肺腺癌中HPRT1基因表达对患者总生存的影响

目的 探索HPRT1基因在肺腺癌中的表达特征、总生存率、功能激活以及免疫浸润中的影响。方法 通过对TCGA肺腺癌数据以及多个GEO数据库中的肺腺癌数据进行挖掘分析,对比并验证HPRT1表达量与预后总生存(overall surival,OS)的关系,通过cluster Profiler分析HPRT1基因高表达组中上调基因的功能富集情况。且通过TIMER以及CIBERSORT算法计算肺腺癌中不同免疫细胞的浸润水平并对比在HPRT1高低表达组间的浸润程度差异。结果 HPRT1在肺腺癌组织中表达量显著上调,且在TCGA中证明HPRT1基因高表达的患者预后OS更差(P <0.01)。经过2个GEO数据集的验证同样发现HPRT1基因高表达表现为预后OS更差(GSE13213,P <0.01;GSE67639,P <0.001)。差异分析显示高表达的患者中有683个基因的表达量显著上调且这些上调基因的功能主要富集与p53以及细胞周期等癌症相关的信号通路。TIMER以及CIBERSORT算法进行的免疫细胞浸润程度分析发现在高表达差预后人群中B细胞以及CD4T细胞含量均更低(P <0.05)。结论 HPRT1基因表达量越高肺腺癌患者的总生存越差,且高表达患者的p53信号通路上调,B细胞以及CD4T细胞浸润程度显著下降。

Lesch-Nyhan综合征8例临床特征及HPRT1基因变异分析

目的分析Lesch-Nyhan综合征的临床特征及HPRT1基因变异特点,以提升对该病的认识。方法回顾性分析2015年7月至2019年11月诊断并随访的8例患儿的临床表现、实验室检查及基因检测结果,总结患儿的临床特征及HPRT1基因变异特点。结果8例患儿均为男性,于3月龄至11月龄起病,主因发育落后就诊,同时有锥体系及锥体外系症状,4例在就诊前已出现自残行为,4例目前尚未出现自残行为,血清尿酸不同程度增高。HPRT1基因检测出6种变异(c.609+5G>A、exon 2-3 del、c.131G>A、exon7-8 del、c.384+2T>A、c.212G>A)。经口服碳酸氢钠片、别嘌呤醇片、巴氯芬及家庭康复等治疗后,5例患儿脑损伤症状缓解,1例窒息死亡,1例死于肺部感染,1例未规律服药和复查,病情加重。结论Lesch-Nyhan综合征患者的临床症状轻重不一,主要临床特征为神经系统功能障碍、自残行为、高尿酸血症,基因测序是确诊的关键,对症治疗可改善症状。

Ames试验与HPRT试验两种方法对6种氧化型染发剂的检测

目的:通过细菌回复突变试验(Ames试验)和体外哺乳动物细胞基因突变试验(HPRT试验)两种方法检测氧化型染发剂,并对其结果进行分析比较,探讨两种方法在检测氧化型染发剂致突变性中的应用。方法:Ames试验采用一组营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌检测6种氧化型染发剂。各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从312~10 000μg/皿,通过计算受试物回复突变菌落数,判定受试物的致突变性。HPRT试验采用体外培养的V79细胞,各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从4.88~5 000μg/mL,研究6种氧化型染发剂致细胞HPRT位点突变的频率,通过计算受试物引起的V79细胞的突变频率,判定其致突变性。结果:在Ames试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,受试物在2 500~10 000μg/皿剂量范围均存在回变菌落数超过溶剂对照组两倍的情况,并有剂量-反应关系,表明Ames试验检测6种氧化型染发剂均为阳性结果。而在HPRT试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,各受试物在>2 500μg/mL时具有明显毒性作用,在9.75~2 500μg/mL剂量范围细胞突变频率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义,表明HPRT试验检测6种氧化型染发剂均为阴性结果。结论:由于氧化型染发剂有明显的细胞毒性,导致HPRT试验无法设计更高的剂量,从而无法反映受试物致突变性的真实水平。而Ames试验具有简单、快速、经济等优点,可作为检测氧化型染发剂致突变性的首选方法。

HPRT1基因相关神经系统异常综合征1例报告

目的探讨HPRT1基因相关的神经系统异常综合征(HRND)的临床表现及基因突变特点。方法回顾分析1例以发育迟缓、高尿酸血症为表现的HRND患儿的临床资料及基因全外显子测序和验证结果。复习文献,比较相似基因型患者的临床表型,并在RNA水平探讨基因突变对蛋白功能的影响。结果患儿,男,3岁4个月。面容未见异常,语言、运动发育均落后,四肢活动受限,双下肢可部分持重,双足外翻,四肢肌力低下,活动及情绪紧张时四肢肌张力增高,不自主动作增多。尿酸1404.7μmol/L,Y痕迹蛋白1.64 mg/L,乳酸脱氢酶539 U/L,乳酸脱氢酶同工酶84 U/L。脑电图、肌电图、头颅磁共振未见明显异常。全外显子测序结果显示,HPRT1基因存在c.319-2A>T剪接位点突变,其母亲为携带者,该突变可导致HPRT1基因编码的RNA错误加工(缺少外显子3)。结论HPRT1基因c.319-2A>T剪接突变是导致HRND的遗传病因,全外显子测序技术可协助临床确诊。

丙烯酰胺诱导人白血病HL-60和NB_4细胞hprt基因的分子突变谱

为了研究丙烯酰胺的遗传毒理作用 ,采用单细胞克隆培养 ,双向筛选计数 ,多重PCR扩增与电泳分析 ,研究了诱导HL 6 0和NB4 两种细胞hprt基因突变率及分子突变谱 .发现只有丙烯酰胺高剂量组 (70 0mg·L- 1)才对两种细胞有明确的致hprt基因突变作用 ;丙烯酰胺诱发突变主要由点突变和缺失两部分组成 (40 .0 %～ 6 6 .7% ,33.3%～ 6 0 .0 % ) ,而自发突变几乎全是点突变 (90 .0 %以上 ) ,两种细胞均无全基因缺失型 ;缺失突变可以发生于hprt基因上的每个外显子 (除外显子 7/ 8以外 ) ,较集中于基因的 3′末端 ,且诱发突变中绝大多数是点突变与单个外显子缺失 (93.3% ,86 .1% ) ,两种细胞情况类似 .结果提示 ,丙烯酰胺具有较弱的诱导hprt基因突变的作用 ,且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样 。

昆明山海棠对人白血病细胞HPRT位点的影响

目的：研究昆明山海棠对人白血病细胞ＨＬ－６０ＨＰＲＴ位点的影响。方法：用ＴＨＨ水溶液对ＨＬ－６０细胞进行浓度梯度染毒，不同时间点进行单细胞微孔接种，计数阳性克隆，测定接种存活率、克隆效率和突变频率。结果：ＴＨＨ染毒细胞的突变频率，在处理剂量３．３５～２０．１０ｍｇ／ｍｌ范围内，具有明显的剂量－反应关系。但随着ＴＨＨ的浓度增高至３３．５０ｍｇ／ｍｌ组，由于细胞存活率太低，细胞数不够最后接种要求，不能继续进行。这一现象可能与ＴＨＨ的细胞毒性有关。结论：ＴＨＨ对ＨＬ－６０细胞具有肯定的致突变性。

镉和氯化汞致体细胞hprt基因位点突变的作用和突变频率的研究

目的 了解镉和汞对细胞hprt基因位点的影响 ,探讨化学诱变物致机体损伤早期检测的敏感指标。方法 采用多核细胞法研究化学诱变物氯化汞和镉对人血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果 氯化汞可诱发大鼠血淋巴细胞hprt基因位点突变 ,突变频率随着染毒浓度的增加而升高 ,突变频率 ^Y (10 -3 )与氯化汞浓度C (mg/kg)之间拟合成 ^Y =0 0 4 2 3C +1 0 4 6 3的直线回归方程。不同浓度金属镉也能致hprt基因突变 ,镉浓度与突变频率之间有剂量反应关系。 结论 氯化汞和镉对血淋巴细胞hprt基因位点及突变频率有影响 。

昆明山海棠诱导人白血病细胞HPRT基因突变的研究

为研究昆明山海棠(THH)的遗传毒性和药理作用，采用单细胞克隆培养,双向筛选计数，多重PCR扩增与电泳分析，研究了THH诱导HL－60细胞HPRT基因突变率及分子突变谱。发现随着染毒剂量的增加，细胞接种存活率逐渐下降，突变频率明显升高；THH诱发突变主要由缺失和点突变两部分组成(46.6％和53.4％)，而自发突变几乎全是点突变(92.3％)；HPRT基因突变位点在各个外显子的分布较集中于基因的3′末端，且外显子1缺失只出现于全基因缺失中，外显子7/8与9多表现为连锁缺失(71.4％)。结果提示，THH具有明确的诱导HPRT基因突变的作用，且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样，这可能与其作用机制有关。上述发现有助于阐明THH遗传毒性作用机理。

用BrdU法研究γ射线外照射诱发外周血淋巴细胞HPRT基因突变

用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)法检测 ,不同剂量γ射线外照射诱发正常人外周血淋巴细胞HPRT基因突变频率 (MFs) ,并研究其剂量效应关系。抽取正常成年人静脉血 ,分成 5组 ,分别用 0 .0— 4 .0Gy的不同剂量γ射线照射 ,全血培养后用BrdU法检测淋巴细胞HPRT基因MFs。结果表明 ,正常人外周血淋巴细胞的MFs随外照射剂量的增加而上升 ,且剂量效应关系符合线性平方模型。研究证明了BrdU法是一种快速、简便、较敏感的检测外照射诱发HPRT基因突变的方法 ,HPRT基因辐射突变可作为生物剂量计。

体细胞HPRT基因突变检测用于辐射剂量估算的可行性研究

用多核细胞法研究了 60 Coγ射线 0～ 4 .0 Gy照射诱发的体细胞 HPRT基因突变 ,探讨了其在辐射剂量估算中的适用范围和存在的问题。结果表明 ,HPRT基因突变频率 Y随照射剂量 D ( Gy)的增加而增加 ,在 0～ 4 .0 Gy剂量范围内可拟合为 Y=0 .4 0 2 2 +0 .2 710 D - 0 .0 4 60 D2 ,在 0～ 1.0 Gy低剂量范围内 ,更适于拟合直线模型 Y =0 .382 7+0 .2 94 8D;HPRT基因突变频率与染色体畸变、微核具有良好的相关性。说明 HPRT基因突变可以用于低 LET辐射剂量估算 ,尤其适用于低剂量照射引起的单基因突变检测和辐射危害评价。

克隆法研究辐射诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因突变

本文目的是用克隆法研究γ射线诱发人外周血淋巴细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸抗糖转移酶(HPRT)基因突变的量效关系。从健康成年人外周血分离淋巴细胞 ,每份分成两等份 ,其中一份加滋养细胞 ,另一份不加滋养细胞 ,种于 96孔板 ,进行淋巴细胞的克隆和突变细胞的筛选 ,比较二者结果 ;剂量效应关系实验为取一健康成年男子外周血 2 5mL分成 5等份 ,分别用 0、1、2、4和 6Gy照射 ,分离淋巴细胞 ,种于 96孔板 ,不加滋养细胞条件下观察淋巴细胞的克隆效率和HPRT基因突变频率的变化。结果表明加滋养细胞组的克隆效率高于不加滋养细胞组 (p <0 0 1 ) ,但二者HPRT基因突变频率无差别 (p >0 0 5 )。在一定剂量范围内 ,人外周血淋巴细胞克隆效率与照射剂量呈负相关 。

多核细胞法和Brdurd法检测辐射诱发体细胞HPRT基因突变的比较研究

目的 研究放射性核素内照射诱发体细胞HPRT基因位点突变及其剂量 -效应关系 ,比较不同方法对HPRT基因位点突变的检出率。方法 给大鼠尾静脉注射晚期混合裂变产物后不同时间心脏穿刺取血。用多核细胞法和Brdurd法分别检测HPRT基因突变细胞 ,计算突变率 ,拟合出辐射诱发HPRT基因位点突变的剂量 -效应关系函数。结果 用多核细胞法检测的放射性核素内照射诱发HPRT基因位点突变率 (y ,‰ )和剂量 (D ,cSv)相关函数为y =1 14 98+0 1199lnD,r =0 970 6 ;用Brdurd法检测的相关函数为 y =6 5 310× 10 -2 +3 4 5 4 2× 10 -3 D ,r =0 984 6。多核细胞法检测HPRT基因位点突变检出率比Brdurd法高 11～ 17倍之多。结论 体细胞HPRT基因对电离辐射敏感 ,有可能作为辐射生物剂量计。

5例原发性痛风患者HPRT基因的克隆和序列分析

原发性痛风是先天性嘌呤代谢缺陷症,与嘌呤代谢相关酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT,EC 2.4.2.8)、磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)等缺陷有关。克隆了正常中国人和4个中国原发性痛风家族5位患者的HPRT基因,序列分析表明,正常中国人及Case5患者的HPRT编码区序列与报道的序列(GeneBank登录号M26434)完全一致,而在3个中国痛风家族4位患者的HPRT基因编码区中共发现11个新突变,包括3个同义突变、1个无义突变和7个错义突变。这是关于中国大陆原发性痛风患者HPRT基因突变的首次报道。

成人外周血淋巴细胞HPRT基因突变率及其影响因素的研究

目的 研究年龄范围在 2 1～ 5 0岁健康成年人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变率及其影响因素。方法 用多核细胞法检测淋巴细胞HPRT基因位点突变率 ,拟合HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数。结果 成年人淋巴细胞HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数为 :y =0 .75 5 5 +0 .0 44 0x ,r =0 .982 9(P <0 .0 5 )。吸烟对健康成人HPRT基因突变率有影响 (P <0 .0 5 ) ,而不同性别间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 成年人HPRT基因位点突变率随年龄增长而增加 ,年递增率为 0 .0 44 0‰ ;吸烟对HPRT基因突变有影响 ,而性别则无影响。

痹宁胶囊对痛风性关节炎患者HPRT基因水平的影响研究

目的:观察痹宁胶囊对78例急性痛风性关节炎患者HPRT(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因表达的影响。方法:将符合纳入标准的78例急性痛风性关节炎患者按照随机的原则分为治疗组和对照组,观察两组治疗前后血清HPRT mRNA水平。结果:治疗组的血清的HPRT mRNA表达升高优于对照组。结论:痹宁胶囊使急性痛风性关节炎患者血清HPRT mRNA表达升高。

丙烯酰胺对人白血病细胞HPRT位点的影响

目的 :为了研究丙烯酰胺 (AA)对人白血病HL - 6 0细胞HPRT位点的影响作用。方法 :本研究采用AA水溶液对HL -6 0细胞进行浓度梯度染毒 ,不同时间点进行单细胞微孔接种 ,在含 6 -TG培养基中筛选突变细胞 ,计数阳性克隆 ,测定接种存活率、克隆效率和突变频率。结果 :AA染毒细胞的突变频率在处理剂量范围内具有明显的剂量—反应关系 ,在最高剂量组(70 0 μg/ml)才有明确的致HPRT基因突变作用 ,同时发现AA染毒细胞的克隆效率随着剂量增加有轻度升高 ,这一现象可能与AA较强的细胞毒性有关。结论 :AA具有较弱的基因损害能力。

2450 MHz微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响

目的 :探讨微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响 .方法 :选用频率 2 4 5 0MHz微波 ,采用不同功率密度 (5 ,10 ,30mW·cm 2 )辐照小鼠 ,连续辐照 1,3,7d后 ,心脏取血 ,应用多核细胞法检测HPRT基因位点突变频率 .结果 :淋巴细胞HPRT基因位点突变率随着辐照时间延长和辐照强度的增大呈增加趋势 ,30mW·cm-2 微波照射 7d组淋巴细胞HPRT基因突变频率与对照组相比相差显著(P <0 0 5 ) .结论 :2 4 5

晚期混合裂变产物内照射诱发体细胞 HPRT 基因位点突变的剂量效应关系研究

运用多核细胞法及胞质分裂阻断微核（ＣＢＭＮ）法对５组Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠外周血淋巴细胞ＨＰＲＴ基因位点突变频率及微核进行检测。实验组静脉注射放射性比活度为３．６４×１０５Ｂｑ／ｍｌ的晚期混合裂变产物后１至９ｄ心脏穿刺取血。结果表明：静注后第１ｄ，累积剂量达１．７３ｃＳｖ时，与对照组相比，ＨＰＲＴ位点突变频率、、微核率均已显著增加（ｐ＜０．０１）；累积剂量与ＨＰＲＴ位点突变频率、微核细胞率、微核率间均可拟合成剂量效应函数Ｙ＝ａ＋ｂｌｎＸ；ＨＰＲＴ基因突变检测可望成为生物剂量计。

黄鳝Hprt基因的克隆及表达分析

次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hprt)参与嘌呤核苷酸的补救合成。采用RACE技术克隆了黄鳝的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因,它的全长cDNA为1 452 bp,预测编码218个氨基酸,与人类、小鼠、鸡和斑马鱼等脊椎动物Hprt氨基酸序列之间的同源性超过76.7%。基于该基因氨基酸序列构建了进化树,显示与斑马鱼Hprt基因更同源。RT-PCR表明黄鳝Hprt基因在多种组织中广谱表达,表明黄鳝该基因在功能和进化上的保守性。

肿瘤患者HPRT基因的调查

目的了解肿瘤患者与健康人群体细胞HPRT基因突变频率,探讨体细胞HPRT基因突变与肿瘤发生的关系。方法采用多核细胞法研究肿瘤患者外周血淋巴细胞HPRT基因位点的突变频率,并与正常人群进行对比。结果肿瘤患者外周血淋巴细胞转化率较正常对照组低(P<0.05);而淋巴细胞HPRT基因突变率较正常对照组高(P<0.05);不同种类癌症患者外周血HPRT基因突变频率无显著差异。结论HPRT基因突变频率分析可作为患癌风险评估的生物学标志。