靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的分析方法比较

以靛膏为原料,采用盐酸酸化、葡萄糖还原和乙酸乙酯提取3种工艺制备靛蓝酸化物、靛蓝还原物和乙酸乙酯提取物。建立高效液相色谱(HPLC)法、紫外可见分光光度(UV)法和双波长紫外分光光度(dW-UV)法,分析3种靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的含量,并以Kolmogorov-Smirnov检验、Bland-Altman偏差图比较和Spearman检验确定3种样品各自最佳分析方法。结果表明:所建立的HPLC法、UV法和dW-UV法简单、准确、灵敏度高、稳定性好和重复性好。3种靛蓝提取物成分含量检测方法均遵从正态分布,两两测定值存在显著差异。UV法更适于分析靛蓝酸化物、靛蓝还原物中靛蓝含量;HPLC法更适于乙酸乙酯提取物中靛蓝、靛玉红含量分析。

聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒制备及其体内药动学研究

目的制备聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒,测定包封率、载药量、粒径、Zeta电位,单因素试验优化处方,XRPD进行晶型分析,考察体外释药、稳定性。24只大鼠随机分为4组,分别灌胃给予杨梅苷、杨梅苷固体脂质纳米粒、杨梅苷固体脂质纳米粒+聚乙二醇硬脂酸酯、聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(150 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定杨梅素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为药脂比1∶15,单硬酯酸甘油酯与聚乙二醇硬脂酸酯比例10∶1,泊洛沙姆188浓度0.8%,均质次数8次,包封率为81.75%,载药量为5.04%,粒径为207.56 nm,PDI为0.092,Zeta电位为-14.79 mV。杨梅苷以无定型状态存在于聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒中,18 h内累积释放度为64.71%,模拟胃液中2 h内、模拟肠液中12 h内稳定性良好。与原料药、固体脂质纳米粒比较,聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒t_(max)延长(P<0.05),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.05,P<0.01),相对生物利用度与原料药相比增加至4.60倍。结论聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒可改善杨梅苷稳定性,促进其口服吸收。

阿达木单抗还原肽指纹图谱鉴别方法的建立与验证

目的 建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法。方法 阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarity determining region, CDR)特征肽段。建立能够有效鉴别阿达木单抗肽指纹图谱的液相色谱分析方法,并进行方法学验证和应用评价。结果 阿达木单抗经胰蛋白酶(Trypsin)和胞内蛋白酶(Lys-C)酶解后,CDR肽段均由高分辨质谱完成确证。贝伐珠单抗和利妥昔单抗用于评估方法专属性,结果表明该方法专属性强。选择Fc段保守氨基酸序列作为参比峰,以CDR特征肽段的相对保留时间(RRT)和相对峰面积(RPA)考察方法的变异程度。Trypsin酶解的样品连续5次进样各特征肽段RRT的RSD在0.008%~1.097%之间,RPA的RSD在1.212%~7.951%之间;中间精密度考察各特征肽段RRT的RSD在0.010%~0.985%之间,RPA的RSD在2.306%~10.939%之间;酶切比例为1∶35~1∶45,酶切时间为3.5~4.5 h时,RRT和RPA的RSD均符合方法耐用性要求。Lys-C酶解的样品方法学验证结果也表明其精密度、耐用性均表现良好。不同色谱柱对肽段的选择性、保留强弱、分离效果以及峰强度等具有一定差异。结论 建立的基于Trypsin/Lys-C酶切、鉴定CDR特征肽段的高效液相肽指纹图谱鉴别方法可用于阿达木单抗的质量控制及批检验放行,同时可为企业建立单抗肽指纹图谱鉴别方法提供参考。

前维生素D相对校正因子的研究及测定

目的:测定前维生素D相对校正因子,简化维生素D含量测定的计算方法。方法:通过对各国药品标准中维生素D含量计算方法的研究,采用HPLC法测定前维生素D相对校正因子,并对测定的影响因素进行了考察。结果:统计了国内7家实验室的前维生素D相对校正因子的测定结果,确定了254 nm和265 nm 2个波长下的前维生素D相对校正因子。结论:采用前维生素D相对校正因子法计算维生素D的总量,简化了实验步骤,避免了随机操作误差。该方法快速、准确,为进一步提高维生素D制剂标准奠定了基础。

宣木瓜药材烫晒法有效物质含量变化及干燥工艺优化

目的:以山楂酸、齐墩果酸、熊果酸含量来阐述宣木瓜药材烫晒法的科学内涵,以期确定宣木瓜最适宜的产地加工工艺和关键技术参数。方法:采用反相高效液相色谱法测定设计不同的干燥方法制备不同的样品。结果:通过对烫晒、生晒和直接烘干等9个不同干燥方法处理的宣木瓜样品进行含量测定,发现最佳干燥成药材的方法是烫晒;宣木瓜山楂酸、齐墩果酸和熊果酸分别是0.0076、0.5259和0.2571;发现最佳干燥成饮片的方法为烫晒后烘48 h用水润48 h再在60℃烘48 h的方法,其主要化学成分含量高,山楂酸、齐墩果酸和熊果酸分别是0.0071、0.4425和0.291。结论:本研究为宣木瓜药材烫晒法科学内涵及干燥工艺提供了试验理论依据。

正交试验法优选十三味逐瘀合剂的提取工艺

目的优选十三味逐瘀合剂的水提煎煮工艺,为其后续研究提供参考。方法以煎煮次数(A)、加水量(B)、煎煮时间(C)作为考察因素,羟基红花黄色素A的含量与出膏率的综合评分为指标,确定羟基红花黄色素A含量和出膏率的权重系数分别为70%和30%,通过L_(9)(3^(4))正交试验设计,优选水提的煎煮工艺,并进行验证实验。结果最优选的煎煮工艺为加8倍量水,煎煮2次,每次煎煮90 min。结论优选的工艺条件合理、稳定可行,可用于规范化十三味逐瘀合剂提取。

单磷酸阿糖腺苷有关物质检测方法的优化

目的:优化单磷酸阿糖腺苷有关物质的HPLC测定方法。方法:采用色谱柱ChromCore AQC_(18)(4.6 mm×150 mm, 5μm),流动相A为含0.01 mol·L^(-1)四丁基氢氧化铵与0.1 mol·L^(-1)磷酸二氢钾的缓冲液,流动相B为甲醇,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长258 nm。结果:主成分与各杂质间的分离度良好;主成分及各杂质在各自浓度范围内呈现良好的线性关系(r>0.999 9);单磷酸阿糖腺苷原料药各杂质的平均加样回收率为95.0%~99.2%,RSD为1.0%~4.4%(n=9),注射用单磷酸阿糖腺苷各杂质的平均加样回收率为91.8%~102.1%,RSD为0.5%~4.8%(n=9)。结论:该方法简便、快捷、准确、专属性强,可用于单磷酸阿糖腺苷有关物质的测定。

多成分定量分析结合化学计量学和熵权TOPSIS法综合评价益肺清化膏质量

目的采用多成分定量分析结合化学计量学和熵权逼近理想解排序(TOPSIS)法综合评价益肺清化膏质量。方法采用高效液相色谱法测定14批益肺清化膏(S1~S14)中党参炔苷、紫丁香苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、黄芪紫檀烷苷、黄芪异黄烷苷、黄芪甲苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷、麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B的含量,然后利用化学计量学(主成分分析和正交偏最小二乘-判别分析)和熵权TOPSIS法对14批益肺清化膏的质量进行评价。结果化学计量学结果显示,14批益肺清化膏可聚为3类,编号S1~S6的样品为第Ⅰ类,编号S7~S10的样品为第Ⅱ类,编号S11~S14的样品为第Ⅲ类;毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、鸡矢藤次苷甲酯、黄芪甲苷、黄芪紫檀烷苷、党参炔苷、麦冬甲基黄烷酮A和桔梗皂苷E的变量重要性投影值均大于1。熵权TOPSIS分析结果显示,14批样品的最优解的欧氏贴近度在0.1529~0.7366之间,以编号S14样品最高(0.7366)。结论14批益肺清化膏中以编号S14样品的质量最优,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷等8个成分可能是影响益肺清化膏质量的差异标志物。

猴耳环双标多测法及抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分快速筛选法的建立

目的:建立猴耳环中5个成分的双标多测法及其抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的快速筛选法。方法:采用HPLC法,以双标线性校正法准确定位猴耳环中5个成分色谱峰,以没食子酸为参照物,计算没食子酸与其余4个成分的相对校正因子,对各成分进行定量,将所得结果与外标法进行比较。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法快速筛选猴耳环中具有抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。结果:双标线性校正法相比于相对保留时间更能准确地预测待测组分在未知色谱柱上的保留时间;相对校正因子法和外标法结果的RSD<2.00%。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法可以快速筛选出猴耳环中7-没食子酰基特利色黄烷、杨梅苷等不同程度抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物。结论:该研究建立的双标多测同时测定猴耳环中5个成分的方法准确可行,采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法能快速、灵敏、高通量筛选猴耳环中的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。

桑叶蜜炙工艺优化研究

目的:桑叶蜜炙工艺的优选。方法:以黄酮类化合物:芦丁、绿原酸、紫云英苷、异槲皮苷,槲皮素的含量为指标,通过正交试验以及高效液相色谱法,对桑叶的蜜炙方法进行系统研究。结果:桑叶蜜炙工艺的优选方案是:药材与熟蜜的重量比为5∶1,闷润时间为20 min,用武火(900W)炒制3 min时,黄酮类化合物的含量最高。结论:本次实验中桑叶与蜜的重量比、闷润时间、炒制火候、炒制时间等因素对桑叶的蜜炙影响较大,利用正交试验结合高效液相色谱法有助于有效准确地测出桑叶蜜炙后黄酮类化合物的含量,为今后桑叶的蜜炙工艺提供参考。

HPLC-UV法测定舒肝和胃丸中α-香附酮和香附烯酮的含量

目的:建立舒肝和胃丸中α-香附酮和香附烯酮的高效液相色谱(HPLC-UV)含量测定法,为该制剂中醋香附含量的质量控制提供依据。方法:对舒肝和胃丸中α-香附酮和香附烯酮同时进行含量测定。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇和水(65∶35),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长254 nm,柱温30℃,进样量5μL。结果:采用该方法得到的舒肝和胃丸色谱图中,α-香附酮和香附烯酮色谱峰与相邻色谱峰分离效果较好,满足含量测定的要求;指标性成分α-香附酮、香附烯酮分别在0.08036~0.80360μg、0.2112~2.1120μg范围内线性关系良好,相关系数均为1.000;平均加标回收率分别为102.0%(RSD:1.6%,n=6),102.4%(RSD:2.0%,n=6);稳定性(24 h)、重复性、精密度良好。结论:本研究建立的α-香附酮和香附烯酮HPLC-UV含量测定方法简单、快捷、准确,可为舒肝和胃丸中醋香附含量的控制提供依据。

HPLC法测定人血清及脑脊液中头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松的浓度

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定血清/脑脊液中头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟的浓度,并应用于治疗药物监测。方法 色谱柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5.0 μm);甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用甲酸调节pH值至3.0)为流动相,梯度洗脱;检测波长为254 nm;流速为1.0 mL/min;柱温25 ℃;头孢曲松和头孢噻肟作为内标。考察专属性、线性、精密度、稳定性、回收率等试验。结果 头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松的血清/脑脊液样品线性良好(r值均>0.999);三者血清/脑脊液的日内、日间精密度良好(RSD<5%),回收率在90%~110%之内;在室温24 h、冷藏48 h、反复冻融3次、样品处理后6 h、-20 ℃冷冻50 d等情况下均稳定(RSD<15%)。结论?该方法操作简便、准确、专属性强,可进行药物浓度监测,预防抗菌药物相关性脑病的发生。

混合型饲料添加剂中胆汁酸含量测定方法比较研究

本试验采用高效液相色谱-示差折光(HPLC⁃RID)和高效液相色谱-荧光(HPLC⁃FLD)法,研究建立混合型饲料添加剂中猪胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸含量的高效液相色谱测定方法,并对2种高效液相色谱法、重量法、容量法胆汁酸含量测定结果进行比较分析。HPLC⁃RID法:试样用甲醇-乙腈-水溶液提取,C18柱分离,HPLC⁃RID测定,3种胆汁酸的定量限为10.0~20.0 mg/g,平均回收率为82.54%~108.50%,相对标准偏差(RSD)为2.90%~7.61%;HPLC⁃FLD法:试样用甲醇提取,氢氧化钾甲醇溶液皂化,以1,4,7,10,13,16-六氧杂环十八烷乙腈液和4-溴甲基-7-甲氧基香豆素乙腈液衍生,C18柱分离,HPLC⁃FLD测定,3种胆汁酸的定量限为2.0~3.0 mg/g,平均回收率为70.43%~84.31%,RSD为4.82%~9.80%。结果表明:HPLC⁃RID法、HPLC⁃FLD法均可测定混合型饲料添加剂中的3种胆汁酸含量,但由于HPLC⁃FLD法胆汁酸需要衍生,易受样品基质影响,胆汁酸含量测定结果重现性、稳定性差;重量法、容量法测定的是混合型饲料添加剂中所有胆汁酸的总含量,但由于方法特性所限,容量法测定结果不能准确反映产品所有胆汁酸的总含量。本研究建立的HPLC⁃RID法重现性、稳定性、可信度高,适用于混合型饲料添加剂中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量的测定;重量法适用于混合型饲料添加剂中胆汁酸总含量的测定。

不同产地伸筋草的质量评价

目的评价不同产地伸筋草的质量。方法以6省产的16批伸筋草为样品,采用一测多评(QAMS)法检测伸筋草中α-玉柏碱、β-玉柏碱、石松碱、石松灵碱、伸筋草萜宁醇、21-表千层塔烯二醇、豆甾醇和β-谷甾醇含量,并与外标法结果进行比较;根据《中国药典》附录方法检测浸出物和总灰分。将上述指标结合主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析、加权逼近理想排序(TOPSIS)法评价其质量。结果16批样品中伸筋草萜宁醇含量为0.183~0.446 mg/g;以伸筋草萜宁醇为内参物,按QAMS法测得α-玉柏碱、β-玉柏碱、石松碱、石松灵碱、21-表千层塔烯二醇、豆甾醇和β-谷甾醇的含量分别为1.250~2.097、0.690~1.184、0.035~0.102、0.076~0.150、0.356~0.570、0.085~0.229、0.238~0.855 mg/g,与外标法结果无显著差异;浸出物为12.18%~22.78%,总灰分为3.16%~6.11%。主成分分析显示S1~S6、S7~S11、S12~S16分别聚为3类。α-玉柏碱、β-谷甾醇、伸筋草萜宁醇、β-玉柏碱和21-表千层塔烯二醇的变量重要性投影值均大于1。加权TOPSIS法评价结果显示,S14样品的质量最优(相对贴近度为0.7092)。结论云南绥江县伸筋草质量最优。本研究建立的QAMS法结合化学计量学和加权TOPSIS分析可用于不同产地伸筋草的质量评价。

不同产地黄芪饮片中多糖及甲苷含量比较

黄芪是常用补气药之一,黄芪多糖和黄芪甲苷是其发挥药效的物质基础。以黄芪多糖和黄芪甲苷为评价指标,比较甘肃、内蒙古、山西三个不同产地的黄芪饮片的质量差异。结果表明:甘肃黄芪、内蒙古黄芪、山西黄芪的多糖含量分别为22.87%、20.02%、22.29%;甘肃黄芪的黄芪甲苷含量最高,为0.049%;其次是山西黄芪,黄芪甲苷含量为0.026%,内蒙古黄芪中黄芪甲苷含量最低,仅为0.0027%。仅有甘肃黄芪的甲苷含量测定结果符合药典标准。分析认为药材生长年限是导致内蒙古黄芪与甘肃黄芪、山西黄芪甲苷含量之间差异较大的主要原因。该研究为黄芪种植、资源开发及合理使用提供参考依据。

HPLC法测定乳苣不同部位菊苣酸含量

采用超声法提取乳苣不同部位总多酚,建立了测定乳苣不同部位菊苣酸含量的HPLC法,色谱条件为:岛津LC-16型高效液相色谱仪,SPD检测器,C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温为40℃,流动相为甲醇-0.1%磷酸,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为280 nm,进样量为10μL。结果表明,菊苣酸浓度在11.6~58.0μg·mL^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(R^(2)=0.9994),平均加标回收率为95.30%(n=6);乳苣根、茎、叶、全草中菊苣酸含量分别为23.70 mg·g^(-1)、37.20 mg·g^(-1)、114.24 mg·g^(-1)、102.50 mg·g^(-1),乳苣不同部位菊苣酸含量大小顺序为:叶>全草>茎>根。该方法简便、快速、准确,适用于乳苣中菊苣酸含量的测定。

HPLC法测定葫芦七不同部位中7种倍半萜的含量

[目的]建立HPLC法测定葫芦七不同部位(根、茎、叶)中7种倍半萜类化合物的含量。[方法]采用Kromasil C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(40∶60);柱温35℃;检测波长240 nm;进样体积10μL。[结果]7种被测成分在测定质量浓度范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9990);平均回收率在95.18%~97.61%,RSD在0.41%~1.60%;被检测的7种倍半萜类成分在葫芦七根、茎、叶不同部位中的含量差异明显,根中所含化合物的种类相对较多,含量相对较高。[结论]该方法快速、简便、准确,可用于葫芦七药材的质量控制。

60%肟菌·环丙唑醇水分散粒剂高效液相色谱分析方法

为了建立能够同时测定环丙唑醇和肟菌酯两种有效成分含量的高效液相色谱分析方法。用高效液相色谱法,以甲醇-磷酸水混合溶液为流动相,C18不锈钢色谱柱,在220 nm波长条件下对试样进行分离和定量分析。试验结果表明,该方法下环丙唑醇和肟菌酯均有良好的线性关系,线性相关系数R2均为0.999 8。精密度结果表明环丙唑醇的相对标准偏差为0.43%,肟菌酯的相对标准偏差为0.44%。准确度试验结果表明平均环丙唑醇回收率为100.73%,肟菌酯平均回收率为100.52%。该检测方法分离效果好,线性关系、准确度和精密度均符合要求,可用于环丙唑醇和肟菌酯复配产品的定量分析。

150 g/L毒莠定·225 g/L二氯吡啶酸可溶液剂的高效液相色谱定量方法

建立了快速分析150 g/L毒莠定·225 g/L二氯吡啶酸可溶液剂复配产品的高效液相色谱(HPLC)定量方法。定量分析采用CAPCELLPAKC18(250 mm×4.6 mm×5μm)色谱柱,以乙腈/甲醇/磷酸水(pH 2.40)=20/10/70(V/V/V)作为流动相,在235 nm波长下对样品中的二氯吡啶酸和毒莠定进行分离测定。测定结果表明,二氯吡啶酸和毒莠定线性相关系数为0.9999、1.0000,变异系数为0.32%、0.63%,平均回收率为99.4%、100.6%,均满足定量控制要求。本文所提方法精密准确,分离良好,简捷稳定,可用于不同规格的单一制剂、复合制剂和原药中的二氯吡啶酸及毒莠定的定量分析。

Robustness Study and Superior Method Development and Validation for Analytical Assay Method of Atropine Sulfate in Pharmaceutical Ophthalmic Solution

Background: The robustness is a measurement of an analytical chemical method and its ability to contain unaffected by little with deliberate variation of analytical chemical method parameters. The analytical chemical method variation parameters are based on pH variability of buffer solution of mobile phase, organic ratio composition changes, stationary phase (column) manufacture, brand name and lot number variation;flow rate variation and temperature variation of chromatographic system. The analytical chemical method for assay of Atropine Sulfate conducted for robustness evaluation. The typical variation considered for mobile phase organic ratio change, change of pH, change of temperature, change of flow rate, change of column etc. Purpose: The aim of this study is to develop a cost effective, short run time and robust analytical chemical method for the assay quantification of Atropine in Pharmaceutical Ophthalmic Solution. This will help to make analytical decisions quickly for research and development scientists as well as will help with quality control product release for patient consumption. This analytical method will help to meet the market demand through quick quality control test of Atropine Ophthalmic Solution and it is very easy for maintaining (GDP) good documentation practices within the shortest period of time. Method: HPLC method has been selected for developing superior method to Compendial method. Both the compendial HPLC method and developed HPLC method was run into the same HPLC system to prove the superiority of developed method. Sensitivity, precision, reproducibility, accuracy parameters were considered for superiority of method. Mobile phase ratio change, pH of buffer solution, change of stationary phase temperature, change of flow rate and change of column were taken into consideration for robustness study of the developed method. Results: The limit of quantitation (LOQ) of developed method was much low than the compendial method. The % RSD for the six sample assay of developed method was 0.4% where the % RSD of the compendial method was 1.2%. The reproducibility between two analysts was 100.4% for developed method on the contrary the compendial method was 98.4%.