂”和“瘀血”是HLP发展为AS的病理产物。抵挡汤(Didang Decoction,DDD)为破血逐瘀之强方,化浊降脂,祛浊通脉,有祛瘀生新之效,对动脉粥样硬化性疾病具有一定的疗效。该研究运用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)挖掘DDD的主要入血成分,结合网络药理学探讨DDD防治AS和HLP的作用机制,并运用体外实验验证网络药理学结果。质谱鉴定得到DDD入血成分231个化合物,综合评分>60分的化合物有157个;于SwissTargetPrediction数据库得到903个预测靶点,于GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库得到疾病靶点279个,取交集获得79个DDD防治AS和HLP的潜在靶点基因。基因本体(Gene Ontology,GO)分析提示DDD可能通过胆固醇代谢和炎症反应等生物过程进行调节,京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析提示涉及信号通路包括脂质与动脉粥样硬化、胰岛素抵抗、化学致癌-受体激活、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路等。体外实验显示DDD可降低游离脂肪酸诱导的L02细胞脂质积蓄和胆固醇酯含量,提高细胞活性,可能与上调了PPARα、LPL、PPARG、VEGFA、CETP、CYP1A1、CYP3A4的表达,下调了TNF-α、IL-6的表达有关。DDD可能通过改善脂代谢、炎症反应、抑制凋亡而发挥防治AS和HLP的作用,具有多成分、多靶点、多途径的特点。