Identification of three kinds of Plumeria flowers by DNA barcoding and HPLC specific chromatogram

DNA barcoding and HPLC specific chromatogram were used to identify three kinds of Plumeria flowers respectively. DNAs extracted from the three Plumeria species were amplified by PCR with universal primers, and the psbA-trnH region was selected. All the amplified products were sequenced and the results were analyzed by MEGA 5.0. Chemometric methods including principal components analysis and hierarchical clustering analysis were conducted on the SAS 9.0 software to demonstrate the variability among samples. In conclusion, the psbA-trnH of all samples were successfully amplified from total DNA and sequenced. These three varieties of Plumeria can be differentiated by the psbA-trnH region and clustered into three groups respectively through building neighbor joining tree, which conformed to their germplasm origins. However, it was hard to distinguish them by HPLC specific chromatograms combined with chemometrics analysis. These indicated that DNA barcoding was a promising and reliable tool for the identification of three kinds of Plumeria flowers compared to HPLC specific chromatogram generally used. It could be treated as a powerful complementary method for traditional authentication, especially for those varieties which are difficult to be identified by conventional chromatography.

Sequence-specific Hydrolysis of Single-stranded DNA by PNA-Cerium （Ⅳ） Adduct

A novel artificial site specific cleavage reagent, with peptide nucleic acid （PNA） as sequence-recognizing moiety and cerium （IV） ions as “scissors” for cleaving target DNA, was synthesized. Subsequently, it was employed in the cleavage of target 26-mer single-stranded DNA （ssDNA）, which has 10-mer sequence complementary with PNA recognizer in the hybrids, under physiological conditions. Reversed-phase high-performance liquid chromatogram （RPHPLC） experiments indicated that the artificial site specific cleavage reagent could cleave the target DNA specifically.

地乌药材HPLC-UV特征图谱

目的:建立地乌药材的HPLC-UV特征图谱分析方法.方法:采用HPLC-UV法,Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.01%三氟乙酸水溶液(30∶70),检测波长210 nm,柱温30℃,流速1.0 m L/min.结果:以17批地乌药材为样本,初步建立了地乌药材的HPLC-UV特征图谱,确定了5个特征峰,分别为anhuienoside E、glycoside St-14a、hemsgiganoside B、flaccidosideⅡ和hederasaponin B,其中,16批地乌药材的HPLC图谱相似度均大于0.94.结论:建立的HPLC-UV特征图谱分析方法简单、重现性良好,可为地乌药材及其制剂的质量控制提供依据.

基于双波长差示融合图谱的中药陈皮“质-量”双标质量分析方法研究

目的建立以对照药材为对照物质的定性和不依赖多种对照品定量的陈皮药材“质-量”双标控制方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)法,以对照药材为基准建立陈皮特征图谱,结合双波长差示融合技术,确定15批陈皮药材共有特征峰,根据陈皮对照药材和供试药材特征峰的相似度,明确药材真伪,即“质”。采用质谱技术鉴定特征峰的化学成分,选取“橙皮苷”作为基准物质,进行准确定量分析,并通过基准物质对其余特征峰的化学成分进行相对定量,区分陈皮药材的优劣,即“量”。结果共确定了9个共有特征峰,鉴定出4个化学成分,分别为芸香柚皮苷、橙皮苷、川陈皮素以及橘皮素。10批陈皮与对照药材相似度为0.487~0.556,5批广陈皮药材相似度为0.992~0.996,规定了陈皮及广陈皮药材特征峰化学成分相对含量下限。结论本方法不依赖多种对照品,能精确、高效地判断药材的真伪优劣,可为中药的质量控制提供技术支持。

复方罗布麻颗粒UPLC特征图谱及6个成分含量测定

目的:建立复方罗布麻颗粒的超高效液相色谱法(UPLC)特征图谱,同时对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷进行含量测定。方法:以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,色谱柱为Waters CORTECS T3(100 mm×2.1 mm,1.6μm),流速为0.33 mL·min^(–1),检测波长为360 nm,柱温为30℃。结果:得到15批复方罗布麻颗粒特征图谱,确定特征峰14个,相似度值均大于0.95。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷分别在相应质量浓度范围内与其峰面积呈良好线性关系(r≥0.9999);平均回收率分别为99.9%、100.8%、99.9%、97.6%、101.1%、100.6%,RSD均小于2.0%。结论:该方法具有较高的灵敏度、良好的重复性,可为科学、全面地评价和控制复方罗布麻颗粒的质量提供参考。

北豆根配方颗粒质量评价

目的 评价北豆根配方颗粒质量。方法 制备15批标准汤剂和3批配方颗粒,测定出膏率及木兰花碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱含量、转移率,建立HPLC特征图谱,聚类分析进行化学模式识别。结果 3批配方颗粒出膏率为15.1%~16.6%,木兰花碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱含量分别为18.93~19.39、9.42~9.60、6.79~6.85 mg/g,三者从饮片到配方颗粒的转移率分别为34.42%~35.25%、43.81%~44.65%、27.27%~27.51%;特征图谱中有7个特征峰,相似度均大于0.95,与标准汤剂一致性良好,并符合相关限度要求。15批标准汤剂聚为2类,吉林、河北、山东产药材可用于配方颗粒制备。结论 该方法合理可靠,可为北豆根配方颗粒质量控制、临床应用提供参考。

基于发酵过程的淡豆豉HPLC-ELSD特征图谱建立及指标性成分含量测定

目的:研究发酵过程中淡豆豉样品化学成分变化的特点,建立可用于淡豆豉质量评价的高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)特征图谱,并对淡豆豉中大豆异黄酮类和大豆皂苷类生物活性成分进行含量评价。方法:采用Agilent ZORBAX SB C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相A为0.1%乙酸水溶液,流动相B为0.1%乙酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min~(–1),柱温为30℃,蒸发光散射检测器气体流量为1.6 L·min~(–1)、漂移管温度为60℃、喷雾器温度为30℃。基于选定的过程样品,确定经发酵后含量升高的共有峰,进而建立淡豆豉特征图谱。以淡豆豉特征图谱为对照图谱,对15批市售淡豆豉样品的HPLC-ELSD色谱图进行相似度评价,并对其10个共有峰峰面积进行正交偏最小二乘法-判别分析评价。采用HPLC-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)对淡豆豉中6个大豆异黄酮类物质进行含量测定;采用HPLC-ELSD对淡豆豉中3个B族大豆皂苷进行含量测定。结果:基于10批30个发酵过程样品,发现淡豆豉中存在多个含量升高的色谱峰;其中10个共有峰峰面积升高较显著,进而建立了淡豆豉的特征图谱;通过与对照品比对,指认了其中6个共有峰。根据市售淡豆豉样品的HPLC-ELSD特征图谱相似度是否大于0.95,可将15批市售淡豆豉分为优质淡豆豉和基本合格淡豆豉。10个共有峰峰面积的正交偏最小二乘法-判别分析结果与相似度分析结果一致。15批市售品中大豆苷元和染料木素总质量分数为0.12%±0.06%,大豆皂苷Ba、大豆皂苷Bb和大豆皂苷Bc的总质量分数为0.59%±0.09%;优质淡豆豉中大豆苷元和染料木素总质量分数为0.15%±0.07%,大豆皂苷Ba、大豆皂苷Bb、大豆皂苷Bc总质量分数为0.63%±0.10%,大豆皂苷Bb质量分数为0.46%±0.08%;基本合格淡豆豉中大豆苷元和染料木素总质量分数为0.09%±0.04%,大豆皂苷Ba、大豆皂苷Bb、大豆皂苷Bc总质量分数为0.56%±0.07%,大豆皂苷Bb质量分数为0.41%±0.06%。结论:建立的HPLC-ELSD特征图谱精密度、重复性、稳定性良好,能够体现淡豆豉中大豆皂苷与异黄酮多种组分的含量特点,可用于提升淡豆豉的质量控制水平。指标性成分含量测定方面,建议在《中华人民共和国药典》2020年版标准基础上,进一步提高大豆苷元和染料木素总量的限量标准,且可增加大豆皂苷Bb含量测定项。

不同产地半夏药材HPLC特征图谱的建立

目的:研究并建立半夏药材HPLC特征图谱,提高其质量控制水平。方法:采用SVEA C18Opal色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.9 mL/min,柱温为30℃,检测波长为270 nm,建立了半夏药材的指纹图谱,运用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》对测定的17批半夏药材数据进行处理分析。结果:建立了以9个特征峰为指标成分的半夏药材HPLC特征图谱,以鸟苷色谱峰为参照,其他8个特征峰的相对保留时间分别为(0.503±0.050)min、(0.563±0.056)min、(0.643±0.064)min、(0.928±0.093)min、(1.490±0.149)min、(1.536±0.154)min、(2.171±0.217)min、(2.210±0.221)min。结论:建立了同时测定不同来源半夏药材化学成分的HPLC特征图谱方法,该方法经过方法学验证,结果可靠,可用于半夏药材的质量控制。

基于HPLC特征图谱对消炎灵胶囊的质量评价研究

目的:建立消炎灵胶囊的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)特征图谱法,通过相似度评价及聚类分析研究,为消炎灵胶囊的质量评价提供新思路。方法:使用HPLC,选择Waters Xselect C_(18)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长280 nm。以甘草苷峰作为S峰,将32批消炎灵胶囊特征图谱文件导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1版),进行相似度计算,通过SPSS 26.0软件对结果进行聚类分析。结果:32批消炎灵胶囊HPLC特征图谱有14个共有特征峰,除5批样品外,其余样品相似度均大于0.900,相似度结果与聚类分析结果基本一致。结论:该研究方法及分析结果可为消炎灵胶囊的鉴别与质量控制提供新思路。

Quality evaluation of Polyporus umbellatus based on HPLC specific chromatogram and fingerprint analysis

To evaluate the quality of Polyporus umbellatus,we established a simple,repeatable and reliable method based on high performance liquid chromatography(HPLC)for specific chromatogram and fingerprint analysis,which was applied to analyze samples of medicinal materials and decoction pieces collected from different regions.Finally,ten characteristic peaks were designated in the specific chromatograms and applied to the authenticate identification of P.umbellatus samples.Nine common peaks were designated in the fingerprints,and then the similarities between 32 batches of samples were calculated.Among them,eight compounds were identified by HPLC-APCI-IT-TOF-MS^(n),four of which were identified in specific chromatograms and four in fingerprints.In the present study,we,for the first time,combined HPLC specific chromatograms and fingerprints for the species identification and quality evaluation of P.umbellatus.Collectively,our findings provided a new method for establishing a comprehensive quality standard of P.umbellatus.

UPLC/Q-TOF-MS特征图谱结合化学计量学评价秋海棠属5种药材质量

目的:采用UPLC/Q-TOF-MS技术结合化学计量学方法综合评价秋海棠、中华秋海棠、掌裂叶秋海棠、长柄秋海棠和柔毛秋海棠的质量。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)(2.1 mm×100mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,流速0.2 mL·min^(-1),检测波长254 nm;采用电喷雾离子源(ESI)正负离子同时扫描,以MSE方式进行采集,建立秋海棠属5种药材UPLC/Q-TOF-MS特征图谱,并对它们各自共有峰进行确认和归属,运用主成分分析法(PCA)和偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)对数据进行统计分析。结果:筛选出秋海棠、中华秋海棠、掌裂叶秋海棠、长柄秋海棠和柔毛秋海棠药材各自的共有特征峰分别为15、13、12、12、15个,且共鉴定出29个化合物;秋海棠属5种药材质量存在较大差异,其中,柔毛秋海棠与其他4种药材的化学成分差异显著,秋海棠与中华秋海棠药材之间化学成分差异较小,掌裂叶秋海棠与长柄秋海棠药材之间化学成分差异较小;还筛选出对该5种药材区分贡献显著的8个化学标志物,原花青素B2、表儿茶素、葫芦素D或其同分异构体、葫芦素D葡萄糖苷和葫芦素B为潜在鉴别特征性化学标志物,原花青素B1、儿茶素和芦丁为潜在含量差异性化学标志物。结论:该方法直观、准确地反映了此5种药材的整体质量及化学成分差异情况,并对于建立科学、合理的秋海棠属药材质量评价方法和安全用药具有重要的指导意义,也为其整体质量评价和控制及标准修订提供参考。

维吾尔族习用药神香草特征图谱与含量测定

目的建立神香草高效液相色谱(HPLC)特征图谱,地奥司明、蒙花苷的含量测定方法。方法分析采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);特征图谱检测波长328 nm,含量测定检测波长333 nm。结果神香草HPLC特征图谱中有18个主要色谱峰。地奥司明在10.773~430.92 ng、蒙花苷在0.3247~324.73 ng范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)分别为97.1%(RSD=2.2%)、100.2%(RSD=0.7%)。结论该方法准确可靠,可用于神香草的质量控制。

醋芫花标准汤剂HPLC特征图谱研究

目的:建立醋芫花标准汤剂高效液相色谱法(HPLC)特征图谱,在全面表征其成分特征的同时,能够区别于芫花标准汤剂。方法:采用Kromasil Cl8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为35℃,进样量为20µL,检测波长为238 nm。将得到的21批芫花标准汤剂和21批醋芫花标准汤剂特征图谱经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)进行峰匹配,分别明确共有峰个数,并生成对照特征图谱。通过对比,明确芫花标准汤剂与醋芫花标准汤剂特征图谱的区别点,指认共有特征峰,并对比指认的特征峰峰面积的变化情况。结果:通过对比生成的芫花标准汤剂和醋芫花标准汤剂对照特征图谱,发现其中tR在27.0 min的特征峰是关键区别点,推测该成分可能为醋芫花挥发油中新生成的烯类化合物。指认7个特征峰成分,分别为芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芫花素-5-O-茜草苷、木犀草素、椴树苷、芹菜素、羟基芫花素和芫花素,其含量在炮制前后并没有明显的变化。结论:该方法简单可行,能够较好地区分芫花标准汤剂与醋芫花标准汤剂,从源头加强样品质量控制的同时,可为醋芫花标准汤剂及其配方颗粒质量控制提供参考。

鹅不食草药材倍半萜内酯类特征图谱的建立及多成分定量研究

目的采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)建立鹅不食草药材倍半萜内酯类特征图谱,并同时测定4种有效成分的含量,评价不同产地鹅不食草药材质量的差异。方法采用HPLC法进行测定,色谱柱为Waters HSS T3(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.02%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,波长为225 nm,柱温为40℃,进样量为10μL;建立20批鹅不食草药材特征图谱,通过对照品比对并结合紫外-3D光谱分析,对共有峰进行鉴定,并对4种成分的含量进行测定;对20批鹅不食草药材倍半萜内酯类特征图谱进行相似度评价及主成分分析(principal component analysis,PCA),利用正交偏最小二乘法—判别分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)寻找不同产地鹅不食草药材的差异性成分。结果鹅不食草药材特征图谱有7个共有峰,指认出其中4个峰,分别为短叶老鹳草素A、山金车内酯C、山金车内酯D和小堆心菊素C;除广西产区的3批样品外,其余17批样品相似度均大于0.95;PCA将20批鹅不食草药材划分为2类,OPLS-DA法确定3个差异标志物,差异显著性排序分别为峰6>山金车内酯C>峰7。广西产区山金车内酯C含量明显高于其它产地。结论该方法能有效地分析不同产地鹅不食草药材质量的差异性,为不同产地鹅不食草药材质量的评价提供参考。

桔贝合剂质量标准的研究和探讨

目的:对桔贝合剂的质量标准进行研究,增加了新的检测项目和检验方法。方法:建立桔贝合剂中桔梗、枇杷叶的薄层色谱鉴别方法。建立桔贝合剂高效液相色谱特征图谱,色谱柱为Agilent ZORBAX-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)和0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL/min,检测波长250 nm。建立高效液相色谱法测定桔贝合剂中贝母素甲与贝母素乙的含量,色谱柱为Waters T3 C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈–0.1%二乙胺溶液(70︰30),柱温30℃,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器(ELSD)。结果:薄层色谱中样品与桔梗、枇杷叶相对应的位置特征斑点明显,分离度好;建立了以黄芩苷为参照峰的高效液相色谱特征图谱,确定了8个共有特征峰,分别来自苦杏仁、甘草、黄芩和苯甲酸钠,12批样品特征图谱与对照特征图谱的相似度大于0.95;贝母素甲和贝母素乙分别在52~520μg/mL和58~580μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率分别为101.0%和96.3%。12批样品中贝母素甲和贝母素乙含量范围分别为12.4~55.4μg/mL和6.2~48.3μg/mL,两者含量总和范围为19.2~85.3μg/mL。结论:本研究采用薄层色谱法和高效液相色谱法,建立的检验方法可对桔贝合剂进行定性鉴别和定量测定,能够有效评价与控制桔贝合剂质量。

参葛颗粒HPLC特征图谱及含量测定研究

目的采用高效液相色谱(HPLC)法创建参葛颗粒特征图谱及含量测定方法。方法色谱柱Kromasil 100-5-C_(18)(4.6 mm×250.0 mm,5μm);流动相乙腈-水;柱温30℃;流速为1.0 ml/min;进样量10μl;检测波长为220 nm,采用对照品比对、超高压液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用技术对特征峰进行化学成分指认及药味归属,并检测10批参葛颗粒的特征图谱和含量。结果建立了参葛颗粒的HPLC图谱,标记8个特征峰并进行了指认,10批颗粒批间一致性良好,10批颗粒葛根素的含量范围为10.6611~11.9936 mg/g。结论建立的参葛颗粒特征图谱及含量测定方法操作简单,具有良好的稳定性、重现性,对参葛颗粒中所含的化学成分进行了较全面的展示,也可为其他相关中药复方制剂的质量控制研究提供参考。

基于HPLC特征图谱与制备分离技术川木通标准汤剂化学成分研究

目的:建立川木通标准汤剂特征图谱,结合柱色谱和制备色谱分离技术对未知特征峰进行分离、纯化和结构鉴定,为川木通标准汤剂及其制剂质量标准的提高提供参考。方法:制备12批川木通标准汤剂,采用高效液相色谱法(HPLC)建立川木通标准汤剂特征图谱,将十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)的柱色谱和半制备高效液相色谱相结合,对川木通标准汤剂特征图谱的特征峰进行分离、纯化,并采用核磁共振(NMR)和质谱(MS)分析对分离得到的未知化合物进行结构鉴定。结果:12批川木通标准汤剂特征图谱共标识出7个共有特征峰,其整体相似度均在0.90以上。经分离制备和结构分析,共鉴定出5个化合物,分别为腺苷、落叶松树脂醇-4,4′-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、落叶松树脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、开环异落叶松树脂酚和落叶松树脂醇,其中腺苷、开环异落叶松树脂酚和落叶松树脂醇系首次从川木通中分离得到。结论:通过对川木通中极性较大的水溶性成分的研究,为川木通药材、饮片及其制剂质量标准的提高提供有益参考。

百合药材UPLC特征图谱及特征峰QTOF-MS分析研究

目的:建立百合药材超高效液相色谱(UPLC)特征图谱,并采用电喷雾离子源-四极杆-飞行时间质谱(ESI-QTOF-MS)对其特征峰进行定性研究。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,检测波长320 nm,柱温35℃。质谱检测采用负离子模式;电压3.0 kV;离子源温度120℃;雾化温度350℃;雾化气600 L/h。结果:获得百合药材UPLC特征图谱,共有峰19个,鉴定出12个酚性甘油酯类成分,其中6个通过对照品对照确认,6个通过质谱信息推测。结论:建立的UPLC-UV特征图谱可用于百合药材质量评价,为全面控制其质量提供了科学依据。

黄葵胶囊中5种黄酮类成分的含量测定及其特征图谱研究

目的:建立同时测定黄葵胶囊中5种黄酮类成分含量的方法,并对其特征图谱进行研究。方法:采用HPLC法,色谱条件为:Thermo scientific Hypersil GOLD(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL/min,波长360 nm,柱温30℃。结果:5种黄酮成分(芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、杨梅素、槲皮素)具有良好的分离度,相关系数均为0.9999,平均回收率为98.46%～100.33%,并用此法建立了黄葵胶囊的特征图谱,包含15个共有峰,采用对照品指认了其中5个峰,分析测定了10批黄葵胶囊的特征图谱,相似度均在0.95以上。结论:该文所建立的含量测定及特征图谱分析方法特征性和专属性强,且快速、简便、可靠,可用于全面控制该制剂的质量。

银翘散煎剂与5种银翘解毒成药HPLC特征图谱的比较研究

目的比较银翘散煎剂与5种相关成药(银翘解毒颗粒、银翘解毒片、银翘解毒丸、银翘解毒液、银翘解毒合剂等)的HPLC特征图谱、日服用生药及指标成分量的差异。方法采用HPLC色谱法,phenomenexluna色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为230 nm,流速为1.0 mL/min。结果得到分离度较好的银翘散煎剂HPLC特征图谱,识别了其中的16个特征峰,上市银翘解毒成药如颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、合剂分别保留了煎剂中6和10～13的特征峰,绿原酸、连翘酯苷A、牛蒡苷等指标成分日服用量与煎剂相比均有不同程度的降低。结论银翘散煎剂与5种银翘解毒成药HPLC特征图谱、日服用生药及指标成分量存在较大差异,提示基于临床汤剂研发与生产的成药制剂应关注并克服汤剂成药化缺陷。